Товары в корзине: 0 шт Оформить заказ
Стр. 1
 

19 страниц

396.00 ₽

Купить ГОСТ Р 52711-2007 — официальный бумажный документ с голограммой и синими печатями. подробнее

Официально распространяем нормативную документацию с 1999 года. Пробиваем чеки, платим налоги, принимаем к оплате все законные формы платежей без дополнительных процентов. Наши клиенты защищены Законом. ООО "ЦНТИ Нормоконтроль".

Наши цены ниже, чем в других местах, потому что мы работаем напрямую с поставщиками документов.

Способы доставки

  • Срочная курьерская доставка (1-3 дня)
  • Курьерская доставка (7 дней)
  • Самовывоз из московского офиса
  • Почта РФ

Настоящий стандарт распространяется на консервы: фруктовые и овощные соки, нектары, морсы и сокосодержащие напитки; фруктовые и овощные концентрированные соки, а также сырье, питьевую исходную, технологическую, технологическую промывную воду, оборудование и воздух производственных помещений и устанавливает методы их микробиологического анализа с применением специальных микробиологических сред:

- количественный метод определения мезофильных аэробных и факультативно анаэробных микроорганизмов;

- качественный метод выявления бактерий группы кишечных палочек (колиформных бактерий) в питьевой исходной, технологической и технологической промывной воде;

- количественный и качественный методы определения дрожжей, плесневых грибов, молочнокислых и уксуснокислых бактерий;

- качественный метод подтверждения отсутствия в готовых продуктах микроорганизмов, вызывающих их порчу (дрожжей, плесневых грибов, молочнокислых и уксуснокислых бактерий);

- качественный метод подтверждения отсутствия в готовых продуктах индикаторной, патогенной и условно-патогенной лимитируемой микрофлоры, мезофильных клостридий, сульфитредуцирующих клостридий, сальмонелл.

Методы предназначены для определения количества или качественного выявления микроорганизмов:

- прямым посевом в специальные микробиологические среды определенного объема (массы) анализируемой пробы или ее разведения;

- с применением мембранной фильтрации

  Скачать PDF

Оглавление

1 Область применения

2 Нормативные ссылки

3 Методы отбора, подготовки, транспортирования и хранения проб

4 Методы анализа

4.1 Средства измерений, вспомогательные устройства, реактивы и материалы

4.2 Описание специальных микробиологических сред

4.3 Подготовка к проведению анализов

4.3.1 Подготовка посуды

4.3.2 Приготовление реактивов и растворов

4.3.3 Подготовка специальных микробиологических сред к проведению анализа

4.3.4 Подготовка мембранных фильтров и фильтровального прибора. Порядок работы с применением метода мембранной фильтрации

4.4 Определение количества мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов (КМАФАнМ) с использованием агаризованной среды № 1

4.5 Определение бактерий группы кишечных палочек (колиформных бактерий) в питьевой исходной, технологической и технологической промывной воде

4.6 Определение дрожжей, плесневых грибов, молочнокислых и уксуснокислых бактерий

4.6.1 Проведение анализа с использованием микробиологической среды № 2

4.6.2 Проведение анализа с использованием микробиологических сред № 4 и 5

4.7 Определение соответствия готовых продуктов требованиям к отсутствию микроорганизмов, вызывающих их порчу (дрожжей, плесневых грибов, молочнокислых и уксуснокислых бактерий)

4.8 Определение соответствия готовых продуктов требованиям к отсутствию индикаторной, патогенной, условно-патогенной лимитируемой микрофлоры, в том числе В. subtilis, В. cereus, В. polymyxa, S. aureus, мезофильных клостридий (в том числе С. botulinum, С. perfringens), сульфитредуцирующих клостридий, сальмонелл

4.9 Метод подтверждения готовности линии розлива по микробиологическим показателям к производству асептически упаковываемых готовых продуктов

4.10 Контроль бутылок после бутылкомоечной машины или устройства для ополаскивания бутылок (ринзера) на соответствие требованиям к отсутствию микроорганизмов, вызывающих порчу готовых продуктов, индикаторной, патогенной и условно-патогенной микрофлоры

4.11 Контроль укупорочного материала на соответствие требованиям к отсутствию микроорганизмов, вызывающих порчу готовых продуктов, индикаторной, патогенной и условно-патогенной микрофлоры

4.12 Контроль воздуха в производственных помещениях по микробиологическим показателям

4.13 Контроль состояния поверхностей производственного оборудования и помещений по микробиологическим показателям методом свобирования

