Стр. 1
 

8 страниц

244.00 ₽

Купить официальный бумажный документ с голограммой и синими печатями. подробнее

Официально распространяем нормативную документацию с 1999 года. Пробиваем чеки, платим налоги, принимаем к оплате все законные формы платежей без дополнительных процентов. Наши клиенты защищены Законом. ООО "ЦНТИ Нормоконтроль".

Наши цены ниже, чем в других местах, потому что мы работаем напрямую с поставщиками документов.

Способы доставки

  • Срочная курьерская доставка (1-3 дня)
  • Курьерская доставка (7 дней)
  • Самовывоз из московского офиса
  • Почта РФ

Распространяется на фруктовые и овощные соки, нектары и сокосодержащие напитки и устанавливает метод определения D-изолимонной кислоты в виде свободной кислоты или ее соли, включая эфиры и лактоны

Введен впервые. Переиздание

Оглавление

1 Область применения

2 Нормативные ссылки

3 Определения и сокращения

4 Сущность метода

5 Средства измерений, вспомогательные устрйоства, реактивы и материалы

6 Отбор и подготовка проб

7 Подготовка к испытанию

8 Проведение испытания

9 Выражение результатов

10 Контроль достоверности полученных результатов

11 Отчет об испытании

Приложение А Библиография

Показать даты введения Admin

Страница 1

ГОСТ Р 51128-98

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

СОКИ ФРУКТОВЫЕ И ОВОЩНЫЕ

Метод определения D-изолимонной кислоты

Издание официальное

ГОССТАНДАРТ РОССИИ Москва

Страница 2

ГОСТ Р 51128-98

Предисловие

1    РАЗРАБО ТАН Московской государственной академией пищевых производств, Всероссийским научно-исследовательским институтом консервной и овощесушильной промышленности

ВНЕСЕН Техническим комитетом ТК 335 «Методы испытаний агропромышленной продукции на безопасность*

2    ПРИНЯТ И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Постановлением Госстандарта России от 19 января 1998 г. № 6

3    Разделы настоящего стандарта за исключением 2; 5: 6: 8.2; 9 представляют собой аутентичный текст европейского стандарта ЕН 1139—94. «Фруктовые и овощные соки. Ферментативное определение содержания D-изолимонной кислоты. Спектрофотометрическое определение никоти-намидадениндннуклеотндфосфата (НАДФН)*

4    ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

5    ПЕРЕИЗДАНИЕ

Настоящий стандарт не может быть полностью или частично воспроизведен, тиражирован и распространен в качестве официального издания на территории Российской Федерации без разрешения Госстандарта России

II    104

Страница 3

ГОСТ Р 51128-98

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙ С К О Й Ф Е Д Е Р Л Ц И И

СОКИ ФРУКТОВЫЕ И ОВОЩНЫЕ

Метод определения D-нзолнмошюй кислоты

Fruit and vegetable juiccs.

Method for determination of D-isocitric acid

Дата введения 1998—07—01

1    Область применения

Настоящий стандарт распространяется на фруктовые и овощные соки, нектары и сокосодер-жашне напитки и устанавливает метод определения D-изолимонной кислоты в виде свободной кислоты или ее соли, включая эфиры и лактоиы.

2    Нормативные ссылки

В настоящем стандарте использованы ссылки на следующие стандарты:

ГОСТ 1770-74 Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия

ГОСТ 2603-79 Ацетон. Технические условия ГОСТ 3118-77 Кислота соляная. Технические условия ГОСТ 3760-79 Аммиак водный. Технические условия ГОСТ 4108-72 Барий хлорид 2-водный. Технические условия ГОСТ 4166-76 Натрий сернокислый. Технические условия ГОСТ 4328-77 Натрий гидроокись. Технические условия ГОСТ 6259-75 Глинернн. Технические условия ГОСТ 6709-72 Вода дистиллированная. Технические условия

ГОСТ 10652-73 Этиленднамннтетрауксусной кислоты динатриевая соль. Технические условия

ГОСТ 12026-76 Бумага фильтровальная лабораторная. Технические условия

ГОСТ 26313-84 Продукты переработки плодов и овощей. Правила приемки, методы отбора

проб

ГОСТ 26671-85 Продукты переработки плодов и овощей, консервы мясные и мясорастительные. Подготовка проб для лабораторных анализов

ГОСТ 29227-91 (ИСО 835-1—81) Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования

3    Определения и сокращения

3.1    В настоящем стандарте применяют следующие термины с соответствующими определениями:

массовая концентрация D-изолимонной кисюты во фруктовых и овощных соках, нектарах и сокосодержащих напитках: Массовая концентрация D-изолимонной кислоты, определенная в соответствии с методикой, установленной настоящим стандартом, выраженная в мг/дм*.

