Товары в корзине: 0 шт Оформить заказ
Стр. 1
 

35 страниц

487.00 ₽

Купить ГОСТ Р 53991-2010 — официальный бумажный документ с голограммой и синими печатями. подробнее

Официально распространяем нормативную документацию с 1999 года. Пробиваем чеки, платим налоги, принимаем к оплате все законные формы платежей без дополнительных процентов. Наши клиенты защищены Законом. ООО "ЦНТИ Нормоконтроль".

Наши цены ниже, чем в других местах, потому что мы работаем напрямую с поставщиками документов.

Способы доставки

  • Срочная курьерская доставка (1-3 дня)
  • Курьерская доставка (7 дней)
  • Самовывоз из московского офиса
  • Почта РФ

Распространяется на продукты пищевые, корма и продовольственное сырье и устанавливает методы газожидкостной хроматографии с детектором электронного захвата и газожидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим детектором для идентификации и количественного определения маркерных и диоксиноподобных полихлорированных бифенилов.

Диапазон измерений для диоксиноподобных ПХБ от 2,0 до 2500,0 нг/кг, для маркерных ПХБ - от 1,0 до 1500,0 мкг/кг

  Скачать PDF

Действие завершено 15.02.2015

Оглавление

1 Область применения

2 Нормативные ссылки

3 Условия выполнения измерений и требования безопасности

4 Отбор проб

5 Определение ПХБ методом газожидкостной хроматографии с детектором электронного захвата (ГХ-Э3Д)

5.1 Сущность метода

5.2 Средства измерений, вспомогательное оборудование, материалы, реактивы

5.3 Подготовка к проведению анализа

5.4 Проведение анализа

6 Определение ПХБ методом газожидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим детектором (ГХ-МС)

6.1 Сущность метода

6.2 Средства измерений, вспомогательное оборудование, материалы, реактивы

6.3 Подготовка к проведению анализа

6.4 Проведение анализа

7 Обработка результатов

8 Контроль точности измерений

8.1 Контроль стабильности градуировочной характеристики

8.2 Контроль извлечения изотопно-меченых конгенеров маркерных и диоксиноподобных ПХБ для ГХ-МС анализа

8.3 Контроль смещения результатов количественного анализа с помощью аттестованных стандартных образцов

Приложение А (справочное) Абсолютные времена удерживания ПХБ

Приложение Б (обязательное) Допустимые уровни содержания ПХБ

Приложение В (обязательное) Коэффициенты эквивалентной токсичности ПХБ

Приложение Г (обязательное) Название ПХБ согласно номенклатуре ИЮПАК

Приложение Д (обязательное) Контроль стабильности результатов измерений

Библиография

Показать даты введения Admin

ФЕДЕРАЛЬНОЕ АГЕНТСТВО ПО ТЕХНИЧЕСКОМУ РЕГУЛИРОВАНИЮ И МЕТРОЛОГИИ

НАЦИОНАЛЬНЫМ

СТАНДАРТ

РОССИЙСКОЙ

ФЕДЕРАЦИИ

ПРОДУКТЫ ПИЩЕВЫЕ, КОРМА, ПРОДОВОЛЬСТВЕННОЕ СЫРЬЕ

Методы определения содержания полихлорированных бифенилов

Издание официальное

Москва

Стандартинформ

2011

Предисловие

Цели и принципы стандартизации в Российской Федерации установлены Федеральным законом от 27 декабря 2002 г. № 184-ФЗ «О техническом регулировании», а правила применения национальных стандартов Российской Федерации — ГОСТ Р 1.0 — 2004 «Стандартизация в Российской Федерации. Основные положения»

Сведения о стандарте

1    РАЗРАБОТАН Федеральным государственным учреждением «Всероссийский государственный Центр качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов» (ФГУ «ВГНКИ»), Федеральным государственным учреждением «Центральная научно-методическая ветеринарная лаборатория» (ФГУ«ЦНМВЛ»)

2    ВНЕСЕН Техническим комитетом по стандартизации ТК335 «Методы испытаний агропромышленной продукции на безопасность»

3    УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 29 ноября 2010 г. № 564-ст

4    ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодно издаваемом информационном указателе «Национальные стандарты», а текст изменений и поправок — в ежемесячно издаваемых информационных указателях «Национальные стандарты». В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ежемесячно издаваемом информационном указателе «Национальные стандарты». Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования — на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет

©Стандартинформ, 2011

Настоящий стандарт не может быть полностью или частично воспроизведен, тиражирован и распространен в качестве официального издания без разрешения Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии

В качестве внутреннего стандарта используют октахлорнафталин. Для определения диоксиноподобных ПХБ готовят раствор массовой концентрацией октахпорнафталина 30 нг/см3, для определения маркерных ПХБ — 100 нг/см3.

Допускается использование других разведений градуировочных растворов в указанном диапазоне измерений массовой концентрации ПХБ.

5.3.4.4    Для градуировки хроматографа используют не менее трех уровней концентраций рабочих градуировочных растворов. Определяемые в анализируемой пробе содержания индивидуальных конгене-ров должны находиться в диапазоне концентраций градуировочной кривой для каждого конгенера.

5.3.4.5    При установлении градуировочной характеристики для количественного определения диоксиноподобных ПХБ в инжектор хроматографа вводят по 1—3 мм3 не менее двух раз растворы для каждого градуировочного уровня в соответствии стаблицей 5.1.

При установлении градуировочной характеристики для количественного определения маркерных ПХБ в инжектор хроматографа вводят по 0,5—1,0 мм3 не менее двух раз растворов для каждого градуировочного уровня в соответствии стаблицей 5.2.

С помощью компьютерной системы обработки данных устанавливают градуировочную характеристику для площади пика методом внутреннего стандарта для каждого конгенера.

Коэффициент отклика для /-го конгенера к, рассчитывают по формуле

(5.1)

где S, — площадь пика для /-го конгенера в градуировочном растворе;

Mjs — массовая концентрация внутреннего стандарта в градуировочном растворе, нг/см3;

S/s — площадь пика внутреннего стандарта в градуировочном растворе;

М, — массовая концентрация /-го конгенера в градуировочном растворе, нг/см3.

При построении градуировочной зависимости используют линейную функцию типа у = ах + Ь.

5.3.4.6    Расчеты коэффициентов градуировочной зависимости выполняются системой обработки данных в автоматическом режиме.

5.3.4.7    Градуировочную характеристику считают приемлемой, если рассчитанное программным обеспечением значение квадрата коэффициента корреляции для каждого конгенера > 0,99, а значение «Accuracy» для каждой точки градуировочной кривой находится в диапазоне 80 % —120 %.

5.3.4.8    Построение новой градуировочной кривой проводят после каждого включения газового хроматографа (остановка работы для сервисного обслуживания или текущей профилактики).

5.3.4.9    Приготовленные градуировочные растворы и растворы внутренних стандартов хранят в морозильной камере при температуре не выше минус20 °С. Перед применением растворы выдерживают при комнатной температуре в темном месте не менее 30 мин.

5.3.5 Обработка проб

5.3.5.1    Анализируемую пробу измельчают на гомогенизаторе или перемешивают на орбитальном шейкере (жидкие пробы).

5.3.5.2    Для определения диоксиноподобных ПХБ гомогенат проб массой 3 г влажностью не более 15 % смешивают в фарфоровой ступке с 10 г натрия сернокислого и используют для ускоренной экстракции.

Для проб влажностью более 15 % гомогенат проб массой 5 г растирают в фарфоровой ступке с 10 г натрия сернокислого и высушивают в микроволновой печи в течение 2—3 мин. Высушенную пробу повторно растирают до однородного состояния и используют для экстракции.

Полученную смесь помещают в экстракционную ячейку вместимостью 33 см3, заполненную согласно рисунку 5.1.

5.3.5.3    Для определения маркерных ПХБ гомогенат проб массой 1 г влажностью не более 15 % смешивают в фарфоровой ступке с 5 г натрия сернокислого и используют для ускоренной экстракции.

Для проб влажностью более 15% гомогенат проб массой 1 г растирают в фарфоровой ступке с 5—7 г натрия сернокислого до сыпучего состояния и высушивают в микроволновой печи в течение 2—3 мин. Высушенную пробу повторно растирают до однородного состояния и используют для экстракции.

