Товары в корзине: 0 шт Оформить заказ
Стр. 1
 

15 страниц

304.00 ₽

Купить ГОСТ Р 54075-2010 — официальный бумажный документ с голограммой и синими печатями. подробнее

Официально распространяем нормативную документацию с 1999 года. Пробиваем чеки, платим налоги, принимаем к оплате все законные формы платежей без дополнительных процентов. Наши клиенты защищены Законом. ООО "ЦНТИ Нормоконтроль".

Наши цены ниже, чем в других местах, потому что мы работаем напрямую с поставщиками документов.

Способы доставки

  • Срочная курьерская доставка (1-3 дня)
  • Курьерская доставка (7 дней)
  • Самовывоз из московского офиса
  • Почта РФ

Распространяется на сырое и подвергнутое термизации или низкотемпературной пастеризации молоко, сыры и другую молочную продукцию и устанавливает методы определения в них содержания общего количества спор мезофильных анаэробных микроорганизмов (бактерий) и спор мезофильных лактатсбраживающих анаэробных микроорганизмов (бактерий)

  Скачать PDF

Рекомендуется использовать вместо ГОСТ 25102-90 (ИУС 9-2011)

Действие завершено 15.02.2015

Оглавление

1 Область применения

2 Нормативные ссылки

3 Термины и определения

4 Средства измерений, вспомогательное оборудование, материалы и реактивы

5 Отбор проб

6 Метод определения общего количества спор мезофильных анаэробных бактерий

7 Метод определения количества спор мезофильных лактатсбраживающих анаэробных бактерий

Приложение А (обязательное) Рост споровых анаэробных бактерий на среде СДА

Приложение Б (обязательное) Рост споровых анаэробных лактатсбраживающих бактерий на среде ЛАССА

Библиография

Показать даты введения Admin

ФЕДЕРАЛЬНОЕ АГЕНТСТВО ПО ТЕХНИЧЕСКОМУ РЕГУЛИРОВАНИЮ И МЕТРОЛОГИИ

ГОСТР

54075-

2010

НАЦИОНАЛЬНЫЙ

СТАНДАРТ

РОССИЙСКОЙ

ФЕДЕРАЦИИ

МОЛОКО И МОЛОЧНАЯ ПРОДУКЦИЯ

Методы определения содержания спор мезофильных анаэробных микроорганизмов

Издание официальное


Москва

Стандартинформ

2012


Предисловие

Цели и принципы стандартизации в Российской Федерации установлены Федеральным законом от 27 декабря 2002 г. № 184-ФЗ «О техническом регулировании», а правила применения национальных стандартов Российской Федерации — ГОСТ Р 1.0-2004 «Стандартизация в Российской Федерации. Основные положения»

Сведения о стандарте

1    РАЗРАБОТАН Государственным научным учреждением Всероссийским научно-исследовательским институтом маслоделия и сыроделия Российской академии сельскохозяйственных наук (ГНУ ВНИИМС Россельхозакадемии)

2    ВНЕСЕН Техническим комитетом по стандартизации ТК 470 «Молоко и продукты переработки

молока»

3    УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 30 ноября 2010 г. № 729-ст

4    ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодно издаваемом информационном указателе «Национальные стандарты», а текст изменений и поправок — в ежемесячно издаваемых информационных указателях «Национальные стандарты». В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ежемесячно издаваемом информационном указателе «Национальные стандарты». Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования — на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет

© Стандартинформ, 2012

Настоящий стандарт не может быть полностью или частично воспроизведен, тиражирован и распространен в качестве официального издания без разрешения Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии

Смесь нагревают до температуры (95 ± 2) °С, выдерживают при постоянном помешивании до расплавления агара и добавляют 10 см3 0,01 %-ного раствора треххлористого железа, 10 см3 0,01 %-ного раствора тетраборнокислого натрия, 10 см3 1 %-ного раствора кислого углекислого натрия и 1 см0,4 %-ного раствора индикатора нейтрального красного. С помощью раствора 20 %-ной молочной кислоты доводят активную кислотность до (5,70 ± 0,05) pH. Приготовленную смесь разливают в пробирки по 10—12 см3, закрывают ватными пробками и стерилизуют при температуре (121 + 2) °С в течение (15 ± 1) мин. Затем в стерильных условиях ватные пробки заменяют на стерильные резиновые.

