Федеральная служба по напору в сфере защиты нрав ногрсбшелсн и благополучия человека

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Определение остаточных количеств пирнпроксифена в цитрусовых (плоды, сок) методом капиллярной газожидкостной хроматографии

Методические указания МУК 4.1.3li0—13

ББК51.23

060

060 Определение остаточных количеств пирипроксифсна в цитрусовых (плоды, сок) методом капиллярной газожидкост-ной хроматографии: Методические указания.—М.: Федеральный центр гигиены и эпидемиологии Роспотрсбнадюра. 2014.—18 с.

1.    Разработаны ФБУН «Федеральный научный центр гигиены им. Ф. Ф. Эрисмана Роспотребнадзора (В. II. Ракитский. Т. В. Юдина.

М. В. Ларькина. О. Е. Егорченкова. С. К. Рогачева).

2.    Рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемиологическому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 29 октября 2013 г. № 3).

3.    Утверждены врио руководителя Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека. Главного государственного санитарного врача Российской Федерации Л. Ю. Поповой 30 октября 2013 г.

4.    Введены впервые.

ББК 51.23

€> Роспотребнадзор, 2014 © Федеральный центр i ш ненм и

эпидемиологии Роспотребнадзора, 2014

МУК 4.1.3120—13

Смесь гексан-ацетон (объемное соотношение 2 : 8). В мерную колбу вместимостью 100 см³ помещают 20 см³ гексана и 80 см ацетона, перемешивают.

7.6.    Подготовка колонки с силикагелем для очистки жстрактов

Нижнюю часть стеклянной колонки длиной 25 см. внутренним

диаметром 10—12 мм уплотняют тампоном из стекловаты, выливают в колонку (при открытом кране) суспензию 5 г силикагеля в 20 см³ гексана. Дают растворителю стечь до верхнего края сорбента, на который помещают слой безводного сульфата натрия высотой 1 см. Колонку промывают смесью гсксан-этилацетат в объемном соотношении 8 : 2. порцией по 20 см³, скорость прохождения растворителя 1—2 капли в секунду. Колонка готова к работе.

7.7.    Проверка хроматографического поведения пирипроксифена

на колонке с силикагелем

В кругло донную колбу вместимостью 100 см³ помещают 0.5 см³ раствора № 1 пирипроксифена с концентрацией 10 мкг/см³. упаривают досуха на ротационном испарителе при температу ре водяной бани не выше 35 °С. Сухой остаток растворяют в 5 см³ смеси гсксан-этилацетат (8 : 2. по объему), помещая на ультразвуковую баню на 30 с. и наносят на колонку, подготовленную по п. 7.6. Колбу обмывают дважды смесью гсксан-этилацетат (8 : 2. по объем) ) порциями по 5 см³, которые также наносят на колонку. Скорость прохождения растворителя через колонку - 1—2 капли в секунд)-. Промывают колонку 15 см³ смеси гсксан-этилацетат в объемном соотношении 8 : 2. элюат отбрасывают.

Затем колонку промывают 40 см³ смеси гсксан-этилацетат (8 : 2. по объему) со скоростью 1—2 капли в секунд)’. Фракционно (по 10 см³) отбирают элюат. упаривают, остатки растворяют в 1 см³ смеси гексан-ацетон (2 : 8, по объему), анализируют содержание пирипроксифена по п. 9.4.

Фракции, содержащие пирнпроксифсн. объединяют и вновь анализируют.

Устанавливают уровень вещества в элюате. определяют полноту смывания с колонки и необходимый для очистки объем элюента.

Примечание. Проверку хроматографического поведения пирипроксифена следует проводить обязательно, поскольку профан» вымывания может изменяться при использовании новой партии сорбентов и растворителей.

11

8. Отбор и хранение проб

Отбор проб производится в соответствии с правилами, определенными: ГОСТ 4427-82 «Апельсины. Технические условия»; ГОСТ 4428-82 «Мандарины. Технические условия». ГОСТ 4492-82 «Лимоны. Технические условия». ГОСТ 26313-84 «Продукты переработки плодов и овощей. Правила приемки, методы отбора проб»; «Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов» (№ 2051—79 от 21.08.79).

