ГОСТ Р 51485-99
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ
СЕМЕНА РАПСАОпределение содержания хлорофилла спектрометрическим методом
|
Москва
Стандартинформ
2010 |
Предисловие
1 РАЗРАБОТАН Временным творческим коллективом, образованным в рамках договора № 9842002 Е 4075 между АФНОР и ВНИЦСМВ с участием членов Технического комитета по стандартизации ТК 238 «Масла растительные и продукты их переработки»
ВНЕСЕН Техническим комитетом по стандартизации ТК 238 «Масла растительные и продукты их переработки»
2 ПРИНЯТ И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Постановлением Госстандарта России от 22 декабря 1999 г. № 641-ст
3 Настоящий стандарт гармонизирован с международным стандартом ИСО 10519:1997 «Семена рапса. Определение содержания хлорофилла. Спектрометрический метод»
4 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ
5 ПЕРЕИЗДАНИЕ. Июнь 2010 г.
© ИПК Издательство стандартов, 1999 © СТАНДАРТИНФОРМ, 2010
Настоящий стандарт не может быть полностью или частично воспроизведен, тиражирован и распространен в качестве официального издания без разрешения Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии
204
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИСЕМЕНА РАПСА Определение содержания хлорофилла спектрометрическим методом
Rapeseed.
Determination of chlorophyll content by spectrometric method
Дата введения 2001—01—01
1 Область применения
Настоящий стандарт распространяется на семена рапса и устанавливает спектрометрический метод определения содержания хлорофилла.
Метод не применим для определения хлорофилла в маслах.
2 Нормативные ссылки
В настоящем стандарте использованы ссылки на следующие стандарты:
ГОСТ 4095-75 Изооктан технический. Технические условия ГОСТ 10852-86 Семена масличные. Правила приемки и методы отбора проб ГОСТ 10856-96 Семена масличные. Методы определения влажности ГОСТ 12026-76 Бумага фильтровальная лабораторная. Технические условия ГОСТ 24104-88* Весы лабораторные общего назначения и образцовые. Общие технические условия
ГОСТ 25336-82 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные
ГОСТ 25828-83 Гептан нормальный эталонный. Технические условия. Типы, основные параметры и размеры
ГОСТ 29142-91 (ИСО 542—90) Семена масличных культур. Отбор проб ГОСТ 29227-91 (ИСО 835-1—81) Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования
ГОСТ Р 51652-2000 Спирт этиловый ректификованный из пищевого сырья. Технические условия
3 Сущность метода
Сущность метода заключается в экстракции навески продукта в специальном аппарате со специальным растворителем для экстракции и в дальнейшем спектрометрическом определении содержания хлорофилла в экстракте.
4 Определение
В настоящем стандарте используют следующий термин с соответствующим определением: содержание хлорофилла: Масса фракции веществ в миллиграммах в 1 кг пробы, соответствующая полосе спектра поглощения с длиной волны около 665 нм, полученной в условиях, установленных настоящим стандартом, выраженная как хлорофилл А.
Содержание хлорофилла выражается в миллиграммах на килограмм.
* С 1 июля 2002 г. введен в действие ГОСТ 24104-2001. (На территории Российской Федерации действует ГОСТ Р 53228-2008).
Издание официальное
5 Отбор проб
5.1 Отбор проб — по ГОСТ 10852.
При экспортно-импортных поставках — по ГОСТ 29142.
6 Аппаратура, материалы и реактивы
6.1 Спектрометр, пригодный для измерения поглощения в диапазоне длин волн от 600 до 700 нм, шириной спектральной полосы 2 нм.
6.2 Кюветы оптические толщиной слоя вещества не менее 1 см.
6.3 Устройства для измельчения зерновых и масличных культур: лабораторные электрические мельницы, бытовые электрокофемолки и другие, обеспечивающие проход через сито.
6.4 Сито с металлотканой сеткой числом отверстий на 1 см2 60—70, по [1].