Готовая рабочая питательная среда должна иметь интенсивный малиново-красный цвет.

Допускается замена мясопептонного бульона гидролизатом казеина и пептоном. Для этого к 1 дм3 гидролизата казеина добавляют 10 г пептона, устанавливают pH (7,0 ±0,1), нагревают до кипения, фильтруют через бумажный фильтр в чистые колбы и стерилизуют при температуре (121 + 2) °С в течение (15 +1) мин.

7.3    Проведение анализа

7.3.1    Подготовку образцов проводят по 6.3.

7.3.2    Посев образцов проводят по 6.4.1 и 6.4.2, используя рабочую питательную среду для определения лактатсбраживающих анаэробных бактерий.

Культивирование посевов проводят в термостате при температуре (37 + 1) °С в течение 72 ч.

7.4    Обработка результатов

7.4.1    Рост мезофильных лактатсбраживающих анаэробных спорообразующих бактерий в посевах определяют по изменению цвета рабочей питательной среды с малиново-красного до соломенно-желтого и газообразованию (образованию разрывов столбика агара).

7.4.2    Определение наиболее вероятного числа спор мезофильных лактатсбраживающих анаэробных бактерий проводят по 6.5.

Признаки роста споровых анаэробных лактатсбраживающих бактерий на среде ПАССА представлены в приложении Б. 1


Приложение А (обязательное)

Рост споровых анаэробных бактерий на среде СДА

А.1 Признаки роста споровых анаэробных бактерий представлены на рисунке А.1.

Рисунок А.1


9



Приложение Б (обязательное)

Рост споровых анаэробных лактатсбраживающих бактерий на среде ПАССА

Б.1 Признаки роста споровых анаэробных бактерий представлены на рисунке Б.1.


© - среда без признаков роста;


- среда с признаками роста


Рисунок Б.1


10


Библиография

[1] Федеральный закон от 12 июня 2008 г. № 88-ФЗ «Технический регламент на молоко и молочную продукцию» (с изменением)

[2]    ТУ 6-09-3839—75

[3]    СТО ВНИИМС 003—2010

[4]    СТО ВНИИМС 001—2009

[5]    ГФ СССР, X, от. 6

[6]    ТУ 6—09—3251—73

[7]    ТУ 6—09—4120—75

[8]    ТУ 9229—027—04610209—94

Кальций молочнокислый Гидролизат белков молока Автолизат дрожжевой сухой Кислота аскорбиновая пищевая Цистеин солянокислый

Индикатор нейтральный красный (нейтральрот)

Среда сухая для определения спор мезофильных анаэробных бактерий (СДА)

[9] ТУЮ—1189—94

Среда сухая для определения лактатсбраживающих анаэробных бактерий (ЛАССА)

[10] СанПиН 2.1.4.1074—2001

Питьевая вода. Гигиенические требования к качеству воды централизованных систем питьевого водоснабжения. Контроль качества

11

УДК 576.8:006.354    ОКС    67.100.10    Н19    ОКСТУ    9209

Ключевые слова: молоко, сыр, молочные продукты, методы микробиологического анализа, мезофиль-ные анаэробные и мезофильные лактатсбраживающие анаэробные микроорганизмы

Редактор Л.В. Коретникова Технический редактор Н.С. Гоишанова Корректор И.А. Королева Компьютерная верстка И.А. Налейкиной

Сдано в набор 27.12.2011. Подписано в печать 20.01.2012. Формат 60 х 84^. Гарнитура Ариал.

Уел. печ. л. 1,86. Уч.-изд. л. 1,40. Тираж 201 экз. Зак. 75.

ФГУП «СТАНДАРТИНФОРМ», 123995 Москва, Гранатный пер., 4. www.gostinfo.ru    info@gostinfo.ru

Набрано во ФГУП «СТАНДАРТИНФОРМ» на ПЭВМ.

Отпечатано в филиале ФГУП «СТАНДАРТИНФОРМ» — тип. «Московский печатник», 105062 Москва, Лялин пер., 6.