Полученную смесь помещают в экстракционную ячейку вместимостью 33 см3, заполненную согласно рисунку 5.2.

ГОСТ P 53991—2010


Фильтр бумажный


Натрий сернокислый до фильтра


Проба с сульфатом натрия


Фильтр из стекловолокна


Силикагель с серной кислотой (5.3.2.1) 2 г


Силикагель (5.3.1.5) 1 г


Силикагель с серной кислотой (5.3.2.1) 2 г


Силикагель (5.3.1.5) 1 г


Силикагель с серной кислотой (5.3.2.1) 2 г


Силикагель (5.3.1.5) 2 г


Фильтр бумажный


Рисунок 5.1 — Схема заполнения экстракционной ячейки для экстракции диоксиноподобных ПХБ


Фильтр бумажный Натрий сернокислый до фильтра Проба с сульфатом натрия Фильтр из стекловолокна Силикагель с серной кислотой (5.3.2.1) 2 г Силикагель (5.3.1.5) 1 г Силикагель с серной кислотой (5.3.2.1) 2 г Силикагель (5.3.1.5) 1 г Силикагель с серной кислотой (5.3.2.1) 3 г Силикагель (5.3.1.5) 1 г Силикагель с серной кислотой (5.3.2.1) 2 г Силикагель (5.3.1.5) 2 г Фильтр бумажный


Рисунок 5.2 — Схема заполнения экстракционной ячейки для экстракции маркерных ПХБ


5.3.5.4    Взвешивание компонентов при заполнении экстракционныхячеек проводят непосредственно в экстракционной ячейке последовательно согласно схемам их заполнения.

5.3.5.5    Заполненные ячейки помещают в экстрактор, устанавливая параметры экстракции в соответствии с таблицей 5.3.


9


Таблица 5.3 — Параметры экстракции ПХБ

Параметры

Условия

Температура, °С

80

Время нагревания, мин

5

Количество циклов

2

Растворитель

н-гексан

Давление, МПа

10

Время термостатирования, мин

5

Объем растворителя от вместимости ячейки, %

60

Вместимость ячейки, см3

33

Время продувки азотом, с

100

5.3.5.6    Полученные гексановые экстракты количественно переносят из приемных флаконов экстрактора в круглодонные колбы вместимостью 100 см3 и упаривают на ротационном испарителе при температуре от 35 °С до 37 °С до объема от 0,5 до 1,0 см3.

5.3.5.7    Для определения диоксиноподобных ПХБ остаток после упаривания на ротационном испарителе дополнительно очищают последовательно на колонке с активированным углем и затем на колонке с силикагелем, импрегнированным серной кислотой (5.3.2.1).

5.3.5.8    Для определения маркерных ПХБ упаренный остаток количественно переносят в стеклянную виалу вместимостью 4 см3, добавляют 50 мм3 раствора внутреннего стандарта (октахпорнафталин 100 нг/см3 в ундекане по 5.3.4.3) и отдувают в термостатируемом нагревательном модуле в токе азота при температуре от 18 °С до 20 °С до конечного объема 50 мм3. Остаток переносят в виалу для автосамплера вместимостью 2 см3 со стеклянным вкладышем. Полученный экстракт используют для ГХ-ЭЗД анализа.

5.3.5.9    Для очистки (фракционирования) с активированным углем на дно пастеровской пипетки помещают стекловату (5.3.1.4), а затем насыпают 10 %-ную смесь активированного угля на сорбенте (5.3.2.4). Сверху укрепляют сорбент слоем стекловаты. Высота слоя сорбента (10 ± 1) мм.

5.3.5.10    Подготовленную колонку промывают последовательно по одному объему колонки толуолом, дихпорметаном, 5 %-ным раствором дихлорметана в гексане (5.3.2.6).

5.3.5.11    Пипеточным дозатором количественно переносят концентрированную пробу из выпарительной колбы на колонку (при элюировании через колонку вакуум или избыточное давление не применяют). Колбу дополнительно обмывают 1 см3 5 %-ного раствора дихлорметана в гексане (5.3.2.6), отбирают пипеточным дозатором и наносят на колонку. Промывают колонку последовательно, один раз 1 см3 50 %-ного раствора дихлорметана в гексане (5.3.2.7) и два раза по 3 см3 50 %-ного раствора дихлорметана в гексане (5.3.2.7). Промывные фракции удаляют.

5.3.5.12    Колонку промывают в обратном направлении 2 см3 50 %-ного раствора дихлорметана в гексане (5.3.2.7) и 10 см3толуола, собирая элюаты в круглодонную колбу вместимостью 50 см3 (при обратном элюировании через колонку вакуум или избыточное давление не применяют). Объединенный элюат (фракция диоксиноподобных ПХБ) упаривают на ротационном испарителе при температуре от 55 °С до 57 °С до объема от 0,1 до 0,3 см3. Затем к концентрату приливают 1 см3 гексана и очищают на колонке с силикагелем, импрегнированным серной кислотой. Для этого на дно пастеровской пипетки укладывают стекловату (5.3.1.4) и затем четыре слоя сорбента (высота каждого слоя 1 см): силикагель (5.3.1.5), силикагель с серной кислотой (5.3.2.1), силикагель (5.3.1.5), силикагель с серной кислотой (5.3.2.1). Верхний слой сорбента укрепляют стекловатой.

5.3.5.13    Подготовленную колонку промывают последовательно по одному объему колонки дихлорме-таном и 5 %-ным раствором дихлорметана в гексане (5.3.2.6). Промывные фракции удаляют. Затем через колонку пропускают фракцию диоксиноподобных ПХБ. Колбу дополнительно обмывают 1 см3 5 %-ного раствора дихлорметана в гексане (5.3.2.6), отбирают пипеточным дозатором и наносят на колонку. Элюируют ПХБ 10 см3 5 %-ного раствора дихлорметана в гексане (5.3.2.6). Полученный элюат упаривают на ротационном испарителе при температуре от 35 °С до 37 °С до объема от 0,5 до 1,0 см3. Остаток количественно переносят в стеклянную виалу вместимостью 4 см3, добавляют 20 мм3 раствора внутреннего стандарта (окгахлорнафталин 30 нг/см3 в ундекане по 5.3.4.3) и отдувают в термостатируемом нагревательном модуле в токе азота при температуре от 18 °С до 20 °С до конечного объема 20 мм3. Остаток после отдувки растворителей переносят в виалу для автосамплера вместимостью 2 см3 со стеклянным вкладышем. Полученный экстракт используют для ГХ-ЭЗД анализа.

ю

ГОСТ Р 53991-2010

5.3.5.14    Для исключения ложноположительных результатов вследствие возможной контаминации лабораторной посуды и реактивов ПХБ параллельно с анализируемыми пробами экстрагируют и очищают методом колоночной хроматографии не менее двух холостых проб (экстракционные ячейки заполняют согласно приведенным выше схемам, вместо проб используют натрий сернокислый). Найденное среднее значение В,-содержания каждого конгенера в холостых пробах вычитают из результатов испытания анализируемых проб.

5.3.5.15    Для измерения проб с содержанием маркерных ПХБ менее 1 мкг/кгили диоксиноподобных ПХБ менее 2 нг/кг проводят экстракцию нескольких экстракционных ячеек, заполненных анализируемой пробой согласно вышеописанной методике подготовки проб. Для определения маркерных ПХБ полученные экстракты нескольких экстракционных ячеек объединяют и концентрируют до объема 50 мм3 с 50 ммундеканового раствора внутреннего стандарта с концентрацией октахлорнафталина 100 нг/см3 (5.3.4.3). Для определения диоксиноподобных ПХБ полученные экстракты нескольких экстракционных ячеек объединяют, упаривают на ротационном испарителе до объема от 0,5 до 1,0 см3 и затем очищают на колонке с активированным углем и колонке с силикагелем, импрегнированным серной кислотой по приведенной выше схеме. Полученный элюат после стадий колоночной очистки концентрируют с20 мм3 ундеканового раствора внутреннего стандарта с концентрацией октахлорнафталина 30 нг/см3 (5.3.4.3).

