Купить СТБ ГОСТ Р 51116-2002 — бумажный документ с голограммой и синими печатями. подробнее
Цена на этот документ пока неизвестна. Нажмите кнопку "Купить" и сделайте заказ, и мы пришлем вам цену.
Распространяем нормативную документацию с 1999 года. Пробиваем чеки, платим налоги, принимаем к оплате все законные формы платежей без дополнительных процентов. Наши клиенты защищены Законом. ООО "ЦНТИ Нормоконтроль"
Наши цены ниже, чем в других местах, потому что мы работаем напрямую с поставщиками документов.
Распространяется на зерно (пшеницу, кукурузу, ячмень, овес), продукты его переработки (муку, крупу, отруби и др.), комбикорма и устанавливает метод определения содержания дезоксиниваленола (вомитоксина) с использованием жидкостного хроматографа "Милихром".
Стандарт идентичен государственному стандарту Российской Федерации ГОСТ Р 51116-97
1 Область применения
2 Нормативные ссылки
3 Аппаратура, материалы и реактивы
4 Подготовка к испытанию
5 Проведение испытания
6 Обработка результатов
7 Контроль точности анализов
Приложение А Библиография
Дата введения | 01.01.2003 |
---|---|
Добавлен в базу | 01.02.2020 |
Завершение срока действия | 15.12.2011 |
Актуализация | 01.01.2021 |
27.12.2002 | Утвержден | Госстандарт Республики Беларусь | 56 |
---|---|---|---|
Разработан | БелГИСС | ||
Издан | БелГИСС | 2003 г. |
Чтобы бесплатно скачать этот документ в формате PDF, поддержите наш сайт и нажмите кнопку:
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ РЕСПУБЛИКИ БЕЛАРУСЬ
Метод определения содержания дезоксиниваленола (вомитоксина)
Метад вызначэння змяшчэння дэзаксЫваленолу (ваымтаксшу)
(ГОСТ Р 51116-97, ЮТ)
Издание официальное
Госстандарт
Минск
УДК 636.086.001.4: 006.354 МКС 65.120.19 (КГСС19) ЮТ
Ключевые слова: зерно, продукты переработки зерна, комбикорма, метод, дезоксиниваленол (вомитоксмн). хроматография жидкостная высокоэффективная, экстракция, очистка, раствор градуировочный
ОКП 92 99600 ОКП РБ 15.71.10
Предисловие
1 ПОДГОТОВЛЕН научно-производственным республиканским унитарным предприятием «Белорусский государственный институт стандартизации и сертификации (БелГИСС)»
ВНЕСЕН Управлением стандартизации Госстандарта Республики Беларусь
2 УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ постановлением Госстандарта Республики Беларусь от 27 декабря 2002 г. № 56
3 Настоящий стандарт идентичен государственному стандарту Российской Федерации ГОСТ Р 51116-97 «Комбикорма, зерно, продукты его переработки. Метод определения содержания дезоксиниваленола (вомитоксина)»
Государственный стандарт Российской Федерации разработан Техническим комитетом по стандартизации ТК 4 «Комбикорма, БВД. премиксы», АООТ «Всероссийский научно-исследовательский институт комбикормовой промышленности» (АООТ «ВНИИКП»)
Степень соответствия - идентичная (ЮТ)
4 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ
Настоящий стандарт не может быть тиражирован и распространен без разрешения Госстандарта Республики Беларусь
Издан на русском языке
Приложение А
(информационное)
Библиография
[1J ТУ 6-16-3096-89 Уголь активированный
(2] ТУ 6-09-1678-86 Фильтры обездоленные (белая, красная, синяя ленты)
Сдано в набор 21 01 2003 Подписано в печать 06 02 2003 Формат бумаги А4 Бумага офсетная Гарнитура Ариал Печать офсетная Уел печ л. 1.39 Уел. кр -отт. 1.39 Уч - изд л. 0,76 Тираж экз Заказ
Издатель и полиграфическое исполнение НП РУП «Белорусский государственный институт стандартизации и сертификации (БелГИСС)» Лицензия ЛВ № 231 от 04 03 98 Лицензия ЛП № 408 от 25 07 2000 220113. г. Минск, ул Мележа. 3.
