Товары в корзине: 0 шт Оформить заказ
Стр. 1
 

8 страниц

244.00 ₽

Купить официальный бумажный документ с голограммой и синими печатями. подробнее

Официально распространяем нормативную документацию с 1999 года. Пробиваем чеки, платим налоги, принимаем к оплате все законные формы платежей без дополнительных процентов. Наши клиенты защищены Законом. ООО "ЦНТИ Нормоконтроль".

Наши цены ниже, чем в других местах, потому что мы работаем напрямую с поставщиками документов.

Способы доставки

  • Срочная курьерская доставка (1-3 дня)
  • Курьерская доставка (7 дней)
  • Самовывоз из московского офиса
  • Почта РФ

Распространяется на мясо и мясные продукты и устанавливает метод определения L - (+) - глутаминовой кислоты

Показать даты введения Admin

Страница 1

ГОСТ Р 51198-98 (ИСО 4134-78)

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

МЯСО И МЯСНЫЕ ПРОДУКТЫ Метод определения Ь-(+)-глутаминовой кислоты

Издание официальное

Москпа

Стэидартенформ

2010

Страница 2

ГОСТ I* 51198-98

Предисловие

1    РАЗРАБОТАН Московской государственной академией пищевых производств

ВНЕСЕН Техническим комитетом по стандартизации ГК 335 «Методы испытаний агропромышленной продукции на безопасность»

2    ПРИНЯТ И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Постановлением Госстандарта России от 28 августа 1998 г. N? 336

3    Настоящий стандарт представляет собой аутентичный текст международного стандарта ИСО 4134—78 о Мясо и мясные продукты. Определение содержания 1_-(+)-глугаминовой кислоты» с дополнительными требованиями, отражающими потребности экономики страны (2, 4. 6.6, 6.8, 6.12, 6.13, 7.1 и 9.1)

4    ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

5    ПЕРЕИЗДАНИЕ. Январь 2010 г.

О И ПК Издательство стандартов, 1998 © СТАНДАРТИНФОРМ, 2010

Настоящий стандарт не может быть полностью или частично воспроизведен, тиражирован и рас пространен в качестве официального издания без разрешения Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии

118

II

Страница 3

ГОСТ Р 51198-98 (ИСО 4134-78)

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

МЯСО И МЯСНЫЕ ПРОДУКТЫ

Метод определения Ь-(+)-глутаминовой кислоты

Meat and meat products.

Method Гог determination of L-(+)-glytamic acid content

Дата введения 2000—01—01

1    Область применения

Настоящий стандарт распространяется на мясо и мясные продукты и устанавливает метод определения Ь-(+)-глутаминовой кислоты.

2    Нормативные ссылки

ГОСТ 9793-74 Продукты мясные. Методы определения влаги

ГОСТ Р 51447-99 (ИСО 3100-1—91) Мясо и мясные продукты. Методы отбора проб

3    Определение

Массовая доля 1_-(+)-глугамнновой кислоты — массовая доля М+)-глутамн новой кислоты, определенная в соответствии с настоящим стандартом и выраженная в процентах.

4    Сущность метода

1_-(+)-глутамниовую кислоту экстрагируют из пробы продукта, взятой на испытание, ледяным раствором хлорной кислоты. Смесь центрифугируют, фильтруют и доводят активную кислотность фильтрата до требуемого значения. Проводят ферментативное преобразование 1--(+)-глутамата в а-кетоглутарат в ходе реакции с никотинамидадениндинуклеотидом (НАД) в присутствии глутамат-дегидроге назы (ГДГ):

ГДГ

Ь-(+)-глутамат + НАД* +Н,0 *-> а-кетоглутарат + НАДН + NH3 + Н\

Затем окисляют эквивалентное количество восстапоапенной формы НАДН хлоридом йодони-тротетразолия (ИНТ) в присутствии липоаминдегидрогеназы (ЛАДГ):

ЛАД Г

НАДН + ИНТ-хлорид + Н* <-^НАД* + формазан.

Измеряют массовую долю образовавшегося формазана на спектрофотометре при длине волны 492 нм.