6.5 Микроразмельчитель тканей ножевой (рисунок 1).
|
|
1 — электродвигатель; 2 — вал с ножами (ножевая 1 — неопреновая или фторсиликоновая пробка № 3; 2 —
мешалка); 3 — сосуд для размельчения тканей; 4— стальная обшивка; 3 — шарики из нержавеющей стали
контейнер; 5 — каплеуловитель; 6 — тумблеры для 0 16 мм
включения прибора и изменения числа оборотов;
7— корпус предохранителя Рисунок 2 — Микроразмельчитель шариковый |
6.6 Микроразмельчитель шариковый (рисунок 2).
Рисунок 1 — Микроразмельчитель тканей ножевой
6.7 Весы лабораторные 2-го класса точности наибольшим пределом взвешивания 200 г по ГОСТ 24104.
6.8 Пипетка 1-1а(2)-1(2)-25 по ГОСТ 29227 или автоматический дозатор, позволяющий дозировать 30 см3 с погрешностью менее 10.
6.9 Пробирки П4-20-14/23 ХС по ГОСТ 25336.
6.10 Фильтровальная бумага ФНС по ГОСТ 12026, фильтр V-образной формы.
6.11 Спирт этиловый ректификованный по ГОСТ Р 51652 с последующим абсолютированием.
6.12 Изооктан (2,2,4-триметилпентан) по ГОСТ 4095, безводный свежеперегнанный, фракция, перегоняющаяся при температуре 80—120 °С, или
6.13 н-гептан по ГОСТ 25828 безводный или
6.14 Петролейный эфир (температурой кипения 90—100 °С) безводный по [2].
206
ГОСТ Р 51485-99
Допускается использование другой аппаратуры и реактивов, по качеству и метрологическим характеристикам не уступающих перечисленным.
7 Подготовка к определению7.1 Подготовка проб
7.1.1 Из средней пробы выделяют семена рапса массой (50+5) г. Выделенные семена очищают от сорной примеси.
7.1.2 Влажность анализируемых семян должна быть не менее 10 %. При большей влажности семена подсушивают в сушильном шкафу при температуре 45 °С не более 12 ч.
Перед измельчением проводят определение влажности в семенах по ГОСТ 10856.
7.1.3 Очищенные и подсушенные семена измельчают в измельчающем устройстве до прохода всей массы измельченного материала через сито с металлотканой сеткой числом отверстий 60—70 на 1 см2. Измельченные семена тщательно перемешивают и взвешивают две навески массой по (2+0,001) г для параллельных определений содержания хлорофилла.
7.2 Подготовка растворителя для экстракции
Для экстракции готовят растворитель, состоящий из смеси безводного этилового спирта — 1 часть и безводного изооктана (или безводного я-гепта на, или безводного петролейного эфира температурой кипения 90—100 °С) — 3 части.
8 Проведение определения8.1 Экстракция с применением ножевого микроразмельчителя тканей (рисунок 1)
8.1.1 Микроразмельчитель тканей ножевой — экстрактор блендерного типа, включающий контейнер, в котором устанавливается сосуд с измельченным растительным продуктом и растворителем для получения экстракта. Экстракция проводится при перемешивании ножевой мешалкой, ножи которой вращаются со скоростью 3000 или 5000 об/мин.
Во избежание разбрызгивания экстрагируемого материала сосуд закрывают эбонитовой крышкой с тефлоновой прокладкой (или прокладкой из других материалов, устойчивых по отношению к растворителям).
8.1.2 Взятую по 7.1.3 навеску измельченных семян (около 2 г) помещают в сосуд микроразмельчителя тканей и приливают с помощью пипетки 30 см3 растворителя для экстракции (7.2). Проводят экстракцию, включая прибор 3 раза по 5 мин с перерывами 10 мин, затем дают экстракту отстояться 10 мин и декантируют через бумажный фильтр в пробирку для дальнейшего заполнения оптической кюветы. Пробирку закрывают как можно плотнее для предотвращения испарения растворителя.
Примечание — Помутнение или неоднородность раствора указывает на присутствие влаги в растворе.
8.2 Экстракция в экстракционном сосуде из нержавеющей стали шарикового микроразмельчителя или в экстракционном сосуде шариковой мельницы (рисунок 2)
8.2.1 Микроразмельчитель шариковый (рисунок 2), состоящий из надежно закрывающихся трубчатых сосудов из нержавеющей стали вместимостью (50+0,5) г с шариками из нержавеющей стали диаметром 16 мм и устройства для встряхивания горизонтально расположенных надежно закрытых сосудов частотой встряхивания 240 мин-1 и горизонтальным смещением 3,5 см; или мельница шариковая с техническими характеристиками, аналогичными мельницам фирмы «Dan-goumau».