Содержание
1 Область применения..............................................................................................................................1
2 Нормативные ссылки.............................................................................................................................1
3 Аппаратура, материалы и реактивы.....................................................................................................1
4 Подготовка к испытанию........................................................................................................................2
5 Проведение испытания..........................................................................................................................4
6 Обработка результатов..........................................................................................................................5
7 Контроль точности анализов.................................................................................................................6
Приложение А Библиография..................................................................................................................8
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ РЕСПУБЛИКИ БЕЛАРУСЬ
КОМБИКОРМА, ЗЕРНО, ПРОДУКТЫ ЕГО ПЕРЕРАБОТКИ Метод определения содержания дезоксиниваленола (вомитоксина)
КАМБ1КАРМЫ, ЗЕРНЕ, ПРАДУКТЫ ЯГО ПЕРАПРАЦОУК1 Метад вызначэння змяшчэння дэзакажваленолу (вам^аксжу)
COMPOUND FEEDS, GRAIN AND GRAIN BY-PRODUCTS Method for determination of desoxinivalenol (vomitoxin) content
Дата введения 2003-01-01
1 Область применения
Настоящий стандарт распространяется на зерно (пшеницу, кукурузу, ячмень, овес), продукты его переработки (муку, крупу, отруби и др.), комбикорма и устанавливает метод определения содержания дезоксиниваленола (вомитоксина) с использованием жидкостного хроматографа «Милихром».
Сущность метода заключается в экстракции дезоксиниваленола (вомитоксина) из испытуемой пробы смесью ацетонитрила с водой, очистке экстракта на двух последовательных колонках с активированным углем и количественном определении дезоксиниваленола (вомитоксина) с помощью жидкостного хроматографа «Милихром» со спектрофотометрическим детектором на ультрафиолетовую область (далее - с УФ-детектором) в двухволновом режиме.
Пределы определения в пробе - 0.2 - 4.0 мг/кг, в растворе - 1 - 20 нг/мкдм3.
2 Нормативные ссылки
В настоящем стандарте использованы ссылки на следующие стандарты:
ГОСТ 1770-74 (ИСО 1042-83. ИСО 4788-80) Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия
ГОСТ 5556-81 Вата медицинская гигроскопическая. Технические условия ГОСТ 6995-77 Реактивы. Метанол-яд. Технические условия ГОСТ 13496.0-80 Комбикорма, сырье. Методы отбора проб ГОСТ 13586.3-83 Зерно. Правила приемки и методы отбора проб ГОСТ 24104-2001 Весы лабораторные. Общие технические требования
ГОСТ 25336-82 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры
ГОСТ 26312.1-84 Крупа. Правила приемки и методы отбора проб ГОСТ 27668-88 Мука и отруби. Приемка и методы отбора проб
ГОСТ 29227-91 (ИСО 835-1-81) Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования
3 Аппаратура, материалы и реактивы
Весы лабораторные общего назначения 3-го класса точности с наибольшим пределом взвешивания 500 г по ГОСТ 24104
Весы лабораторные общего назначения 2-го класса точности с наибольшим пределом взвешивания 20 г по ГОСТ 24104.
Мельница лабораторная электрическая типа ЭМ-ЗА, обеспечивающая измельчение пробы до прохода без остатка через сито с отверстиями диаметром 1 мм.
Аппарат для встряхивания проб типа АВУ-6С, обеспечивающий частоту встряхивания 200 колебаний в минуту.
Издание официальное
Хроматограф жидкостный «Милихром» с УФ-детектором со спектральным диапазоном 190 360 нм. обеспечивающий одновременное измерение на не менее двух длинах волн, уровень шумов не более 10 : единиц оптической плотности (е. о. п.).
Спектрофотометр типа СФ-26. СФ-46 со спектральным диапазоном 186 - 1100 нм. основная погрешность измерений коэффициента пропускания не более 1 %. градуировки длин волн в УФ области - не более 0,1 нм.
Колонка аналитическая хроматографическая для высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) размером 80 х 2 мм, заполненная сорбентом диабонд С 16 с эффективностью не ниже 5000 теоретических тарелок (далее - т. т.).
