Государственное санитарно-эпидемиологическое нормирование _Российской    Федерации    _

4.2. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. БИОЛОГИЧЕСКИЕ И МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Измерение концентраций штаммов микроорганизмов в атмосферном воздухе населенных мест

Сборник методических указаний МУК 4.2.3249—14 МУК 4.2.3251—14 МУК 4.2.3253—14 МУК 4.2.3255—14 МУК 4.2.3257—14

Выпуск 1

Издание официальное

Москва • 2015

Федеральная служба по надзору в сфере зашиты прав потребителей и благополучия человека

4.2. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. БИОЛОГИЧЕСКИЕ И МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Измерение концентраций штаммов микроорганизмов в атмосферном воздухе населенных мест

Сборник методических указаний МУК 4.2.3249—14 МУК 4.2.3251—14 МУК 4.2.3253—14 МУК 4.2J255—14 МУК 4.2.3257—14

Выпуск 1

ББК 51.21 И37

И37 Измерение концентраций штаммов микроорганизмов в атмосферном воздухе населенных мест: Сборник методических указаний. Вып. 1.—М: Федеральный центр гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора, 2015.—40 с.

ISBN 978—5—7508—1414—5

1.    Разработаны и подготовлены ГБОУ ВПО «Российский национальный исследовательский медицинский университет им. Н. И. Пирогова Минздрава России (д.б.н. И. И. Шеина).

2.    Рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемиологическому нормированию Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 6.11.2014 № 2).

3.    Утверждены руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации А. Ю. Поповой 30 декабря 2014 г.

4.    Введены впервые.

ББК 51.21

Ответственный за выпуск Н. В. Митрохина

Редактор Л. С. Кучурова Компьютерная вёрстка Е. В. Ломановой

Подписано в печать 21.08.15 Формат 60x88/16    Печ.    л. 2,5

Тираж 150 экз.    Заказ    54

Федеральная служба по надаору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека 127994, Москва, Вадковский пер., д 18, стр. 5,7

Оригинал-макет подготовлен к печати и тиражирован отделом издательскою обеспечения Федерального цекгра гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора 117105, Москва, Варшавское ш., 19а

Отделение реализации, тсл./факс 952-50-89

€> Роспотребнадзор, 2015 О Федеральный центр гигиены и

эпидемиологии Роспотребнадзора, 2015

МУК 4.2.3249—14, 4.2.3251—14,4.2.3253—14, 4.2.3255—14, 4.2.3257—14

Содержание

Микробиологическое измерение концентрации Rhodococcus jialingiae lkp ВКПМ Ac-1957 в атмосферном воздухе населенных мест:

МУК 4.2.3249—14..................................................................................................5

Микробиологическое измерение концентрации Azotobacter chroococcum ВН-1811 ВКПМ В-9029 в атмосферном воздухе населенных мест:

МУК 4.2.3251—14................................................................................................12

Микробиологическое измерение концентрации Bacillus mucilaginosus Вас-10 ВКПМ В-8966 в атмосферном воздухе населенных мест:

МУК 4.2.3253—14................................................................................................19

Микробиологическое измерение концентрации L. xylanilyticus 5rb ВКПМ

В-11685 в атмосферном воздухе населенных мест: МУК 4.2.3255—14..........26

Микробиологическое измерение концентрации Yarrowia lipolytica 2кр ВКПМ Y-4043 в атмосферном воздухе населенных мест:

МУК 4.2.3257—14................................................................................................33

3

МУК 4.2.3249—14,4.2.3251—14,4.2.3253—14, 4.2.3255—14,4.2.3257—14

Введение

Сборник методических указаний «Измерение концентраций штаммов микроорганизмов в атмосферном воздухе населенных мест» (выпуск 1) разработан с целью обеспечения контроля соответствия фактических концентраций микроорганизмов их предельно допустимым концентрациям (ПДК), что является обязательным при осуществлении санитарно-эпидемиологического контроля.

Включенные в данный сборник методические указания по контролю биотехнологических штаммов в атмосферном воздухе населенных мест разработаны в соответствии с требованиями ГОСТ 17.2.4.02-81 «Охрана природы. Атмосфера. Общие требования к методам определения загрязняющих веществ» и Р 8.563—96 «Методики выполнения измерений».