8.2.2 В сосуд из нержавеющей стали или в экстракционный сосуд шариковой мельницы взвешивают навеску измельченных семян массой 2 г с точностью до 0,001 г.
В сосуд с помощью пипетки приливают 30 см3 растворителя для экстракции. Если используется трубчатый сосуд из нержавеющей стали, помещают в него три шарика из нержавеющей стали и встряхивают в течение 1 ч. При использовании шариковой мельницы добавляют в сосуд, по крайней мере, четыре стальных шарика среднего размера и проводят экстракцию в течение 20 мин.
8.2.3 Дают экстракту отстояться в течение 10 мин и затем декантируют достаточный объем экстракта через бумажный фильтр в пробирку для заполнения оптической кюветы. Закрывают пробирку как можно плотнее для предотвращения испарения.
207
8.3 Проведение
Профильтрованный экстракт заливают в кювету спектрометра и измеряют поглощение при длинах волн 665, 705 и 625 нм (значения, полученные при 705 и 625 нм, используют для расчета поправки на линии основания).
9 Обработка результатов
Содержание хлорофилла W, мг/кг продукта, рассчитывают по формуле
скорректированное значение поглощения по линии основания, эквивалентное
^665 — (^705 + Л>25)/2; поглощение при 665 нм; поглощение при 705 нм; поглощение при 625 нм; постоянная, равная 13; толщина слоя в оптической кювете, см; масса навески, г;
объем растворителя, прилитого в сосуд, см3.
Для выражения содержания хлорофилла в пересчете на сухое вещество нужно провести пересчет с учетом влажности семян, определенной по 7.1.2.
А665 — ^705 — ^625 — К-I — т — V—
10 Точность определения10.1 Повторяемость
Расхождение между результатами двух независимых единичных определений, выполненных при использовании одного метода, на идентичном материале, в одной лаборатории, одним и тем же оператором, на одном оборудовании, в течение короткого промежутка времени, не должно превышать 10 % по отношению к среднеарифметическому значению двух результатов при доверительной вероятности 0,95.
10.2 Воспроизводимость
Расхождение между результатами двух единичных определений, выполненных одним методом на идентичном испытуемом материале, в различных лабораториях, разными операторами, на различном оборудовании, не должно превышать 20 % по отношению к среднеарифметическому значению двух результатов при доверительной вероятности 0,95.
11 Требования техники безопасности
11.1 Работы по приготовлению растворителя, проведению экстракции и фильтрации экстракта проводят в вытяжном шкафу с соблюдением правил личной гигиены.
11.2 Необходимо соблюдать правила безопасности работы с размельчителем проб и микрораз-мельчителем тканей, а также основные правила работы с электроприборами.
11.3 Изооктан горюч, легковоспламеним, токсичен при вдыхании. Помещение должно быть оборудовано приточно-вытяжной вентиляцией.
12 Протокол испытания
Протокол испытания должен содержать следующую информацию:
- ссылку на метод, в соответствии с которым проводился отбор проб, если он известен;
- ссылку на использованный метод;
- полученный(ые) результат(ы) испытания.
Также должны быть указаны все подробности испытания, не отраженные в настоящем стандарте (или необязательные для применения), а также все случайности, которые могут повлиять на результаты.
Протокол испытания должен включать всю информацию, необходимую для полной идентификации пробы.
ГОСТ Р 51485-99
|
[1] ТУ 14-4-1374-
[2] ТУ 38-101373- |
ПРИЛОЖЕНИЕ А (справочное)
Библиография
-86 Сетки проволочные стальные для мукомольной промышленности -90 Петролейный эфир |
209
УДК 651.53.011.001.4:006.354 ОКС 67.200.20 С19 ОКСТУ 9109
Ключевые слова: семена рапса, хлорофилл, измельчение семян, экстракция пробы, спектрометрическое определение, обработка результатов
210
