Государственное санитарно-эпидемиологическое нормирование _Российской    Федерации_

4.2. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. БИОЛОГИЧЕСКИЕ И МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Измерение концентраций штаммов микроорганизмов в воздухе рабочей зоны

Сборник методических указаний МУК 4.2.3248—14 МУК 4.2.3250—14 МУК 4.2.3252—14 МУК 4.2.3254—14 МУК 4.2.3256—14

Выпуск 2

Издание официальное

Москва • 2015

Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека

4.2. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. БИОЛОГИЧЕСКИЕ И МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Измерение концентраций штаммов микроорганизмов в воздухе рабочей зоны

Сборник методических указаний МУК 4.2.3248—14 МУК 4.2.3250—14 МУК 4.2.3252—14 МУК 4.2.3254—14 МУК 4.2.3256—14

Выпуск 2

ББК 51.24 И37

И37 Измерение концентраций штаммов микроорганизмов в воздухе рабочей зоны: Сборник методических указаний. Вып. 2.—М: Федеральный центр гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора, 2015.—41 с.

ISBN 978—5—7508—1396—4

1.    Разработаны и подготовлены ГБОУ ВПО «Российский национальный исследовательский медицинский университет им. Н. И. Пирогова» Минздрава России (д.б.н. Н. И. Шеина).

2.    Рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемиологическому нормированию Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 6 ноября 2014 г. № 2).

3.    Утверждены руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека. Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации А. Ю. Поповой 30 декабря 2014 г.

4.    Введены впервые.

ББК 51.24

© Роспотребнадзор, 2015 © Федеральный центр гигиены и

эпидемиологии Роспотребнадзора, 2015

МУК 4.2.3248—14,4.2.3250—14,4.2.3252—14 4.2.3254—14,4.2.3256—14

Содержание

Введение......................................................................................................................4

Микробиологическое измерение концентрации клеток микроорганизма Rhodococcus jialingiae Ikp ВКПМ Ac-1957 в воздухе рабочей зоны:

МУК 4.2.3248—14..................................................................................................5

Микробиологическое измерение концентрации Azotobacter chroococcum ВН-1811 ВКПМ В-9029 в воздухе рабочей зоны: МУК 4.2.3250—14.............13

Микробиологическое измерение концентрации Bacillus mucilaginosus Вас-10 ВКПМ В-8966 в воздухе рабочей зоны:

МУК 4.2.3252—14..............................................................................................211

Микробиологическое измерение концентрации Lysinibacillus xylanilyticus

5rb ВКПМ В-11685 в воздухе рабочей зоны: МУК 4.2.3254—14.................288

Микробиологическое измерение концентрации клеток микроорганизма Yarrowia lipolytica 2kp ВКПМ Y-4043 в воздухе рабочей зоны:

МУК 4.2.3256—14................................................................................................36

3

МУК 4.2.3248—14,4.2.3250—14,4.2.3252—14 4.2.3254—14,4.2.3256—14

Введение

Сборник методических указаний «Измерение К01гцентраций штаммов микроорганизмов в воздухе рабочей зоны» (выпуск 2) разработан с целью обеспечения контроля соответствия фактических концентраций микроорганизмов их предельно допустимым концентрациям (ПДК), что является обязательным при осуществлении санитарно-эпидемиологического контроля.

Включенные в данный список методические указания по контролю биотехнологических штаммов в воздухе рабочей зоны разработаны в соответствии с требованиями ГОСТ 12.1.005-88 «ССТБ. Воздух рабочей зоны. Общие санитарно-гигиенические требования» и ГОСТ 8.563— 96 ГСИ. «Методики выполнения измерений».

Методики выполнены с использованием современных и адекватных микробиологических методов исследования и позволяют контролировать концентрации биотехнологических штаммов на уровне и ниже их 11ДК в воздухе рабочей зоны, установленных в гигиенических нормативах.

Методические указания по измерению концентраций штаммов микроорганизмов в воздухе рабочей зоны предназначены для лабораторий центров гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора, санитарномикробиологических лабораторий промышленных предприятий, а также для научно-исследовательских институтов и других заинтересованных министерств и ведомств, аккредитованных в установленном порядке на право проведения микробиологических исследований, для осуществления контроля за содержанием штаммов в воздухе рабочей зоны. ¹

МУК 4.2.3248—14

УТВЕРЖДАЮ Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главный государственный санитарный врач Российской Федерации

А. Ю. Попова

30 декабря 2014 г.

4.2. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. БИОЛОГИЧЕСКИЕ И МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Микробиологическое измерение концентрации клеток микроорганизма Rhodococcus jialingiae lkp ВКПМ Ас-1957 в воздухе рабочей зоны

Методические указания МУК 4.2.3248—14

МУК 4.2.3248—14

назван. Является компонентом биопрепарата по биоремедиации почв, грунтов, водоемов и стоков от нефти и нефтепродуктов.

По анализу секвенсов вариабельных участков генов, кодирующих 16S рРНК, выделенный штамм является Rhodococcus jialingiae (99%). Аэроб. Способен к росту на средах, содержащих источники углерода. Хорошо утилизирует фруктозу, сорбит, маннит, инозит, слабее глюкозу, сахарозу, мальтозу, сукцинат, цитрат и бензоат, активно разлагает тирозин.

По систематическому положению относится к группе нокардио-формных актиномицетов к подгруппе бактерий, содержащих миколовые кислоты.

Макроскопически колонии микроорганизма круглые, непрозрачные, слизистые, блестящие, плоские, вершина приподнята, края ровные, окраска розовато-кремовая.