ГОСТ Р 54075-2010

Содержание

1    Область применения...................................................1

2    Нормативные ссылки..................................................1

3    Термины и определения................................................2

4    Средства измерений, вспомогательное оборудование, материалы и реактивы..............3

5    Отбор проб.........................................................4

6    Метод определения общего количества спор мезофильных анаэробных бактерий............4

7    Метод определения количества спор мезофильных лактатсбраживающих анаэробных бактерий . . 7

Приложение А (обязательное) Рост споровых анаэробных бактерий на среде СДА............9

Приложение Б (обязательное) Рост споровых анаэробных лактатсбраживающих бактерий на среде

ЛАОСА..................................................10

Библиография........................................................11

НАЦИОНАЛЬНЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

МОЛОКО И МОЛОЧНАЯ ПРОДУКЦИЯ Методы определения содержания спор мезофильных анаэробных микроорганизмов

Milk and milk product.

Methods for determination of the spores content of mesophilic anaerobic microorganisms

Дата введения — 2012—01—01

1    Область применения

Настоящий стандарт распространяется на сырое и подвергнутое термизации или низкотемпературной пастеризации молоко, сыры и другую молочную продукцию и устанавливает методы определения в них содержания общего количества спор мезофильных анаэробных микроорганизмов (бактерий) и спор мезофильных лактатсбраживающих анаэробных микроорганизмов (бактерий).

2    Нормативные ссылки

В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие стандарты:

ГОСТ Р ИСО 7218-2008 Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Общие требования и рекомендации по микробиологическим исследованиям

ГОСТ Р 51652-2000 Спирт этиловый ректификованный из пищевого сырья. Технические условия ГОСТ Р 53430-2009 Молоко и продукты переработки молока. Методы микробиологического анализа

ГОСТ 199-78 Реактивы. Натрий уксуснокислый 3-водный. Технические условия ГОСТ 490-2006 Кислота молочная пищевая. Технические условия ГОСТ 745-2003 Фольга алюминиевая для упаковки. Технические условия ГОСТ 779-55 Мясо-говядина в полутушах и четвертинах. Технические условия ГОСТ 975-88 Глюкоза кристаллическая гидратная. Технические условия ГОСТ 1770-74 (ИСО 1042—83, ИСО 4788—80) Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия

ГОСТ 3118-77 Реактивы. Кислота соляная. Технические условия

ГОСТ 4025-95 Мясорубки бытовые. Технические условия

ГОСТ 4147-74 Реактивы. Железо (III) хлорид 6-водный. Технические условия

ГОСТ 4199-76 Реактивы. Натрий тетраборнокислый 10-водный. Технические условия

ГОСТ 4201-79 Реактивы. Натрий углекислый кислый. Технические условия

ГОСТ 4233-77 Реактивы. Натрий хлористый. Технические условия

ГОСТ 4328-77 Реактивы. Натрия гидроокись. Технические условия

ГОСТ 5556-81 Вата медицинская гигроскопическая. Технические условия

ГОСТ 6709-72 Вода дистиллированная. Технические условия

ГОСТ 9147-80 Посуда и оборудование лабораторные фарфоровые. Технические условия ГОСТ 9412-93 Марля медицинская. Общие технические условия ГОСТ 10163-76 Крахмал растворимый. Технические условия ГОСТ 12026-76 Бумага фильтровальная лабораторная. Технические условия ГОСТ 13805-76 Пептон сухой ферментативный для бактериологических целей. Технические условия

Издание официальное

ГОСТ 13928-84 Молоко и сливки заготовляемые. Правила приемки, методы отбора проб и подготовка их к анализу

ГОСТ 14919-83 Электроплиты, электроплитки и жарочные электрошкафы бытовые. Общие технические условия

ГОСТ 17206-96 Агар микробиологический. Технические условия ГОСТ 18300-87 Спирт этиловый ректификованный технический. Технические условия ГОСТ 19881-74 Анализаторы потенциометрические для контроля pH молока и молочных продуктов. Общие технические условия

ГОСТ 23683-89 Парафины нефтяные твердые. Технические условия

ГОСТ 25336-82 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры

ГОСТ 26678-85 Холодильники и морозильники бытовые электрические компрессионные параметрического ряда. Общие технические условия

ГОСТ 26809-86 Молоко и молочные продукты. Правила приемки, методы отбора и подготовка проб к анализу

ГОСТ 27752-88 Часы электронно-механические кварцевые настольные, настенные и часы-будильники. Общие технические условия

ГОСТ 28498-90 Термометры жидкостные стеклянные. Общие технические требования. Методы испытаний