Методики выполнены с использованием современных и адекватных микробиологических методов исследования и позволяют контролировать концентрации биотехнологических штаммов микроорганизмов на уровне и ниже их ПДК в атмосферном воздухе населенных мест, установленных в гигиенических нормативах.

Методические указания по измерению концентраций штаммов микроорганизмов в атмоферном воздухе населенных мест предназначены для лабораторий центров гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора, санитарно-микробиологических лабораторий промышленных предприятий, а также для научно-исследовательских институтов и других заинтересованных министерств и ведомств, аккредитованных в установленном порядке на право проведения микробиологических исследований, для осуществления контроля за содержанием штаммов в атмосферном воздухе населенных мест.

4

МУК 4.2.3251—14

УТВЕРЖДАЮ Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека. Главный государственный санитарный врач Российской Федерации

А. Ю. Попова

30 декабря 2014 г.

4.2. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. БИОЛОГИЧЕСКИЕ И МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Микробиологическое измерение концентрации Azotobacter chroococcum ВН-1811 ВКПМ В-9029 в атмосферном воздухе населенных мест

Методические указания МУК 4.2.3251—14

1. Общие положения и область применения

1.1.    Настоящие методические указания устанакливают порядок применения метода микробиологического количественного анализа концентрации Azotobacter chroococcum ВН-1811 ВКПМ В-9029 в атмосферном воздухе населенных мест в диапазоне концентраций от 50 до 50 ООО клеток в 1 м ³ воздуха.

1.2.    Методические указания носят рекомендательный характер.

2. Биологическая характеристика штамма Azotobacter chroococcum ВН-1811 ВКПМ В-9029 и его гигиенический норматив в атмосферном воздухе населенных мест

Штамм Azotobacter chroococcum ВН-1811 ВКПМ В-9029 выделен из почв Подмосковья, не является генетически модифицированным штаммом. Штамм продуцирует гетероауксин, антибиотики. Предполагается использовать в растениеводстве.

На среде Федорова штамм образует крупные, круглые, выпуклые, непрозрачные, гладкие колонии с ровными краями. Через 18—20 ч при t

МУК 4.2.3251—14

28—30 °С можно видеть мелкие полиморфные клетки. Через 48 ч роста наблюдаются мелкие палочки, которые могут располагаться парами.

Желатин разжижает, крахмал быстро гидролизует. Восстанавливает лакмусовое молоко. Нитраты восстанавливает до нитритов, каталазоположительный, образует сероводород, вызывает гемолиз.

Штамм Azotobacter chroococcum ВН-1811 депонирован во Всероссийской коллекции промышленных микроорганизмов под номером ВКПМ В-9029.

Предельно допустимая концентрация (ПДК) в атмосферном воздухе населенных мест - 5 ООО кл/м³.

3.    Пределы измерений

Методика обеспечивает выполнение измерений количества клеток в атмосферном воздухе населенных мест в диапазоне концентраций от 50 до 50 ООО клеток в 1 м³ воздуха при доверительной вероятности 0,95.

4.    Методы измерений

Прямой метод основан на аспирации из атмосферного воздуха населенных мест бактерий на агаризованную среду Федорова и подсчете количества выросших колоний по типичным культурально-морфологическим признакам.

5. Средства измерений, вспомогательные устройства,

реактивы и материалы

При выполнении измерений применяют следующие средства измерений, вспомогательные устройства и материалы.

5.1. Средства измерений Барометр-анероид с диапазоном измерения атмосферного давления 5—790 мм рт. ст. и пределом допустимой погрешности

± 2,5 мм рт. ст.    ТУ 2504-1799-75

Весы лабораторные, аналитические, наибольший

предел взвешивания 110 г, предел допустимой

погрешности ± 0,2 мг    ГОСТ Р 53228-08

Колбы мерные 2-100-2, 2-250-2, 2-1000-2    ГОСТ 1770-74

Пипетки градуированные 2-го класса точности

вместимостью 1,0; 2,0; 5,0; 10,0 см³    ГОСТ 29227-91

13

МУК 4.2.3251—14

Цилиндры мерные 2-го класса точности вместимостью 25 и 50 см³    ГОСТ    1770

Термометр лабораторный шкальный, пределы измерения 0—55 °С    ТУ 25-2021.003—88

Аспирационный аппарат и устройство для отбора проб воздуха

Примечание. Допускается использование средств измерения с аналогичными или лучшими характеристиками.