Показать даты введения Admin

ГОСТР

52711-

2007

ФЕДЕРАЛЬНОЕ АГЕНТСТВО ПО ТЕХНИЧЕСКОМУ РЕГУЛИРОВАНИЮ И МЕТРОЛОГИИ

НАЦИОНАЛЬНЫЙ

СТАНДАРТ

РОССИЙСКОЙ

ФЕДЕРАЦИИ

ПРОИЗВОДСТВО СОКОВОЙ ПРОДУКЦИИ

Методы микробиологического анализа с применением специальных микробиологических сред

Издание официальное

Москва

Стандартинформ

2007

Предисловие

Цели и принципы стандартизации в Российской Федерации установлены Федеральным законом от 27 декабря 2002 г. N6 184-ФЗ «О техническом регулировании», а правила применения национальных стандартов Российской Федерации — ГОСТ Р 1.0-2004 «Стандартизация в Российской Федерации Основные положения»

Сведения о стандарте

1    РАЗРАБОТАН Государственным образовательным учреждением высшего профессионального образования «Московский государственный университет пищевых производств» Министерства образования и науки Российской Федерации (ГОУВПО «МГУПП») и ООО «Делер НФ и БИ»

2    ВНЕСЕН Государственным образовательным учреждением высшего профессионального образования «Московский государственный университет пищевых производств» Министерства образования и науки Российской Федерации (ГОУВПО «МГУПП»)

3    УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 19 февраля 2007 г. № 16-ст

4    ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодно издаваемом информационном указателе «Национальные стандарты». а текст изменений и поправок — в ежемесячно издаваемых информационных указателях «Национальные стандарты». В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ежемесячно издаваемом информационном указателе «Национальные стандарты». Соотвепют-вующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования — на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет

© Стандартинформ. 2007

Настоящий стандарт не может быть полностью или частично воспроизведен, тиражирован и распространен в качестве официального издания без разрешения Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии

ГОСТ P 52711—2007

Содержание

1    Область применения..................................................1

2    Нормативные ссылки..................................................1

3    Методы отбора, подготовки, транспортирования и хранения проб......................2

4    Методы анализа.....................................................3

4.1    Средства измерений, вспомогательные устройства, реактивы и материалы.............3

4.2    Описание специальных микробиологических сред.............................4

4.3    Подготовка к проведению анализов.......................................5

4.3.1    Подготовка посуды..............................................5

4.3.2    Приготовление реактивов и растворов.................................6

4.3.3 Подготовка специальных микробиологических сред к проведению анализа..........6

4.3.4    Подготовка мембранных фильтров и фильтровального прибора Порядок работы

с применением метода мембранной фильтрации..............................7

4.4    Определение количества мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов (КМАФАнМ) с использованием агаризованной среды №1...................7

4.5    Определение бактерий группы кишечных палочек (колиформных бактерий) в питьевой

исходной, технологической и технологической промывной воде.......................9

4.6    Определение дрожжей, плесневых грибов, молочнокислых и уксуснокислых бактерий.....10

4.6.1 Проведение анализа с использованием микробиологической среды №2...........10

4.6.2    Проведение анализа с использованием микробиологических сред №4 и 5..........11

4.7    Определение соответствия готовых продуктов требованиям к отсутствию микроорганизмов. вызывающих их порчу (дрожжей, плесневых грибов, молочнокислых и уксуснокислых

бактерий).........................................................12

4 .8 Определение соответствия готовых продуктов требованиям к отсутствию индикаторной, патогенной, условно-патогенной лимитируемой микрофлоры, в том числе В subtilis. В. cereus.

В. polymyxa. S. aureus, мезофильных клостридий (в том числе С. botulinum. С perfringens). сульфитредуцирующих клостридий. сальмонелл................................13

4.9    Метод подтверждения готовности линии розлива по микробиологическим показателям

к производству асептически упаковываемых готовых продуктов.......................13

4.10    Контроль бутылок после бутылкомоечной машины или устройства для ополаскивания

бутылок (ринзера) на соответствие требованиям к отсутствию микроорганизмов, вызывающих порчу готовых продуктов, индикаторной, патогенной и условно-патогенной микрофлоры.......14

4.11    Контроль укупорочного материала на соответствие требованиям к отсутствию микроор

ганизмов. вызывающих порчу готовых продуктов, индикаторной, патогенной и условно-патогенной микрофлоры..................................................14

4.12    Контроль воздуха в производственных помещениях по микробиологическим показателям ..15

4.13    Контроль состояния поверхностей производственного оборудования и помещений по

микробиологическим показателям методом свобирования..........................15

НАЦИОНАЛЬНЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

ПРОИЗВОДСТВО СОКОВОЙ ПРОДУКЦИИ

Методы микробиологического анализа с применением специальных микробиологических сред

Manufacturing of juice products.

