Государственное санитарно-эпидемиологическое нормирование _Российской    Федерации_

4.2. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. БИОЛОГИЧЕСКИЕ И МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Измерение концентраций штаммов микроорганизмов в воздухе рабочей зоны

Сборник методических указаний МУК 4.2.3248—14 МУК 4.2.3250—14 МУК 4.2.3252—14 МУК 4.2.3254—14 МУК 4.2.3256—14

Выпуск 2

Издание официальное

Москва • 2015

Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека

4.2. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. БИОЛОГИЧЕСКИЕ И МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Измерение концентраций штаммов микроорганизмов в воздухе рабочей зоны

Сборник методических указаний МУК 4.2.3248—14 МУК 4.2.3250—14 МУК 4.2.3252—14 МУК 4.2.3254—14 МУК 4.2.3256—14

Выпуск 2

ББК 51.24 И37

И37 Измерение концентраций штаммов микроорганизмов в воздухе рабочей зоны: Сборник методических указаний. Вып. 2.—М: Федеральный центр гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора, 2015.—41 с.

ISBN 978—5—7508—1396—4

1.    Разработаны и подготовлены ГБОУ ВПО «Российский национальный исследовательский медицинский университет им. Н. И. Пирогова» Минздрава России (д.б.н. Н. И. Шеина).

2.    Рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемиологическому нормированию Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 6 ноября 2014 г. № 2).

3.    Утверждены руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека. Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации А. Ю. Поповой 30 декабря 2014 г.

4.    Введены впервые.

ББК 51.24

© Роспотребнадзор, 2015 © Федеральный центр гигиены и

эпидемиологии Роспотребнадзора, 2015

МУК 4.2.3248—14,4.2.3250—14,4.2.3252—14 4.2.3254—14,4.2.3256—14

Содержание

Введение......................................................................................................................4

Микробиологическое измерение концентрации клеток микроорганизма Rhodococcus jialingiae Ikp ВКПМ Ac-1957 в воздухе рабочей зоны:

МУК 4.2.3248—14..................................................................................................5

Микробиологическое измерение концентрации Azotobacter chroococcum ВН-1811 ВКПМ В-9029 в воздухе рабочей зоны: МУК 4.2.3250—14.............13

Микробиологическое измерение концентрации Bacillus mucilaginosus Вас-10 ВКПМ В-8966 в воздухе рабочей зоны:

МУК 4.2.3252—14..............................................................................................211

Микробиологическое измерение концентрации Lysinibacillus xylanilyticus

5rb ВКПМ В-11685 в воздухе рабочей зоны: МУК 4.2.3254—14.................288

Микробиологическое измерение концентрации клеток микроорганизма Yarrowia lipolytica 2kp ВКПМ Y-4043 в воздухе рабочей зоны:

МУК 4.2.3256—14................................................................................................36

3

МУК 4.2.3248—14,4.2.3250—14,4.2.3252—14 4.2.3254—14,4.2.3256—14

Введение

Сборник методических указаний «Измерение К01гцентраций штаммов микроорганизмов в воздухе рабочей зоны» (выпуск 2) разработан с целью обеспечения контроля соответствия фактических концентраций микроорганизмов их предельно допустимым концентрациям (ПДК), что является обязательным при осуществлении санитарно-эпидемиологического контроля.

Включенные в данный список методические указания по контролю биотехнологических штаммов в воздухе рабочей зоны разработаны в соответствии с требованиями ГОСТ 12.1.005-88 «ССТБ. Воздух рабочей зоны. Общие санитарно-гигиенические требования» и ГОСТ 8.563— 96 ГСИ. «Методики выполнения измерений».

Методики выполнены с использованием современных и адекватных микробиологических методов исследования и позволяют контролировать концентрации биотехнологических штаммов на уровне и ниже их 11ДК в воздухе рабочей зоны, установленных в гигиенических нормативах.

