ГОСТ Р 51427-99
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ
СОКИ ЦИТРУСОВЫЕ
Метод определения массовой концентрации гесперидина и нарингина с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии
Издание официальное
ГОССТАНДАРТ РОССИИ Москва
Предисловие
1 РАЗРАБОТАН Всероссийским научно-исследовательским институтом консервной и овощесушильной промышленности (ВНИИКОП)
ВНЕСЕН Техническим комитетом по стандартизации ТК 93 «Продукты переработки плодов и овощей»
2 ПРИНЯТ И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Постановлением Госстандарта России от 22 декабря 1999 г. № 582-ст
3 Стандарт гармонизирован с европейским стандартом ЕН 12148:1996 «Соки фруктовые и овощные. Определение гесперидина и нарингина в цитрусовых соках. Метод высокоэффективной жидкостной хроматографии»
4 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ
Настоящий стандарт не может быть полностью или частично воспроизведен, тиражирован и распространен в качестве официального издания без разрешения Госстандарта России
© ИПК Издательство стандартов, 2000 © СТАНДАРТИНФОРМ, 2008 Переиздание (по состоянию на апрель 2008 г.)
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ
СОКИ ЦИТРУСОВЫЕ
Метод определения массовой концентрации гесперидина и нарингина с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии
Citrus juices. Method for determination of hesperidin and naringin mass concentration using high performance liquid chromatography
Дата введения 2001—01—01
1 Область применения
Настоящий стандарт распространяется на цитрусовые соки и устанавливает метод определения массовой концентрации гесперидина и нарингина с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии.
Диапазон определения массовой концентрации гесперидина и нарингина — от 300 до 2000 мг/дм3.
2 Нормативные ссылки ^
В настоящем стандарте использованы ссылки на следующие стандарты:
ГОСТ 61-75 Кислота уксусная. Технические условия
ГОСТ 1770-74 Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия
ГОСТ 5712-78 Аммоний щавелевокислый Сводный. Технические условия ГОСТ 20289-74 Диметилформамид. Технические условия
ГОСТ 24104-88 Весы лабораторные общего назначения и образцовые. Общие технические условия
ГОСТ 25336-82 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры
ГОСТ 26313-84 Продукты переработки плодов и овощей. Правила приемки, методы отбора проб ГОСТ 26671-85 Продукты переработки плодов и овощей, консервы мясные и мясорастительные. Подготовка проб для лабораторных анализов
ГОСТ 29227-91 (ИСО 835-1—81) Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования
ГОСТ Р 51431-99 Соки фруктовые и овощные. Метод определения относительной плотности ИСО 3696—87* Вода для лабораторного анализа. Технические условия и методы испытаний
3 Сущность метода
Метод основан на экстракции гесперидина и нарингина из пробы сока раствором диметил-формамида при нагревании и количественном определении их массовых концентраций в экстракте с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с применением обращенно-фазовой колонки и спектрофотометрического детектора в ультрафиолетовой области спектра.
* Действует до введения в действие ГОСТ Р, разработанного на основе стандарта ИСО.
Издание официальное
1} См. примечание ФГУП «СТАНДАРТИНФОРМ» (с. 6).
4 Средства измерений, лабораторное оборудование, реактивы и материалы
Весы лабораторные общего назначения по ГОСТ 24104 с наибольшим пределом взвешивания 20 г, 2-го класса точности.
Весы лабораторные общего назначения по ГОСТ 24104 с наибольшим пределом взвешивания 200 г, 2-го класса точности.
Жидкостный хроматограф, состоящий из:
- насоса высокого давления с верхним пределом давления не менее 25 МПа и диапазоном регулирования подачи растворителя от 0,1 до 5 см3/мин;
- петлевого устройства ввода пробы (инжектора) с рабочим объемом петли 0,020 см3;
- спектрофотометрического детектора с переменной длиной волны, позволяющего проводить измерение оптической плотности при длине волны 287 нм, или детектора с фиксированной длиной волны, позволяющего проводить измерения оптической плотности при длине волны 280 нм, снабженного проточной кварцевой кюветой вместимостью не более 0,01 см3, с относительной погрешностью измерения оптической плотности не более 2 %;
- регистрирующего устройства (самописца или интегратора), позволяющего проводить измерения при чувствительности 0,2 мВ/см, с погрешностью записи в рабочих условиях не более 0,5 %;
- колонки длиной 250 мм, внутренним диаметром 4 или 4,6 мм, заполненной обращенно-фа-зовым сорбентом с привитыми октадецильными группами размером частиц 5 мкм.
Микрошприц вместимостью, обеспечивающей полное заполнение петли инжектора.