Microbiological control methods using special microbiological nutrient media

Дата введения — 2008—01—01

1    Область применения

Настоящий стандарт распространяется на консервы: фруктовые и овощные соки, нектары, морсы и сокосодержащие напитки (далее — готовые продукты): фруктовые и овощные концентрированные соки, а также сырье, питьевую исходную, технологическую, технологическую промывную воду, оборудование и воздух производственных помещений и устанавливает методы их микробиологического анализа с применением специальных микробиологических сред:

-    количественный метод определения мезофильных аэробных и факультативно анаэробных микроорганизмов (КМАФАнМ);

• качественный метод выявления бактерий группы кишечных палочек (колиформных бактерий) в питьевой исходной, технологической и технологической промывной воде:

-    количественный и качественный методы определения дрожжей, плесневых грибов, молочнокислых и уксуснокислых бактерий:

-    качественный метод подтверждения отсутствия в готовых продуктах микроорганизмов, вызывающих их порчу (дрожжей, плесневых грибов, молочнокислых и уксуснокислых бактерий):

-    качественный метод подтверждения отсутствия в готовых продуктах индикаторной, патогенной и условно-патогенной лимитируемой микрофлоры, в том числе В. subtilis. В cereus. В. polymyxa. S. aureus, мезофильных клостридий (в том числе группы С. botulinum, С. Perfringens). сульфитредуцирующих клос-тридий. сальмонелл

Методы предназначены для определения количества или качественного выявления микроорганизмов:

-    прямым посевом в специальные микробиологические среды определенного объема (массы) анализируемой пробы или ее разведения:

-    с применением мембранной фильтрации.

2    Нормативные ссылки

В настоящем стандарте использованы ссылки на следующие стандарты:

Г ОСТ Р 51446—99 (ИСО 7218—96) Микробиология. Продукты пищевые Общие правила микробиологических исследований

ГОСТ Р 51593-2000 Вода питьевая Отбор проб

ГОСТ Р 51652-2000 Спирт этиловый ректификованный из пищевогосырья. Технические условия

ГОСТ Р 51935-2002 (ЕН 285—96) Стерилизаторы паровые большие. Общие технические требования и методы испытаний

ГОСТ 177-88 Водорода перекись Технические условия

ГОСТ 1770-74 Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия

Издание официальное

ГОСТ 3118-77 Кислота соляная Технические условия

ГОСТ 5556-81 Вата медицинская гигроскопическая Технические условия

ГОСТ 6672-75 Стекла покровные для микролрепаратов Технические условия

ГОСТ 6709-72 Вода дистиллированная. Технические условия

ГОСТ 9284-75 Стекла предметные для микролрепаратов Технические условия

Г ОСТ 9412—93 Марля медицинская. Общие технические условия

ГОСТ 13739-78 Масло иммерсионное для микросколии. Технические требования. Методы испытаний

ГОСТ 14919-83 Электроплиты, электроплитки и жарочные электрошкафы бытовые Общие технические условия

ГОСТ 16317-87 Приборы холодильные электрические бытовые Общие технические условия ГОСТ 18481-81 Ареометры и цилиндры стеклянные Общие технические условия ГОСТ 21241-89 Пинцеты медицинские. Общие технические требования и методы испытаний ГОСТ 24104-2001 Весы лабораторные Общие технические требования ГОСТ 25336-82 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры

ГОСТ 25706-83 Лупы. Типы, основные параметры Общие технические требования ГОСТ 26668-85 Продукты пищевые и вкусовые. Методы отбора проб для микробиологических анализов

ГОСТ 26669-85 Продукты пищевые и вкусовые. Подготовка проб для микробиологических анализов

ГОСТ 28498-90 Термометры жидкостные стеклянные. Общие технические требования Методы испытаний

ГОСТ 29227-91 (ИСО 835-1—81) Посуда лабораторная стеклянная Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования

ГОСТ 29228-91 (ИСО 835-2—81) Посуда лабораторная стеклянная Пипетки градуированные. Часть 2. Пипетки градуированные без установленного времени ожидания

ГОСТ 29229-91 (ИСО 835-3—81) Посуда лабораторная стеклянная Пипетки градуированные. Часть 3. Пипетки градуированные со временем ожидания 15 с

ГОСТ 29230-91 (ИСО 835-4—81) Посуда лабораторная стеклянная Пипетки градуированные. Часть 4. Пипетки выдувные

Примечание — При пользовании настоящим рекомендациями целесообразно проверить действие ссылочных стандартов в информационной системе общего пользования — на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет или по ежегодно издаваемому информационному указателю «Национальные стандарты», который опубликован по состоянию на 1 января текущего года, и по соответствующим ежемесячно издаваемым информационным указателям, опубликованным в текущем году. Если ссылочный стандарт заменен (изменен), то при пользовании настоящим стандартом следует руководствоваться замененным (измененным) стандартом. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, применяется в части, не затрагивающей эту ссылку.

