Стр. 1
 

12 страниц

304.00 ₽

Купить официальный бумажный документ с голограммой и синими печатями. подробнее

Официально распространяем нормативную документацию с 1999 года. Пробиваем чеки, платим налоги, принимаем к оплате все законные формы платежей без дополнительных процентов. Наши клиенты защищены Законом. ООО "ЦНТИ Нормоконтроль".

Наши цены ниже, чем в других местах, потому что мы работаем напрямую с поставщиками документов.

Способы доставки

  • Срочная курьерская доставка (1-3 дня)
  • Курьерская доставка (7 дней)
  • Самовывоз из московского офиса
  • Почта РФ

Распространяется на сырое натуральное коровье молоко - сырье и устанавливает люминесцентный метод определения количества мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов (КМАФАнМ) от 50 тыс. до 20000 тыс. КОЕ/см куб. Наименьший предел обнаружения КМАФАнМ - не менее 50 тыс. КОЕ/см куб. Требования к молоку установлены в ГОСТ Р 52054

стандарт принят с правом досрочного введения

Оглавление

1 Область применения

2 Нормативные ссылки

3 Термины, определения, обозначения и сокращения

4 Методика определения

Приложение А Вспомогательные устройства для фильтрования молока

Приложение Б Перегонная установка

Библиография

Показать даты введения Admin

ФЕДЕРАЛЬНОЕ АГЕНТСТВО ПО ТЕХНИЧЕСКОМУ РЕГУЛИРОВАНИЮ И МЕТРОЛОГИИ

НАЦИОНАЛЬНЫЙ

СТАНДАРТ

РОССИЙСКОЙ

ФЕДЕРАЦИИ

МОЛОКО НАТУРАЛЬНОЕ КОРОВЬЕ — СЫРЬЕ

Люминесцентный метод определения количества мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов

Издание официальное

ф

со

со

й

о

о

7


Москва

Стандартинформ

2006

Предисловие

Цели и принципы стандартизации в Российской Федерации установлены Федеральным законом от 27 декабря 2002 г. № 184-ФЗ «О техническом регулировании», а правила применения национальных стандартов Российской Федерации — ГОСТ Р 1.0-2004 «Стандартизация в Российской Федерации. Основные положения»

Сведения о стандарте

1    РАЗРАБОТАН ООО «Люмтек»

2    ВНЕСЕН Техническим комитетом по стандартизации ТК 186 «Молоко и молочные продукты»

3    УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 23 декабря 2005 г. № 331-ст

4    ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодно издаваемом информационном указателе «Национальные стандарты», а текст изменений и поправок — в ежемесячно издаваемых информационных указателях «Национальные стандарты». В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ежемесячно издаваемом информационном указателе «Национальные стандарты». Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования — на официальном сайте национального органа Российской Федерации по стандартизации в сети Интернет

© Стандартинформ, 2006

Настоящий стандарт не может быть полностью или частично воспроизведен, тиражирован и распространен в качестве официального издания без разрешения Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии

НАЦИОНАЛЬНЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

МОЛОКО НАТУРАЛЬНОЕ КОРОВЬЕ — СЫРЬЕ

Люминесцентный метод определения количества мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов

Fresh cow’s milk — raw material.

Luminescent method of quantitative determination of the total amount of mesophilic aerobic and elective

anaerobic microorganisms

Дата введения — 2007—01—01

1    Область применения

Настоящий стандарт распространяется на сырое натуральное коровье молоко — сырье (далее — молоко) и устанавливает люминесцентный метод определения количества мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов (КМАФАнМ) от 50 тыс. до 20000 тыс. КОЕ/см3. Наименьший предел обнаружения КМАФАнМ — не менее 50 тыс. КОЕ/см3.

Требования к молоку установлены в ГОСТ Р 52054.