ГОСТ 29169-91 (ИСО 648—77) Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки содной отметкой ГОСТ 29227-91 (ИСО 835-1—81) Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования

Примечание — При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов в информационной системе общего пользования — на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет или по ежегодно издаваемому информационному указателю «Национальные стандарты», который опубликован по состоянию на 1 января текущего года, и по соответствующим ежемесячно издаваемым информационным указателям, опубликованным в текущем году. Если ссылочный стандарт заменен (изменен), то при пользовании настоящим стандартом следует руководствоваться заменяющим (измененным) стандартом. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, применяется в части, не затрагивающей эту ссылку.

3 Термины и определения

В настоящем стандарте применены термины, установленные ГОСТ Р ИСО 7218, [1], а также следующие термины с соответствующими определениями:

3.1    общее количество спор мезофильных анаэробных бактерий: Количество микроорганизмов, сохранившихся после тепловой обработки исследуемого продукта или его разведений при температуре (75 + 1) °С в течение 30 мин, способных прорастать, размножаться и давать видимые признаки роста в анаэробных условиях на соответствующих основных питательных средах при температуре (37 + 1) °С.

3.2    количество спор мезофильных лактатсбраживающих анаэробных бактерий: Количество микроорганизмов, сохранившихся после тепловой обработки исследуемого материала или его разведений при температуре (75 + 1) °С в течение 30 мин, способных прорастать, размножаться и давать видимые признаки роста в анаэробных условиях при температуре (37 + 1) °С на соответствующих дифференциально-диагностических питательных средах, содержащих в качестве источника углеводного питания только лактаты.

3.3    основная питательная среда (общего назначения): Среда, предназначенная для выращивания различных микроорганизмов.

3.4    дифференциально-диагностическая питательная среда: Среда, предназначенная для разграничения отдельных групп (видов) микроорганизмов.

3.5    сухие питательные среды (СДА, ПАССА и др.): Порошкообразные или гранулированные питательные среды промышленного производства, отвечающие требованиям соответствующих документов, предназначенные для приготовления рабочих питательных сред, а также среды зарубежного производства, имеющие разрешение на их применение.

3.6    рабочая питательная среда: Среда, приготовленная из одноименной сухой питательной среды или отдельных компонентов и подготовленная для выполнения микробиологических посевов.

3.7    полужидкая (полутвердая) питательная среда: Рабочая питательная среда, содержащая микробиологического агара от 0,3 % до 0,8 %. 2

ГОСТ Р 54075-2010

3.8    рабочая питательная среда СДА: Полужидкая основная питательная среда для определения общего количества спор мезофильных анаэробных бактерий при контроле молока, сыров и другой молочной продукции.

3.9    рабочая питательная среда ПАССА: Полужидкая дифференциально-диагностическая питательная среда для определения спор лактатсбраживающих маслянокислых бактерий.

3.10    признак роста: Внешнее изменение питательной среды, свидетельствующее о росте и развитии микроорганизмов.

4 Средства измерений, вспомогательное оборудование, материалы и реактивы

Анализатор потенциометрический для контроля pH по ГОСТ 19881, диапазоном измерения pH 3—8, погрешностью измерения pH ± 0,02.

Весы лабораторные среднего класса точности, с пределом допускаемой абсолютной погрешности однократного взвешивания + 0,01 и±0,1 г.

Термостат жидкостный (редуктазник), позволяющий поддерживать температуру от 25 °С до 55 °С, с отклонением от заданной температуры ± 1 °С.

Термостат жидкостный, позволяющий поддерживать температуру от 15 °С до 55 °С, с отклонением от заданной температуры + 1 °С.

Термостат суховоздушный с естественной или принудительной циркуляцией воздуха, с охлаждением.

Стерилизатор паровой медицинский (автоклав).

Баня водяная с обогревом, позволяющая поддерживать температуру от 0 °С до 100 °С, с отклонением от заданной температуры + 2 °С.

Мясорубка бытовая по ГОСТ 4025.

Термометр стеклянный жидкостный (нертутный) по ГОСТ 28498, диапазоном измерения от 0 °С до 100 °С, ценой деления шкалы 1 °С.

Шкаф сушильный, обеспечивающий поддержание температуры (160 ± 5) °С.