3 Методы отбора, подготовки, транспортирования и хранения проб

3.1 Отбор проб по ГОСТ Р 51593 и ГОСТ 26668 со следующими дополнениями: перед взятием пробы готового продукта пробку и горловину бутылки, поверхность металлической банки или другой упаковки протирают ватным тампоном, смоченным в водном растворе объемной долей этилового спирта 70 %, приготовленном по 4.3.22. Затем стерильным ключом снимают кроненпробку или отвинчивают пробку бутылки. Горловину открытой бутылки обжигают в пламени спиртовки или протирают ватным тампоном, смоченным в водном растворе объемной долей этилового спирта 70 %. и отбирают необходимый для анализа объем готового продукта.

Перед взятием пробы из упаковки, состоящей из комбинированных материалов (типа «Тетра-Пак». «Ело-Пак» и др.), отрывают от корпуса упаковки приклеенный к ней уголок верхней части укупоренного пакета, протирают уголок ватным тампоном, смоченным в водном растворе объемной долей этилового спирта 70 %. фламбируют. в асептических условиях фламбированными ножницами отрезают уголок пакета и отбирают необходимый объем готового продукта Не допускается проводить отбор проб из упаковок. состоящих из комбинированных материалов, через отвинчивающуюся крышку пакета или фольги-рованную пробку, предназначенную для введения в упаковку трубочки

2

ГОСТ P 52711—2007

Отбор проб технологической промывной воды проводят после подтверждения отсутствия моющих и дезинфицирующих средств, руководствуясь рекомендациями фирмы-изготовителя по их использованию

Отбор проб для подтверждения готовности линии розлива по микробиологическим показателям к производству асептически упаковываемых готовых продуктов по 4.9.1.1.

Отбор проб промывной воды при контроле бутылок после бутылкомоечной машины по 4.10.1.

Отбор проб укупорочного материала — по 4.11.1.

Отбор проб воздуха производственных помещений — по4.12.1.

Отбор проб с поверхностей производственных помещений и оборудования — по4.13.

3.2    Подготовка проб — по ГОСТ 26669.

3.3    Транспортирование и хранение проб

Доставку проб готовых продуктов, расфасованных в потребительскую тару, допускается осуществлять. соблюдая требования к условиям хранения, установленные документами, в соответствии с которыми изготовлены продукты.

Доставку проб анализируемых продуктов, не расфасованных в потребительскую тару, осуществляют в стерильных контейнерах-холодильниках, стерильных пакетах типа «WHIRL-РАК» (или в другой стерильной таре, обеспечивающей сохранность проб) при температуре 4 *С—10 *С. В холодный период года контейнеры или пакеты «WHIRL-РАК» должны быть снабжены термоизолирующими прокладками. обеспечивающими предохранение проб от промерзания. При соблюдении указанных условий срок начала анализа от момента отбора проб не должен превышать 6 ч.

Если пробы нельзя охладить, их анализ следует проводить в течение 2 ч после отбора.

Если не могут быть соблюдены условия доставки проб, то отбор и анализ проб не проводят.

4 Методы анализа

4.1 Средства измерений, вспомогательные устройства, реактивы и материалы

Автоклав или стерилизатор паровой большой по ГОСТ Р 51935.

Весы лабораторные по ГОСТ 24104 с пределом допустимой абсолютной погрешности однократного взвешивания не более ± 0,01 мг.

Прибор вакуумного фильтрования.

Вакуумный насос.

Термостаты любого типа, обеспечивающие поддержание заданной температуры от 26 вС до45 °С с допустимой погрешностью * 1 *С.

Шкаф сушильный любого типа, обеспечивающий температуру нагрева 100 °С — 200 °С с пределом допустимой абсолютной погрешности ♦ 2 “С.

pH-метр или потенциометр с автоматической термокомпенсацией, пределом допустимой абсолютной погрешности ± 0.1 pH и порогом чувствительности 0.01 pH.