Колонки хроматографические для жидкостной хроматографии (ЖХ) размером 100 х 5 мм с оттянутым концом и шарообразной верхней частью вместимостью 25 см'.
Баллон с азотом.
Сито с отверстиями диаметром 1 мм.
Испаритель ротационный марки ИР-2М или насос водоструйный.
Колбы мерные 1 (2)-25 (50. 100) - 2 по ГОСТ 1770.
Цилиндры мерные 1 (3)-25 (100, 250) по ГОСТ 1770.
Колбы 0-25 (50)-14/23 ТС по ГОСТ 25336.
Пробирки типа П1 по ГОСТ 25336.
Пипетки 1-1-2-0.5 (1.2. 5.10) по ГОСТ 29227.
Колбы плоскодонные конические с притертыми стеклянными или полиэтиленовыми пробками вместимостью 500 см3.
Склянки из темного стекла с притертыми пробками.
Уголь активированный марки ФАС размером частиц от 0.08 до 0.10 мм по (1].
Фильтры бумажные обеззоленные марки ФОМ по (2).
Вата медицинская гигроскопическая по ГОСТ 5556.
Метанол - яд по ГОСТ 6995
Ацетонитрил для хроматографии с содержанием основного вещества не менее 99.5 % (оптическая плотность ацетонитрила при длине волны 210 нм относительно воды должна быть не более 0.3 е. о. п.)
Дезоксиниваленол (вомитоксин) кристаллический массовой долей основного вещества не менее 90 %.
Вода бидистиллированная электрическим сопротивлением не менее 12 МОм.
Допускается применение других средств измерений с метрологическими характеристиками и оборудования с техническими характеристиками, а также материалов и реактивов по качеству не ниже вышеуказанных.
4 Подготовка к испытанию
4.1 Отбор проб-по ГОСТ 13496.0, ГОСТ 13586.3, ГОСТ 26312.1, ГОСТ 27668.
Масса средней пробы исследуемого продукта должна быть не менее 2 кг.
4.2 Подготовка пробы к испытанию
Из средней пробы исследуемого продукта методом квартования выделяют часть пробы массой не менее 100 г и измельчают на лабораторной мельнице до такого состояния, чтобы она проходила без остатка через сито с отверстиями диаметром 1 мм. Выделенную часть размолотой пробы тщательно перемешивают.
Выделенную часть пробы муки используют для анализа без предварительного размалывания.
4.3 Приготовление элюирующих растворов
Приготавливают смеси ацетонитрила и воды в объемных соотношениях: 0,05:1; 0,125:1; 0.5:1; 1:1.
4.4 Приготовление исходного раствора дезоксиниваленола (вомитоксина)
Навеску кристаллического дезоксиниваленола (вомитоксина) массой (10 ± 0.01) мг помещают в мерную колбу вместимостью 100 см3, растворяют в бидистиллированной воде и доводят объем раствора бидистиллированной водой до метки.
Для определения массовой концентрации дезоксиниваленола (вомитоксина) в исходном растворе 3 см исходного раствора переносят в пробирку Растворитель испаряют в токе азота или при вакууме с помощью водоструйного насоса при нагревании не выше 60 °С досуха. К остатку добавляют 3 см3 метилового спирта и измеряют оптическую плотность полученного раствора на спектрофотометре при длине волны 218 нм в кюветах толщиной просвечиваемого слоя 10 мм относительно метилового спирта.
Массовую концентрацию дезоксиниваленола (вомитоксина) в исходном растворе си. нг/мкдм . вычисляют по формуле
4500-10®
где D - оптическая плотность исходного раствора дезоксиниваленола (вомитоксина). е. о. п.;
296 - молекулярная масса дезоксиниваленола (вомитоксина). г;
4500 - коэффициент молярной экстинкции дезоксиниваленола (вомитоксина). дм /моль • см;
109 - коэффициент пересчета г в нг;
10' - коэффициент пересчета дм ‘ в мкдм'.
4.5 Приготовление градуировочных растворов дезоксиниваленола (вомитоксина)
В мерные колбы вместимостью 100 см3 переносят исходный раствор дезоксиниваленола (вомитоксина) в объемах, указанных в таблице 1. Объем жидкости в колбах доводят до метки дистиллированной водой.