Отобранные пробы цитрусовых (плоды, сок) хранят в стеклянной или полиэтиленовой таре в холодильнике в темноте нс более 5 дней. Для длительного хранения образцы замораживают и хранят при температуре-18 °С.

Пробы сока анализируют в день изготовления.

Перед анализом образцы плодов измельчают.

9. Выполнение определения

9.1. Экстракция

9.1.1. Плоды цитрусовых

Образец измельченных плодов цитрусовых массой 20 г помещают в коническу ю колбу вместимостью 250 см³. добавляют 100 см³ ацетона и помещают на аппарат для встряхивания на 30 мин. Пробе дают отстояться. затем надосадочную жидкость фильтруют на воронке Бюхнера с помощью разряжения, создаваемого водоструйным насосом, через бумажный фильтр средней плотности. Растительный остаток повторно дважды экстрагируют 100 см³ацстона. выдерживая на встряхивателе 30 мин. Экстракт фильтруют на воронке Бюхнера, осадок на фильтре промывают 20 см³ ацетона.

Объединенный отфильтрованный экстракт упаривают на ротационном вакуумном испарителе при температу ре бани не выше 40 °С до объема 50—80 см³, добавляют 200 см³ этилацетата и повторно упаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре бани не выше 35 °С до водного остатка (3—5 см³), вносят 70 см³ ацетонитрила (насыщенного гексаном) и подвергают очистке по п. 9.2.

9.1.2. Сок цитрусовых

К образцу сока с мякотью массой 20 г. находящемуся в конической колбе (с пришлифованной пробкой) вместимостью 250 см³, добавляют 100 см³ ацетона, интенсивно встряхивают в течение 5 мин. помещают в

МУК 4.1.3120—13

холодильник (4 °С) на 1 ч. Экстракт фильтруют на воронке Бюхнера через двойной бумажный фильтр средней плотности под вакуумом, дважды промывая остаток на фильтре 20 см³ ацетона.

Объединенный отфильтрованный экстракт упаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре бани нс выше 40 °С до объема 50—80 см³, добавляют 200 см³ этила цстата, перемешивают и повторно упаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре бани нс выше 35 °С до водного остатка (3—5 см³), вносят 70 см³ ацетонитрила (насыщенного гексаном) и подвергают очистке по п. 9.2.

9.2. Очистка жстракта перераспределением в системе несмешивающихся растворителей

Объединенный отфильтрованный экстракт, полученный по пп. 9.1.1 или 9.1.2. переносят в делительную воронку вместимостью 250 см³, добавляют 100 см³ гексана (насыщенного ацетонитрилом), интенсивно встряхивают делительную воронку в течение 2 мин. После полного разделения фаз нижний ацетонитрильный слой отделяют, верхний гексановый слой отбрасывают. Ацетонитрильную фазу вновь переносят в делительную воронку и повторяют операцию промывки, используя 70 см³ гексана (насыщенного ацетонитрилом). Ацетонитрильный раствор переносят в круглодонную колбу вместимостью 150 см³, упаривают досуха на ротационном испарителе при температуре водяной бани нс выше 35 °С, вносят 100 см³ 5 %-го водного раствора хлористого натрия, выдерживают 1 мин на ультразвуковой бане.

Водную фазу помещают в делительную воронку вместимостью 250 см³. добавляют 100 см³ днхлормстана. интенсивно встряхивают 5 мин. После полного разделения фаз нижний дихлорметановый слой переносят в колбу для упаривания вместимостью 150 ем³, фильтруя через слой безводного сульфата натрия (толщиной около 1 см), помещенный на бумажном фильтре в химическую воронку.

Экстракцию пирипрокенфена повторяют еще дважды порциями дихлорметана объемом 100 см³, встряхивая в течение 5 мин.

Для полного разделения фаз содержимое воронки должно отстояться 10—15 мин. Следы дихлорметана в водной фазе недопустимы, поскольку это снижает полнот) извлечения вещества.