Анаэростаты или другие устройства, создающие анаэробные условия.

Часы по ГОСТ 27752 или таймер.

Плитка электрическая по ГОСТ 14919.

Холодильник бытовой по ГОСТ 26678.

Спиртовка СЛ-1 по ГОСТ 25336.

Пробки резиновые конусные.

Емкости металлические или кастрюли, используемые для растворения, расплавления, нагревания или охлаждения питательных сред и воды.

Вспомогательное оборудование для отбора проб: трубка, отборник, шпатель, щуп, ложка, мешалка, нож, пробник.

Фольга алюминиевая по ГОСТ 745.

Вата медицинская гигроскопическая по ГОСТ 5556.

Бумага индикаторная универсальная.

Бумага фильтровальная лабораторная по ГОСТ 12026.

Марля медицинская по ГОСТ 9412.

Пипетки 1—1 (2)—1 поГОСТ29169.

Пипетки 1—1 (2)—1 (2)—1 (2,5,25) по ГОСТ 29227.

Колбы мерные 2—50 (100,200, 500,1000)—2 по ГОСТ 1770.

Колбы конические Кн—2—100 (250)—34ТХС по ГОСТ 25336.

Цилиндры 1 (2)—25 (50, 100)—1 по ГОСТ 1770.

Пробирки П1, П2—16—150 ТС по ГОСТ 25336.

Пробирки П1, П2—21—200 ТС по ГОСТ 25336.

Стаканчики для взвешивания (бюксы) типов СВ и СН по ГОСТ 25336.

Стекло часовое.

Ступки лабораторные фарфоровые с пестиком по ГОСТ 9147.

Ланцет.

Штатив для пробирок.

Агар микробиологический по ГОСТ 17206.

Кислота соляная по ГОСТ 3118, раствор объемной долей 20 %. 3

Кислота молочная по ГОСТ 490, раствор объемной долей 20 %.

Кальций молочнокислый по [2].

Натрия гидроокись по ГОСТ 4328, раствор массовой долей 20 %.

Натрий углекислый кислый по ГОСТ 4201, ч. д. а.

Натрий уксуснокислый 3-водный по ГОСТ 199, ч. д. а.

Натрий хлористый по ГОСТ 4233.

Натрий тетраборнокислый 10-водный по ГОСТ4199, ч. д. а.

Парафин по ГОСТ 23683.

Масло вазелиновое.

Пептон сухой ферментативный для бактериологических целей по ГОСТ 13805.

Гидролизат белков молока по [3].

Г идролизат казеина.

Мясо — говядина по ГОСТ 779.

Автолизат дрожжевой сухой по [4].

Глюкоза кристаллическая гидратная по ГОСТ 975.

Крахмал растворимый по ГОСТ 10163.

Кислота аскорбиновая пищевая по [5].

Цистеин солянокислый по [6].

Железо (Ш) хлорид 6-водный по ГОСТ 4147, ч. д. а.

Индикатор нейтральный красный (нейтральрот) по [7].

Среда сухая для определения спор мезофильных анаэробных бактерий (СДА) по [8].

Среда сухая для определения лактатсбраживающих анаэробных бактерий (ПАССА) по [9].

Спирт этиловый ректификованный по ГОСТ Р 51652 и спирт этиловый ректификованный технический по ГОСТ 18300.

Вода питьевая по [10].

Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.

Допускается применение других средств измерений, реактивов, по качеству и метрологическим характеристикам не уступающих перечисленным выше.

5    Отбор проб

Отбор проб и подготовка их к анализу — по ГОСТ Р 53430, ГОСТ 13928, ГОСТ 26809.

6    Метод определения общего количества спор мезофильных анаэробных бактерий

6.1    Сущность метода

Метод основан на способности спор мезофильных анаэробных микроорганизмов (бактерий), сохранившихся после тепловой обработки исследуемого материала или его разведений при температуре (75 ± 1)°С в течение 30 мин, прорастать, размножаться и давать видимые признаки роста в питательных средах.

Метод предназначен для оценки сырого молока и выявления источника микробиологической порчи молочных продуктов.