Методические указания по измерению концентраций штаммов микроорганизмов в воздухе рабочей зоны предназначены для лабораторий центров гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора, санитарномикробиологических лабораторий промышленных предприятий, а также для научно-исследовательских институтов и других заинтересованных министерств и ведомств, аккредитованных в установленном порядке на право проведения микробиологических исследований, для осуществления контроля за содержанием штаммов в воздухе рабочей зоны.

4

МУК 4.2.3250—14

УТВЕРЖДАЮ Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главный государственный санитарный врач Российской Федерации

А. Ю. Попова

30 декабря 2014 г.

4.2. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. БИОЛОГИЧЕСКИЕ И МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Микробиологическое измерение концентрации Azotobacter chroococcum ВН-1811 ВКПМ В-9029 в воздухе рабочей зоны

Методические указания МУК 4.2.3250—14

1. Назначение и область применения

1.1.    Настоящие методические указания устанавливают порядок применения метода микробиологического количественного анализа концентрации Azotobacter chroococcum ВН-1811 ВКПМ В-9029 в воздухе рабочей зоны в диапазоне концентраций от 50 до 500 000 клеток в 1 м⁵ воздуха.

1.2.    Методические указания носят рекомендательный характер.

2. Биологическая характеристика штамма Azotobacter chroococcum ВН-1811 ВКПМ В-9029 и его гигиенический норматив в воздухе рабочей зоны

Штамм Azotobacter chroococcum ВН-1811 ВКПМ В-9029 выделен из почв Подмосковья, не является генетически модифицированным штаммом. Штамм продуцирует гетероауксин, антибиотики. Предполагается использовать в растениеводстве.

На среде Федорова штамм образует крупные, круглые, выпуклые, непрозрачные, гладкие колонии с ровными краями. Через 18—20 ч при

13

128—30 °С можно видеть мелкие полиморфные клетки. Через 48 ч роста наблюдаются мелкие палочки, которые могут располагаться парами.

Желатин разжижает, крахмал быстро гидролизует. Восстанавливает лакмусовое молоко. Нитраты восстанавливает до нитритов, каталазоположительный, образует сероводород, вызывает гемолиз.

Штамм Azotobacter chroococcum ВН-1811 депонирован во Всероссийской коллекции промышленных микроорганизмов под номером ВКПМ В-9029.

Предельно допустимая концентрация (ПДК) в воздухе рабочей зоны - 50 ООО кл/м³.

3.    Пределы измерений

Методика обеспечивает выполнение измерений количества клеток в воздухе рабочей зоны в диапазоне концентраций от 50 до 500 000 клеток в 1 м³ воздуха при доверительной вероятности 0,95.

4.    Методы измерений

Прямой метод основан на аспирации из воздуха производственных помещений бактерий на среду Федорова и подсчета количества выросших колоний по типичным культурально-морфологическим признакам.

5. Средства измерений, вспомогательные устройства,

реактивы и материалы

При выполнении измерений применяют следующие средства измерений, вспомогательные устройства и материалы, реактивы и питательные среды.

5.1. Средства измерении Барометр-анероид с диапазоном измерения атмосферного давления 5—790 мм рт. ст. и пределом допустимой погрешности

± 2,5 мм рт. ст.    ТУ 2504-1799—75

Весы лабораторные, аналитические, наибольший предел взвешивания 110 г, предел допустимой погрешности ± 0,2 мг    ГОСТ Р 53228-08

Колбы мерные 2-100-2,2-250-2,2-1000-2    ГОСТ 1770-74

Пипетки градуированные 2-го класса точности вместимостью 1,0; 2,0; 5,0; 10 см³

14

МУК 4.2.3250—14

Цилиндры мерные 2-го класса точности

вместимостью 25 и 50 см³    ГОСТ 1770-74

Термометр лабораторный шкальный, пределы

измерения 0—55 °С    ТУ    25-2021.003—88

Аспирационный аппарат и устройство для

отбора проб воздуха

Примечание. Допускается использование средств измерения с аналогичными или лучшими характеристиками.