Объединенную органическую фазу, пропущенную через слой сульфата натрия, упаривают на ротационном испарителе при температуре нс выше 35 °С до объема 20 см³. добавляют 10 см³ этилацетата. упаривают досуха и подвергают дополнительной очистке на колонке по п. 9.3.

9.3. Очистка экстракта па колонке с силикагелем

Остаток, полученный по п. 9.2. находящийся в круглодонной колбе, растворяют в 5 см³ смеси гексан-этилацетат (8 : 2. по объему), выдерживают на ультразвуковой бане 1 мин. Затем раствор наносят на колонку. подготовленную по п. 7.6. Колбу обмывают дважды смесью гексан-этилацетат (8 : 2. по объему) порциями по 5 см³, которые также наносят на колонку. Скорость прохождения растворителя через колонку - 1—2 капли в секунду. Промывают колонку 15 см³ смеси гексан-этилацетат (8 : 2. по объему), элюат отбрасывают.

Пирипроксифсн элюируют с колонки 40 см³ смеси гексан-этилацетат (8 : 2. по объему) со скоростью 1—2 капли в секунду, собирая элюат в круглодонную колбу вместимостью 150 см³. раствор упаривают досуха при температуре не выше 35 °С. Сухой остаток растворяют в 1 см³ смеси гексан-ацетон (2 : 8. по объему) и анализируют по п. 9.4.

9.-4. Условии хроматографировании

9.4.1.    Газовый хроматограф, снабженный термоионным детектором с пределом детектирования по азоту в азобензоле 5 • 10 ¹³ г/с.

Хроматографическая, капиллярная, кварцевая колонка, длиной 30 м. внутренним диаметром 0.25 мм. содержащая сорбент: 5 %- фенил. 95 % - димстнлполисилоксан (толщина пленки сорбента 0.25 мкм).

Температу ра детектора: 300 °С испарителя: 270°С

Температура термостата колонки программированная. Начальная температура - 180°С. выдержка 1 мин. нагрев колонки со скоростью 10 градусов в минуту до температуры 270 °С. выдержка 10 мин. затем нагрев колонки до температуры 280 °С.

Газ 1 (азот): давление 125 кПа. скорость 29.169 см/с. поток 0.815 см³/.мин.

Газ 2: деление потока 1:6.1; сброс 5.0см³/мин. с 1 мин -20.0 см³/мин.

Газ 3 (водород): 13.0 см³/мин.

Газ 4 (воздух): 200.0 см³/мин.

Хроматографируемый объем: 1 мм³.

Линейный диапазон детектирования: 0.5—5.0 нг.

9.4.2.    Хроматограф газовый с масс-селективным детектором (метод подтверждения)

Хроматографическая, капиллярная, кварцевая колонка, длиной 30 м. внутренним диаметром 0.25 мм. содержащая сорбент 5 % - фенил 95 %- димстнлполисилоксан (толщина пленки сорбента 0.25 мкм).

14

МУК 4.1.3120—13

Температу ра детектора: 300 °С.

квадруполя - 150 °С. источника - 230 °С. переходной камеры - 280 °С.

Температу ра испарителя: 270 °С

Температура термостата колонки программированная. Начальная температу ра - 200 °С. выдержка 2 мин. нагрев колонки со скоростью 5 граду сов в минуту до температуры 240 °С. выдержка 4 мин. нагрев колонки со скоростью 10 граду сов в мину ту до температу ры 260 °С. выдержи! 8 мин.

Газ 1 (гелий): поток в колонке 1.2 см³/мин.

Давление - 130.5 кПа.

Средняя линейная скорость - 34.1 см/с.

Хроматографируемый объем: 1 мм³

Режим сканирования - SCAN.

Линейный диапазон детектирования: 0.5—5.0 нг.

Образцы, дающие пики большие, чем граду ировочный раствор пн-рнпроксифсна с концентрацией 5.0 мкг/см³, разбавляют смесью гексан-ацетон (2 : 8. по объему), не более чем в 50 раз.