5.3.5.16    Так как при определении маркерных ПХБ не используют фракционирование на активированном угле, необходимо при проведении ускоренной экстракции учитывать содержание жира в анализируемой пробе. Независимо от вида продукции содержание жира в анализируемой пробе для экстракции должно быть в 30—40 раз меньше количества силикагеля, импрегнированного серной кислотой, используемого при заполнении экстракционной ячейки. При меньших соотношениях в экстракте содержатся остаточные количества жира, который приводит к дискриминации пробы в инжекторе хроматографа и занижению результатов определения ПХБ, а также требует более частой замены вкладыша в инжекторе хроматографа.

Фильтр бумажный Натрий сернокислый до фильтра Проба с сорбентом «Hydromatrix» Натрий сернокислый 2 г Фильтр бумажный


5.3.5.17    Определение количества сырого жира проводят методом ускоренной экстракции. Экстракционную ячейку заполняют согласно рисунку 5.3.

Рисунок 5.3 — Схема заполнения экстракционной ячейки для экстракции сырого жира

Для влажных проб проводят сушку в микроволновой печи, как описано в 5.3.5.2.

Заполненные ячейки помещают в экстрактор, устанавливая параметры экстракции в соответствии с таблицей 5.4.

Таблица 5.4 — Параметры экстракции

Параметры

Условия

Температура, °С

120

Время нагревания, мин

5

Количество циклов

2

Растворитель

н-гексан/изопропанол, 1/1

Давление, МПа

10

Время термостатирования, мин

15

Объем растворителя от вместимости ячейки, %

50

Вместимость ячейки, см3

33

Время продувки азотом, с

100

11

5.3.5.18 Полученные экстракты количественно переносят из приемных флаконов экстрактора в предварительно высушенные до постоянной массы круглодонные колбы вместимостью 100 см3 и упаривают на ротационном испарителе при температуре 60 °С досуха. Колбы переносят в сушильный шкаф и высушивают до постоянной массы при температуре от 100 °С до 105 °С, охлаждают в эксикаторе и затем взвешивают на аналитических весах.

Содержание сырого жира С, г/100 г или %, рассчитывают по формуле

(5.2)

^ _ (Л4, -М2

с- мп

где М1 — масса колбы с экстрактом жира, высушенной до постоянной массы, г;

М2 — масса пустой колбы, высушенной до постоянной массы, г;

Мп — масса анализируемой пробы, г.

5.4 Проведение анализа

5.4.1    Для определения диоксиноподобных ПХБ в инжектор хроматографа вводят 1,0—3,0 мм3 экстракта и проводят анализ в условиях, указанных в 5.3.3.

5.4.2    Для определения маркерных ПХБ в инжектор хроматографа вводят 0,5—1,0 мм3 экстракта и проводят анализ в условиях, указанных в 5.3.3.

5.4.3    Проводят не менее двух определений для каждой анализируемой пробы.

5.4.4    Время удерживания конгенеров ПХБ определяют при анализе градуировочных растворов.

5.4.5    Значения абсолютного времени удерживания анализируемых конгенеров ПХБ приведены в приложении А.

5.4.6    Коррекцию абсолютного времени удерживания при отображении хроматограмм в окне обработки данных программного обеспечения проводят, используя опцию сдвига хроматограмм «Offsets».

5.4.7    Для коррекции систематических сдвигов времени удерживания при обработке хроматограмм выбирают два или три конгенера в качестве реперных пиков, указывая допустимое для них относительное отклонение 1 %.

т,-тп

т5п


Я/ =


(5.3)


5.4.8    При определении времени удерживания допускается использовать относительное время удерживания /-го конгенера R„ определяемого программным обеспечением или рассчитанного по формуле

где Г/ — абсолютное время удерживания /'-го конгенера, мин;

Тп — абсолютное время удерживания неудерживаемого вещества, мин;

Ts— абсолютное время удерживания внутреннего стандарта (октахлорнафталин), мин.

5.4.9 Отклонения значений относительного времени удерживания конгенеров ПХБ, полученных при анализе пробы, от значений относительного времени удерживания, полученных при анализе градуировочных растворов ПХБ, не должны отличаться более чем на 0,003.

6 Определение ПХБ методом газожидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим детектором (ГХ-МС)

6.1    Сущность метода

Идентификацию маркерных и диоксиноподобных ПХБ в анализируемой пробе методом ГХ-МС проводят по времени удерживания конгенеров, соотношениям относительных ионных интенсивностей детектируемых дочерних ионов и отклонениям относительных ионных интенсивностей дочерних ионов в анализируемой пробе от полученных при анализе градуировочных растворов ПХБ.

Количественное определение маркерных и диоксиноподобных ПХБ проводят методом внутреннего стандарта по площади пика идентифицированных соединений относительно градуировочной кривой, полученной при анализе градуировочных растворов известных соединений в аналогичных условиях.

6.2    Средства измерений, вспомогательное оборудование, материалы, реактивы

При определении содержания ПХБ применяют средства измерений, вспомогательное оборудование и материалы по 5.2, за исключением окгахлорнафталина и газового хроматографа с детектором электронного захвата, вместо которого применяют:

-хромато-масс-спектрометр, позволяющий проводить измерения в диапазоне масс 10—650 а.е.м., разрешением по шкале масс не более 1,0 а.е.м. и чувствительностью в режиме ионизации электронным

12

ГОСТ P 53991—2010

ударом: при инжекции в колонку 2 пг гексахлорбензола (сканирование в диапазоне от 45 до 350 а.е.м. за 1 с) отношение сигнал/шум на молекулярном ионе с m/z* 284 не менее 10/1;

-    кварцевую капиллярную колонку 50 м х 0,25 мм х 0,25 мкм с индексом полярности неподвижной жидкой фазы от 5 до 30.

6.3 Подготовка к проведению анализа

6.3.1    Подготовку лабораторной посуды и реактивов проводят по 5.3.1.

6.3.2    Параметры хромато-масс-спектрометрических измерений

6.3.2.1    Хромато-масс-спектрометр включают в соответствии с руководством (инструкцией) по эксплуатации и устанавливают параметры, рекомендуемые изготовителем капиллярных колонок.

6.3.2.2    Для кварцевой капиллярной колонки 50 м х 0,25 мм х0,25 мкм используют следующие хроматографические параметры:

а)    газ-носитель — гелий;

б)    скорость потока газа-носителя 0,8 см3/мин;

в)    параметры работы инжектора (для проб объемом до 1 мм3):

1)    вкладыш внутренним диаметром 2 мм для работы в режиме без деления потока:

-    0—3 мин в режиме без деления потока;

-3 мин в режиме с делением потока 1/10;

2)    температура инжектора 280 °С;

г)    параметры работы инжектора (для проб объемом от 1 до 3 мм3):

1)    вкладыш внутренним диаметром 2 мм, заполненный стекловатой, для работы в режиме без деления потока:

-    0—0,3 мин в режиме деления потока 1/10;

-    0,3 мин до 3 мин в режиме без деления потока;

-3 мин в режиме деления потока 1/10;

2)    начальная температура инжектора 90 °С — 0,3 мин;

3)    с 0,3 мин программируемый нагрев от 90 °С до 280 °С со скоростью 200 °С/мин;

4)    изотерма при 280 °С до 30 мин;

д)    температурная программа колонки:

1)    начальная температура 120 °С — 1,0 мин;

2)    программируемый нагрев от 120 °С до 150 °С со скоростью 15,0 °С/мин;

3)    программируемый нагрев от 150 °С до 280 °С со скоростью 2,5 °С/мин;

4)    изотерма при 280 °С до 60 мин;

5)    время анализа 60 мин;

е)    параметры работы автосамплера:

1)    режим работы — пользовательский;

2)    растворитель для промывки шприца — изооктан;

3)    ввод пробы с пробкой растворителя и промывка шприца изоокганом;

4)    объем пробки растворителя 1,0 мм3;

5)    время промывки шприца растворителем 40 с;

6)    скорость набора пробы в шприц 1,0 мм3/с;

7)    скорость ввода пробы 0,5 мм3/с;

8)    время нахождения иглы в инжекторе после ввода пробы 2,0 мин, для ввода проб в режиме с делением потока;

9)    время нахождения иглы в инжекторе после ввода пробы 0,04 мин, для ввода проб в режиме без деления потока.