Градуировочные растворы хранят в стеклянной посуде с притертой пробкой в темном месте при температуре около 0 °С не более года.
Таблица 1 | ||||||||||||||||
|
4.6 Подготовка колонок для ЖХ для очистки экстракта
На дно двух хроматографических колонок ЖХ помещают промытые ацетонитрилом ватные тампоны. В одну колонку вносят (0.2 ± 0.05) г (далее - колонка 1). в другую - (0.1 ± 0,05) г (далее - колонка 2) активированного угля. Уплотняют при осторожном постукивании до высоты слоя, не изменяющейся при дальнейшем постукивании.
4.7 Кондиционирование ВЭЖХ колонки
Перед первыми анализами колонку кондиционируют, проводя 3-4 холостых опыта, т. е. проводят градиентное элюирование по 5.3 без введения в колонку пробы.
4.8 Градуировка прибора
Для градуировки прибора в колонку ВЭЖХ вводят по 4 мкдм градуировочных растворов и проводят хроматографирование по 5.3. Каждый градуировочный раствор вводят 3 раза. Для каждого пика определяют время удерживания мин. измеряют высоту пика h„ мм или е. о. п.
По полученным результатам устанавливают время удерживания дезоксиниваленола (вомитоксина) и погрешность времени удерживания. Среднее время удерживания t. мин. вычисляют по формуле
П
п
где /, - время удерживания для /-го градуировочного раствора, мин;
п - количество введенных в хроматограф градуировочных растворов, п = 9.
Среднее квадратическое отклонение значения времени удерживания S. мин. вычисляют по формуле
s=j£(tl-i)2/h-i. О)
Границы абсолютной погрешности значения времени удерживания, ± Д-, мин. вычисляют по формуле
Д = S • /. (4)
где t - критерий Стьюдента для числа степеней свободы i- п - 1 (Р = 0.95). Записывают интервал, в котором могут находиться с вероятностью Р = 0,95 значения времени удерживания дезоксиниваленола (вомитоксина) от (} ~ Д) до (/ + Д).
По результатам хроматографирования градуировочных растворов определяют значение градуировочного коэффициента. Для этого сначала вычисляют для каждого градуировочного раствора значение градуировочного коэффициента К„ нг/мм или нг/е. о. п., по формуле
где т, - масса дезоксиниваленола (вомитоксина). введенная в хроматограф с на градуировочным раствором, нг (по данным таблицы 1); h, - высота пика /-го градуировочного раствора, мм или е. о. п.
Среднее арифметическое значение градуировочного коэффициента К. нг/мм или нг/е. о. п.. вычисляют по формуле
п
К = ~. (6)
п
где п - количество градуировочных растворов, введенных в хроматограф, п = 9.
Значение градуировочного коэффициента контролируют не реже одного раза в месяц. Для этого вводят в хроматограф один из градуировочных растворов и вычисляют для него градуировочный коэффициент К,. Если при этом |К, - К | < 0.1 К. прибор не подлежит переградуировке. В противном случае прибор должен быть отградуирован заново согласно 4 8.
5 Проведение испытания
5.1 Экстракция дезоксиниваленола (вомитоксина) из исследуемого продукта
Навеску исследуемого продукта массой (25 ± 0.05) г помещают в колбу с притертой пробкой вместимостью 500 см3, приливают 20 cmj бидистиллированной воды и затем 105 cmj ацетонитрила. Колбу закрывают пробкой и встряхивают на аппарате для встряхивания проб в течение 30 мин. После этого содержимое колбы фильтруют через бумажный складчатый фильтр в колбу с притертой пробкой.
5.2 Очистка экстракта
5 см3 фильтрата (5.1) переносят в колрнку 1 ЖХ (4.6) и элюируют в остродонную колбу вместимостью 50 см' со скоростью не более 0.5 см^/мин. С целью ускорения элюирование можно проводить с помощью вакуума водоструйного насоса. Не допуская осушения сорбента, через колонку пропус-кают 15 см3 ацетонитрила, собирая элюат в ту же остродонную колбу.