3.2    В настоящем стандарте применяют оигдующие сокращения:

ИПДГ — нзоцитратдегидрогеназа ЕС 1.1.1.42 |1|;

НАДФ — ннкотипамндаденипдинуклеотидфосфат. окисленная форма;

НАДФН — никотинамидадениндинуклеотндфосфат. восстановленная форма;

Е — стандартная единица, определяет количество (активность) фермента, которое служит катализатором при 25 "С для превращения 1 мкмоля вещества в минуту.

Ишанис официальное

105

1

Страница 4

ГОСТ Р 51128-98

4    Сущность метода

Метод основан на осаждении D-изолимонной кислоты в виде соли бария, перерастворении соли, ферментативном декарбоксилировании иона цитрата под действием НАДФ в присутствии ИЦДГ, фотометрическом измерении количества образовавшегося НЛДФН, эквивалентного количеству D-изолимонной кислоты.

В ходе анализа протекают следующие ферментативные реакции:

ИЦДГ

Е)-нзошгфат-ион+НАДФ+-> а-кетоглутарат+НЛДФН-*-СО;,+Н'. (1)

5    Средства измерений, вспомогательные устройства, реактивы и материалы

Спектрофотометр, позволяющий проводить исследования при длине волны 340 нм, или фотометр фотоэлектрический шириной спектральной полосы не более 10 нм и допустимой абсолютной погрешностью измерений коэффициента пропускания не более I %, или спектрофотометр на ртутной лампе, позволяющий проводить измерения при длинах волн 365 или 334 нм.

Кюветы из оптического стекла или полистироловые рабочей длиной 10 мм.

Иономер или pH-метр с погрешностью измерения не более 0.05 pH.

Электрод для измерения pH стеклянный.

Электрод сравнения (каломельный).

Пипетки по ГОСТ 29227 типа 3, исполнения 1, 1-го класса точности, вместимостью I и 10 см3.

Дозаторы липеточные объемами 1, 0,2 и 0,02 см3 относительной погрешностью дозирования ±1 % 121-

Колба мерная по ГОСТ 1770, исполнения 2, вместимостью 50 см5.

Центрифуга лабораторная, обеспечивающая увеличение ускорения свободного падения при центрифугировании в 3000 раз.

Стаканы для центрифугирования вместимостью 100 см5.

Фильтры бумажные обеззоленные марки ФОМ по ГОСТ 12026.

Баня водяная |3|.

Кислота D-изолимонная по НД |4) раствор массовой концентрации /и(С(Н>;0?)=500 мг/дм5.

Кислота соляная по ГОСТ 3118, х. ч.. раствор молярной концентрации с (НС 1 )=4 моль/дм3.

Аммиак водный по ГОСТ 3760, ч. д. а.

Ацетон по ГОСТ 2603, ч. д. а.

Барий хлористый 2-водный по ГОСТ 4108, х. ч., раствор массовой концентрации /м(ВаС1,)=300 103 мг/дм3.

Натрия гидроокись по ГОСТ 4328. ч. д. а., раствор молярной концентрации c(NaOH)=4 моль/дм3.

Натрий сернокислый по ГОСТ 4166, ч. д. а., раствор массовой концентрации /w(Na,S04)=71103 мг/дм3.

Марганец (II) сернокислый |5), раствор массовой концентрации m(MnS04)=l2,5 10' мг/дм3.

Этилендиаминтетрауксусной кислоты динатриевая соль 2-водная по ГОСТ 10652, ч. д. а.

Трис(гидроксиметил)аминометан |6|, х. ч.

Глицерин по ГОСТ 6259.

НАДФ (динатриевая соль) по |4|.

ИЦДГ |4|.

Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.

Допускается применять другие средства измерений с метрологическими характеристиками, вспомогательные устройства с техническими характеристиками, а также реактивы по качеству не ниже перечисленных.

106

2

Страница 5

ГОСТ Р 51128-98

6    Отбор и подготовка проб

Отбор проб — по ГОСТ 26313, подготовка их к испытанию — по ГОСТ 26671.