6.3.2.3    Для настройки масс-спектрометрического детектора типа «ионная ловушка» применяют следующие общие параметры:

-    температура ионной ловушки 220 °С;

-    температура блока сопряжения 250 °С;

-    температура вакуумируемого блока 60 °С;

-    диапазон регистрируемых масс 126—500 m/z;

-    окно изоляции масс 1,5 m/z;

-    задержка работы катода/умножителя 12 мин;

Отношение массы иона к его заряду.

13

-    продолжительность периода сканирования 0,5 с;

-    дополнительное напряжение на умножителе 200 В;

-    ток эмиссии катода 50—90 мкА;

-    максимальное время ионизации 25 000 мкс;

-    значение напряжения продольной модуляции 4,0 В.

Допускается применение других параметров масс-спектрометрического детектора, обеспечивающих чувствительность и селективность анализа.

6.3.2.4 Для метода воздействия на ионы в режиме мониторинга нескольких реакций (MRM) при резонансной диссоциации ионов применяют параметры, указанные в таблице 6.1.

Таблица 6.1 — Параметры метода воздействия на ионы в режиме MRM при резонансной активации выбранных ионов для ионной ловушки

Конгенер ПХБ

Ион-

предшест-

венник,

m/z

Параметр СЮ RF, m/z

Параметр

СЮ,

В

Дочерние

ионы,

m/z

Соотношения относительных ионных интенсивностей дочерних ионов,

± 20 %

28

258 (М+2)

133

1,2

186/188

2,0

28L

270 (М+2)

141

1,2

198/200

2,0

52, 81, 77

292 (М+2)

157

1,2

220/222

1,0

52L, 81Ц77Ц 70L

304 (М+2)

166

1,2

232/234

1,0

101 105,114, 118, 123, 126

326 (М+2)

181

1,6

254/256

0,6

101L, 105L, 114L, 118L, 123L,

1261_| 111L

338 (М+2)

190

1,6

266/268

0,6

138, 153, 156, 157, 167, 169

360 (М+2)

206

1,6

288/290

0,5

138L 153L 156L 157L, 167L

169L

372 (М+2)

214

1,6

300/302

0,5

180, 189

396 (М+4)

231

1,6

324/326

1,0

180L, 189L, 170L

408 (М+4)

240

1,6

336/338

1,0

6.3.2.5 Для резонансного метода для ионной ловушки применяют следующие специализированные параметры:

-    уровень удерживающего радиочастотного поля 48 m/z;

-    амплитуда вспомогательного широкополосного сигнала 40 В;

-    амплитуда широкополосного сигнала 30 В;

-    время изоляции 5 мс;

-    время возбуждения 20 мс;

-диапазон модуляции 2;

-    скорость модуляции удерживающего поля 5600 мкс;

-    число частотных составляющих сигнала активации 1;

-    величина сдвига сигнала активации 0 Гц.

Допускается использование другиххроматографическихусловий и параметров настройки масс-спектрометрического детектора, обеспечивающих разделение компонентов пробы, а также позволяющих проводить измерения в указанном диапазоне содержаний конгенеров.

6.3.3 Подготовка хромато-масс-спекгрометрической системы

6.3.3.1    Подготовку хромато-масс-спектрометра к работе осуществляют в соответствии стехническим руководством по эксплуатации прибора.

6.3.3.2    Для проверки чувствительности ПХ-МС системы в инжектор хроматографа при соблюдении параметров, указанных в 6.3.2, вводят 1—3 мм3 раствора ПХБ градуировочного уровня № 1 в соответствии стаблицейб.2.

Таблица 6.2 — Массовая концентрация диоксиноподобных ПХБ в градуировочных растворах

Конгенер

Массовая концентрация диоксиноподобных конгенеров ПХБ для градуировочного уровня, нг/см3

№ 1

№ 2

№ 3

№ 4

№ 5

Нативные конгенеры ПХБ

81

0,2

2

20

200

500

77

0,2

2

20

200

500

105

0,2

2

20

200

500

114

0,2

2

20

200

500

118

0,2

2

20

200

500

123

0,2

2

20

200

500

126*

0,2

2

20

200

500

156

0,2

2

20

200

500

157

0,2

2

20

200

500

167

0,2

2

20

200

500

169

0,2

2

20

200

500

189

0,2

2

20

200

500

Изотопно-меченые конгенеры/внутренний стандарт № 1.1 (суррогаты)

81L

20

20

20

20

20

77L

20

20

20

20

20

105L

20

20

20

20

20

114 L

20

20

20

20

20

118 L

20

20

20

20

20

123L

20

20

20

20

20

126L

20

20

20

20

20

156L

20

20

20

20

20

157L

20

20

20

20

20

167L

20

20

20

20

20

169L

20

20

20

20

20

189L

20

20

20

20

20

Изотопно-меченые конгенеры/внутренний стандарт № 2.1 (извлечение)

70L

20

20

20

20

20

111 L

20

20

20

20

20

138L

20

20

20

20

20

170L

20

20

20

20

20

* Соотношение сигнал — шум должно быть не менее 5/1.

6.3.3.3 Для градуировки хромато-масс-спектрометра используют исходные градуировочные растворы ПХБ, на основании которых приготавливают рабочие градуировочные растворы в ундекане согласно таблице 6.2 (для определения диоксиноподобных ПХБ) или таблице 6.3 (для определения маркерных ПХБ).

Таблица 6.3 — Массовая концентрация маркерных ПХБ в градуировочных растворах

Конгенер

Массовая концентрация маркерных конгенеров ПХБ для градуировочного уровня, нг/см3

№ 1

№ 2

№ 3

№ 4

№ 5

Нативные конгенеры ПХБ

28

2

20

100

500

1000

52

2

20

100

500

1000

101

2

20

100

500

1000

138

2

20

100

500

1000

153

2

20

100

500

1000

180

2

20

100

500

1000

Изотопно-меченые конгенеры/внутренний стандарт № 1.2 (суррогаты)

28L

50

50

50

50

50

52L

50

50

50

50

50

101L

50

50

50

50

50

138L

50

50

50

50

50

153L

50

50

50

50

50

180L

50

50

50

50

50

Изотопно-меченые конгенеры/внутренний стандарт № 2.2 (извлечение)

70L

50

50

50

50

50

В качестве внутренних стандартов используют меченные изотопами 13С аналоги маркерных и диоксиноподобных ПХБ в ундекане. Для каждого анализируемого конгенера ПХБ следует использовать соответствующий изотопно-меченый аналог.

Допускается использование других разведений градуировочных растворов в указанном диапазоне измерений содержаний ПХБ.

6.3.3.4    Для получения градуировочных данных используют не менее трех уровней концентраций градуировочных растворов. Определяемые в анализируемой пробе содержания индивидуальных конгене-ров должны находиться в диапазоне концентраций градуировочной кривой для каждого конгенера.

6.3.3.5    Установление градуировочной характеристики проводят по 5.3.4.5 — 5.3.4.7,5.3.4.9, при этом для количественного определения диоксиноподобных ПХБ в инжектор хроматографа вводят растворы в соответствии с таблицей 6.2, маркерных ПХБ — в соответствии стаблицей 6.3.

6.3.3.6    Вычисление площади пика проводят на двух дочерних ионах (согласно таблице 6.1) для каждого конгенера. Соотношения относительных ионных интенсивностей дочерних ионов должны соответствовать значениям, указанным в таблице 6.1.

6.3.3.7    Установление новой градуировочной зависимости проводят после каждого включения хрома-то-масс-спекгрометра (остановка работы для сервисного обслуживания или текущей профилактики).

6.3.3.8    Дополнительно готовят растворы внутренних стандартов № 1.1,1.2 и № 2.1,2.2. Растворы суррогатов готовят с массовой концентрацией изотопно-меченых конгенеров 20 нг/см3 (№ 1.1) и 50 нг/см(№ 1.2) в изооктане. Растворы для контроля извлечения готовят с массовой концентрацией изотопно-меченых конгенеров 20 нг/см3 (№ 2.1) и 50 нг/см3 (№ 2.2) в ундекане.

6.3.4 Обработка проб

Обработку проб проводят по 5.3.5 со следующими изменениями.

6.3.4.1 Вместо раствора внутреннего стандарта октахлорнафталин 100 нг/см3 в ундекане применяют раствор внутренних стандартов № 2.2 (массовая концентрация изотопно-меченых конгенеров 50 нг/смв ундекане), вместо раствора внутреннего стандарта октахлорнафталин 30 нг/см3 в ундекане — раствор внутренних стандартов № 2.1 (массовая концентрация изотопно-меченых конгенеров 20 нг/см3 в ундекане).