2    Нормативные ссылки

В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие стандарты:

ГОСТ Р ИСО 5725-1-2002 Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 1. Основные положения и определения

ГОСТ Р 51652-2000 Спирт этиловый ректификованный из пищевого сырья. Технические условия

ГОСТ Р 51917-2002 Продукты молочные и молокосодержащие. Термины и определения ГОСТ Р 52054-2003 Молоко натуральное коровье — сырье. Технические условия ГОСТ 1770-74 Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия

ГОСТ 2228-81 Бумага мешочная. Технические условия

ГОСТ 2405-88 Манометры, вакуумметры, мановакуумметры, напоромеры, тягомеры и тягонапо-ромеры. Общие технические условия

ГОСТ 3118-77 Реактивы.Кислотасоляная.Техническиеусловия

ГОСТ 3145-84 Часы механические с сигнальным устройством. Общие технические условия ГОСТ 6709-72 Реактивы.Водадистиллированная.Техническиеусловия ГОСТ 8218-89 Молоко.Метод определения чистоты

ГОСТ 9225-84 Молоко и молочные продукты. Методы микробиологического анализа ГОСТ 10157-79 Аргон газообразный и жидкий. Технические условия ГОСТ 12026-76 Бумагафильтровальнаялабораторная. Технические условия ГОСТ 12290-89 Картон фильтровальный для пищевых жидкостей. Технические условия ГОСТ 22649-83 Стерилизаторы воздушные медицинские. Общие технические условия ГОСТ 22967-90 Шприцы медицинские инъекционные многократного применения. Общие технические требования и методы испытаний

ГОСТ 23932-90 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Общие технические условия ГОСТ 24104-2001 Весылабораторные.Общие технические требования ГОСТ 24861-91 (ИСО 7886—84)Шприцыинъекционныеоднократногоприменения ГОСТ 26668-85 Продукты пищевые и вкусовые. Методы отбора проб для микробиологических анализов

ГОСТ 26809-86 Молоко и молочные продукты. Правила приемки, методы отбора и подготовка проб к анализу

Издание официальное

ГОСТ 28498-90 Термометры жидкостные стеклянные. Общие технические требования. Методы испытаний

ГОСТ 29169-91 (ИСО 648—77)Посудалабораторнаястеклянная.Пипетки с однойотметкой

Примечание — При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов в информационной системе общего пользования — на официальном сайте национального органа Российской Федерации по стандартизации в сети Интернет или по ежегодно издаваемому информационному указателю «Национальные стандарты», который опубликован по состоянию на 1 января текущего года, и по соответствующим ежемесячно издаваемым информационным указателям, опубликованным в текущем году. Если ссылочный стандарт заменен (изменен), то при пользовании настоящим стандартом следует руководствоваться замененным (измененным) стандартом. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, применяется в части, не затрагивающей эту ссылку.

3    Термины, определения, обозначения и сокращения

3.1    В настоящем стандарте применены термины по ГОСТ Р ИСО 5725-1 и ГОСТ Р 51917.

3.2    В настоящем стандарте применены следующие обозначения и сокращения:

КМАФАнМ — количество мезофильных аэробных и факультативно анаэробных микроорганизмов;

АТФ — аденозин-5’-трифосфат;

BPN-реагент — растворитель соматических клеток, белка и жира молока;

КОЕ — колониеобразующие единицы.

4    Методика определения

Метод основан на:

-    растворении соматических клеток, белка и жира молока ВР1-реагентом;

-    фильтровании полученного раствора молока через бактериальный мембранный фильтр;

-    растворении отфильтрованных микроорганизмов диметилсульфоксидом;

-    измерении люминесценции полученного раствора, расчете молярной концентрации АТФ микроорганизмов и выражении ее значения в КОЕ/см3 молока.

4.1 Средства измерений и вспомогательные устройства

Прибор «Биотокс-7», обеспечивающий измерение люминесценции в диапазоне длин волн от 380 до 600 нм по [1].

Люминометрическая кювета полистирольная диаметром 10 мм, вместимостью 0,35 см3, дно которой выполнено из бактериального мембранного фильтра с порами 0,45 мкм (приложение А, рисунок 1) [2].

