Государственное санитарно-эпидемиологическое нормирование _Российской    Федерации_

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Определение остаточных количеств форамсульфурона в ботве и корнеплодах сахарной свеклы методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

Методические указания МУК 4.1.3563—19

Издание официальное

Москва • 2020

Федеральная служба по надзору в сфере зашиты нрав потребителей и благополучия человека

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Определение остаточных количеств форамсульфурона в ботве и корнеплодах сахарной свеклы методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

Методические указания МУК 4.1.3563—19

менее 100 г/дм'. Выдерживают его над осушителем в течение 5—6 часов. Затем ацетонитрил сливают с осушителя в круглодонную колбу со шлифом объемом 4 ООО см' аппарата для перегонки растворителей.

Ацетонитрил перегоняют при температуре 81.5 °С. а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше 81.5 °С\ отбрасывают.

8. 1.2. Очистка хлористого меттена Хлористый метилен промывают равным объемом 5 % раствора натрия углекислого кислого (безводного), осу шают, добавляя в него гранулированный безводный хлористый кальций из расчета не менее 100г/дм\ Выдерживают его над осушителем в течение 12—24 часов. Затем хлористый метилен сливают с осушителя в круглодонную колбу со шлифом объемом 4 ООО см' аппарата для перегонки растворителей. Хлористый метилен перегоняют при температуре 40,0 °С. а фракции, отогнанные при температу ре ниже и выше 40,0 °С. отбрасывают.

<V. 1.3. Очистка гексана Гексан, содержащий воду, предварительно осушают, добавляя в него гранулированный безводный хлористый кальций из расчета не менее 100 г/дм\ Выдерживают его над осушителем в течение 5—6 часов. Затем гексагг сливают с осушителя в круглодонную колбу со шлифом объемом 4 000 см' аппарата для перегонки растворителей.

Гексан перегоняют при температуре 68.7 °С, а фракции, отог нанныс при температу ре ниже и выше 68.7 °С, отбрасывают.

8.1.4. Приготов/ение бидистил7ированной воды Дистиллированную воду помещают в круглодонную колбу со шлифом объемом 4 000 см' от аппарата для перегонки растворителей, добавляют к ней марганцовокислый калий из расчета 1 г/дм и кипятят в течение 6 часов.

Собирают фракции, отогнанные при темперагу ре Ю0.0°С, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше 100,0 °С, отбрасывают.

8.2. Приготов.\ение растворов Оля проведения анализа

8.2.1. Приготовление подвижной фазы дяя ВЭЖХ Для приготовления подвижной фазы используют свежеперегнанный ацетонитрил, бидистиллированную воду и ортофосфорную кислоту. Ацетонитрил и воду предварительно фильтруют через мембранные фильтры.

В колбу объемом I 000 см³ помещают 350 см³ ацетонитрила, 650 см' 0.005 М водного раствора ортофосфорной кислоты и перемешивают.

В случае отсутствия в составе хроматографической системы автоматического дегазатора через раствор подвижной фазы пропускают газообразный гелий со скоростью 20 см /мин в течение 5 минут, после чего его помешают в ультразвуковую ванну для удаления растворенных газов на I минуту.

8.2.2. Приготовление рабочих растворов

8.2.2.1.    Приготовление 2 Мраствора ортофос</юрной кислоты.

В мерную колбу объемом 100 см ' вносят 50 см ’ бидистиллирован-ной воды, прибавляют 13,7 см³ 85,0%-й ортофосфорной кислоты, доводят объем бидистиллированной водой до метки и перемешивают.

5.2.2.2.    Приготовление 0,005 Мраствора ортофосфорной кислоты.

В мерную колбу объемом 1 ООО см ’ вносят 500 см’ бидистиллированной воды, прибавляют 2,5 см³ 2 М раствора ортофосфорной кислоты, доводят объем профильтрованной через мембранный фильтр бидистиллированной водой до метки и перемешивают. Раствор используют в качестве компонента подвижной фазы для чроматофафического анализа.