Микроскоп световой биологический любого типа, обеспечивающий увеличение 900 ■—1000'.

Цилиндры стеклянные по ГОСТ 18481

Холодильник по ГОСТ 16317.

Плитка электрическая с закрытой спиралью по ГОСТ 14919.

Баня водяная.

Фильтры мембранные для микробиологических целей размером пор 0.2 и 0.45 мкм.

Пинцеты медицинские по ГОСТ 21241.

Шпатели металлические и стеклянные.

Термометры жидкостные стеклянные (нертутные) диапазоном измерений отО °С до 100 °С и ценой деления шкалы 1 *С по ГОСТ 28498.

Лупа по ГОСТ 25706.

Спиртовка по ГОСТ 25336.

Ключ для вскрытия бутылок.

Колбы К, П, Кн вместимостью 50.100,250,500 и 1000 см1 по ГОСТ 25336.

Колба Эрленмейера.

Инверсионные бутылки.

Пробирки П1, П2. П2Т по ГОСТ 25336.

Пипетки градуированные вместимостью 1,2,5.10.25 см1по ГОСТ 29227. ГОСТ 29228. ГОСТ 29229, ГОСТ 29230.

Стаканы типов В и Н вместимостью 100,150,250.400,600,800.1000 см1 по ГОСТ 25336.

Стаканчики для взвешивания (бюксы) типов СВ или СН по ГОСТ 25336.

Стекла предметные для микропрепаратов по ГОСТ 9284.

Стекла покровные для микропрепаратов по ГОСТ 6672.

Цилиндры мерные вместимостью от 25 до 2000 см3 включительно по ГОСТ 1770.

Чашки биологические (Петри) по ГОСТ 25336.

Стерильные цилиндрической формы емкости (тубы) по ГОСТ Р 51446.

Марля медицинская по ГОСТ 9412.

Вата медицинская гигроскопическая по ГОСТ 5556.

Крафт-бумага по документу, в соответствии с которым она изготовлена.

Масло иммерсионное для микроскопии по ГОСТ 13739.

Бумага индикаторная универсальная.

Спирт этиловый ректификованный из пищевого сырья по ГОСТ Р 51652.

Вода питьевая по [1].

Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.

Перекись водорода по ГОСТ 177.

Кислота соляная по ГОСТ 3118.

Стеклянные шарики.

pH-метр по ГОСТ Р 51446.

Секундомер.

Петли микробиологические по ГОСТ Р 51446.

Допускается использование других средств измерений, вспомогательных устройств, реактивов и материалов аналогичного назначения, по техническим характеристикам не уступающих указанным выше.

4.2 Описание специальных микробиологических сред

4.2.1    Среда № 1 (среда «NAHRAGAR DEV — Agar»)1» представляет собой твердую стерильную микробиологическую среду, разлитую в стеклянные бутылки. Среда Ne 1 характеризуется следующими основными свойствами:

-    предназначена для определения количества: мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов, дрожжей, плесневых грибов, мезофильных клостридий (в том числе группы С. botulinum, С. perfringens), сульфитредуцирующих клостридий и сальмонелл, микроорганизмов группы В subtilis. В. cereus. В. polymyxa. S. aureus;

-    температурный интервал применения (инкубации) 20° С—40° С;

-    предназначена для анализа соков, нектаров, морсов, сокосодержащих напитков, фруктовых и овощных концентрированных соков, сырья и технологической воды, оборудования и воздуха производственных помещений;

-    значение pH 7,3 ±0.2:

-    компоненты: вода, пептон, мясной экстракт, агар-агар. NaCI;

-    простой способ подготовки к использованию.

Среду № 1 используют для культивирования микроорганизмов при непосредственном внесении анализируемой пробы или ее разведения в питательную среду (далее — метод прямого посева) и при выполнении анализа методом мембранной фильтрации Подготовка среды к использованию приведена в4.3.3.1.

4.2.2    Среда № 2 (среда «OFS-Agar»)1» представляет собой твердую стерильную микробиологическую среду, разлитую в стеклянные бутылки. Среда № 2 характеризуется следующими основными свойствами:

-    селективность: дрожжи, плесневые грибы, молочнокислые бактерии, уксуснокислые бактерии;

-    температурный интервал применения (инкубации) 26 ° С—30° С:

-    предназначена для анализа соков, нектаров, морсов, сокосодержащих напитков, фруктовых и овощных концентрированных соков, сырья и технологической воды, оборудования и воздуха производственных помещений;

-    значение pH 5.0 ±0.1;

-    компоненты: вода, сахар, апельсиновый концентрат, агар-агар, дрожжевой экстракт, пептон;

-    простой способ подготовки к использованию.