5    Реактивы

Все реактивы должны быть аналитического качества (не ниже х. ч.). Все растворы, кроме растворов неорганических соединений (5.1 и 5.2), должны храниться в закрытой посуде из темного стекла, тщательно вымытой и пропаренной или стерилизованной.

Вода, используемая для приготовления растворов ферментов, должна быть деминерализованной или бндистиллированной, полученной в стеклянном дистилляторе.

Издание официальное

N9

1

Страница 4

ГОСТ I* 51198-98

Вода, используемая для приготовления растворов химических реагентов и подготовки проб, должна быть дистиллированной или деминерализованной.

II римечанис— Однократно дистиллированная вода может содержать ноны металлов, которые снижают активность ферментов, а деминерализованная вода может содержать микроорганизмы, увеличивающие неснецифическую фоновую ферментативную активность и искажающие результаты анализа.

Препарат НАД должен содержать не менее 90 % основного вещества.

1_-(+)-глутамнновая кислота должна содержать не менее 98 % основного вещества.

Допускается использовать имеющиеся в продаже готовые наборы реактивов при условии соответствия качества реактивов требованиям настоящего стандарта.

5.1    Раствор хлорной кислоты с (НСЮ4) — 1,0 моль/дм3

8.6 см' раствора хлорной кислоты массовой доли 70 % и плотности 1.67 г/см3 помещают в мерную колбу вместимостью ИЮ см3 и доводят объем раствора до метки водой.

Примечание — При использовании хлорной кислоты меньшей массовой доли проводят перерасчет объема кислоты, используемой для осаждения белков.

5.2    Раствор гидроксида калия с (КОН) = 2 моль/дм3

Растворяют 56.1 г гидроксида калия (КОН) в воде, доводят объем раствора до 500 см3.

5.3    Буферный раствор активной кислотности 8,6 pH

5.3.1    Растворяют 1.86 г гидрохлорида триэтаноламина в воде, ловодят активную кислотность раствора до 8,6 pH раствором гидроксида калия (5.2), используя для измерений рН-метр. Затем добавляют 0,68 г октилфенолдекаэтиленгликолевого эфира (например. Тритон X = 100) и доводят обьем раствора до 100 см3 водой.

5.3.2    Растворяют 0.86 г двуэамещеиного фосфорнокислого калия (К2НР04) и 0,007 г одноза-мещенного фосфорнокислого калия (КН2Р04) в воде и доводят объем раствора до 100 см3.

5.3.3    Смешивают 20 см3 раствора по 5.3.1 и 5 см3 раствора по 5.3.2.

Раствор хранят при температуре 4 *С.

5.4    Раствор НАД

Навеску НАД массой 0.025 г растворяют в 5.0 см3 воды в небольшой колбе со шлифом, колбу закрывают пробкой.

Раствор устойчив не менее 1 мес при температуре 4 *С.

5.5    Раствор йодонитротетразолия |2-(р-йодофенил)-3-(р-нитрофенил)-5-фенилтетра»олия| хлорида (ИНТ-хлорнда)

Растворяют 0,030 г ИНТ-хлорида в 50 см3 воды, колбу закрывают пробкой.

Раствор устойчив не менее 2 мес при температуре 4 "С в темноте.

5.6    Раствор ЛАДГ

Растворяют 0.003 глиофильно высушенной липоаминдегидрогеназы в I см3 воды.

Раствор устойчив не менее трех недель при температуре 4 "С.

5.7    Раствор ГДГ

Используют раствор глютаматдегидрогеназы концентрации 10 мг/см1, свободный от сульфата аммония, этилендиаминтетрауксусной кислоты и глугамнназы, поставляемый в готовом виде (например, в расфасовке по 1,0 см'), удельной активностью не менее 900 Е/см3.

Раствор устойчив не менее 12 мес при температуре 4 "С.

5.8    Стандартный раствор Ь-(+)-глутамнновой кислоты

Растворяют 0.050 г М+)-глутаминовой кислоты в 25 см3 воды. Активную кислотность раствора устанавливают 7.0 pH раствором гидроксида калия (5.2), после чего доводят объем раствора до 50 см3.

Раствор хранят при температуре 4 ’С и непосредственно перед использованием разводят водой в соотношении объемов 1 : 49.