5.2. Вспомогательные устройства и материалы

Шкаф сушильный стерилизационный, позволяющий поддерживать температуру (160± 5)°С

Термостаты, позволяющие поддерживать рабочую температуру (28 ± 2) °С и (37 ± 2) °С Автоклав электрический Стерилизаторы паровые медицинские

Дистиллятор

Облучатель бактерицидный настенный Холодильник бытовой Микроскоп биологический с иммерсионной системой

Лупа с увеличением хЮ Пробирки типов П1, П2 Спиртовки лабораторные стеклянные Чашки биологические (Петри)

Воронки конусные диаметром 40—45 мм

Груша резиновая

Петля бактериологическая

Марля медицинская

Вата медицинская гигроскопическая

Бумага фильтровальная лабораторная

Примечание. Допускается применение оборудования с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.

МУК 4.2.3251—14

5.3. Реактивы и питательные среды

Агар микробиологический

Аммоний молибденово-кислый, хч

Вода дистиллированная

Железо серно-кислое, хч

Калий однозамещенный фосфорно-кислый, хч

Кальций уг лекислый, хч

Кислота борная, хч

Магний серно-кислый, хч

Марганец серно-кислый 5-водный, чда

Меласса свекловичная

Натрий хлористый, хч

Спирт этиловый ректификованный

Спирт этиловый технический

Примечание. Допускается использование других питательных сред и диагностических препаратов с аналогичными характеристиками.

6.Требования безопасности

При выполнении измерений концентрации клеток в атмосферном воздухе населенных мест соблюдают следующие требования.

6.1.    СП 1.3.2322—08 «Безопасность работы с микроорганизмами III—ГУ групп патогенности (опасности) и возбудителями паразитарных болезней».

6.2.    СП 1.3.2518—09. Дополнения и изменения 1 к СП 1.3.2322—

08.

6.3.    Правила техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.005-88.

6.4.    Электробезопасность при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019-79 и инструкции по эксплуатации прибора.

6.5.    Все виды работ с реактивами проводят только в вытяжном шкафу при работающей вентиляции, работа с биологическим материалом осуществляется в боксе, оборудованном бактерицидными лампами.

7. Требования к квалификации операторов

К выполнению измерений и обработке их результатов допускают лиц с высшим или средним специальным образованием, прошедших

15

МУК 4.2.3251—14

соответствующую подготовку и имеющих навыки работы в области микробиологических исследований.

8. Условия измерений

Приготовление сред, подготовку к анализу проводят в следующих условиях:

-    температура воздуха (20 ± 5) °С;

-    атмосферное давление (760 ± 20) мм рт. ст.;

-    влажность воздуха    не более 80 %.

9. Приготовление питательных сред

Для приготовления агаризованной среды Федорова смешивают указанные компоненты (г/дм⁵): калий однозамещенный фосфорно-кислый - 0,5 г; магний серно-кислый - 0,3 г; натрия хлорид - 0,3 г; железо серно-кислое - 0,005 г; марганец серно-кислый - 0,005 г; аммоний молибденово-кислый - 0,005 г; борная кислота - 0,005 г; кальций углекислый - 3,5 г; меласса - 30,0 г; агар-агар - 17,0 г. Сухие компоненты растворяют в 1 000 см³ дистиллированной воды, тщательно перемешивают и нагревают до полного растворения агара.

Смесь нагревают до растворения агара, стерилизуют автоклавированием при 121 °С в течение 15 мин и охлаждают до 60°. Приготовленную среду разливают в стерильные колбы по 250—500 см³ и автоклавируют при 121 °С в течение 15 мин.

Готовую среду хранят в защищенных от света условиях при температуре не выше 8 °С в течение 14 дней, не более.

10. Проведение измерения

10.1. Условия отбора проб воздуха

Отбор проб воздуха проводят в соответствии с требованиями ГОСТ 17.2.4.02-81 «Охрана природы. Атмосфера. Общие требования к методам определения загрязняющих веществ» и Р 8.563—96 «Методики выполнения измерений».

Для этого воздух аспирируют при помощи пробоотборника на поверхность плотной питательной среды в соответствии с технической документацией (инструкцией) на прибор. Время аспирации и объем отбираемого воздуха зависит от предполагаемой концентрации микроорганизма.