10. Обработка результатов анализа

Содержание пнрипроксифсна в пробе (А', мг/кг) рассчитывают по формуле:

А’-содержание пнрипроксифсна в пробе, мг/кг;

А - концентрация пнрипроксифсна. найденная по граду ировочной характеристике в соответствии с величиной площади хроматографического пика, мкг/см³;

Г-объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, см³; /// - масса анализиру емого образца, г;

11. Проверка приемлемости результатов параллельных определении

За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предела повторяемости:

J г. где

15

Л'/, Х₂ - результаты параллельных определений, мг/кг; г - значение предела повторяемости (табл. 1). при этом г = 2.8ст_г. При невыполнении условия выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.

12. Оформление результатов

Результат анализа представляют в виде:

( D ± Л), мг/кг при вероятности Р - 0,95. где О- среднее арифметическое результатов определений, признанных приемлемыми, мг/кг:

Д - граница абсолютной погрешности, мг/кг:

<5 - граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций, табл. 1). %.

Если содержание компонента менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде:

«содержание пирипроксифена в пробе менее 0,025 мг/кг»*

* 0,025 мг/кг - предел обнаружения пирипроксифена в цитрусовых (плодах и соке).

13. Контроль качества результатов измерений

Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-1-6-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений».

13.1. Контроль стабильности градуировочной характеристики.

Контроль стабильности градуировочной характеристики проводят в начале и по окончании каждой серии анализов.

При контроле стабильности градуировочной характеристики проводят измерения нс менее трех образцов концентраций для градуировки, содержание пирипроксифена в которых должно охватывать весь диапазон концентраций от 0.5 до 5.0 мкг/см³.

Градуировочная характеристика считается стабильной, если для каждого из используемого для контроля градуировочного раствора сохраняется соотношение:

^.(0-уоо ^

N

МУК 4.1.3120—13

УТВЕРЖДАЮ Врио руководителя Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека. Главного государственного санитарного врача Российской Федерации

А. Ю. Попова

30 октября 2013 г.

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Определение остаточных количеств пирипроксифена в цитрусовых (плоды, сок) методом капиллярной газожидкостной хроматографии

Методические указания МУК 4.1.3120—13

Свидетельство об аттестации №01.00282-2008/0176.06.09.13 от 06.09.13.

Настоящие методические указания устанавливают порядок применения метода капиллярной газожидкостной хроматографии для измерения концентрации пирипроксифена в цитрусовых (плоды, сок) в диапазонах 0.025—0.25 мг/кг.

Методические указания носят рекомендательный характер.

Название действующего вещества по ИСО: пирнпрокенфен.

Химический класс: дифенил-производные.

Название действующего вещества по ИЮПАК: 4-феноксифенил (RS)-2-(2-пиридилокси) пропиловый эфир.

Структурная формула:

Эмпирическая формула: C20H19NO3.

Молекулярная масса: 321.37.

Порошок от белого до желтого цвета со слабым характерным запахом. Температура плавления 47.4 °С. Давление паров менее 0.013* 10 мПа (при 23 °С). Растворимость в воде 0.367 мг/дм³ (при 25 °С). Коэффицн-

снт распределения н-октан/вода K_owlogP = 5.37 (при 25 °С). Стабильность в водных растворах: при pH 4.7.9 период полураспада более 367 дней при 20 °С.

Растворимость в органических растворителях (г/100 см³): гексан -7.67. метанол - 6.01 (при 20 °С).

Кроткая токсикологическая характеристика. Острая пероральная токсичность (LDso) для крыс > 5 000 мг/кг: острая дермальная токсичность (LD₅₀) для крыс > 2 000 мг/кг. острая ингаляционная токсичность (LC50) Для крыс > 1 300 мг/м³ при экспозиции 4 ч.

Область применения. Пирипроксифен - инсектицид контактного и кишечного действия из группы аналогов ювенильного гормона, подавляющий эмбриогенез и процесс метаморфоза насекомых. Активно подавляет развитие мух. жуков, комаров и других насекомых.