По окончании элюирования из колбы с помощью ротационного вакуумного испарителя при температуре не более 60 °С полностью отгоняют растворитель. К сухому остатку добавляют 1 см3 бидистиллированной воды. Колбу закрывают пробкой и ее стенки осторожно споласкивают находящейся в ней жидкостью. Содержимое колбы с помощью пипетки переносят в колонку 2 (4.6). Стенки
колбы повторно обмывают 1 см бидистиллированной воды, которую также переносят в колонку 2. Колонку 2 промывают 2 см3 бидистиллированной воды и элюат отбрасывают.
Из колонки 2 дезоксиниваленол элюируют 7,5 см ацетонитрила в остродонную колбу вместимостью 25 см3. Собранный элюат упаривают досуха с помощью ротационного вакуумного испарителя. Остаток растворяют в 0,2 см метилового спирта. Полученный раствор используют для хроматографического анализа (далее - испытуемый раствор).
5.3 Выполнение измерений
5.3.1 Условия проведения измерений
Измерения проводят в следующих условиях:
а) разделение компонентов проводят на колонке размером 80 < 2 мм:
б) сорбент - диабонд С 16 с эффективностью не менее 5000 т. т.;
в) рабочие длины волн УФ-детектора - 230 и 276 нм (230 нм - опорная длина волны. 276 нм -длина волны для контроля чистоты экстракта);
г) скорость элюирования - 100 мкдмэ/мин.
Элюирование проводят в градиентном режиме. Для этого в шприце насоса готовят элюент с перформированным градиентом. Насос устанавливают в перевернутое положение и набирают последовательно:
600 мкдм' воды;
500 мкдм ' раствора ацетонитрил-вода (0.05 :1);
600 мкдм' раствора ацетонитрил-вода (0.125 :1);
100 мкдм ' раствора ацетонитрил-вода (0.5 : 1);
100 мкдм раствора ацетонитрил-вода (1 :1);
700 мкдм ацетонитрила;
д) объем анализируемого раствора - 4 мкдм3;
е) чувствительность 0.1 е. о. п. при 100 милливольтах шкалы самописца.
На приборе устанавливают следующие параметры:
количество образцов - 3;
объем ступеней, мкдм3:1 - 600. 2 - 500, 3 - 600, 4 - 100. 5 - 100, 6 - 700;
объем регенерации, мкдм' - 200, буфера - 15. пробы - 4. буфера - 10;
расход элюента - 100 мкдм /мин; скорость набора - 800 мкдм /мин.
5.3.2 Проведение измерений испытуемого раствора
Допускается проведение анализа методом внешнего стандарта.
Если прибор предварительно отградуирован по 4.8. в колонку хроматографа вводят три раза по 4 мкдм испытуемого раствора, полученного по 5.2. По показаниям прибора при двух длинах волны -230 и 276 нм оценивают чистоту испытуемого раствора согласно инструкции к прибору. Идентификацию пика дезоксиниваленола (вомитоксина) проводят по времени удерживания t, которое должно находиться в интервале, установленном при градуировке: (t - Д) (t + Д). Измеряют высоту пиков дезоксиниваленола (вомитоксина).
Если прибор предварительно не градуировали, в колонку хроматографа вводят три раза по 4 мкдм' испытуемого раствора и градуировочных растворов Измеряют высоту пиков дезоксиниваленола (вомитоксина) испытуемого раствора и того градуировочного раствора, высота пиков которого наименее отличается от высоты пиков испытуемого раствора.
6.1 В том случае, когда одновременно с испытуемыми растворами хроматографируют и градуировочные растворы, массовую долю дезоксиниваленола (вомитоксина) X. нг/г, в испытуемой пробе вычисляют по формуле
(7)
т, -0.2-125-1000 /I, -4 25-5-87
где ш, - масса дезоксиниваленола (вомитоксина), введенная в хроматограф с на градуировочным раствором, высота пика которого наименее отличается от высоты пика испытуемого раствора, нг (определяется по данным таблицы 1);
^осо “ среднее арифметическое значение трех измерений высоты пиков испытуемого раствора, мм или е. о. п.;
/), - среднее арифметическое значение трех измерений высоты пиков /-го градуировочного
раствора, мм или е. о. п.;
0.2 - объем испытуемого раствора дезоксиниваленола (вомитоксина) из образца, см';
4 - объем испытуемого раствора, введенный в хроматограф, мкдм3;
125 - объем экстракта испытуемой пробы, см3;
5 - объем экстракта испытуемой пробы, взятый для очистки, см3;
25 - масса навески испытуемой пробы, г;
87 - степень извлечения дезоксиниваленола (вомитоксина) из пробы. %;
1000 - коэффициент пересчета см3 в мкдм3.