8.2.2.3.    Приготовитие 1 Мраствора гидроокиси натрия.

В термостойкий химический стакан на 500 см³ переносят 20 г гидроокиси натрия, добавляют 200—300 см' дистиллированной воды. Затем раствор перемешивают (осторожно, при растворении щелочи раствор сильно нагревается) и после охлаждения раствор переносят в мерную колбу, доводят объем до метки дистиллированной водой и перемешивают (при приготовлении раствора соблюдать осторожность и работать под тягой).

8.2.2.4.    Приготовитие 0.05 \1 раствора даунам с щечного фосфор-нокислого катя.

Взвешивают 11,4 г К₂НР0₄ * ЗН₂0 и переносят в мерную колбу объемом 1 000 см\ добавляют 500 600 см³ дистиллированной воды, перемешивают до полного растворения соли, проверяют pH полученного раствора. Если pH раствора менее 9, доводят его до указанного значения с помощью 1 М раствора гидроокиси натрия, контролируя pH. После достижения нужного значения pH объем доводят водой до метки.

8.2.2.5.    Приготовитие 0,5°/о-го воОного раствора уксусной кислоты.

В мерную колбу объемом 100 см⁴ помещают 50 см’ бидистиллированной воды, прибавляют 0,5 см³ ледяной уксусной кислоты, перемешивают и доводят водой объем в колбе до метки. Раствор используется для приготовления 0.005 % водного раствора уксусной кислоты.

8.2.2.6.    Приготовление 0.005%-го воОного раствора уксусной кислоты.

В мерную колбу объемом 100 см’ помещают 50 см⁷ бидистиллиро-ванной воды, прибавляют 1 см' 0,5 % водного раствора уксусной кислоты, перемешивают и доводят водой объем в колбе до метки.

8.2.2.7.    Приготовление (К 1%-го раствора уксусной кислоты в ацетонитриле.

В мерную колбу объемом 100 см’ помешают 50 см ацетонитрила, прибавляют 0,1 см’ ледяной уксусной кислоты, перемешивают и доводят ацетонитрилом объем в колбе до метки.

8.2.2.8.    Приготовление 5%-го раствора натрия углекислого кислого.

В мерную колбу на I 000 см переносят 50 г натрия углекислого кислого, добавляют 200—300 см дистиллированной воды, перемешивают содержимое до полною растворения и доводят водой объем в колбе до метки. Раствор используют для очистки хлористого метилена.

8.2.2.9.    Приготовление раствора для разведения ирод и приготовления стандартных растворов.

Мерным цилиндром отмеряют 35 см’ ацетонитрила и помещают в плоскодонную колбу объемом 100 см⁷. Туда же помещают 65 см’ 0,005 М водного раствора ортофосфорной кислоты. Смесь тщательно перемешивают и используют для приготовления стандартных растворов для хроматографирования и растворения проб перед хроматографированием. Раствор хранят нс более 2 недель при комнатной температуре.

Н.2.5. Приготовление градуировочных растворов

8.2.3.1.    Стандартный раствор ЛЬ 1 с концентрацией форачеуль-фурона ИЮ. 0 мкг/елг.

Взвешивают 10 мг форамсульфурона в мерной колбе объемом 100 см'. Навеску растворяют в ацетонитриле и доводят объем до метки ацетонитрилом. Полученный стандартный раствор № I используется для приготовления стандартных растворов для хроматографического исследования и установления гратуировочной характеристики. Стандартный раствор № 1 хранится в морозильной камере при температу ре не выше -18 °С в течение 30 суток.

8.2.3.2.    Стандартный раствор ЛЬ 2 с концентрацией </юрачсуль-фурона 10.0мкг/см³

Из стандартного раствора .№ I отбирают пипеткой 10 см’, помешают в мерную колбу объемом 100 см³ и доводят объем до метки ацетонитрилом. Стандартный раствор №2 используется для приготовления стандартных растворов для хроматографического исследования и установления градуировочной характеристики. Стандартный раствор №2 хранится в холодильнике в течение 30 суток.