1. Погрешность измерений

При соблюдении всех регламентируемых условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и ее составляющие) результатов измерения при доверительной вероятности Р = 0.95 нс превышает значений, приведенных в табл. 1 для соответствующих диапазонов концентраций.

Таблица 1

Метрологические параметры

Анализи руемый объекг Диана зон определяемых концентраций, мг/кг I Указатель ТОЧИОС- ти (граница относительной ПОГрвШ-ности), +<$, %, Р = 0,95 Показатель пов- ЮрЯОМОС- ти (среднеквадратичное отклонение повторяемости), <т„ % Показатель вос-произво-димости (средне-квадра-тичное огклоие-ние вос-произво-димости), <ТЛ, % Показатель вос-нроизво-димости (средие-юзадра-тичное отклонение вос-произво-;щ моста), г, % Предел воспроизводи моста (значение допустимого расхождения между двумя результатами измерений, полученных в разных лабораториях), Я,% 11лоды цитрусовых от 0,025 до 0,25 вкл. 50 2,7 3,8 1 11 Сок цитрусовых от 0,025 до 0,25 вкл. 50 3,7 5,2 10 15

МУК 4.1.3120—13

Полнота извлечения вещества, стандартное отклонение, доверительный интервал среднего результата для всего диапазона измерений (п = 20) приведены в табл. 2.

Таблица 2

Анализируемый объект Метрологические параметры, Р = 0,95, п = 20 Предел обнару жения, мг/кг Диапазон определяемых концентраций, мг/кг Полнота извлечения вещества, % Стандартное отклонение, % Доверительный интервал среднего результата, ±, % Плоды цитрусовых 0,025 0,025—0,25 92,5 3,77 2,01 Сок цитрусовых 0,025 0,025—0,25 92,9 3,83 2,04

2. Метод измерений

Метод основан на определении пирипроксифена с использованием капиллярной газожидкостной хроматографии (ГЖХ) с термоионным детектором (ТИД) и/или масс-селективным (МСД) детекторами после извлечения вещества из анализируемых образцов ацетоном, очистки экстрактов перераспределением в системе несмешивающи.хся растворителей и на колонке с силикагелем.

Количественное определение проводится методом абсолютной калибровки.

3. Средства измерений, вспомогательные устройства, реактивы и материалы

3.1. Средства измерений

Газовый хроматограф, снабженный термоионным детектором с пределом детектирования по азоту в азобензоле 5 • 10 ¹³ г/с и автоматическим пробоотборником, предназначенный для работы с капиллярной колонкой Газовый хроматограф, снабженный масс-селективным детектором и автоматическим пробоотборником, предназначенный для работы с капиллярной колонкой Барометр-анероид с диапазоном измерения атмосферного давления 5—790 мм рт. ст. и

с пределом допустимой погрешности (1.0 ±2.5) мм рт. ст.

Весы аналитические, с пределом взвешивания 110 г и пределом допустимой погрешности 0.001 г

Весы лабораторные общего назначения, с наибольшим пределом взвешивания до 420 г и пределом допустимой погрешности ± 0.01 г Колбы мерные 2-го класса точности вместимостью 100. 200. 250 см³ Меры массы

Микрошприц вместимостью 10 мм³ Пипетки граду проваиные 2-го класса точности вместимостью 1.0; 2.0; 5.0 и 10.0 см³

Примечание. Допускается использование средств измерения с аналогичными или лучшими характеристиками.

3.2. Реактивы

Пирипроксифсн. аналитический стандарт с содержанием основного компонента 100.0 % Азот газообразный (чистота 99.999 %) в баллонах Ацетон, осч

Гелий газообразный вч. в баллонах

Вода для лабораторного анализа (бидистилли-

рованная или деионизованная)

Калий марганцово-кислый (перманганат калия), хч

Калий углекислый (карбонат казня, поташ), хч. прокаленный

Кальций хлористый (хлорид кальция), хч. насыщенный водный раствор Кислота серная (концентрированная), хч Метилен хлористый (дихлорметан). хч Натрий сернокислый (сульфат натрия) безводный, хч

Натрий углекислый (карбонат натрия), хч Натрий хлористый (хлорид натрия), хч н-Гсксан (гексан), для хроматографии Силикагель для колоночной хроматографии (размер частиц 0.200—0.500 мм)

6

МУК 4.1.3120—13

Этиловый эфир уксусной кислоты (этилацс-

тат), хч    ’    ’    ГОСТ 22300-76

Примечание. Допускается исполь зование реактивов с более высокой квалификацией, не требующих дополнительной очистки растворителей.