Баня водяная, пригодная для поддержания температуры (90+2) °С.
Колбы мерные по ГОСТ 1770 вместимостью 50, 100 и 1000 см3.
Цилиндры по ГОСТ 1770 вместимостью 250 и 1000 см3.
Фильтры мембранные размером пор не более 0,5 мкм.
Пипетка по ГОСТ 29227 типа 2 исполнения 1, 1-го класса точности вместимостью 2 и 10 см3.
Аммоний щавелевокислый 1-водный (оксалат аммония) по ГОСТ 5712, х.ч.
Ацетонитрил для жидкостной хроматографии [1], х.ч.
Диметилформамид по ГОСТ 20289, х.ч.
Кислота уксусная по ГОСТ 61, х.ч.
Вода для лабораторного анализа по ИСО 3696 категории 1.
Нарингин (нарингенин-7-неогесперидозид).
Гесперидин (гесперидин- 7 -рутинозид).
Допускается использование других средств измерений, лабораторного оборудования и реактивов, по метрологическим и техническим характеристикам не уступающих перечисленным выше.
5 Отбор и подготовка проб
5.1 Отбор проб — по ГОСТ 26313.
5.2 Подготовка проб к испытаниям — по ГОСТ 26671.
Концентрированные продукты разводят водой до заданного значения относительной плотности в соответствии с нормативным или техническим документом на конкретный вид продукта. Относительную плотность разбавленной пробы определяют по ГОСТ Р 51431 и найденное значение указывают в протоколе испытаний.
6 Подготовка к проведению испытаний
Для приготовления растворов, используемых при проведении испытания, и подвижной фазы для ВЭЖХ используют только воду для лабораторного анализа категории 1 по ИСО 3696.
6.1 Приготовление стандартных растворов гесперидина и нарингина
Навески гесперидина и нарингина массой 120 мг каждая переносят в мерные колбы вместимостью 100 см3. В колбы вносят по 20 см3 диметилформамида. Содержимое колб перемешивают до полного растворения кристаллов гесперидина и нарингина, затем объем содержимого в колбах доводят до отметки раствором уксусной кислоты концентрации с(СН3СООН) = 0,01 моль/дм3, содержимое колб тщательно перемешивают. Из полученных основных растворов гесперидина и нарингина массовой концентрации 1200 мг/дм3 готовят рабочие растворы гесперидина и нарингина массовой концентрации 120, 60, 30 и 15 мг/дм3 точным разведением основных растворов в соответствующее количество раз смесью раствора уксусной кислоты концентрации с(СН3СООН) = = 0,01 моль/дм3 и диметилформамида (8:2 по объему). Срок годности основных и рабочих растворов гесперидина и нарингина — 30 сут при хранении при температуре около 4 °С.
6.2 Приготовление раствора оксалата аммония концентрации clXNH^CzC^ Н20] = 0,025 моль/дм3
ГОСТ Р 51427-99
Навеску оксалата аммония массой 3,55 г переносят в мерную колбу вместимостью 1000 см1, растворяют в 100 — 200 см1 воды, объем содержимого в колбе доводят водой до отметки.
6.3 Приготовление подвижной фазы для ВЭЖХ
Подвижную фазу для ВЭЖХ готовят смешиванием 200 см1 ацетонитрила, 800 см1 воды и 0,5 см1 уксусной кислоты.
7 Проведение испытаний
7.1 Экстракция гесперидина и нарингина из пробы сока
Проводят два параллельных определения.
В мерную колбу вместимостью 50 см1 пипеткой вносят 10 см1 исследуемой пробы, 10 см1 раствора оксалата аммония концентрации 0,025 моль/дм1 и 10 см1 диметилформамида. Объем содержимого в колбе доводят водой до отметки, содержимое колбы тщательно перемешивают. После этого колбу с раствором выдерживают на водяной бане при температуре 90 °С в течение 10 мин, затем колбу с раствором охлаждают до комнатной температуры и содержимое колбы фильтруют через мембранный фильтр. Фильтрат используют для хроматографического анализа.
7.2 Хроматографический анализ
Хроматографический анализ рабочих стандартных растворов гесперидина и нарингина и экстрактов из пробы, приготовленных по 7.1, проводят при следующих условиях:
Состав подвижной фазы — по 6.4;
Скорость потока подвижной фазы — 1,0 см1/мин;
Длина волны детектора — 287 нм для детектора с переменной длиной волны;
280 нм для детектора с фиксированной длиной волны;
Чувствительность детектора — 0,05 — 0,2 единиц оптической плотности на полную
шкалу;
Объем анализируемого раствора — полное заполнение петли инжектора.