6.2    Подготовка к анализу

6.2.1    Приготовление раствора хлористого натрия (физиологический раствор) для приготовления разведений

В 1 дм3 питьевой воды растворяют 8,5 г хлористого натрия, затем раствор разливают по 10 см3 в чистые стеклянные пробирки диаметром 21 мм, по 93 см3 — в колбы. Емкости закрывают ватными пробками и стерилизуют при температуре (121 ± 2) °С в течение (20 ± 5) мин. После стерилизации в пробирках должно остаться около 9 см3, а в колбах — около 90 см3 раствора хлористого натрия.

6.2.2    Приготовление рабочей питательной среды СДА для определения общего количества спор мезофильных анаэробных бактерий

6.2.2.1 (50 + 5) г сухой среды СДА вносят в 1 дм3 воды, тщательно перемешивают, нагревают и кипятят 3—5 мин, не допуская пригорания. В полученной среде проверяют активную кислотность и при необходимости корректируют ее 20 %-ным раствором гидроокиси натрия или 20 %-ным раствором молочной или соляной кислоты до значения (7,3 ±0,1) pH. Готовую среду разливают в пробирки по 4

ГОСТ Р 54075-2010

(12 + 1) см3, закрывают ватными или ватно-марлевыми пробками и стерилизуют при температуре (121 + 2) °С втечение (15 + 1) мин.

Готовая рабочая питательная среда должна иметь интенсивно-красный цвет.

Готовую рабочую питательную среду хранят в холодильнике при температуре (8 + 2) °С не более 1 мес или при температуре от 18 °С до 23 °С не более 7 сут при условии сохранения внешнего вида среды.

6.2.2.2 Допускается приготовление рабочей питательной среды для определения общего количества спор мезофильных анаэробных бактерий из отдельных ингредиентов. Для этого в 1 дм3 питьевой воды вносят 33,3 г гидролизата белков молока, 15,0 г микробиологического агара, 0,5 г солянокислого цистеина или 1,0 г аскорбиновой кислоты, 1,0 г растворимого крахмала и 5,0 г уксуснокислого натрия. Растворяют добавленные компоненты, нагревая смесь в текучем паре. Добавляют 5,0 г глюкозы и 4,0 г сухого дрожжевого автолизата. Устанавливают pH (7,1+0,1), разливают среду в пробирки по (10 + 2) см3, закрывают ватными или ватно-марлевыми пробками и стерилизуют при температуре (121 + 2) °С втечение (15 + 1) мин.

При длительном хранении рабочей питательной среды (более 20 сут) после охлаждения пробирок со средой в стерильных условиях ватные пробки заменяют на стерильные резиновые пробки.

Рабочую питательную среду хранят в холодильнике при температуре (8 + 2) °С не более 1 мес или при температуре от 18 °С до 23 °С не более 7 сут при условии сохранения внешнего вида среды.

6.2.3    Приготовление водного агара

В 1 дм3 питьевой воды вносят 15 г агара и нагревают до кипения. После расплавления агара раствор в горячем состоянии разливают в пробирки по 15 см3 или в колбы по 50—100 см3, закрывают ватными пробками и стерилизуют при температуре (121 +2) °С втечение (15 + 1) мин.

6.3    Подготовка образцов к анализу

6.3.1    Подготовка образцов сырого молока и жидкой молочной продукции

Пробы жидкой молочной продукции (сырое молоко, восстановленное молоко и другие, аналогичные по консистенции продукты) тщательно перемешивают и отбирают для анализа стерильной пипеткой по 15 см3, переносят в стерильные пробирки, которые закрывают стерильными ватными пробками. При этом необходимо следить, чтобы капельки продукта не попадали на стенки пробирок.

Подготовленные пробирки вместе с контрольной пробиркой, в которой находится 10 см3 раствора хлористого натрия по 6.2.1 или воды и термометр, помещают в водяную баню. Уровень воды в водяной бане должен быть выше уровня продукта на 10—15 мм. Пробирки выдерживают при температуре (75 + 1) °С в течение (30 ± 3) мин, затем быстро охлаждают до комнатной температуры, погружая их в холодную воду.

В зависимости от предполагаемой обсемененности исследуемого жидкого молочного продукта спорами мезофильных анаэробных бактерий из прогретых проб готовят десятикратные разведения в соответствии с требованиями ГОСТ Р 53430.

Допускается приготовление разведений из непрогретых проб продуктов с последующим совместным прогревом проб исходных продуктов и их разведений при температуре (75 ± 1) °С в течение (30 + 3) мин.