5.2. Вспомогательные устройства и материалы

Шкаф сушильный стерилизационный, позволяющий поддерживать температуру (160 ± 5) °С

Термостаты, позволяющие поддерживать рабочую температуру (28 ± 2) и (37 ± 2) °С Автоклав электрический Стерилизаторы паровые медицинские

Дистиллятор

Облучатель бактерицидный настенный Холодильник бытовой Микроскоп биологический с иммерсионной системой

Лупа с увеличением х 10 Пробирки типов П1, П2 Спиртовки лабораторные стеклянные Чашки биологические (Петри)

Воронки конусные диаметром 40—45 мм

Груша резиновая

Петля бактериологическая

Марля медицинская

Вата медицинская гигроскопическая

Бумага фильтровальная лабораторная

Примечание. Допускается применение оборудования и материалов с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.

15

5.3. Реактивы и питательные среды

ГОСТ 17206-96 ГОСТ 3765-78 ГОСТ 6709-90 ГОСТ 6981-94 ГОСТ 4198-75 ГОСТ 4530-76 ГОСТ 18704-78 ГОСТ 4523-77 ГОСТ 435-77 Р 52304—05 ГОСТ 4233-77 ГОСТ Р 51652-2000 или ГОСТ 18300-87

Спирт этиловый технический    ГОСТ 17299-78

Примечание. Допускается использование других питательных сред и диагностических препаратов с аналогичными характеристиками.

6. Требования безопасности

При выполнении измерений концентрации клеток в воздухе рабочей зоны соблюдают следующие требования.

6.1.    СП 1.3.2322—08 «Безопасность работы с микроорганизмами III—IV групп патогенности (опасности) и возбудителями паразитарных болезней».

6.2.    СП 1.3.2518—09. Дополнения и изменения 1 к СП 1.3.2322—08.

6.3.    Правила техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.005-88.

6.4.    Электробезопасность при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019-79 и инструкции по эксплуатации прибора.

6.5.    Все виды работ с реактивами проводят только в вытяжном шкафу при работающей вентиляции, работа с биологическим материалом осуществляется в боксе, оборудовашюм бактерицидными лампами.

7. Требования к квалификации операторов

К выполнению измерений и обработке их результатов допускают лиц с высшим или средним специальным образованием, прошедших

МУК 4.2.3250—14

соответствующую подготовку и имеющих навыки работы в области микробиологических исследований.

8. Условия измерений

Приготовление сред, подготовку к анализу проводят в следующих условиях:

-    температура воздуха (20 ± 5) °С;

-    атмосферное давление (760 ± 20) мм рт. ст.;

-    влажность воздуха    нс    более    80    %.

9. Приготовление питательных сред

Для приготовления агаризованной среды Федорова смешивают указанные компоненты: калий однозамещенный фосфорно-кислый -0,5 г; магний серно-кислый - 0,3 г; натрия хлорид - 0,3 г; железо сернокислое - 0,005 г; марганец серно-кислый - 0,005 г; аммоний молибденово-кислый - 0,005 г; борная кислота - 0,005 г; кальций углекислый -3,5 г; меласса - 30,0 г; агар-агар - 17,0 г. Сухие компоненты растворяют в 1 000 см³ дистиллированной воды, тщательно перемешивают.

Смесь нагревают до растворения агара, стерилизуют автоклавированием при 121 °С в течение 15 мин и охлаждают до 60 °. Приготовленную среду разливают в стерильные колбы по 250—500 см³ и автоклавируют при 121 °С в течение 15 мин.

Готовую среду хранят в защищенных от света условиях при температуре не выше 8 °С в течение 14 дней, не более.

10. Проведение измерения

10.1. Отбор проб воздуха

Отбор проб воздуха проводят с учетом требований ГОСТ 12.1.005-88 с изменением 1 «ССБТ. Общие сани гарно-гигиенические требования к воздуху рабочей зоны» и ГОСТ 8.563-96. ГСИ. «Методики выполнения измерений».

Для этого воздух аспирируют при помощи пробоотборника на поверхность плотной питательной среды в соответствии с технической документацией (инструкцией) на прибор. Время аспирации и объем отбираемого воздуха зависит от предполагаемой концентрации микроорганизма.