'' Питательная среда является рекомендуемой к применению. Эта информация дана для сведения пользователей настоящего стандарта и не означает, что стандарт устанавливает обязательное применение указанной питательной среды. Допускаются к использованию питательные среды производства других изготовителей, предназначенные для целей описываемых методов Рекомендуемые специальные микробиологические среды «NAHRAGAR DEV — Agar». «OFS-Адаг». «LMC — concentrate». «TF-В» и «TF-G» производятся компанией «Doehler GmbH» (Германия), имеют сертификат ИСО 9001:2000.

ГОСТ P 52711—2007

Среду № 2 используют в качестве питательной среды для количественного и качественного определения микроорганизмов в пробе при выполнении анализа методом прямого посева (в том числе при анализе проб воздуха) и методом мембранной фильтрации Подготовка среды к использованию приведена в 4.3.3.1.

4.2.3    Среда № 3 (среда « LMC— concentrate» У > представляет собой жидкую стерильную микробиологическую среду, разлитую в стеклянные бутылки Среда № 3 характеризуется следующими основными свойствами:

-    селективность: бактерии группы кишечных палочек (колиформные бактерии);

-    температурный интервал применения (инкубации) 36,0 °С—44.5 °С;

-    предназначена для анализа питьевой исходной, технологической и технологической промывной воды, санитарно-гигиенического состояния производства:

-    значение pH 7.2 ±0.1;

-    компоненты: вода, лактоза, пептон. NaCI. бромкрезолпурпур:

-    простой способ подготовки к использованию.

Среду № 3 используют в качестве питательной среды для культивирования микроорганизмов при выполнении анализа методом прямого посева, методом мембранной фильтрации, в том числе при анализе проб, взятых стерильной палочкой с ватным наконечником (свобом) с контролируемых поверхностей методом стирания (методом свобирования). Подготовка среды к использованию приведена в 4.3.3.2.

4.2.4    Среда № 4 (среда «TF-B»)’> представляет собой стерильную среду, разлитую в стеклянные бутылки. Среда №4 предназначена для предварительного обогащения проб нефильтрующихся продуктов перед анализом пробы с применением TF-G или среды № 2. Среда № 4 характеризуется следующими основными свойствами:

-    селективность: дрожжи, плесневые грибы, молочнокислые бактерии, уксуснокислые бактерии;

-    предназначена для анализа соков, нектаров, морсов, сокосодержащих напитков, фруктовых и овощных концентрированных соков, сырья и технологической воды, оборудования и воздуха производственных помещений;

-    температурный интервал применения (инкубации) 26 °С—30 °С;

-    значение pH 6.2 ± 0.2;

-    компоненты: вода, сахар, пептон, дрожжевой экстракт, буфер;

-    перед использованием не требует подготовки.

4.2.5    СредаМвб^редаиТР-бл^состоитиздвухкомпонентов^омпонента 1 — «TF-G 1 ж1 (порошкообразной смеси) и компонента 2 — «TF-G 2»1* (корректора pH). Среда № 5 характеризуется следующими основными свойствами:

-    селективность: дрожжи, плесневые грибы, молочнокислые бактерии, уксуснокислые бактерии;

-    предназначена для анализа соков, нектаров, морсов, сокосодержащих напитков, фруктовых и овощных концентрированных соков, сырья и технологической воды, оборудования и воздуха производственных помещений;

-    температурный интервал применения (инкубации) 26 °С—30 °С;

-    компоненты: сахар, пептон, дрожжевой экстракт, буфер, минеральные добавки, стабилизатор, молочная кислота:

-    простой способ подготовки к использованию.

Подготовка среды к использованию приведена в 4.3.3.3.

4.3 Подготовка к проведению анализов

4.3.1    Подготовка посуды

4.3.1.1    Новую посуду, предназначенную для микробиологических работ, кипятят в подкисленной воде (водном растворе объемной долей соляной кислоты 1 %—2 %) в течение 15 мин. затем ополаскивают дистиллированной водой до полного удаления следов моющего раствора и высушивают в сушильном шкафу.