6 Средства контроля и вспомогательные устройства

Обычная лабораторная аппаратура, а также указанная в 6.1 —6.11.

6.1    Мясорубка механическая лабораторная, снабженная перфорированной пластинкой с отверстиями диаметром не более 4 мм.

6.2    Миксер лабораторный.

6.3    Центрифуга лабораторная с пробирками вместимостью 50 или 1(H) см3.

6.4    Иономер или рН-метр диапазоном измерений от 1 до 14 pH и допускаемой погрешностью ± 0.05 pH.

6.5    Фильтры бумажные гофрированные диаметром 15 см.

■>    120

Страница 5

ГОСТ I» 51198-98

6.6    Колбы мерные вместимостью НЮ м 250 см3 и допускаемой относительной погрешностью

± 0,2 %.

6.7    Дозаторы пипеточные объемами доз 25. 50 и 100 см3 и относительной погрешностью дозирования ± 1 %.

6.8    Пипетки градуированные вместимостью 0.05; 0,2; 0,5 и 2,5 см3 и допускаемой относительной погрешностью ± 1 %.

6.9    Шпатели пластиковые или палочки стеклянные для перемешивания содержимого кюветы при проведении фотометрических измерений.

6.10    Спектрофотометр (фотометр) со следующими техническими характеристиками: спектральный интервал — не более 10 нм: интервал измерений оптической плотности — от 0,000 до 2,000; погрешность установки длины волны — ± 3 нм; среднее квадратическое отклонение случайной составляющей погрешности измерений — не более 0.15 %.

6.11    Кюветы фотометрические толщиной поглощающего слоя 10 мм.

6.12    Термометр жидкостный стеклянный с интервалом измерений от 0 до 100 'С, допускаемой погрешностью измерений ± 2 *С.

6.13    Весы лабораторные общего назначения с наибольшим пределом взвешивания 200 г и допускаемой погрешностью ± 0.001 г.

7    Порядок подготовки к проведению измерений

7.1    Отбор проб - по ГОСТ Р 51447.

7.2    Пробу массой не менее 200 г. полученную из репрезентативной выборки, хранят в условиях, предотвращающих порчу и изменение состава.

8    Порядок проведения измерений

8.1    Подготовка пробы к проведению измерений

Образец пробы гомогенизируют, дважды пропуская через мясорубку (6.1) и тщательно перемешивая.

Образец хранят не более 24 ч в заполненном доверху и герметически закрытом контейнере таким образом, чтобы предотвратить порчу или изменение состава.

8.2    Навеска для проведения анализа

Взвешивают приблизительно 50 г исследуемого образна с точностью до 10 мг и помешают навеску образца в лабораторный миксер (6.2).

8.3    Приготовление экстракта

8.3.1    К навеске образца в лабораторном миксере добавляют 100 см3 охлажденного льдом раствора хлорной кислоты (5.1) и гомогенизируют.

8.3.2    Часть гомогеннзата помешают в центрифужную пробирку и центрифугируют К) мин при угловой скорости 3000 мин-1, затем, осторожно отодвинув слой жира, отфильтровывают супернатант через гофрированный бумажный фильтр (6.5) в коническую колбу вместимостью 200 см*. Первые 10 см3 фильтрата выбрасывают.

8.3.3    50 см5 подготовленного раствора, который может быть слегка мутным, переносят в стаканчик вместимостью 100 см3 и доводят активную кислотность раствора до 10 pH раствором гидроксида калия (5.2).

8.3.4    Количественно переносят содержимое стаканчика в мерную колбу вместимостью 100 см’ и доводят объем раствора до метки водой.

8.3.5    Раствор охлаждают в ледяной бане 20 мин и фильтруют через гофрированный бумажный фильтр (6.5), отбросив первые 10 см3 фильтрата.

8.3.6    25 см3 фильтрата переносят в мерную колбу вместимостью 250 см3 и доводят объем фильтрата до метки водой.

П р и м с ч а н и с — Объем фильтрата выбирают так, чтобы концентрация 1--(+)-глутами новой кислоты была приблизительно 0.030 г/дм5.