Штатив для люминометрических кювет (приложение А, рисунок 2) [2].

Шприц медицинский вместимостью 5 см3 по ГОСТ 22967, ГОСТ 24861.

Наконечник резиновый к медицинскому шприцу (приложение А, рисунок 3) [2].

Колба вместимостью 5 см3, 100 см3, 1дм 3 по ГОСТ 1770.

Пипетки автоматические, позволяющие дозировать объемы: 0,02, 0,05, 0,2 и 1 см3 [3].

Наконечники к автоматическим пипеткам стерильные [4].

Термометр стеклянный жидкостной (нертутный), диапазон измерения 0 °С—100 °С, цена деления шкалы 1 °С по ГОСТ 28498.

Часы механические с сигнальным устройством по ГОСТ 3145.

Шкаф сушильный, позволяющий поддерживать температуру (165 ± 5) °С.

Стерилизатор воздушный медицинский по ГОСТ 22649 или стерилизатор паровой медицинский, позволяющие поддерживать температуру (121 ± 2) °С.

Баня водяная, позволяющая поддерживать температуру (45 ± 1) °С.

Перегонная установка (см. приложение Б).

Весы лабораторные с пределом допускаемой абсолютной погрешности однократного взвешивания не более ± 0,02 мг по ГОСТ 24104.

Установка для получения деионизированной воды по [5].

Пипетка стеклянная номинальной вместимостью 50 см3 2 кл. по ГОСТ 29169.

Эксикатор по ГОСТ 23932.

Вакуумметр по ГОСТ 2405.

4.2    Реактивы и материалы

АТФ-реагент для биолюминесцентного определения АТФ, чистый сухой, содержащий люциферзу светляков, Д-люциферин, соль магния, компоненты буферной системы, стабилизаторы [6].

Вода деионизированная с электропроводимостью не более 0,1 мкСм, получаемая в соответствии с инструкцией к установке по 4.1.

Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.

АТФ сухой с содержанием основного вещества не менее 99 % [7].

BPN-реагент чистый сухой с массовой долей неионного детергента не более 5 %, содержащий компоненты буферной системы и комплекс протеаз [8].

Промывочный раствор для подготовки образцов к АТФ-метрии, чистый, с массовой долей неионного детергента не более 1 % [9].

Диметилсульфоксид [10].

Кислота соляная по ГОСТ 3118, х.ч.

Аргон по ГОСТ 10157.

Фильтровальная бумага по ГОСТ 12026 или фильтровальный картон по ГОСТ 12290.

Бумага мешочная по ГОСТ 2228.

Спирт этиловый по ГОСТ Р 51652.

Допускается применение других средств измерений, вспомогательных устройств с метрологическими и техническими характеристиками, а также реактивов и материалов по качеству не уступающим приведенным выше.

4.3    Отбор проб

Отбор проб — по ГОСТ 9225 и ГОСТ 26809.

4.4    Подготовка к измерениям

4.4.1    Приготовление водного раствора с массовой долей соляной кислоты от 1 % до 2 %

В мерную колбу вместимостью 1 дм3(см. 4.1) наливают от 100 до 200 см3дистиллированной воды и доливают пипеткой (см. 4.1) 50 см3 соляной кислоты (см. 4.2). Приливают дистиллированную воду до метки.

4.4.2    Подготовка посуды, инструментов и материалов

Лабораторную посуду, инструменты и материалы (полоски фильтровальной бумаги или фильтровального картона размером 4х 12 см, завернутые в бумагу (см. 4.2), стерилизуют в соответствии с ГОСТ 26668 (пункт 1.2).

Колбу для отбора молока вместимостью 100 см3 (см. 4.1) кипятят в водном растворе соляной кислоты по 4.4.1 в течение 15 мин и ополаскивают дистиллированной водой. Затем колбу стерилизуют в сушильном шкафу при температуре (160 ± 5)°Св течение 2 ч с последующим охлаждением в эксикаторе (см. 4.1) либо в стерилизаторе при температуре (121 ± 2) °С в течение (30 ± 1) мин с последующим охлаждением в эксикаторе (см. 4.1).

