ФЕДЕРАЛЬНОЕ АГЕНТСТВО ПО ТЕХНИЧЕСКОМУ РЕГУЛИРОВАНИЮ И МЕТРОЛОГИИ

НАЦИОНАЛЬНЫЙ

СТАНДАРТ

РОССИЙСКОЙ

ФЕДЕРАЦИИ

МЯСО И МЯСНЫЕ ПРОДУКТЫ

Иммунопреципитационный метод определения массовой доли животного (говяжьего, свиного, бараньего) белка

Издание официальное

Москва

Стандартинформ

2010

Предисловие

Цели и принципы стандартизации в Российской Федерации установлены Федеральным законом от 27 декабря 2002 г. № 184-ФЗ «О техническом регулировании», а правила применения национальных стандартов Российской Федерации — ГОСТ Р 1.0-2004 «Стандартизация в Российской Федерации. Основные положения»

Сведения о стандарте

1    РАЗРАБОТАН Государственным научным учреждением Всероссийским научно-исследовательским институтом мясной промышленности им. В М. Горбатова Российской академии сельскохозяйственных наук (ГНУ ВНИИМП им. В.М. Горбатова Россельхозакадемии)

2    ВНЕСЕН Техническим комитетом по стандартизации ТК 226 «Мясо и мясная продукция»

3    УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 11 декабря 2009 г. № 748-ст

4    ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодно издаваемом информационном указателе «Национальные стандарты». а текст изменений и поправок — в ежемесячно издаваемых информационных указателях «Национальные стандарты». В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ежемесячно издаваемом информационном указателе «Национальные стандарты». Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования — на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет

© Стандартинформ. 2010

Настоящий стандарт не может быть полностью или частично воспроизведен, тиражирован и распространен в качестве официального издания без разрешения Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии

II

3    Сущность метода...........................

4    Диапазоны измерений и метрологические характеристики метода

5    Отбор проб..............................

6    Средства измерений, оборудование, материалы и реактивы. . . .

7    Подготовка к выполнению измерений................

8    Проведение измерений.......................

9    Обработка результатов.......................

10    Требования безопасности.....................

Библиография ..............................

НАЦИОНАЛЬНЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

МЯСО И МЯСНЫЕ ПРОДУКТЫ

Иммунопреципитационный метод определения массовой доли животного (говяжьего, свиного, бараньего) белка

Meat and meat products. Immune Method (or determination of animal (pork. beef, mutton) proteins mass fraction

Дата введения — 2010—07—01

1    Область применения

Настоящий стандарт распространяется на мясо и мясные полуфабрикаты и устанавливает иммунопреципитационный метод опредепения массовой доли животного (говяжьего, свиного, бараньего) белка.

Стандарт предназначен для идентификации свиного, говяжьего или бараньего белков в составе мясного сырья и мясных продуктов, не подвергнутых тепловой обработке.

2    Нормативные ссылки

В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие стандарты:

ГОСТ Р 50444-92 Приборы, аппараты и оборудование медицинские. Общие технические условия

ГОСТ Р 51447-99 (ИСО 3100-1—91) Мясо и мясные продукты. Методы отбора проб ГОСТ 12.1.004-91 Система стандартов безопасности труда. Пожарная безопасность. Общие требования

ГОСТ 12.1.007-76 Система стандартов безопасности труда. Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности

ГОСТ 12.1.019-79 Система стандартов безопасности труда. Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты

ГОСТ 12.4.009-83 Система стандартов безопасности труда. Пожарная техника для защиты объектов. Основные виды. Размещение и обслуживание

ГОСТ 1770-74 Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия

ГОСТ 6709-72 Вода дистиллированная. Технические условия ГОСТ 9656-75 Реактивы. Кислота борная. Технические условия

ГОСТ 10652-73 Реактивы. Соль динатриевая этилендиамин-N, N. N\ N'-тетрауксусной кислоты 2-водная (трилон Б). Технические условия

ГОСТ 20903-75 Кюветы прямоугольные кварцевые для спектрофотометров. Основные размеры. Технические требования

ГОСТ 25011-81 Мясо и мясные продукты. Методы определения белка

ГОСТ 25336-82 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры

ГОСТ 26678-85 Холодильники и морозильники бытовые электрические компрессионные параметрического ряда. Общие технические условия

Издание официальное

Примечание — При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов в информационной системе общего пользования — на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет или по ежегодно издаваемому информационному указателю «Национальные стандарты», который опубликован по состоянию на 1 января текущего года, и по соответствующим ежемесячно издаваемым информационным указателям, опубликованным о текущем году. Если ссылочный стандарт заменен (изменен), то при пользовании настоящим стагщартом следует руководствоваться заменяющим (измененным) стандартом. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, применяется в части, не затрагивающей эту ссылку.