16

ГОСТ P 53991—2010

6.3.4.2    В экстракционную ячейку, заполненную согласно рисунку 5.1, на слой пробы наносят 20 ммраствора изотопно-меченых конгенеров (суррогатов) в изооктане № 1.1 (массовая концентрация меченых конгенеров 20 нг/см3).

В экстракционную ячейку, заполненную согласно рисунку 5.2, на слой пробы наносят 50 мм3 раствора изотопно-меченых конгенеров (суррогатов) в изоокгане N21.2 (массовая концентрация меченых конгенеров 50 нг/см3).

6.3.4.3    При измерении проб с содержанием маркерных ПХБ менее 1 мкг/кг или диоксиноподобных ПХБ менее 2 нг/кг количество добавки суррогатов, вносимых в пробу перед экстракцией, уменьшают кратно количеству экстрагируемых ячеек.

6.4 Проведение анализа

Анализ проводят по 5.4 со следующими изменениями.

6.4.1    Анализ проводят в условиях, указанных в 6.3.2.

6.4.2    Значения абсолютного времени удерживания анализируемых конгенеров ПХБ приведены в приложении Б.

6.4.3    Для коррекции систематических сдвигов времени удерживания при обработке хроматограмм в качестве реперных пиков используют соответствующие изотопно-меченые конгенеры ПХБ. Допустимое относительное отклонение абсолютного времени удерживания их изотопно-меченых конгенеров не должно превышать 0,15 %.

6.4.4    Для коррекции систематических сдвигов времени удерживания допускается использовать относительное время удерживания /-го конгенера Rh определяемого программным обеспечением или рассчитанного по формуле:

Ri=i~,    (6-2)

1 IS

где Tj—абсолютное время удерживания /-го конгенера, мин;

Tjs—абсолютное время удерживания изотопно-меченого аналога /-го конгенера, мин.

6.4.5 Отклонения значений относительного времени удерживания конгенеров ПХБ, полученных при анализе пробы, от значений относительного времени удерживания, полученных при анализе градуировочных растворов ПХБ, не должны отличаться более чем на 0,002.

7 Обработка результатов

7.1 В соответствии сданными, полученными при анализе градуировочных растворов, создаюттабли-цу пиков с использованием программного обеспечения хроматографа или масс-спектрометра соответственно. Метод обработки хроматограммы — внутренний стандарт.

Содержание /-го нативного конгенера в анализируемой пробеX,, нг/кг, рассчитывают по формуле

(7.1)

SiMismo

' SiskiW

где S,— площадь пика /-го нативного конгенера в анализируемой пробе;

Mis — количество внутреннего стандарта в анализируемой пробе по 5.3.5.2 или суррогата, добавленного к анализируемой пробе перед экстракцией, по 6.3.4.2, нг;

1000 — коэффициент пересчета в нг/кг;

S/s — площадь пика внутреннего стандарта (суррогата) в анализируемой пробе;

к/— коэффициент отклика для /-го конгенера [см. формулу (5.1)];

И/— масса анализируемой пробы, г.

7.2    Расчеты содержания конгенера и площади пика выполняют с помощью системы обработки данных в автоматическом режиме.

7.3    Для ГХ-МС анализа вычисление площади пика проводят на двух дочерних ионах (согласно таблице 6.1) для каждого конгенера. Отклонения относительных ионных интенсивностей дочерних ионов в анализируемой пробе от относительных ионных интенсивностей дочерних ионов, полученных при анализе градуировочных растворов, не должны превышать значений, указанных в таблице 7.1.

17

ГОСТ P 53991—2010

Содержание

1    Область применения........................................ 1

2    Нормативные ссылки....................................... 1

3    Условия выполнения измерений и требования    безопасности.................... 2

4    Отбор проб............................................ 3

5    Определение ПХБ методом газожидкостной хроматографии с детектором электронного захвата

(ГХ-ЭЗД).............................................. 3

5.1    Сущность метода....................................... 3

5.2    Средства измерений, вспомогательное оборудование,    материалы, реактивы.......... 3

5.3    Подготовка к проведению анализа............................... 5

5.4    Проведение анализа...................................... 12

6    Определение ПХБ методом газожидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим детектором (ГХ-МС)............................................ 12

6.1    Сущность метода....................................... 12

6.2    Средства измерений, вспомогательное оборудование,    материалы, реактивы.......... 12

6.3    Подготовка к проведению анализа............................... 13

6.4    Проведение анализа...................................... 17

7    Обработка результатов...................................... 17

8    Контроль точности измерений................................... 21

8.1    Контроль стабильности градуировочной характеристики.................... 21

8.2    Контроль извлечения изотопно-меченых конгенеров маркерных и диоксиноподобных ПХБ для

ГХ-МС анализа......................................... 22

8.3    Контроль смещения результатов количественного анализа с помощью аттестованных стандартных образцов......................................... 23

Приложение А (справочное) Абсолютные времена удерживания ПХБ................ 24

Приложение Б (обязательное) Допустимые уровни содержания ПХБ................. 27

Приложение В (обязательное) Коэффициенты эквивалентной токсичности ПХБ............ 29

Приложение Г (обязательное) Название ПХБ согласно номенклатуре ИЮПАК............ 30

Приложение Д (обязательное) Контроль стабильности результатов измерений............ 31

Библиография............................................ 32

Таблица 7.1 — Максимально допустимые отклонения относительных ионных интенсивностей

Относительная ионная интенсивность (% от основного пика)

Максимально допустимые отклонения для ГХ-МС-МС детектирования, %

Св. 50

± 20

» 20 до 50 включ.

± 25

» 10 » 20 »

± 30

Менее 10 »

± 50

7.4    Результаты измерений маркерных ПХБ округляют до первого десятичного знака и выражают в мкг/кг.

7.5    Результаты измерений диоксиноподобных ПХБ округляют до второго десятичного знака и выражают суммой содержания конгенеров в нг/кг ТЭ ВОЗ (токсических эквивалентах Всемирной организации здравоохранения) для каждого конгенера в соответствии с таблицей В.1 приложения В.

7.6    Для выражения концентрации диоксиноподобных ПХБ в ТЭ ВОЗ полученные значения содержания конгенеров в нг/кг умножают на соответствующий коэффициент эквивалентной токсичности /-го конгенера (в соответствии с таблицей В.1 приложения В) для ГХ-ЭЗД анализа или наТЭ ВОЗ для ГХ-МС анализа.

7.7    При количественном определении диоксиноподобных ПХБ методом ГХ-ЭЗД необходимо делать поправку на извлечение. Для этого параллельно с анализируемыми пробами готовят не менее двух проб с добавкой известного количества диоксиноподобных конгенеров (на слой натрия сернокислого в экстракционной ячейке наносят от 50 до 100 мм3 изооктанового раствора смеси диоксиноподобных конгенеров с массовой концентрацией индивидуальных конгенеров 20 нг/см3).

Далее проводят экстракцию, фракционирование, очистку и ГХ-ЭЗД анализ в соответствии стребова-ниями метода. Определяют концентрацию диоксиноподобных конгенеров (с учетом разбавлений в процессе подготовки проб) в анализируемых пробах. Коэффициенты извлечения получают путем расчета отношений количества добавки конгенеров перед экстракцией к количеству конгенеров после ГХ-ЭЗД анализа. Затем результаты определения индивидуальных конгенеров [по формуле (7.1)] в нг/кг умножают на соответствующий коэффициент извлечения для каждого конгенера.

7.8    Значения расширенной неопределенности измерений с коэффициентом охвата к = 2 результатов количественного определения/-го конгенера при Р= 0,95 Ujc, нг/кг для диоксиноподобных ПХБ и мкг/кг для маркерных ПХБ, рассчитывают по формуле

(7.2)

— и^1

II = у    ',с

i-c 'Чс 100

где X, с — среднеарифметическое значение содержания /-го конгенера в анализируемой пробе, нг/кг для диоксиноподобных ПХБ и мкг/кг для маркерных ПХБ;

U% —значение относительной расширенной неопределенности /-го конгенера для соответствующего диапазона содержания маркерных ПХБ (см. таблицы 7.3 и 7.4) и диоксиноподобных ПХБ (см. таблицы 7.5 и 7.6), %.