6.1    Выделение D-и зол и мон ной кислоты из фруктового и овощного сока, нектаров и сокосодержащих напитков

В стакане для центрифугирования 10 см’ исследуемого образца смешивают с 5 см' раствора пироокиси натрия. Раствор выдерживают в течение 10 мин при температуре от 20 до 25 "С. После добавления 5 см3 соляной кислоты объем раствора доводят водой до 25 см’. Последовательно приливают 2 см3 раствора аммиака, 3 см3 раствора хлористого бария и 20 см' ацетона и хорошо перемешивают стеклянной палочкой. Раствор выдерживают в течение 10 мин, затем в течение 5 мин центрифугируют. Надосадочную жидкость осторожно декантируют, осадок в стакане для центрифугирования растворяют в 20 см3 раствора сернокислого натрия, помешивая стеклянной палочкой. Для ускорения растворения осадка стакан помешают на кипящую водяную баню и выдерживают в течение 10 мин при неоднократном перемешивании. После охлаждения до температуры от 20 до 25 *С раствор количественно переносят в мерную колбу вместимостью 50 см3 и доводят буферным раствором до метки. Из мерной колбы раствор переносят в колбу Эрленмайера, содержащую 1 г активированного угля, выдерживают в течение 5 мин и фильтруют через складчатый бумажный фильтр. Прозрачный, бесцветный фильтрат используют для ферментативного определения D-изо-лимонной кислоты.

6.2    Выделение D-и золимон ной кислоты из концентратов фру кт о в ы х и овошных соков, нектаров и с о к о с о д е р-ж а ш и х напитков

Перед выделением D-изолимонной кислоты концентрат разводят водой до содержания сухих веществ по рецептуре натурального сока, нектара или сокосодержащего напитка. Далее выделение D-изолимонной кислоты проводят по 6.1.

7    Подготовка к испытанию

7.1    Приготовление    буферного    раствора    активной    кис

лотностью 7,0 pH

2.42    г трис(гидроксиметил) аминометана и 35 мг дннатриевой соли этилендиаминтетрауксус-ной кислоты (дигидрата) растворяют в 80 см' воды, значение pH раствора доводят с помощью соляной кислоты до 7.0 и объем доводят до 100 см3. Буферный раствор устойчив при температуре 4 "С в течение 1 г.

7.2    Приготовление    буферного    раствора    активной    кис

лотностью 7,4 pH

2.42    г трнс(гидроксиметил) аминометана и 35 мг дннатриевой соли этнлендиаминтетрауксус-ной кислоты (дигидрата) растворяют в 80 см5 воды, значение pH раствора доводят с помощью соляной кислоты до 7,4, затем объем раствора доводят дистиллированной водой до 100 см5. Буферный раствор устойчив при температуре 4 *С в течение 1 г.

7.3    Приготовление    раствора    НЛДФ

50 мг дннатриевой соли НЛДФ растворяют в 5 см3 воды. Раствор устойчив при температуре 4 "С в течение четырех недель.

7.4    Приготовление    раствора    ИЦДГ

10.0 мг лиофилнзата ИЦДГ из свиного сердца растворяют в 1 см3 (20 Е/см3) глицерина. Раствор устойчив при температуре 4 “С в течение 6 мес.

8    Проведение испытания

Анализ проводят при температуре от 20 до 25 'С.

При проведении испытания количество реактивов задают в см3, а результаты пересчитывают на 1 дм3 пробы.

Для дозирования исследуемой пробы и растворов используют пипетки с делениями или пипеточные дозаторы.

Растворы ферментов, коферментов и буфера вносят соответствующими пипеточными дозаторами.

Фермешативное определение D-изолимонной кислоты может быть проведено также с использованием имеющихся в продаже специальных наборов реактивов.

107    3

Страница 6

ГОСТ Р 51128-98

8.1    Приготовление опытной пробы

В кювету- спектрофотометра вносят 2,0 см3 буферного раствора активной кислотностью 7,4 pH. 0.1 см3 раствора сульфата марганца, 0,1 см3 раствора НЛДФ и 1,00 см3 исследуемого раствора пробы, подготовленного по разделу 6. Смесь перемешивают, выдерживают в течение 3 мин и измеряют оптическую плотность раствора — (Лавров* относительно воздуха.

8.2    Р е а к ц и я с ферментом и количественный анализ

К подготовленному в кювете по 8.1 раствору добавляют 0,01 см5 раствора ИЦДГ. Раствор перемешивают. Через 10 мин (окончание реакции) измеряют оптическую плотность М,)|1ро04 раствора относительно воздуха.

Через 5 мин проводят контрольное измерение. Если оптическая плотность меняется, измерения проводят каждые следующие 5 мин до тех пор. пока не будет достигнута постоянная величина ее приращения. В этом случае оптическую плотность раствора <Л,)11рова определяют экстраполяцией на момент внесения раствора ИЦДГ.

8.3    К о н т р о л ь и о е испытание

Контрольное испытание проводят параллельно с основным. В кювету спектрофотометра вносят 3,0 см’ буферного раствора активной кислотностью 7.4 pH и 0,1 см} раствора НЛДФ. Смесь перемешивают, выдерживают в течение 3 мин и измеряют оптическую плотность (Л,)к01111К1.и относительно воздуха.

К подготовленному в кювете раствору добавляют 0,01 см3 раствора ИЦДГ, перемешивают н через 10 мин измеряют оптическую плотность раствора (^2)КОИ1рал1>, как в 8.2.