4.4.3    Очистка диметилсульфоксида с помощью перегонки

Диметилсульфоксид перегоняют в потоке аргона при температуре (72,0 ± 0,2) °С и остаточном давлении 15 мм рт. ст. Для шлифов перегонной установки (см. 4.1) использование смазки не допускается. Перегнанный диметилсульфоксид хранят в стеклянной посуде без доступа света в течение 30 дней при температуре не выше 4 °С.

4.4.4    Подготовка раствора АТФ-реагента

В упаковку с сухим АТФ-реагентом (см. 4.2) автоматической пипеткой, позволяющей дозировать 1 см3, вносят деионизированную воду по 4.2 в объеме, указанном на этикетке упаковки, и осторожно перемешивают покачиванием. Если для испытания используют несколько упаковок с сухим АТФ-реаген-том, то их содержимое после добавления деионизированной воды объединяют в одну упаковку с помощью автоматической пипетки. Перед использованием раствор АТФ-реагента выдерживают от 15 до 30 мин. Полученный раствор используют в течение 6 ч.

4.4.5    Приготовление контрольного образца АТФ с молярной концентрацией (С1) — 1 • 10 11 моль/см3

Взвешивают (0,2755 ± 0,0001) г АТФ (см. 4.2), растворяют его деионизированной водой в мерной колбе вместимостью 5 см3 (молярная концентрация водного раствора АТФ — 0,1 моль/см3).

0,5 см3 водного раствора АТФ вносят в мерную колбу вместимостью 5 см3 и доводят объем раствора до метки диметилсульфоксидом по 4.4.3 (молярная концентрация полученного раствора АТФ в диметилсульфоксиде— 1 • 10 2 моль/см3). Данную процедуру повторяют еще девять раз, последовательно растворяя 0,5 см3 вновь получаемых растворов диметилсульфоксидом в мерных колбах вместимостью 5 см3.

Допускается использовать для приготовления контрольного образца лиофильно высушенную смесь АТФ с инертными наполнителями, обеспечивающую после ее растворения молярную концентрацию АТФ 1 • 10 11 моль/см3.

4.4.6    Измерение люминесценции контрольного образца АТФ

Люминометрическую кювету помещают в кюветное отделение прибора для измерения люминесценции и последовательно вносят в нее 0,02 см3 контрольного образца АТФ по 4.4.5 и 0,05 см3 деионизированной воды, а также 0,05 см3 раствора АТФ-реагента по 4.4.4. Раствор перемешивают прокачиванием: трижды набирая содержимое люминометрической кюветы в наконечник автоматической пипетки вместимостью 0,05 см3 и возвращая его в люминометрическую кювету. Измеряют люминесценцию /1.

Процедуру измерения люминесценции контрольного образца АТФ проводят дважды. АТФ-реагент считают пригодным для проведения испытаний, если для среднеарифметического значения двух результатов наблюдений люминесценции выполняется условие: /1 > 500 усл. ед.

4.4.7    Подготовка пробы молока

Из объединенной пробы молока по ГОСТ 9225 отбирают 250 см3 молока, фильтруют его через иглопробивную ткань в соответствии с требованиями ГОСТ 8218 (см. разделы 2, 3). Предварительно ткань стерилизуют при температуре (121 ± 2) °С в течение (30 ± 1) мин, охлаждают в эксикаторе до температуры (20 ± 2) °С. Предварительно поверхность установки для фильтрования молока обрабатывают этиловым спиртом (см. 4.2) и высушивают.

4.5 Проведение измерений

4.5.1    Отбирают 50 см3 отфильтрованного молока по 4.4.7 и помещают в колбу вместимостью 100 см3, подготовленную по 4.4.2. Молоко подогревают до температуры (20 ± 2)°Си перемешивают.