Таблица 7.3 — Значения относительной расширенной неопределенности Uj%1,%, при коэффициенте охвата к = 2 и Р = 0,95 в диапазонах измерений содержания маркерных ПХБ методом ГХ-ЭЗД

Конгенер

ПХБ

Диапазон измерений содержания маркерных ПХБ, мкг/кг

от 1,0 до 5,0 мкг/кг включ.

св. 5,0 до 1500,0 мкг/кг

28

12

9

52

22

15

101

11

10

118

10

10

138

8

8

153

11

9

180

7

9

НАЦИОНАЛЬНЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

ПРОДУКТЫ ПИЩЕВЫЕ, КОРМА, ПРОДОВОЛЬСТВЕННОЕ СЫРЬЕ Методы определения содержания полихлорированных бифенилов

Food products, feeds, food raw materials.

Methods for determination of polychlorinated biphenyls

Дата введения —2012 — 01—01

1 Область применения

Настоящий стандарт распространяется на продукты пищевые, корма и продовольственное сырье и устанавливает методы газожидкостной хроматографии с детектором электронного захвата (ГХ-ЭЗД) и газожидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим детектором (ГХ-МС) для идентификации и количественного определения маркерных и диоксиноподобных полихлорированных бифенилов (ПХБ).

Диапазон измерений для диоксиноподобных ПХБ от 2,0 до 2500,0 нг/кг, для маркерных ПХБ — от 1,0 до 1500,0 мкг/кг.

Примечания

1    Маркерные ПХБ: 28, 52, 101, 138, 153 и 180 конгенеры.

2    Диоксиноподобные ПХБ: 77, 81, 105, 114, 118, 123, 126, 156, 157, 167, 169, 189 конгенеры.

2 Нормативные ссылки

В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие стандарты:

ГОСТ Р ИСО 5725-6-2002 Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 6. Использование значений точности на практике

ГОСТ Р 51447-99 (ИСО 3100-1—91) Мясо и мясные продукты. Методы отбора проб ГОСТ Р 51850-2001 Продукция комбикормовая. Правила приемки. Упаковка, транспортирование и хранение

ГОСТ Р 52062-2003 Масла растительные. Правила приемки и методы отбора проб ГОСТ Р 52121-2003 Яйца куриные пищевые. Технические условия

ГОСТ Р 53228-2008 Весы неавтоматического действия. Часть 1. Метрологические и технические требования. Испытания

ГОСТ Р 53597-2009 Мясо птицы, субпродукты и полуфабрикаты из мяса птицы. Методы отбора проб и подготовка их к испытаниям

ГОСТ Р 53669-2009 Пищевые продукты переработки яиц сельскохозяйственной птицы. Методы отбора проб и органолептического анализа

ГОСТ 12.1.005-88 Система стандартов безопасности труда. Общие санитарно-гигиенические требования к воздуху рабочей зоны

ГОСТ 12.1.007-76 Система стандартов безопасности труда. Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности

ГОСТ 12.1.019-2009 Система стандартов безопасности труда. Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты

ГОСТ 12.2.085-2002 Сосуды, работающие под давлением. Клапаны предохранительные. Требования безопасности

Издание официальное

ГОСТ 745-2003 Фольга алюминиевая для упаковки. Технические условия

ГОСТ 2603-79 Реактивы. Ацетон. Технические условия

ГОСТ 4166-76 Реактивы. Натрий сернокислый. Технические условия

ГОСТ 4204-77 Реактивы. Кислота серная. Технические условия

ГОСТ 8285-91 Жиры животные топленые. Правила приемки и методы испытания

ГОСТ 9147— 80 Посуда и оборудование лабораторные фарфоровые. Технические условия

ГОСТ 9293-74 Азот газообразный и жидкий. Технические условия

ГОСТ 13496.0-80 Комбикорма, сырье. Методы отбора проб

ГОСТ 13586.3-83 Зерно. Правила приемки и методы отбора проб

ГОСТ 13867-68 Продукты химические. Обозначения чистоты

ГОСТ 17536-82 Мука кормовая животного происхождения. Технические условия

ГОСТ 20083-74 Дрожжи кормовые. Технические условия

ГОСТ 23423-89 Метионин кормовой. Технические условия

ГОСТ 24596.1-81 Фосфаты кормовые. Методы отбора и подготовки проб для анализа ГОСТ 25336-82 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры

ГОСТ 26809-86 Молоко и молочные продукты. Правила приемки, методы отбора и подготовка проб к анализу

ГОСТ 27262-87 Корма растительного происхождения. Методы отбора проб ГОСТ 28179-89 Дрожжи кормовые — паприн. Технические условия ГОСТ 28736— 90 Корнеплоды кормовые. Технические условия

ГОСТ 29227-91 (ИСО 835-1—81) Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования

ГОСТ 31339-2006 Рыба, нерыбные объекты и продукция из них. Правила приемки и методы

отбора проб

Примечание — При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов в информационной системе общего пользования — на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет или по ежегодно издаваемому информационному указателю «Национальные стандарты», который опубликован по состоянию на 1 января текущего года, и по соответствующим ежемесячно издаваемым информационным указателям, опубликованным в текущем году. Если ссылочный стандарт заменен (изменен), то при пользовании настоящим стандартом следует руководствоваться заменяющим (измененным) стандартом. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, применяется в части, не затрагивающей эту ссылку.

3 Условия выполнения измерений и требования безопасности

следующие условия:

-    температура окружающего воздуха..................................................................от    20    °С    до    25    °С;

-    атмосферное давление...................................................................................от    84    до    106 кПа;

-    напряжение в электросети.......................................................................................(220    ±    20)    В;

-    частота тока в электросети...................................................................................от    49    до    51    Гц;

-    относительная влажность воздуха....................................................................от    40    %    до    80    %.


3.1 При определении маркерных и диоксиноподобных ПХБ в лаборатории должны быть соблюдены

3.2    Хроматографические измерения проводят в условиях, указанных инструкцией по эксплуатации соответствующего прибора.

3.3    Используемые в работе реактивы относят к веществам 1-го и 2-го класса опасности по ГОСТ 12.1.007, при работе с ними необходимо соблюдать требования безопасности, установленные для работ стоксичными, едкими и легковоспламеняющимися веществами по ГОСТ 12.1.005.

3.4    Помещения, в которых проводят анализ и подготовку проб, должны быть оборудованы приточновытяжной вентиляцией.

3.5    Приготовление градуировочных растворов проводят под тягой в вытяжном шкафу.

3.6    При проведении измерений соблюдают требования ГОСТ 12.2.085 и [1].

3.7    При выполнении измерений на газовом хроматографе или хромато-масс-спектрометре соблюдают правила электробезопасности в соответствии с ГОСТ 12.1.019 и инструкциями по эксплуатации приборов.

3.8    К выполнению измерений методом газовой хроматографии допускаются лица, владеющие техникой ГХ-ЭЗД или ГХ-МС и изучившие инструкции по эксплуатации приборов.

2

ГОСТ P 53991—2010

4    Отбор проб

4.1    Отбор проб молока и молочных продуктов — по ГОСТ 26809.

4.2    Отбор проб мяса и мясных продуктов — по ГОСТ Р 51447.

4.3    Отбор проб мяса птицы, пищевых субпродуктов и полуфабрикатов из мяса птицы — по ГОСТ Р 53597.

4.4    Отбор проб яиц и яичного порошка — по ГОСТ Р 52121 и ГОСТ Р 53669.

4.5    Отбор проб животных жиров — по ГОСТ 8285.

4.6    Отбор проб растительных масел — по ГОСТ Р 52062.

4.7    Отбор проб рыбы, икры, мяса морских млекопитающих и жира морских млекопитающих — по ГОСТ 31339.

4.8    Отбор проб сочных, искусственно высушенных и грубых кормов — по ГОСТ 27262.

4.9    Отбор проб зерновых кормов и зернобобовых кормовых культур — по ГОСТ 13586.3, корнеклубнеплодных кормовых культур — по ГОСТ 28736.

4.10    Отбор проб кормовой муки животного происхождения, костного полуфабриката — по ГОСТ 17536.