3    Сущность метода

Метод основан на проявлении особых свойств защитных систем высших позвоночных — вырабатывать новые сывороточные белки (антитела) при введении в организм посторонних для него веществ (антигенов). Используют диагностическую преципитирующую сыворотку к конкретному виду животного белка, вызывающую образование нерастворимого комплекса антиген-антитело.

4    Диапазоны измерений и метрологические характеристики метода

4.1    Диапазон измерений массовой доли животного (говяжьего, свиного, бараньего) белка от 1 % до 85 %.

4.2    Метрологические характеристики метода при доверительной вероятности 0,95 приведены в таблице 1.

Таблица 1

Наименование показателя Диапазон измерений массовой доли. % Г раницы относительной погрешности ±6,% Предел повторяемости Л>т. » Продол воспроизводимости R, Массовая доля животного белка. % От 1 до 85 включ. 30 24 38

5    Отбор проб

5.1    Отбор проб — по ГОСТ Р 51447.

5.2    Пробу хранят в холодильнике при температуре от 0 °С до 5 °С до полного завершения испытания в течение суток.

Допускается хранение проб при температуре от минус 20 °С до минус 10 ^вС в герметичной упаковке в течение одной недели с даты отбора проб на исследование.

6    Средства измерений, оборудование, материалы и реактивы

Спектрофотометр СФ-103 типа «Аквилон», обеспечивающий измерения в диапазоне длин волн от 200 до 900 нм по (1].

Кюветы кварцевые толщиной 1 см по ГОСТ 20903.

Весы лабораторные с пределом допускаемой абсолютной погрешности однократного взвешивания не более ; 0.1 мг.

Микроизмельчитель тканей РТ-2 по (2] или гомогенизатор с частотой вращения 8000 — 24000 об/мин.

Центрифуга с регулируемой скоростью вращения до 8000 об/мин.

Пробирки центрифужные по ГОСТ 25336.

Аппарат встряхивающий.

Холодильник бытовой по ГОСТ 26678.

Дозатор липеточный переменного объема по ГОСТ Р 50444 и (3].

Колбы мерные 2-го класса точности вместимостью 250 см³ по ГОСТ 1770.

Цилиндр мерный 2-го класса точности вместимостью 250 см³ по ГОСТ 1770.

Воронки стеклянные ВД-1-100 ХС по ГОСТ 25336.

ГОСТ Р 53514-2009

Диагностическая сыворотка по (4J.

Свинина, говядина, баранина с массовой долей белка по Кьельдалю не менее 18 % по ГОСТ 25011 для использования в качестве контрольного образца.

Соевый изолят с массовой долей белка по Кьельдалю не менее 85 % по ГОСТ 25011.

Кислота борная по ГОСТ 9656, ч.

2-амино-2(гидроксиметил)-1,3-пропандиол (ТРИС) с массовой долей основного вещества 99,9 %.

Соль динатриевая этилендиамин-N. N. N\ N'-тетрауксусной кислоты (трилон Б) по ГОСТ 10652.

чщ.а.

Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.

Допускается применение других средств измерений с метрологическими характеристиками, оборудования с техническими характеристиками и реактивов по качеству не ниже указанных в настоящем стандарте.

7    Подготовка к выполнению измерений

7.1    Приготовление растворов

7.1.1    Приготовление концентрированного буферного раствора

Навеску 2-амино-2(гидроксиметил)-1.3-пропандиола (ТРИС) массой 15,0 г и навеску трилона Б массой 1.5 г с помощью воронки переносят в мерную колбу вместимостью 250 см¹ и при перемешивании добавляют 100 — 150 см¹ дистиллированной воды. Полученный раствор перемешивают, в него добавляют постепенно 5.5 г борной кислоты и доводят объем раствора до метки дистиллированной водой. Раствор тщательно перемешивают до растворения осадка.

7.1.2    Приготовление рабочего буферного раствора

В мерную колбу вместимостью 250 см¹ с помощью мерного цилиндра вносят 50 см¹ концентрированного буферного раствора. Раствор в колбе доводят до метки дистиллированной водой, тщательно перемешивают и получают рабочий буферный раствор, содержащий в 1 см¹ 0,012 г ТРИС. 0,001 г трилона Б и 0.0044 г борной кислоты.

7.2    Приготовление испытуемого экстракта пробы

7.2.1    Навеску пробы массой 5.0 г перемешивают с 5 см¹ рабочего буферного раствора в гомогенизаторе в течение 5 мин и выдерживают смесь 1 ч при температуре от 5 °С до 8 °С. периодически встряхивая в течение 5 мин.

7.2.2    Смесь центрифугируют при 5000 об/мин в течение 20 мин. Для измерений используют верхний прозрачный слой, содержащий экстракт анализируемого белка.