4.3.1.2    Пробирки, колбы, бутылки закрывают ватно-марлевыми пробками, покрывают колпачком так.чтобыисключитьзагрязнение после стерилизации в процессе работы и хранения. В случае ислоль-

11 Питательная среда является рекомендуемой к применению. Эта информация дана для сведения пользователей настоящего стандарта и не означает, что стандарт устанавливает обязательное применение указанной питательной среды. Допускаются к использованию питательные среды производства других изготовителей, предназначенные для целей описываемых методов. Рекомендуемые специальные микробиологические среды «NAHRAGAR DEV — Agar». «OFS-Адаг». LMC — concentrate». «TF-В» и «TF-G» производятся компанией «Doehler GmbH» (Германия), имеют сертификат ИСО 9001:2000.

5

зования стерильной одноразовой посуды ее стерилизацию не проводят Перед стерилизацией пипетки со вставленными тампонами из ваты и чашки Петри в закрытом виде укладывают в металлические пеналы или обертывают крафт-бумагой. после чего стерилизуют Бумага, используемая для обертывания лабораторной посуды, не должна разрушаться при стерилизации. Режим стерилизации посуды по ГОСТ 26668(1.2).

4.3.1.3    Стерильную посуду хранят в плотно закрывающихся шкафах или ящиках с крышками.

4.3.1.4    Посуду с микробиологическими средами после проведения анализа обеззараживают перед мойкой путем стерилизации в автоклаве при температуре (121 ± 2) вС в течение 30 мин или кипячением в течение 1 ч.

4.3.2 Приготовление реактивов и растворов

4.3.2.1    Приготовление водного раствора объемной долей перекиси водорода 3 %

Для приготовления водного раствора объемной долей перекиси водорода 3 % к 10 см3 раствора перекиси водорода объемной долей 30 % добавляют 90 см3 дистиллированной воды. В случае, если используют раствор перекиси водорода с другой объемной долей, проводят пересчет.

4.3.2.2    Приготовление водного раствора объемной долей этилового спирта 70%

Для приготовления водного раствора объемной долей этилового спирта 70 % к 70 см3 96 %-ного этилового спирта по ГОСТ Р 51652 добавляют 26 см3 дистиллированной воды. Применяют для асептической обработки тары при отборе проб для анализа

4.3    2.3 Приготовление стерильной воды

Стерильную воду получают путем фильтрации дехлорированной питьевой воды через стерильный мембранный фильтр диаметром пор 0,2 мкм или стерилизацией в течение 30 мин при температуре (121 ± 2)Х.

4.3.2.4    Сроки хранения реактивов и растворов не должны превышать одного месяца Водный раствор перекиси водорода объемной долей 3 % необходимо хранить при температуре 0 X—8 X в склянке из темного стекла с притертой пробкой

4.3.3    Подготовка специальных микробиологических сред к проведению анализа

4.3.3.1    Среды № 1 и № 2

Нераспечатанную бутылку с твердыми средами № 1 и № 2 нагревают на водяной бане до перехода микробиологической среды из твердого состояния в жидкое. Температура воды в водяной бане не должна превышать 95 °С. После того как среда расплавилась, ее медленно охлаждают до температуры 45 X—48 °С. При охлаждении среды следует избегать перепада температур более 20 °С.

Расплавленную среду можно хранить в жидком состоянии в водяной бане при температуре 45 °С—48 X не более 2 ч.

4.3.3.2    Среда №3

Для проведения анализа путем внесения пробы воды непосредственно в бутылку с концентратом подготовка не требуется.

Для проведения анализа пробы методом мембранной фильтрации или анализа пробы, взятой методом свобирования. в бутылку с концентратом доливают стерильную воду до горловины бутылки и содержимое перемешивают, после чего среда готова к использованию.

4.3.3.3    Среда №5

Приготовление 1 дм3 готовой среды № 5:

В термостойкую емкость (колбу Эрленмейера) объемом 1.5 дм3 вносят 60 г компонента 1 и постепенно. перемешивая, добавляют 1 дм3 деминерализованной воды.

Полученный раствор нагревают на магнитной мешалке с подогревом до температуры 48Х—52 X при непрерывном перемешивании.

При достижении температуры раствора (50 ± 2) X. добавляя компонент 2. корректируют уровень pH раствора до 4,3—4.4. При выполнении коррекции необходимо использовать pH-метр с автоматической термокомпенсацией.

После проведения коррекции pH раствор нагревают до температуры 85 °С—87 X и выдерживают при этой температуре в течение 60 с. ВНИМАНИЕ! Температура раствора не должна превышать 87 X!

Соблюдая правила асептики, разливают готовую среду № 5 в чистые емкости (термостойкие бутылки с термостойкими крышками) и укупоривают. Применяют емкости и завинчивающиеся крышки, способные выдерживать температуру не ниже 120 X.