3.3. Вспомогательные средства намерений, устройства, материалы Аппарат для встряхивания    ТУ 64-1 -2851—78

Баня ультразвуковая с рабочей частотой 35 кГц Баня водяная

Бумажные фильтры средней и высокой

плотности    ТУ 2642-001 -05015242—07

Воронка Бюхнера    ГОСТ 9147-80

Воронки делительные вместимостью ИХ) и 250 см³ ГОСТ 9737-93 Воронки конусные диаметром 40—45 мм Гнгрометр с диапазоном измерений относительной влажности от 30 до 90 %

Груша резиновая Гомогенизатор бытовой Колба Бунзена

Колбы плоскодонные вместимостью 100. 250.

500 см³

Колбы круглодонные на шлифе (для упаривания) вместимостью 150 и 250 см³ Колонка стеклянная для препаративной хроматографии длиной 25 см. внутренним диаметром 10—12 мм Насос водоструйный вакуумный Ректификационная колонна с числом теоретических тарелок не менее 30 Ротационный вакуумный испаритель с мембранным насосом, обеспечивающий вакуум до 10 мбар

Стаканы химические с носиком, вместимостью 100. 150 и 250 см³    ГОСТ    25336—82

Стекловата Стеклянные палочки

Термометр с диапазоном измерений от 0 до 55 °С и ценой деления 0.1 °С    ГОСТ 28498-90

Установка для перегонки растворителей

7

Хроматографическая, капиллярная, кварцевая колонка, длиной 30 м. внутренним диаметром 0.25 мм. содержащая сорбент: 5 % - фенил.

95 % - димстилполисилоксан (толщина пленки сорбента 0,25 мкм)

Примечание. Допускается применение оборудования с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.

4. Требования безопасности

4.1.    При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007—76. требования по электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ Р 12.1.019-09, а также требования, изложенные в технической документации на газовый хроматограф.

4.2.    Помещение до.тжно соответствовать требованиям пожаробезопасности по ГОСТ 12.1.004-91 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009-83. Содержание вредных веществ в воздухе на должно превышать ПДК (ОБУВ), установленных ГН 2.2.5.1313—03 и 2.2.5.2308— 07. Организация обучения работников безопасности труда - по ГОСТ 12.0.004—90.

4.3.    При работе с газами, находящимися в баллонах под давлением до 15 МПа (150 кгс/см²). необходимо соблюдать «Правила устройства и безопасной эксплу атации стационарных компрессорных установок, воздухопроводов и газопроводов под давлением». ПБ-03-576—03. Запрещается открывать вентиль баллона, нс установив на нем понижающий редуктор.

5. Требования к квалификации операторов

К выполнению измерений допускают специалистов, прошедших обучение, освоивших методику, владеющих техникой, имеющих опыт работы на газовом хроматографе, и подтвердивших соответствие получаемых результатов нормативам контроля погрешности по п. 13.

6. Условия измерении

При выполнении измерений соблюдают следующие условия:

•    процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха (20 ± 5) °С и относительной влажности нс более 80 %:

•    выполнение измерений на газовом хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

МУК 4.1.3120—13

7. Подготовка к выполнению измерений

Измерениям предшествуют следующие операции: очистка органических растворителей (при необходимости), приготовление градуировочных растворов и раствора внесения, установление градуировочной характеристики, приготовление смесей растворителей для экстракции и очистки экстрактов на колонке, подготовка колонки с силикагелем, проверка хроматографического поведения пирипроксифсна на ней.