7.3 Приготовление двухкомпонентных модельных мясорастительных смесей для построения градуировочного графика

Навески по 25,0 г свинины (говядины или баранины) смешивают с навесками 400.0 г и 100,0 г соевого изолята и навески по 100,0 г свинины (говядины или баранины) смешивают с навесками 100. 30.15 и 3,5 г соевого изолята.

Каждую смесь перемешивают на микроизмельчителе тканей в течение 30 мин до образования гомогенной массы. Допускается использование уменьшенных навесок в случае приготовления смеси путем растирания в ступке. Получают двухкомпонентные модельные мясорастительные смеси, массовая доля животного (говяжьего, свиного, бараньего) белка в которых относительно массовой доли общего белка равна 1.3 %; 5.0 %; 17,5 %; 41.4 %; 58.5 % и 86,1 %.

Предварительно определяют массовую долю общего белка методом Кьельдаля по ГОСТ 25011.

8    Проведение измерений

8.1    Измерение испытуемых растворов

8.1.1    20 мм¹ экстракта пробы смешивают с 400 мм¹ рабочего буферного раствора, измеряют фоновое поглощение на спектрофотометре при >. = 405 нм (контроль), затем добавляют 20 мм¹ диагностической сыворотки, содержащей антитела, к определяемому виду белка, проводят реакцию осаждения при постоянном встряхивании смеси в течение 1 ч. Для выявления специфического белка измеряют оптическую плотность среды в кювете с толщиной оптического слоя 1 см.

8.1.2    Для подтверждения действия диагностической преципитирующей сыворотки на животный белок параллельно проводят анализ контрольного образца, не содержащего определяемый белок.

8.1.3    Для каждого испытуемого раствора проводят два измерения, по результатам которых с помощью градуировочного графика находят средние значения массовой концентрации животного (говяжьего, свиного, бараньего) белка в этих растворах.

8.2 Построение градуировочного графика

Градуировочный график строят по результатам двукратного определения в соответствии с 8.1.1 массовой доли животного (говяжьего, свиного, бараньего) белка в двухкомпонентных модельных мясорастительных смесях, содержащих животный белок и добавки растительного соевого белка, соответственно в таблицах 2—4.

Таблица 2

Оптическая плотность среды (0405) при 405 нм 0.070 0.075 0.100 0.158 0.200 0.260 Массовая доля свиного белка в образце С. % от общего белка 1.3 5.0 17.5 41.4 58.5 86.1

Таблица 3

Оптическая плотность среды (0405) при 405 им 0.065 0.085 0.110 0.135 0.155 0.175 0.200 0.225 0.250 0.275 Массовая доля говяжьего белка в образце С. % от общего белка 1 10 20 30 40 50 60 70 80 90

Таблица 4

Оптическая плотность среды (0405) При 405 нм 0.060 0.090 0.115 0.130 0.160 0,170 0.190 0.230 0.260 0.280 Массовая доля бараньего белка в образце С. % от общего белка 11 110 220 330 440 550 660 770 880 990

9 Обработка результатов

9.1    Массовую долю животного (говяжьего, свиного, бараньего) белка б_ж, %, относительно массовой доли общего белка, вычисляют по формуле

6_Ж = — 100, ⁽¹⁾

где С — среднеарифметическое значение массовой доли животного (говяжьего, свиного, бараньего) белка в испытуемой пробе. %;

6, — массовая доля общего белка в анализируемом образце, определенная методом Кьельдаля, %.

9.2    За окончательный результат измерения принимают среднеарифметическое из двух параллельных определений, если выполняется условие приемлемости:

1(2|С, - С₂|У(С, + С₂)] • 100 ir_on,.    (2)

где С, и С₂ — результаты параллельных определений массовой доли животного (говяжьего, свиного, бараньего) белка, определенные по градуировочному графику. %; г_отм — предел повторяемости, приведенный в таблице 1.

Результат вычислений округляют до целого числа.

4

10 Требования безопасности

10.1    При подготовке и проведении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007.

10.2    Помещение, в котором проводят измерения, должно быть снабжено приточно-вытяжной вентиляцией. Работу необходимо проводить, соблюдая правила личной гигиены и противопожарной безопасности в соответствии с требованиями ГОСТ 12.1.004. и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009.

10.3    При работе с электроприборами необходимо соблюдать требования безопасности по ГОСТ 12.1.019.

5

УДК 637.5.045:633.34:537.3:006.354    ОКС    67.120.10    Н19

Ключевые слова: стандарт, мясо, мясные продукты, иммунопреципитационный метод, животный белок, свиной белок, говяжий белок, бараний белок, соевый изолят, лреципитирующая сыворотка, диагностическая сыворотка

7

1