8.2.3.3.    Стандартный раствор ЛЬ 5 с концентрацией <)юрачеуль-фуроиа 1.0 мкг/см¹.

Из стандартного раствора №2 отбирают пипеткой 1 см’, помещают в мерную колбу объемом 10 см¹ и доводят объем до метки смесью ацетонитрила с 0,005 М водным раствором ортофосфорной кислоты в соотношении 35 : 65. Стандартный раствор № 3 используется для установления градуировочной характеристики, готовят перед использованием и применяют в течение одного рабочего дня.

8.2.3.4.    Стандартный раствор Ns 4 с концентрацией (/юрамсуль-фурона 0.5 мкг/см³.

Из стандартного раствора № 3 отбирают пипеткой 5 см³, помешают в мерную колбу объемом 10 см и доводят объем до метки смесью аце-тонитрила с 0.005 М водным раствором ортофосфорной кислоты в соотношении 35 : 65. Стандартный раствор № 4 используется для установления градуировочной характеристики, готовят перед использованием и применяют в течение одного рабочего дня.

8.2.3.5.    Стандартный раствор № 5 с концентрацией (/юрамсуль-фурона 0.2 мкг/см³.

Из стандартного раствора №3 отбирают пипеткой 2 см’, помешают в мерную колбу объемом 10 см ' и доводят объем до метки смесью ацетонитрила с 0.005 М водным раствором ортофосфорной кислоты в соотношении 35 : 65. Стандартный раствор № 5 используется для установления градуировочной характеристики, готовят перед использованием и применяют в течение одного рабочего дня.

8.2.3.6.    Стандартный раствор Ns 6 с концентрацией </юра\куль-фурона 0.1 мкг/см³.

Из стандартного раствора №3 отбирают пипеткой 1 см’, помешают в мерную колбу объемом 10 см³ и доводят объем до метки смесью аце-тонитрш1а с 0,005 М водным раствором ортофосфорной кислоты в соотношении 35 : 65. Стандартный раствор Ns 6 используется для установления градуировочной характеристики, готовят перед использованием и применяют в течение одного рабочего дня.

8.2.3.7.    Стандартный раствор Ns 7 с концентрацией (/.юрамсуль-фурони 0.07 мкг/см³.

Из стандартного раствора №6 отбирают пипеткой 7 см’, помешают в мерную колбу объемом 10 см³ и доводят объем до метки смесью ацетонитрила с 0,005 М водным раствором ортофосфорной кислоты в соотношении 35 : 65. Стандартный раствор № 7 используется для установления градуировочной характеристики, готовят перед использованием и применяют в течение одного рабочего дня.

8.2.3.8.    Стандартные растворы (/юрамсулы/урона с концентрацией 2,5: 2.0: 1.25: 1.0: 0,5: 0.4: 0.25 и 0,2 мкг/см³ для внесения в контрольные образцы.

Методом последовательного разведения ацетонитрилом стандартного раствора №2 готовят растворы, содержащие но 2,5; 2,0; 1,25; 1,0; 0.5; 0.4; 0,25 и 0,2 мкг/см³ и используют эти растворы для внесения в контрольные образцы. Стандартные растворы для внесения готовят перед использованием.

8.3. Устаткиение градуировочной характеристики

Градуировочную характеристику, выражающую зависимость площади (высоты) пика от концентрации форамсульфурона в растворе (мкг/см³), устанавливают методом абсолютной калибровки по 5 растворам для градуировки с концентрацией 1.0; 0,5; 0.2; 0,1 и 0,07 мкг/см\

В инжектор хроматографа вводят по 10 мм каждого градуировоч-ного раствора и анализируют в условиях хроматофафирования по п. 10.3. Осуществляют не менее 5 параллельных измерений.