7.1. Очистка органических растворителей

7.1.1. н-Гексан

Растворитель последовательно промывают порциями концентрированной серной кислоты до тех пор. пока она нс перестанет окрашиваться в желтый цвет, затем водой до нейтральной реакции промывных вод. перегоняют над прокаленным карбонатом калия.

7.1.2. Этилацетат и хлористый метилен

7.1.2.1.    Приготовление раствора натрия углекислого с массовой долей 5 %. Навеску (25 ± 0.1) г натрия углекислого помещают в мерную колбу вместимостью 500 см³, растворяют в бидистиллированной воде, доводят водой до метки, перемешивают.

7.1.2.2.    Очистка растворителей. Каждый растворитель промывают последовательно 5 %-м водным раствором натрия углекислого, насыщенным раствором хлористого кальция, сушат над прокаленным карбонатом калия и перегоняют или подвергают ректификационной перегонке на колонне с числом теоретических тарелок нс менее 30.

7.1.3. Ацетон

Ацетон перегоняют над небольшим количеством перманганата калия и прокаленным карбонатом калия или подвергают ректификационной перегонке на колонне с числом теоретических тарелок не менее 30.

7.2. Приготовление градуировочных растворов и раствора внесения

7.2.1.    Исходный раствор пирипроксифена для градуировки (концентрация 100 мкг/см³). В мерную колбу вместимостью 100 см³ помещают 0.01 г пирипроксифсна, растворяют в 50—60 см³ ацетона, доводят ацетоном до метки, тщательно перемешивают.

Раствор хранят в холодильнике при температу ре 4—6 °С в течение месяца.

7.2.2.    Рабочий раствор № 1 пирипроксифена для внесения (концентрация 10,0 мкг/см). В мерную колбу вместимостью 100 см³ помещают 10.0 см³ исходного градуировочного раствора с концентрацией

9

100.0    мкг/см³ (п. 7.2.1). доводят до метки ацетоном, тщательно перемешивают. получают рабочий растворы № 1 с концентрацией пирипрок-сифсна 10.0 мкг/см³.

Раствор хранят в холодильнике при температуре 4—6 °С в течение месяца.

Этот раствор используют для приготовления проб с внесением при оценке полноты извлечения действующего вещества методом «внесено-найдено» и контроля качества результатов измерений методом добавок.

7.2.3. Рабочие растворы ЛЬ 2—5 пирипрокси(/>ена для градуировки (концентрация 0,5—5,0мкг/см³). В 4 мерные колбы вместимостью 100 см³ помещают 0.5; 1.0; 2.5 и 5.0 см³ исходного раствора с концентрацией 100.0 мкг/см³ (п. 7.2.1), доводят до метки смесью: гексан-ацетон (2 : 8. по объему), тщательно перемешивают, получают рабочие растворы №2—5 с концентрациями пирнпрокенфена 0.5; 1.0. 2.5 и

5.0    мкг/см³.

Растворы хранят в холодильнике при температуре 4—6 °С в течение месяца.

7.3. Установление градуировочой характеристики

Градуировочную характеристику, выражающую линейную (с угловым коэффициентом) зависимость площади пика от концентрации пи-рнпроксифена в растворе, устанавливают методом абсолютной калибровки по 4 растворам для градуировки.

В испаритель хроматографа вводят по 1 мм³ каждого градуировочного раствора и анализируют в условиях хроматографирования по п. 9.5. Осуществляют нс менее 3 параллельных измерений. Устанавливают площади пиков пирипроксифсна.

7.-1. Приготовление раствора марганцово-кислого ки ши с массовой долей 0,1 % (0,1 %-й раствор)

В мерную колбу вместимостью 100 см³ помещают 0.1 г марганцово-кислого калия, растворяют в 50—70 см³ деионизованной воды, доводят водой до метки, тщательно перемешивают.

7.5. Приготовление смеси гексан-этилацетат для очистки

жстрактов на колонке с силикагелем, смеси гексан-ацетон дли растворении образцов

Смесь гсксан-этилацетат (объемное соотношение 8 : 2). В мерную колбу вместимостью 100 см³ помещают 80 см³ гексана и 20 см³ этилаце-тата. перемешивают.

10