Анализ рабочих стандартных растворов проводят непосредственно перед анализом каждой серии экстрактов.
Регистрируют площади пиков и время удерживания гесперидина и нарингина.
Если площадь пика анализируемого вещества в экстракте из пробы превышает площадь пика этого вещества в рабочем стандартном растворе наибольшей концентрации, экстракт из пробы разводят водой, используя пипетку и мерную колбу подходящей вместимости, и проводят его повторный хроматографический анализ.
Из-за ограниченной стабильности экстрактов продолжительность проведения испытания не должна превышать 24 ч.
8 Обработка и оформление результатов
Обработку результатов испытания проводят по методу внешнего стандарта, исходя из линейной зависимости площади пика от концентрации гесперидина и нарингина.
Массовую концентрацию гесперидина или нарингина х, мг/дм1, вычисляют по формуле
_ S- V1 V2-k’
где S— площадь пика гесперидина или нарингина при анализе экстракта из пробы, ед. площ.;
— объем, до которого доведена проба при приготовлении экстракта, см1;
V2 — объем пробы, взятый для приготовления экстракта, см1; к — градуировочный коэффициент соответственно для нарингина или гесперидина, ед. площ. х х дм1/мг, рассчитываемый по формуле
X
к=^, (2)
где Xj — площадь пика гесперидина или нарингина при анализе рабочего стандартного раствора, ед. площ.;
с — концентрация гесперидина или нарингина в рабочем стандартном растворе, мг/дм1.
Примечание — При необходимости определения нарингина и гесперидина в навеске массовую долю этих веществ в продукте х\, мг/кг, вычисляют по формуле
Vx
xl= -Г’
т ■ к
где т — масса навески, г.
Вычисления проводят до первого десятичного знака.
Относительное расхождение между результатами двух определений, выполненных одним оператором при анализе одной и той же пробы, с использованием одних и тех же средств измерений и реактивов, в течение возможно минимального интервала времени, не должно превышать норматива оперативного контроля сходимости 6 % (Р = 0,95). При соблюдении этого условия за окончательный результат испытания принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, округленное до целого значения.
Относительное расхождение между результатами двух определений, выполненных в двух лабораториях при анализе одной и той же пробы, не должно превышать норматива оперативного контроля воспроизводимости, 16 % (Р = 0,95).
Пределы относительной погрешности определения массовой концентрации гесперидина и нарингина при соблюдении условий, регламентируемых настоящим стандартом, не превышают ±11 % (Р= 0,95).
В протоколе испытаний указывают:
- информацию, необходимую для идентификации исследуемого продукта (вид продукта, происхождение, шифр);
- ссылку на настоящий стандарт;
- дату и способ отбора проб (по возможности);
- дату получения пробы для испытаний;
- дату проведения испытаний;
- результат испытаний с указанием погрешности и единицы измерений;
- соблюдение норматива контроля сходимости результатов;
- особенности проведения испытаний (разведение концентрированной пробы, относительную плотность разведенной пробы и пр.);
- отклонения условий проведения испытаний от описанных в стандарте, которые могли повлиять на результат. 2
ГОСТ Р 51427-99
ПРИЛОЖЕНИЕ А (справочное)
Библиография
[1] ТУ 6-09-06-1092—83 Ацетонитрил для жидкостной хроматографии
УДК 664.863.001.4:006.354 ОКС 67.160.20 Н59 ОКСТУ9Ю9
Ключевые слова: цитрусовые соки, гесперидин, нарингин, массовая концентрация, метод определения, высокоэффективная жидкостная хроматография
ПРИМЕЧАНИЕ ФГУП «СТАНДАРТИНФОРМ»
Указанный в разделе 2 «Нормативные ссылки» к ГОСТ Р 51427-99:
ГОСТ 24104-88 заменен на ГОСТ 24104-2001 Весы лабораторные. Общие технические требования
Редактор Р.Г. Говердовская Технический редактор Н.С. Гришанова Корректор А. С. Черноусова Компьютерная верстка А.Н. Золотаревой
Подписано в печать 27.05.2008. Формат 60x84Vs. Бумага офсетная. Гарнитура Таймс. Печать офсетная. Уел. печ. л. 0,93.
Уч.-изд. л. 0,67. Тираж 104 экз. Зак. 616.
1
2
ФГУП «СТАНДАРТИНФОРМ», 123995 Москва, Гранатный пер., 4. www.gostinfo.ru info@gostinfo.ru
Набрано во ФГУП «СТАНДАРТИНФОРМ» на ПЭВМ.
Отпечатано в филиале ФГУП «СТАНДАРТИНФОРМ» — тип. «Московский печатник», 105062, Москва, Лялин пер., 6.