Наполненные емкости переворачивают вверх дном или придают им горизонтальное положение с целью обеспечения пастеризации крышки и внутренней поверхности емкости над жидкостью.

Готовая микробиологическая среда № 5 имеет бледно-опаловый цвет и может иметь уплотнения коллоидной структуры, что не влияет на результаты анализа.

6

ГОСТ P 52711—2007

4.3.3.4    Хранение готовых микробиологических сред

Готовые микробиологические среды, разлитые в тару, хранят следующим образом:

Среды № 1.2.3 и раствор питательной среды № 3 хранят при температуре (4 ± 2) °С не более одного месяца.

Среду № 4 хранят в соответствии с инструкцией на упаковке.

Среду № 5 хранят в течение четырех недель со дня приготовления при температуре 0 °С—8 °С.

По истечении срока хранения микробиологические среды использованию не подлежат.

4.3.4    Подготовка мембранных фильтров и фильтровального прибора. Порядок работы с применением метода мембранной фильтрации

4.3.4.1    Для фильтрации используют стерильные и нестерильные мембранные фильтры размером пор 0.45 мкм.

Нестерильные фильтры стерилизуют непосредственно перед их использованием кипячением или другим способом, рекомендованным фирмой-изготовителем

Для кипячения фильтры помещают в стеклянный стакан или медицинский стерилизатор с дистиллированной водой, нагретой до 30 °С. медленно доводят до кипения на слабом огне, после чего воду меняют и кипятят 10 мин Во избежание деформации фильтров во время кипячения в стакан или медицинский стерилизатор помещают стеклянные шарики.

4 .3.4.2 Перед фильтрацией пробы воронку и столик обтирают ватным тампоном, смоченным водным раствором объемной долей этилового спирта 70 % и стерилизуют фламбированием После охлаждения на столик фильтровального прибора кладут фламбированным пинцетом мембранный фильтр, устанавливают воронку и закрепляют держателем.

Использование одноразовых стерильных комплектов, состоящих из воронки и мембраны, позволяет исключить стадию стерилизации фильтровального прибора

4.3.4.3 Анализируемый объем пробы выливают в воронку и включают вакуум-насос. При отсутствии мерных уровней в воронке для внесения необходимого объема пробы используют стерильные цилиндры или стерильные пипетки. При фильтровании 1 см3 анализируемой пробы в воронку предварительно заливают не менее 10 см3 стерильной воды, после чего вносят анализируемую пробу

4.3.4    4 По окончании фильтрации пробы фильтр промывают 10—20 см3 стерильной воды. После прохождения жидкости через фильтр воронку держат под вакуумом в течение 3—5 с (до полного удаления следов жидкости), после чего насос отключают.

С помощью клапана (или посредством снятия шланга с вакуум-насоса) выравнивают давление под мембраной до атмосферного, снимают воронку и с помощью фламбированного пинцета осторожно снимают фильтр с установки

4.3.4    5 Открывают чашку Петри с предварительно разлитой и охлажденной (застывшей) микробиологической средой и накладывают фильтр на микробиологическую среду так. чтобы между ним и поверхностью питательной среды не оставались пузырьки воздуха Для этого противоположный край фильтра (напротив пинцета) должен лечь на поверхность среды, а затем постепенно накладывают весь фильтр «накатом» на среду

Поверхность фильтра с осевшими на нее микроорганизмами должна быть обращена вверх. Чашку закрывают и на дне чашки под каждым фильтром делают надписи с указанием номера профильтрованной пробы. На одну чашку разрешается поместить в зависимости от диаметра фильтра и чашки Петри от одного до четырех фильтров так. чтобы фильтры не соприкасались.

4.3.4    6 Перед фильтрацией следующей пробы столик и воронку прибора вакуумного фильтрования тщательно фламбируют.

4.4    Определение количества мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов (КМАФАнМ) с использованием агаризованной среды № 1

4.4.1    Метод прямого посева в чашки Петри

Метод основан на непосредственном внесении анализируемого объема пробы воды; анализируемой массы (объема) концентрированного сока, сахарного сиропа, купажного сиропа, готового продукта или их разведения в агаризованную среду, инкубировании посевов и подсчете всех выросших колоний и позволяет определить количество мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов (КМАФАнМ).

Анализ проводят в двух повторностях.

4.4.1.1    Проведение анализа

Отобранную пробу или ее разведение по ГОСТ 26669 тщательно перемешивают, после чего стерильной пипеткой вносят в стерильную чашку Петри (при анализе пробы большой массы (объема) используют несколько чашек Петри). Затем в асептических условиях заливают расплавленной и охлаж-

7

1