4.11    Отбор проб комбикормов, премиксов, жома свекловичного сушеного, ракушечной кормовой крупки, травяной муки, сухих кукурузных кормов, муки рыбной и из морских млекопитающих и ракообразных— по ГОСТ 13496.0.

4.12    Отбор проб кормовых дрожжей — по ГОСТ20083, кормовых дрожжей паприна — по ГОСТ28179.

4.13    Отбор проб белково-витаминно-минеральных и амидо-витаминно-минеральных концентратов — по ГОСТ Р 51850.

4.14    Отбор проб кормовых фосфатов — по ГОСТ 24596.1.

4.15    Отбор проб метионина — по ГОСТ 23423.

4.16    Отобранные пробы перед анализом тщательно перемешивают.

5    Определение ПХБ методом газожидкостной хроматографии с детектором электронного захвата (ГХ-ЭЗД)

5.1    Сущность метода

Метод ГХ-ЭЗД для идентификации и количественного определения маркерных и диоксиноподобных ПХБ основан на измерении содержания индивидуальных конгенеров. Идентификацию конгенеров в анализируемой пробе проводят по времени удерживания градуировочных растворов ПХБ.

Количественное определение проводят методом внутреннего стандарта по площади пика идентифицированных соединений относительно градуировочной кривой,полученной при анализе градуировочных растворов известных соединений в аналогичных условиях.

5.2    Средства измерений, вспомогательное оборудование, материалы, реактивы

5.2.1 При определении содержания ПХБ применяют следующие средства измерений, вспомогательное оборудование и материалы:

-    газовый хроматограф с детектором электронного захвата и автосамплером с пределом детектирования не выше 50 пг/с при инжекции в колонку 20 пг гексахпорбензола;

-    кварцевую капиллярную колонку 50 м х 0,25 мм х 0,25 мкм с индексом полярности неподвижной жидкой фазы от 5 до 30;

-    кварцевую капиллярную колонку 100 м х 0,25 мм х 0,1 мкм с индексом полярности неподвижной жидкой фазы от 5 до 30;

-    компьютер с установленным программным обеспечением для управления газовым хроматографом и обработки результатов измерений;

-пипетки одноканальные переменной вместимостью 10—100мм1, 40—200мм1, 200—1000мм1, 1—5 см1 сдопустимой относительной погрешностью дозирования по изооктану, гексану, дихпорметану и ундекану не более ± 2 %;

-    весы класса точности I или класса точности II, с дискретностью отсчета d = 0,01 мг, поверочным делением е = 100 d по ГОСТ Р 53228;

-весы микроаналитические, Мах не более 20 г, дискретность отсчета d = 0,001 мг;

-    модуль термостатируемый нагревательный с системой отдувки растворителей инертным газом и максимальной температурой термостатирования 250 °С;

-    измельчитель-гомогенизатор лабораторный;

-    ротационный испаритель со скоростью вращения от 20 до 280 об/мин и температурным диапазоном нагревательной бани от 30 °С до 100 °С;

-    экстрактор автоматический для ускоренной экстракции растворителями под давлением стемперату-рой экстракции от 20 °С до 100 °С;

-    шейкер орбитального типа движения с максимальной частотой вращения 1000 об/мин;

-    баню ультразвуковую с рабочей частотой не менее 20 кГц и вместимостью не менее 1 дм3;

-    картриджи для твердофазной экстракции объемом не менее 12 см3;

-    виалы (флаконы) стеклянные вместимостью 2,4 и 60 см3 с герметично закрывающимися пластмассовыми крышками и тефлоновыми прокладками;

-    стеклянные вкладыши для 2 см3 виал на 50 мм3;

-    экстракционные ячейки вместимостью 33 см3 (Dionex, 049562, США)2;

-    фильтры бумажные D28 (Dionex, 049562, США)2;

-    фильтры из стекловолокна GF/B (Whatman, 1821 900048, Германия)2;

-    стекловату силанизированную (Supelco, 20411, Германия)2;

-    фольгу алюминиевую по ГОСТ 745;

-    пипетки пастеровские;

-колбы круглодонные К-1-50-14/23 ТС, К-1 -100-14/23 ТС, К-1 -1000-29/32 ТС, К-1 -2000-29/32 ТС по ГОСТ 25336;

-    колбы конические плоскодонные КНПШ-250-29/32 по ГОСТ 25336;

-    дефлегматор 250-14/23-29/32-ТС по ГОСТ 25336;

-    холодильник ХПТ-1-300-14/23 ХС по ГОСТ 25336;

-    эксикатор 1 -190 по ГОСТ 25336;

-    пипетки стеклянные градуированные по ГОСТ 29227;

-    аппарат Сокслета НЭТ-500 ТС по ГОСТ 25336;

-    ступку, пестик по ГОСТ 9147;

-    колбонагреватель для нагрева жидкостей в круглодонных колбах вместимостью до 1 дм3 в диапазоне температур от 50 °С до 450 °С;

-    печь микроволновую для экспрессной подготовки проб мощностью не менее 800 Вт;

-    шкаф сушильный лабораторный с автоматическим регулированием температуры в рабочем пространстве от 50 °С до 250 °С;

-    камеру лабораторную морозильную с цифровым контроллером температуры и рабочим диапазоном температур от минус 18 °С до минус 24 °С.

5.2.2 При определении содержания ПХБ применяют следующие реактивы:

-    гелий газообразный (сжатый) высокой чистоты, марка 6.0;

-    азот газообразный по ГОСТ 9293, о. ч.;

-уголь активированный (Sigma, кат. № С-5385, Германия)3;

-    сорбент С18 40 мкм (Bondesil С18 40mkm, Varian, кат. № 12213012, США)3;

-    н-гексан, х. ч.;

-    изооктан (Merck, кат. №4718, Германия)3;

-толуол, о. ч.;

-    ацетон по ГОСТ 2603;

-    дихпорметан, х. ч.;

-    метанол, х. ч.;

-    кислоту серную по ГОСТ 4204;

-    натрий сернокислый безводный по ГОСТ 4166;

-    силикагель марки 60 (Merck, кат. № 1.15101, Германия)3

-    октахлорнафталин (Supelco, кат. №44-2725, Германия)3;

-ундекан (Merck, кат. № 1.09795, Германия)3;

-    сорбент «Hydromatrix» (Varian, кат. № 198003, США)3;

-    изопропанол,о. ч.

Все реактивы должны относиться к подгруппе чистоты 2 (х. ч.) или 3 (ч. д. а.) по ГОСТ 13867.

ГОСТ P 53991—2010

5.2.3    При определении содержания ПХБ применяют следующие стандартные образцы:

-градуировочные растворы маркерных и диоксиноподобных ПХБ с относительной расширенной

неопределенностью массовой концентрации конгенеров не более ± 5 % [2];

-стандартный образец с аттестованным содержанием маркерных ПХБ (например, свиной жир IRMM-446)* с относительной расширенной неопределенностью массовой концентрации конгенеров не более ± 10 % [3];

- стандартный образец с аттестованным содержанием диоксиноподобных ПХБ (например, лиофилизо-ванное мясо карпа WMF-01)* с относительной расширенной неопределенностью массовой концентрации конгенеров не более ± 10 % [4].

Допускается применение других средств измерений и вспомогательного оборудования, реактивов и стандартных образцов с метрологическими, техническими и качественными характеристиками не ниже указанных.

5.3    Подготовка к проведению анализа

5.3.1    Подготовка лабораторной посуды

5.3.1.1    Мойку и сушку посуды проводят в отдельном помещении, оборудованном приточно-вытяжной вентиляцией. Не допускается проведение подготовки посуды в данном помещении для других видов анализов. Для сушки лабораторной посуды и подготовки реактивов используют отдельные сушильные шкафы.

5.3.1.2    Стеклянную посуду подвергают стандартной процедуре очистки лабораторной посуды с последующей последовательной промывкой органическими растворителями: толуолом (однократно), ацетоном (дважды).

5.3.1.3    Процедуру промывки органическими растворителями проводят в вытяжном шкафу. Рекомендуется на стадиях промывки использовать ультразвуковую баню. Окончательную сушку посуды проводят в сушильном шкафу, установленном в вытяжном шкафу, при температуре от 105 °С до 110 °С.