8.4. Подготовка концентрирующих патронов Уе 1 для очистки экстрактов и проверка хроматографического поведения форамсульфурона на них

% АЛ. Подготовка концентрирующих папцюнов ЛЬ I для очистки экстракта.

Все процедуры происходят с использованием вакуума, скорость потока растворов через концентрирующий патрон К» I не должна превышать 5 см /мин.

Концентрирующий патрон № I устанавливают на алонж с отводом для вакуума, сверху в концентрирующих патрон № 1 вставляют шприц с разъемом типа Люср объемом нс менее 10 см (используют как емкость для элюентов).

Кондиционирование: концентрирующий патрон № 1 промывают 5 см’ ацетонитрила, затем 10 см’ воды. Элюаты отбрасывают.

Нельзя допускать высыхания поверхности концентрирующего патрона № 1.

8.4.2. Проверка хроматографического поведения форамсульфурона на концентрирующих пат/юнах ЛЬ /.

В концентратор объемом 100 см ’ вносят 1 см’ стандартного раствора форамсульфурона в ацетонитриле с концентрацией 1,0 мкг/см’ и упаривают ею досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 40 ^СС.

Сухой остаток растворяют в 5 см ’ 0,05 М раствора дву замещенног о фосфорнокислого калия, помещают концентратор на 5—10 секунд в ультразвуковую ванну, обмывают стенки концентратора и вносят раствор на подготовленный концентрирующий патрон № 1. Элюат собирают в концентратор объемом 100 см³, упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 40 °С.

Исходным концентратор обмывают 10см’ 0.005%-го водного раствора уксусной кислоты и вносят раствор на концентрирующий иагрон № I. Элюат собирают в концентратор объемом по 100 см , упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 40 °С.

Концентрирующий патрон № 1 высушивают под вакуумом примерно 2 минуты.

Исходную колбу обмывают двумя порциями 0.1%-го раствора уксусной кислоты в ацетонитриле объемом 10см’ каждая и последовательно вносят их на концентрирующий патрон № I. Элюаты собирают в концентратор объемом по 100 см\ упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 40 °С. Отду вают холодным воздухом до исчезновения замаха уксусной кислоты.

Сухой остаток каждой фракции растворяют в 2 см смеси ацетонитрила с 0,005 М водным раствором ортофосфорной кислоты в соотношении 35 : 65 и 10 мм' хроматографируют.

Определяют фракции, содержащие форам суд ьфурон, полноту смывания с концентрирующего патрона № I и необходимый объем элюента.

Изучение поведения форамсульфурона на концентрирующих патронах № 1 проводят каждый раз при отработке методики или поступлении новой партии концентриру ющих патронов № 1.

IX. Отбор проб и хранение

9.1.    Отбор проб производится в соответствии с утвержденными документами'.

Пробы ботвы и корнеплодов сахарной свеклы хранят в холодильнике при температуре (4 ± 2)°С не более суток, для длительного хранения пробы замораживают и хранят в полиэтиленовой таре в морозильной камере при температуре не выше 18 °С. Перед проведением анализа ботву и корнеплоды измельчают.

X. Выполнение определения

/ О. /. Ботва сахарной свет ы

10.1.1.    Экстракция и очистка полученного же тракта перераспределением а системе нес.мешивающихся растворителей.

Образец измельченной ботвы массой 5 г помещают в полипропиленовую банку- для экстракции объемом 250 см\ прибавляют 50 см аието-

^: Унифицированные правила ок'юра проб сельскохозяйственной продукции, нишевых продуктов и объектов окружающей среды для определения мнкроколичсств пестицидов. Г(Х Т 33884

нитрила и пометают на 5 минут в ультразвуковую ванну. Экстракт фильтруют в делительную воронку объемом 250 см’ через бумажный фильтр низкой плотности. Экстракцию повторяют еше дву мя порциями ацетонитрила объемом по 50 см' по 5 минут в ультразвуковой ванне. Экстракты фильтру ют и объединяют в делительной воронке объемом 250 см\

К ацетонитрильному экстракту прибавляют 50 см’ гексана и встряхивают делительную воронку- 2 минуты. После полного разделения фаз в делительной воронке верхний слой (гексан) отбрасывают, а нижний слой (ацетонитрил) возвращают в делительную воронку и повторяют процедуру еше раз. используя 50 см’ гексана. Нижний ацетонитрильный слой собирают в концентратор объемом 250 см . пропуская его через слой безводного сульфата натрия, и выпаривают досуха при температуре не выше 40 °С.