9 Выражение результатов

Основой данного метода является линейная зависимость между образующимся количеством НАДФН и количеством D-изолимонноЙ кислоты.

Разность измеренных оптических плотностей АЛ вычисляют по формуле

Д А — (А, АХрыь ~~ (^2    4)*»*№•

Массовую концентрацию D- изолимон ной кислоты в пробе X. мг/дм3, вычисляют по формуле

_ М Р, /-* 1000

Х г I К 1000 АЛ'    <3>

где Л/—молярная масса D-изолимонной кислоты.М = 192,1 г/моль;

Р, — суммарный объем раствора в кювете,см3:

F— фактор разведения пробы в процессе выделения D-изолимонной кислоты,рассчитываемый как отношение объема разведенной пробы к объему, взятому для разведения; е — молярный показатель поглощения НЛДФН. при 340 нм    — е =6,3 дм3 ммоль-1    •    см-1,

при 365 нм    — е =3,5 дм3 ммоль -1    см~1 (ртутная лампа),

при 334 нм    — е =6.18 дм’-ммоль-1    см~‘    (ртутная лампа);

/ — рабочая длина кюветы,см;

Р. — использованный для приготовления измеряемого раствора объем пробы,см3.

Для указанных в прописи объемов растворов массовую концентрацию D-изолимонной кислоты в пробе X, мг/дм3, вычисляют по формуле

Х= 3083^4-^    (4)

При использовании имеющихся в продаже наборов реактивов численный коэффициент (3083) в формуле (4) может быть иным из-за изменения суммарного объема раствора в кювете (Р,).

108

4

Страница 7

ГОСТ Р 51128-98

При анализе концентратов соков, продуктов с высокой вязкостью и/или очень большим содержанием мякоти результаты испытаний могут быть выражены как массовая доля D-изолнмон-ной кислоты в пробе Х„ млн-1, по формуле

где К—объем разведенного концентрата сока, продукта с высокой вязкостью и/или очень большим содержанием мякоти,см3; т — масса концентрата сока,продукта с высокой вязкостью и/или очень большим содержанием мякоти,взятыхдля разведения,г.

За окончательный результат испытания принимают среднеарифметическое значение результатов двух параллельных определений, округленное до целого значения.

Абсолютное расхождение между результатами двух параллельных определений, выполненных в одной лаборатории, не должно превышать более чем в 5 % случаев значения показателя сходимости d= 2,5 мг/дм3.

Абсолютное расхождение между результатами двух измерений, выполненных в двух лабораториях. не должно превышать более чем в 5 % случаев значение показателя воспроизводимости D= 4,4 мг/дм3.

10    Контроль достоверности полученных результатов

Достоверность получаемых результатов рекомендуется контролировать с помощью стандартного раствора D-изолимонной кислоты массовой концентрации не более 500 мг/дм3, который испытывают по 8.1—8.2 без предварительного разведения.

Если массовая концентрация D-изолимонной кислоты, определенная в результате испытания составляет менее 95 % концентрации стандартного раствора, то испытание повторяют со свежеприготовленными растворами реактивов.

11    Отчет об испытании

В отчете об испытании должны быть указаны:

-    обозначение настоящего стандарта:

-    дата и способ отбора проб (если это возможно);

-    дата доставки образца:

-    дата проведения анализа:

-    результаты исследования;

-    обнаруженные в ходе исследования особенности;

-    все рабочие условия, не установленные данным стандартом или касающиеся как необязательных, так и любых других подробностей, которые могут повлиять на конечный результат.

В отчете должны быть указаны все детали, необходимые для полной идентификации пробы.

109

5

Страница 8

ГОСТ Р 51128-98

ПРИЛОЖЕНИЕ А (справочное)

Библиография

III

Номенклатура ферментов. Рекомендации Международною биохимического союза по

номенклатуре и классификации ферментов, а также единицам ферментов и символам

кинетики (|)срмснтативных реакций. М. 1979

121

ТУ 64-13329—81 Дозаторы и и неточные

13)

ТУ 46-22-603—75 Баня водяная лабораторная с электрическим или с огневым подо

гревом

|4|

Boehringer Mannheim. Mcthodcn tier enzimatischen BioAnalytik und LebensmiUeleanalytik

mil Test-Combinationen

151

ТУ 6-09-01-218—84 Марганец (II) сернокислый

161

ТУ 6-09-4292—76 Трис(гидрокснмстил)аминомстан

ОКС 67.080    Н59

ОКСТУ 9109

Ключевые слова: продукт питания, напиток, нектар, фруктовые и овощные соки, ферментативный анализ, определение концентрации. D-кзолимонная кислота, спектрофотометрня

6

110