При микроскопическом исследовании культура представлена кокковидными клетками, встречаются палочки, неравномерными по толщине грамположительными клетками, споры отсутствуют. В молодой культуре палочки проявляют склонность к ветвлению (образование примитивного мицелия), диаметр клеток 0,6—0,8 мкм, длина в среднем составляет 4—8 мкм, в случае примитивного мицелия до 10—12 мкм. Цикл развития хорошо выражен, на ранних стадиях (20—24 ч) наблюдается элементарное ветвление, в дальнейшем (3—4 сут.) происходит распад длинных клеток на палочковидные и кокковидные элементы.

Мезофил. Рост очень хороший - через 24 ч при 25—28 °С образует колонии на глюкозо-пептонном агаре. Выдерживает концентрации хлорида натрия до 1 % и немного более.

Штамм растет на жидких и агаризованных средах (ГПА, МПА, АГВ, картофельный агар). Можно культивировать на LB-arape и в LB-бульоне или глюкозо-минеральной среде.

Штамм R. jialingiae lkp депонирован во Всероссийской коллекции промышленных микроорганизмов под номером ВКПМ Ас-1957.

Предельно допустимая концентрация (ПДК) в воздухе рабочей зоны - 50 000 кл./м³.

3. Пределы измерений

Методика обеспечивает выполнение измерений количества клеток в воздухе рабочей зоны в диапазоне концентраций от 50 до 50 000 клеток в 1 м³ воздуха при доверительной вероятности 0,95.

МУК 4.2.3248—14

4. Методы измерений

Метод основан на аспирации из воздуха производственных помещений бактерий на глюкозо-пептонный агар и подсчета количества выросших колоний по типичным культурально-морфологическим и физиологическим признакам.

5. Средства измерений, вспомогательные устройства, реактивы и материалы

При выполнении измерений применяют следующие средства измерений, вспомогательные устройства и материалы.

5.7. Средства измерений Барометр-анероид с диапазоном измерения атмосферного давления 5—790 мм рт. ст. и пределом допустимой погрешности (1 ± 2,5) мм рт. ст.

Весы лабораторные, аналитические, наибольший предел взвешивания 110 г, предел допустимой погрешности ± 0,2 мг Колбы мерные 2-100-2,2-250-2,2-1000-2 Пинетки градуированные 2-го класса точности вместимостью 1,0; 2,0; 5,0; 10 см³ Цилиндры мерные 2-го класса точности вместимостью 25 и 50 см³ Термометр лабораторный шкальный, пределы измерения 0—55 °С

Аспирационный аппарат и устройство для отбора проб воздуха

Примечание. Допускается использование средств измерения с аналогичными или лучшими характеристиками.

5.2. Вспомогательные устройства и материалы Шкаф сушильный стерилизационный, позволяющий поддерживать температуру

(160 ± 5)°С    ТУ 9452-010-00141798—02 ²

МУК 4.2.3248—14

Термостаты, позволяющие поддерживать рабочую температуру (28 ± 2) и (37 ± 2) °С Автоклав электрический Стерилизаторы паровые медицинские

Дистиллятор

Облучатель бактерицидный настенный Холодильник бытовой Микроскоп биологический с иммерсионной системой

Лупа с увеличением х 10

Пробирки типов П1, П2

Спиртовки лабораторные стеклянные

Чашки биологические (Петри) или

одноразовые из полимерных материалов

Петля бактериологическая

Марля медицинская

Вата медицинская гигроскопическая

Бумага фильтровальная лабораторная

Примечание. Допускается применение оборудования с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.

5.3. Реактивы и питательные среды Агар микробиологический    ГОСТ 17206-96

Вода дистиллированная    ГОСТ 6709-90

Глюкоза    ГОСТ 6038-79

Пептон сухой ферментативный    ГОСТ 13805-76

Спирт этиловый технический    ГОСТ 17299-78

Спирт этиловый ректификованный    ГОСТ Р 51652-2000 или

ГОСТ 18300-87

Натрий хлористый, хч    ГОСТ 4233-77

Глюкозо-пептонная среда стандартная (ГПА)

Примечание. Допускается использование других питательных сред и диагностических препаратов с аналогичными характеристиками.

МУК 4.2.3248—14

6. Требования безопасности

При выполнении измерений концентрации клеток в воздухе рабочей зоны соблюдают следующие требования.

6.1.    СП 1.3.2322—08 «Безопасность работы с микроорганизмами III—IV групп патогенности (опасности) и возбудителями паразитарных болезней».

6.2.    СП 1.3.2518—09. Дополнения и изменения 1 к СП 1.3.2322—08.

6.3.    Правила техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.005-88.

6.4.    Электробезопасность при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019-79 и инструкции по эксплуатации прибора.

6.5.    Все виды работ с реактивами проводят только в вытяжном шкафу при работающей вентиляции, работа с биологическим материалом осуществляется в боксе, оборудованном бактерицидными лампами.

7. Требования к квалификации операторов

К выполнению измерений и обработке их результатов допускают лиц с высшим или средним специальным образованием, прошедших соответствующую подготовку и имеющих навыки работы в области микробиологических исследований.

8. Условия измерений

Приготовление сред, подготовку к анализу проводят в следующих условиях:

-    температура воздуха (20 ± 5)°С;

-    атмосферное давление (760 ± 20) мм рт. ст.;

-    влажность воздуха    не    более    80    %.

9. Приготовление питательных сред 9.1. Глюкозо-пептонный агар (ГПА)

Для приготовления используют сухую готовую глюкозо-пептонную среду (ГПА): 50,0 г порошка размешивают в 1 000 см³ дистиллированной воды. Можно использовать отдельные компоненты среды следующего состава: пептон - 20,0 г, глюкоза - 10,0 г, хлорид натрия - 5,0 г, агар-агар - 15,0 г. Сухие компоненты растворяют в 1 000 см* дистиллированной воды и тщательно перемешивают.

1

2