6.3.2    Подготовка проб сыра и аналогичной по консистенции молочной продукции

В зависимости от предполагаемой обсемененности исследуемого сыра или иной молочной продукции спорами мезофильных анаэробных бактерий из отобранных проб готовят десятикратные разведения в соответствии с требованиями ГОСТ Р 53430.

Подготовленные пробирки с разведениями проб сыра или иной молочной продукции вместе с контрольной пробиркой, в которой находятся термометр и 10 см3 раствора хлористого натрия по 6.2.1 иливоды, помещают в водяную баню и выдерживают при температуре (75 + 1)°С втечение (30 + 3)мин.

6.4    Проведение анализа

6.4.1    Техника посева споровых анаэробных бактерий

Для создания условий развития анаэробных микроорганизмов могут быть использованы следующие приемы:

-    посев в высокий столбик рабочей питательной среды;

-    культивирование посевов в анаэростатах или других устройствах, создающих анаэробные условия;

-    применение специальных реагентов для создания анаэробных условий.

6.4.1.1    Посев анаэробных микроорганизмов проводят в пробирки с рабочей питательной средой, разлитой высоким столбиком. 5

Непосредственно перед посевом для снижения содержания свободного кислорода рабочие питательные среды кипятят в водяной бане в течение 10—20 мин. При кипячении из среды вытесняются газообразные вещества, в том числе кислород.

Пробирки с прокипяченными рабочими питательными средами быстро охлаждают до (40 ± 1) °С и используют для посева.

Засев рабочей питательной среды проводят соответствующим разведением посевного материала пипеткой. Посевной материал при этом должен свободно вытекать из пипетки без принудительного выдувания.

После проведения посева для уменьшения диффузии кислорода из воздуха рабочие питательные среды сверху заливают стерильным вазелиновым маслом или парафином, или водным агаром толщиной слоя (1,5 + 0,5) см.

При посеве анаэробных микроорганизмов возможно использование анаэробных инкубаторов или настольных анаэробных систем с газогенераторными пакетами.

6.4.2 Посев и культивирование

Для определения количества спор мезофильных анаэробных бактерий проводят посев 1 см3 подготовленной пробы (для молока — нулевое, первое и второе, для сыра — первое и второе разведения; для других молочных продуктов — в зависимости от предполагаемого уровня обсемененности) в пробирку с 10—12 см3 рабочей питательной среды, приготовленной по 6.2.2 или 6.2.3, выдержанной перед анализом в кипящей водяной бане в течение 30 мин и охлажденной до температуры (40 ± 1) °С.

Каждое из выбранных разведений исследуемого продукта засевают в две пробирки с рабочей питательной средой, внося посевной материал на дно пробирки, не допуская взбалтывания среды и не выдувая посевной материал.

Сверху посевы заливают слоем вазелинового масла или парафина, или водного агара по 6.2.3, предварительно расплавленного до температуры (45 ±1) °С. Высота слоя должна быть не менее (1,5 + 0,5)см.

При использовании для посева пробирок с рабочей питательной средой, разлитой высоким столбиком, допускается не заливать посевы защитным слоем вазелинового масла или парафина, или водного агара.

Пробирки с посевом помещают в термостат при температуре (37 ± 1) °С на 72 ч.

6.5 Обработка результатов

Наличие спор мезофильных анаэробных бактерий в засеянных объемах исследуемого продукта определяют по изменению окраски среды с красной нажелтую и газообразованию (появлению разрывов агарового столбика).

В посевах без защитного слоя рост мезофильных анаэробных бактерий определяют по пенообра-зованию, образованию «карманов» в столбике рабочей питательной среды и изменению цвета рабочей питательной среды с красного на желтый. В данном случае основным признаком роста является изменение окраски, так как процесс газообразования может быть не зафиксирован.

Наиболее вероятное число (НВЧ) спор мезофильных анаэробных бактерий при анализе определяют по числу пробирок, в которых они дали рост согласно таблице 1.