4.5.2    Автоматической пипеткой отбирают 1 см3 молока по 4.5.1, вносят его в упаковку с BPN-реагентом и перемешивают ее содержимое. Упаковку выдерживают в водяной бане при (45 ± 1) °С в течение 10 мин.

4.5.3    Люминометрическую кювету устанавливают на стопку из трех-пяти полосок фильтровальной бумаги или на одну полоску фильтровального картона по 4.4.2, помещенных в штатив для люминомет-рических кювет (приложение А, рисунок 2). В люминометрическую кювету автоматической пипеткой вместимостью 0,2 см3 вносят 0,2 см3 раствора по 4.5.2 и продавливают его в фильтровальную бумагу или фильтровальный картон, создавая избыточное давление воздуха с помощью шприца с резиновым наконечником (приложение А, рисунок 3). Стопку фильтровальной бумаги или полоску фильтровального картона в штативе для люминометрических кювет периодически перемещают так, чтобы после фильтрования под люминометрической кюветой она оставалась сухой.

Если фильтрование затруднено, то процедуру по 4.5.2 повторяют с увеличением времени выдерживания упаковки в водяной бане до 20 мин.

4.5.4    В люминометрическую кювету по 4.5.3 автоматической пипеткой вместимостью 0,2 см3 вносят 0,2 см3 промывочного раствора (см. 4.2) и продавливают его в фильтровальную бумагу или фильтровальный картон, создавая избыточное давление с помощью шприца с резиновым наконечником. Стопку фильтровальной бумаги (или полоску фильтровального картона) в штативе для люминометрических кювет периодически перемещают так, чтобы после фильтрования под люминометрической кюветой она оставалась сухой.

4.5.5    Подготовленную люминометрическую кювету по 4.5.4 помещают в кюветное отделение прибора для измерения люминесценции и автоматической пипеткой вместимостью 0,02 см3 вносят в нее 0,02 см3 диметилсульфоксида по 4.4.3. Через 1 мин автоматической пипеткой вместимостью 0,05 см3 в люминометрическую кювету вносят последовательно 0,05 см3 деионизированной воды и 0,05 см3 раствора АТФ-реагента по 4.4.4. Раствор перемешивают прокачиванием: трижды набирая содержимое люминометрической кюветы в наконечник автоматической пипетки и возвращая его в люминометрическую кювету. Измеряют люминесценцию анализируемой пробы /2.

4.5.6    Процедуры по 4.5.3— 4.5.5 проводят дважды.

4.6    Обработка результатов

4.6.1    За результат измерений люминесценции контрольного образца принимают среднеарифметическое значение двух результатов наблюдений /1, если их повторяемость (сходимость) не превышает 10 % среднеарифметического значения.

4.6.2    За результат измерений люминесценции анализируемой пробы принимают среднеарифметическое значение двух результатов наблюдений /2, если их повторяемость (сходимость) не превышает 10 % среднеарифметического значения.

4.6.3    В случае, если повторяемость превышает 10 %, процедуры по 4.4.6 и 4.5.2—4.5.5 повторяют.

4.6.4    Молярную концентрацию АТФ С2, моль/см3, в анализируемой пробе рассчитывают по формуле

С2 = 0,1С1(?2)/(71),    (1)

где 0,1 — коэффициент, учитывающий концентрирование микроорганизмов влюминометрической кювете при фильтровании раствора;

C-i — молярная концентрация АТФ в контрольном образце, 1 -10 11 моль/см3 по 4.4.6;

/1 — среднеарифметическое значение двух результатов наблюдений люминесценции контрольно-_ го образца АТФ по 4.4.6, усл. ед.;

/2 — среднеарифметическое значение двух результатов наблюдений люминесценции анализируемой пробы, усл. ед.

4.6.5    Количество мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов определяют по таблице 1.