6.2 Массовую долю дезоксиниваленола (вомитоксина) X. нг/г. в испытуемой пробе с использованием градуировочного коэффициента вычисляют по формуле
(8)
K h^ 0,2-125-1000 4-25-5-87
где К- градуировочный коэффициент, нг/мм или нг/е. о. п.
6.3 При анализе каждой испытуемой пробы выполняют два параллельных определения, начиная со взятия навески испытуемой пробы по 5.1.
Если расхождение между результатами параллельных определений не превышает (Xi - Х:| < 0.01 d X.
где Ху, Х2 и X - результаты первого и второго параллельных определений и их среднее арифметическое, соответственно, то среднее арифметическое X принимают за результат анализа. В противном случае анализ повторяют. Значение норматива (сО приведено в таблице 2.
По полученному результату анализа и значению относительной погрешности (у. таблица 2) рассчитывают абсолютную погрешность Д. нг/г, по формуле
Д = 0.01 • у • X . (9)
Результат анализа представляют в виде: (X ± Д) нг/г при Р = 0.95. Числовое значение результата анализа и его погрешность должны оканчиваться цифрой одного и того же разряда.
Таблица 2 - Значение нормативов внутреннего оперативного контроля (ВОК) и характеристики погрешности анализа (для вероятности Р - 0,95) | |||||||||||||||||||||||
|
7 Контроль точности анализов
Внутренний оперативный контроль ВОК точности анализов включает контроль сходимости, воспроизводимости и точности результатов анализов. При превышении нормативов ВОК точности проводят повторные анализы. При повторном превышении указанных нормативов анализы приостанавливают. выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и устраняют их.
7.1 Сходимость параллельных определений контролируют для каждой анализируемой пробы согласно 6.3.
7.2 Для проведения ВОК воспроизводимости используют рабочие пробы. Пробу делят на две равные части и анализируют в соответствии с методикой, получая два результата анализа в разных лабораториях или в одной, причем в этом случае максимально варьируют условия проведения анализа, т. е. используют разные наборы мерной посуды, анализы выполняют в разные дни или два различных аналитика.
Воспроизводимость контрольных анализов, а также воспроизводимость результатов анализа рабочих проб, выполненных за период, в течение которого условия проведения анализа принимают за стабильные и соответствующие условиям проведения контрольных анализов, признают удовлетворительной, если |Xi - Хг| £ 0.01D X, где X,, Хг и X - результаты анализа одной и той же пробы, полученные при варьирующих условиях в одной лаборатории или разных лабораториях, и их среднее арифметическое значение, соответственно: D - значение норматива ВОК воспроизводимости (таблица 2).
Периодичность проведения ВОК воспроизводимости не реже одного раза в две недели.
7.3 Для проведения ВОК точности используют рабочие пробы с известной добавкой дезокси-ниваленола (вомитоксина). Пробу делят на две равные части, первую из которых анализируют в соответствии с методикой, а во вторую вводят известную добавку дезоксиниваленола (вомитоксина). а затем анализируют в соответствии с методикой. Добавка должна составлять 50 - 150 % содержания дезоксиниваленола (вомитоксина) в анализируемой пробе. Результаты получают по возможности в одинаковых условиях, т. е. их получает один аналитик с использованием одного набора мерной посуды, одной партии реактивов и т. д.
Точность контрольных анализов признают удовлетворительной, если | х’ - х - С| s 0,01 • К • X.
где X , X и С - результаты контрольных анализов пробы с известной добавкой, без добавки и значение добавки, соответственно: К - значение норматива ВОК точности при использовании метода добавок (таблица 2).
Контроль точности анализа проводят не реже одного раза в месяц, а также при смене реактивов и после длительного перерыва в работе.
7.4 Результаты ВОК заносят в специальный журнал контроля.