Таблица 1

Число пробирок с положительными результатами при посевах

Наиболее вероятное число спор в 1 см3

Число пробирок с положительными результатами при посевах

Наиболее вероятное число спор в 1 см3

1 см3

0,1 см3

0,01 см3

1 см3

0,1 см3

0,01 см3

0

0

0

0

1

1

2

0

0

1

0,5

1

2

0

2,0

0

0

2

1

2

1

3,0

0

1

0

0,5

1

2

2

0

1

1

0,9

2

0

0

2,5

0

1

2

2

0

1

5,0

0

2

0

0,9

2

0

2

0

2

1

2

1

0

6,0

Окончание таблицы 1

Число пробирок с положительными результатами при посевах

Наиболее вероятное число спор в 1 см3

Число пробирок с положительными результатами при посевах

Наиболее вероятное число спор в 1 см3

1 см3

0,1 см3

0,01 см3

1 см3

0,1 см3

0,01 см3

0

2

2

2

1

1

13,0

1

0

0

0,6

2

1

2

20,0

1

0

1

1,2

2

2

0

25,0

1

0

2

2

2

1

70,0

1

1

0

1,3

2

2

2

110,0

1

1

1

2,0

Более 110,0

Результаты, в которых число пробирок с положительными результатами при посевах соответствует 002, 012,021,022,102,112,122,202, не могут быть использованы для расчета, так как в большинстве случаев данные результаты вызваны теми или иными нарушениями при проведении анализа.

В данных случаях исследования повторяют.

Признаки роста споровых анаэробных бактерий на среде СДА представлены в приложении А.

7 Метод определения количества спор мезофильных лактатсбраживающих анаэробных бактерий

7.1    Сущность метода

Метод основан на способности спор мезофильных анаэробных лактатсбраживающих микроорганизмов (бактерий), сохранившихся после тепловой обработки исследуемого материала или его разведений при температуре (75 + 1) °С в течение 30 мин, прорастать, размножаться и давать видимые признаки роста в соответствующих дифференциально-диагностических питательных средах.

Метод предназначен для оценки сыропригодности сырого молока или выявления источника микробиологической порчи молочной продукции, в том числе сыров.

7.2    Подготовка к анализу

7.2.1    Растворы хлористого натрия и водного агара готовят по 6.2.1,6.2.3.

7.2.2    Приготовление мясопептонного бульона

Говяжье мясо, освобожденное от жира и сухожилий, пропускают через мясорубку, взвешивают, складывают в кастрюлю; заливают двойным количеством питьевой воды, отмечают первоначальный объем и оставляют на 18—24 ч при температуре (5 ± 1) °С. После этого для ускорения процесса экстракции питательных веществ из мяса содержимое кастрюли подогревают до температуры (50 ± 5) °С, выдерживают в течение 60 мин и затем кипятят 30—40 мин. После кипячения бульон в горячем состоянии фильтруют через двойной бумажный фильтр. Фильтрат доводят питьевой водой до первоначального объема, добавляют к нему (1,0 + 0,1)% бактериологического пептона и (0,5 ± 0,1)% хлористого натрия и устанавливают с помощью раствора гидроокиси натрия массовой долей 20 % активную кислотность (7,3 + 1) pH. Подготовленный бульон стерилизуют при температуре (121 ±2) °С в течение (15 ± 1) мин.

7.2.3    Приготовление рабочей питательной среды ПАССА для определения количества спор мезофильных анаэробных лактатсбраживающих бактерий

7.2.3.1    (50 + 5) г сухой среды ПАССА вносят в 1 дм3 дистиллированной воды, тщательно перемешивают, нагревают и кипятят 3—5 мин, не допуская пригорания. В полученной среде проверяют активную кислотность и при необходимости корректируют ее 20—30 %-ным раствором гидроокиси натрия или 20 %-ным раствором молочной кислоты до значения (5,7 ±0,1). Полученную рабочую питательную среду разливают в пробирки по (12 ± 1) см3, закрывают ватными пробками и стерилизуют при температуре (121 ±2)°Свтечение(15±1)мин.

7.2.3.2    Допускается приготовление рабочей питательной среды для определения количества спор мезофильных лактатсбраживающих анаэробых бактерий из отдельных ингредиентов.

Для этого к 900 см3 мясопептонного бульона, приготовленного по 7.2.2, добавляют 5,0 г молочнокислого кальция, 5,0 г уксуснокислого натрия, 0,8 г солянокислого цистеина или 1,0 г аскорбиновой кислоты, 4 г сухого дрожжевого автолизата и 20,0 г агара. 6

1

2

3

4

5

6