8.4 Определение

8.4.1 Температуру растворов по 5.3 и 8.3.6 доводят до 20—25 "С. Для проведения ферментативной реакции берут две фотометрические кюветы (6.11), в каждую из которых пипеточным дозатором (6.5) добавляют:

-    2,50 cmj буферного раствора (5.3);

-    0.20 см3 раствора НАД (5.4);

121    3

Страница 6

ГОСТ I* 51198-98

-    0,20 см3 раствора ИН Г (5.5) и

-    0,05 см’ раствора линоаминдегидрогеназа (5.6).

Затем в одну кювету вносят 0,50 см3 экстракта (8.3.6), получая исследуемый раствор, а во вторую — 0,50 см3 воды, получая контрольный раствор.

Растворы в кюветах перемешивают пластиковыми шпателями или стеклянными палочками (6.9) и измеряют оптические плотности относительно воздуха при длине волны 492 им: А, — оптическая плотность исследуемого раствора, Аи — оптическая плотность контрольного раствора.

Температура растворов должна быть от 20 до 25 *С.

8.4.2    В каждую кювету вносят по 0,05 см3 раствора ГДГ (5.7) и тщательно смешивают с содержимым, используя шпатель или стеклянную палочку (6.9).

Растворы выдерживают 15 мин. Затем измеряют оптические плотности при длине волны 492 нм, повторяя измерения через каждые 2 мин до достижения постоянных значений.

Строят графики зависимости оптических плотностей растворов от времени и экстраполируют их на момент внесения фермента ГДГ (приложение А).

Получают экстраполированные значения оптических плотностей исследуемого (А2) и контрольного (Л**) растворов.

8.4.3    Определяют микромолярный коэффициент оптической плотности формазана, повторяя операции по 8.4.1 и 8.4.2. но заменяя 0,5 см3 экстракта в первой фотометрической кювете на 0,5 см3 стандартного раствора L- (+) - г лугам иновой кислоты (5.8).

Получают следующие значения оптических плотностей:

-    Л \ — стандартного раствора Ь-(+)-гл\таминовой кислоты;

-    А \к — контрольного раствора:

-    А; — стандартного раствора L-(+)-глутаминовой кислоты;

-    Л '2ll — контрольного раствора.

8.5 Выполняют два параллельных определения в двух пробах из одного и того же образна (8.1).

9 Правила обработки результатов измерений

9.1    Метод расчета

Массовую долю L - (+) - г лугам иновой кислоты в пробе X, %. вычисляют по формуле

. IПП -4.    ,

„    ....    3.5x147,1    ..    250    .    100    <,ии+    ,0о    100

'УзД^Х*х0.5х10(Ю*~ХХ-<0-Х — *

= 51,485х    -V1    х    (ЮО —гдт-) ,

kxVxm    ЮО

где Д А — А{) — (А — А);

147,1 — молярная масса 1_-(+)-глутамнновой кислоты;

М — массовая доля влаги в пробе, определенная по ГОСТ 9793; т — масса навески (8.2), г;

К— обьем фильтрата, взятый па определение (8.3.6). см3;

к — микромолярный коэффициент оптической плотности формазана при длине волны 492 нм, см2/мкмоль, рассчитанный по формуле

А = A/1'x|i|x-j^-x 147.1 - 51,485 х Д/Г,

где Д Л ' = </Г2 — /Г|) — (/Г - А').

За результат измерений принимают среднеарифметическое значение результатов двух параллельных определений при условии выполнения 9.2.

Результат определяют с точностью 0,01 %.

9.2    Сходимость

Относительное расхождение результатов двух параллельных определений, выполненных в одной лаборатории, не должно превышать 10 % среднеарифметического значения.

122

4

Страница 7

ГОСТ Р 51198-98

10 Оформление результатов измерений

В отчете об испытании должны быть указаны:

-    используемый метод;

-    полученные результаты;

-    любые условия проведения испытаний, не установленные данным стандартом и касающиеся подробностей, которые могут повлиять на конечный результат.

В отчете должны быть все данные, необходимые для полной идентификации пробы.

ПРИЛОЖЕНИЕ А (справочное)

Пример построения графика зависимости оптической плотности раствора от времени

123

5