Таблица 1

Молярная концентрация АТФ, С2, моль/см3

Менее О

2

7

О

6

От О,6О

1О-12

до

2

о

-12

» 1,21

1О-12

»

2,7О

-

-12

» 2,71

1О-12

»

4,

2

О

-

-12

,21

4,

1О-12

»

О

,З

7,

-

-12

» 7,З1

1О-12

»

7

О

О

-

-12

О

4,

1О-12

»

4

О

О

-

-12

включ.

До 5О тыс.

Св. 5О тыс. » 1ОО тыс. включ. »    1ООтыс.    »    2ОО тыс.

»    2ОО тыс.    »    ЗОО тыс.

»    ЗОО тыс.    »    5ОО тыс.

»    5ОО тыс.    »    4ООО тыс.

» 4ООО тыс. » 2ОООО тыс.


Приложение А (обязательное)

Вспомогательные устройства для фильтрования молока

Рисунок 1 — Люминометрическая    Рисунок    2    —    Штатив    для    люмино-    Рисунок    З — Резиновый нако-

полистирольная кювета    метрической    кюветы    нечникк    медицинскому    шприцу



0

А

. 015 »


1 — нагреватель; 2 — термометр; 3 — холодильник; 4 — вакуумметр; 5 — охлаждаемая склянка; 6 — приемник фракций;

Приложение Б (рекомендуемое)


Перегонная установка


7 — круглодонная колба; 8 — капилляр

Рисунок Б.1

Библиография

[1]    ЮУВА4142З6. ОО1 ТУ

[2]    Каталог ООО «Люмтек», N по каталогу 1_РО9 или каталогфирмы New Horizons Diagnostics Corp. США, N по каталогу 89—117О21

[3] ТУ 9452-ОО2-ЗЗ189998—2ОО2 Дозаторы пипеточные с двойным термостатированным цветным корпусом, фиксированными и переменными объемами одно- и многоканальные «Колор»

[4]    ТУ 9452-ОО2-ЗЗ189998—2ОО2 Наконечники полимерные одноразовые кдозаторам пипеточным НП — «Термоэлектрон»

[5]    Каталог фирмы Millipore, Франция, N по каталогу =М035ООТУ

[6]    ТУ 26З9-ОО1-17919612—2ОО2 АТФ-реагент для биолюминесцентного определения АТФ. Чистый

[7]    Каталог фирмы Sigma, N по каталогу А7699

[8]    ТУ 26З9-ОО2-17919612—2ОО2 BPN-реагент. Чистый

[9]    ТУ 26З9-ООЗ-17919612—2ОО2 Промывочный раствор для подготовки образцов к АТФ-метрии. Чистый

[10]    Диметилсульфоксид Р 75/244/9, утвержденный Фармакологическим Государственным Комитетом Минздрава России от 15.ОЗ.99

УДК 637.12.04/07:576.8:006.354    ОКС    67.100.10    Н19    ОКП 92 2000

Ключевые слова: натуральное коровье молоко, сырье, люминесценция, метод, микроорганизмы, аэробные микроорганизмы, факультативно-анаэробные микроорганизмы, общая бактериальная обсеменен-ность, аденозин-5’-трифосфат

Редактор Р.Г. Говердовская Технический редактор В.Н. Прусакова Корректор Р.А. Ментова Компьютерная верстка И.А. Налейкиной

Сдано в набор 18.01.2006. Подписано в печать 30.01.2006. Формат 60 х 841/в. Бумага офсетная. Гарнитура Ариал. Печать офсетная. Усл. печ.л. 1,40. Уч.-изд.л. 0,80. Тираж 839 экз. Зак. 67. С 2402.

ФГУП «Стандартинформ», 123995 Москва, Гранатный пер., 4. www.gostinfo.ruinfo@gostinfo.ru Набрано во ФГУП «Стандартинформ» на ПЭВМ.

Отпечатано в филиале ФГУП «Стандартинформ» — тип. «Московский печатник», 105062 Москва, Лялин пер., 6.