5.3.1.4    Стекловату промывают последовательно толуолом и ацетоном в ультразвуковой бане и затем сушат при температуре 200 °С на алюминиевой фольге в сушильном шкафу в течение 10—15 ч. Чистую вату хранят в герметичной стеклянной посуде.

5.3.1.5    Силикагель кондиционируют в сушильном шкафу при температуре 200 °С в течение 10—15 ч.

5.3.1.6    Натрий сернокислый безводный высушивают в сушильном шкафу при температуре 200 °С в течение 10—15 ч.

5.3.2 Подготовка реактивов

5.3.2.1    Приготовление импрегнированного силикагеля

В стеклянной колбе взвешивают 60 г свежеприготовленного силикагеля (5.3.1.5) и 40 г концентрированной серной кислоты, затем ставят колбу в шейкер на 30 мин.

5.3.2.2    Активированный уголь промывают последовательной экстракцией в аппарате Сокслета толуолом в течение 24 ч, затем высушивают в сушильном шкафу при температуре 150 °С в течение 5 ч.

5.3.2.3    Сорбент С18 промывают в метаноле на ультразвуковой бане в течение 5 мин два раза, затем высушивают в сушильном шкафу при температуре 40 °С в течение 3 ч.

5.3.2.4    Для фракционирования диоксиноподобных ПХБ готовят 10 %-ную смесь свежеприготовленного активированного угля (5.3.2.2) на сорбенте С18 (5.3.2.3).

5.3.2.5    Органические растворители обрабатывают не менее двух раз концентрированной серной кислотой и затем перегоняют в стеклянной лабораторной посуде.

5.3.2.6    Приготовление 5 %-ного (по объему) раствора дихпорметана в гексане

В мерной колбе вместимостью 100 см3 смешивают 5 см3 дихпорметана и 95 см3 гексана.

5.3.2.7    Приготовление 50 %-ного (по объему) раствора дихпорметана в гексане

В мерной колбе вместимостью 100 см3 смешивают 50 см3 дихпорметана и 50 см3 гексана.

5.3.2.8    Для каждой серии анализов необходимо использовать свежеприготовленные реактивы.

5.3.2.9    Каждую новую партию растворителей, сорбентов и материалов проверяют на отсутствие контаминации ПХБ путем проведения холостого опыта в соответствии с процедурой анализа.

5.3.3 Параметры хроматографических измерений

5.3.3.1 Газовый хроматограф сдетектором электронного захвата включают в соответствии с руководством (инструкцией) по эксплуатации и устанавливают параметры, рекомендуемые изготовителем капиллярных колонок.

* Указанные стандартные образцы являются рекомендуемыми к применению. Эта информация приведена для удобства пользователей настоящего стандарта.

5

ГОСТ P 53991—2010

5.3.3.2    Для кварцевой капиллярной колонки 50 м х 0,25 мм х 0,25 мкм устанавливают следующие параметры:

а)    газ-носитель — гелий со скоростью потока 1,1 см3/мин;

б)    параметры работы инжектора (для ввода проб объемом до 1 мм3):

1)    вкладыш ID 2 мм для работы в режиме без деления потока;

2)    от 0 до 3 мин в режиме без деления потока;

3)    с 3 мин в режиме деления потока 1/10;

4)    температура инжектора 280 °С;

в)    параметры работы инжектора (для ввода проб объемом от 1 до 3 мм3):

1)    вкладыш ID 2 мм, заполненный стекловатой, для работы в режиме без деления потока;

2)    от 0 до 0,3 мин в режиме деления потока 1/10;

3)    с 0,3 до 3 мин в режиме без деления потока;

4)    с 3 мин в режиме деления потока 1/10;

5)    начальная температура инжектора 90 °С в течение 0,3 мин;

6)    с 0,3 мин программируемый нагрев от 90 °С до 280 °С со скоростью 200 °С/мин;

7)    изотерма при 280 °С до 30 мин, затем охлаждение инжектора до 90 °С;

г)    температурная программа колонки:

1)    начальная температура 90 °С в течение 2,0 мин;

2)    программируемый нагрев от 90 °С до 150 °С со скоростью 15,0 °С/мин;

3)    программируемый нагрев от 150 °С до 300 °С со скоростью 3,0 °С/мин;

4)    изотерма при 300 °С до 60 мин;

5)    время анализа 60 мин;

д)    параметры работы автосамплера:

1)    режим работы — пользовательский;

2)    растворитель для промывки шприца — изооктан;

3)    ввод пробы с пробкой растворителя и промывка шприца изооктаном;

4)    объем пробки растворителя 1,0 мм3;

5)    время промывки шприца растворителем 40 с;

6)    скорость набора пробы в шприц 1,0 мм3/с;

7)    скорость ввода пробы 0,5 мм3/с;

8)    время нахождения иглы в инжекторе после ввода пробы 2,0 мин (в режиме с делением потока);

9)    время нахождения иглы в инжекторе после ввода пробы 0,04 мин (в режиме без деления потока).

5.3.3.3    В случае обоснованных сомнений в точности результатов измерений применяют кварцевую капиллярную колонку 100 м х 0,25 мм х 0,1 мкм, для которой устанавливают следующие параметры:

а)    газ-носитель — гелий со скоростью потока 2,0 см3/мин;

б)    параметры работы инжектора 1079 по 6.4.2;

в)    температурная программа колонки:

1)    начальная температура 75 °С в течение 2,0 мин;

2)    программируемый нагрев от 75 °С до 150 °С со скоростью 15,0 °С/мин;

3)    программируемый нагрев от 150 °С до 280 °С со скоростью 1,5 °С/мин;

4)    изотерма при 280 °С до 100 мин;

5)    время анализа 100 мин;

г)    параметры работы автосамплера по 5.3.3.2.

Допускается устанавливать другие параметры хроматографических измерений, обеспечивающие разделение компонентов пробы.

5.3.4 Подготовка газового хроматографа

5.3.4.1    Подготовку газового хроматографа к работе осуществляют в соответствии с техническим руководством по эксплуатации прибора.

5.3.4.2    Для проверки чувствительности ГХ-ЭЗД системы в инжектор хроматографа при установлении параметров, указанных в 5.3.3, вводят 1—3 мм3 раствора ПХБ градуировочного уровня № 1 (таблица 5.1).

6

Таблица 5.1—Массовая концентрация диоксиноподобных ПХБ в градуировочных растворах

Конгенер

Массовая концентрация диоксиноподобных конгенеров ПХБ для градуировочного уровня, нг/см3

№ 1

№ 2

№ 3

№ 4

№ 5

Нативные конгенеры ПХБ

81

0,5

2

20

100

500

77*

0,5

2

20

100

500

105

0,5

2

20

100

500

114

0,5

2

20

100

500

118

0,5

2

20

100

500

123

0,5

2

20

100

500

126

0,5

2

20

100

500

156

0,5

2

20

100

500

157

0,5

2

20

100

500

167

0,5

2

20

100

500

169

0,5

2

20

100

500

189

0,5

2

20

100

500

Октахлорнафталин (внутренний стандарт)

ОХН

30

30

30

30

30

* Соотношение сигнал — шум должно быть не менее 5/1.

5.3.4.3 Для градуировки хроматографа используют исходные градуировочные растворы ПХБ, на основании которых приготавливают рабочие градуировочные растворы в ундекане согласно таблице 5.1 (для определения диоксиноподобных ПХБ) или таблице 5.2 (для определения маркерных ПХБ).

Таблица 5.2- Массовая концентрация маркерных ПХБ в градуировочных растворах

Конгенер

Массовая концентрация маркерных конгенеров ПХБ для градуировочного уровня, нг/см3

№ 1

№ 2

№ 3

№ 4

№ 5

Нативные конгенеры ПХБ

28

4

20

100

500

1000

52

4

20

100

500

1000

101

4

20

100

500

1000

118*

4

20

100

500

1000

138

4

20

100

500

1000

153

4

20

100

500

1000

180

4

20

100

500

1000

Октахлорнафталин (внутренний стандарт)

ОХН

100

100

100

100

100

* Диоксиноподобный конгенер.

1

2

Указанные материалы являются рекомендуемыми к применению. Эта информация приведена для удобства пользователей настоящего стандарта.

3

Указанные реактивы являются рекомендуемыми к применению. Эта информация приведена для удобства пользователей настоящего стандарта.