10.1.2.    Очистка жстракта персраспрс()е1снисм в системе несме-итвающихся растворителей.

К сухому остатку в концентраторе, полученному по п. 10.1.1, прибавляют 2 см' ацетонитрила, обмывают стенки концентратора, прибавляют 50cm^j 0.05 М дву замешенного фосфорнокислою калия (pH 9). перемешивают и переносят смыв в делительну ю воронку объемом 250 см’. Водную фракцию промывают двумя порциями хлористого метилена по 30 м’ каждая, встряхивая каждый раз делительную воронку в течение 2 минут. После полного разделения фаз в делительной воронке нижний слой (хлористый метилен) отбрасывают.

Водную фазу переносят в химический стакан объемом 250 см , прибавляют 30 см дистиллированной воды и доводят pH раствора до значения 3 с помощью 2 М водною раствора ор гофосфорной кислоты, кон тролируя pH. Раствор переносят в делительную воронку объемом 250 см ’.

Форамсульфурон экстрагируют тремя порциями хлористою метилена объемом по 30см\ каждый раз интенсивно встряхивая делительную воронку 2 минуты. В слу чае образования эмульсии хлористый метилен с эмульсией (нижний слой) собирают в плоскодонную колбу, объединяя экстракты, затем переносят в делительную воронку и выдерживают при комнатной температу ре до полного разделения слоев. После полного разделения фаз в делительной воронке нижний слой (хлористый метилен) собирают в концентратор объемом 250 см . пропуская сю через слой безводного сульфата натрия, обмывают осушитель 10см' хлористого метилена, элюаты обьединяют и упаривают досуха на роторном вакуумном испарителе при температуре не выше 40 ^СС.

10.1.3.    Очистка жстрикта на концентрирующих патронах № /.

Сухой остаток, полученный по п. 10.1.2. растворяют в 5 см 0.05 М

раствора двузамешенного фосфорнокислого калия (pH 9). помещая кон-

центратор на 5—10 секунд в ультразвуковую ванну, обмывают стенки концентратора и вносят раствор на подготовленный концентрирующий патрон № I. Элюат отбрасывают. Исходный концентратор обмывают 10 см 0,005% водного раствора уксусной кислоты и вносят на концентрирующий патрон № 1. Элюат отбрасывают. Концентрирующий патрон № 1 высушивают иод вакуумом примерно 2 минуты.

Форамсульфурон элюируют с концентрирующего пагрона № 1 10 см’ 0,1% раствора уксусной кислоты в ацетонитриле. Элюат собирают в концентратор объемом 100 см³, выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 40 °С. Отду вают током холодного возду ха до исчезновения запаха уксусной кислоты.

Сухой остаток растворяют в 2,5 см³ смеси ацетонитрила с 0,005 М водным раствором ортофосфорной кислоты в соотношении 35 : 65 и 10 мм* пробы вводят в хроматограф.

10.2. Корнеплоды сахарной свеклы

10.2.1. Экстракция.

Образец измельченных корнеплодов массой 20 г помещают в полипропиленовую банку для экстракции объемом 250 см³, прибавляют 50 см³ ацетонитрила и помешают на 5 минут в ультразву кову ю ванну. Экстракт фильтруют в концентратор объемом 250 см³ через бумажный фильтр низкой плотности. Экстракцию повторяют еще двумя порциями ацетонитрила, используя каждый раз по 50 см’ ацетонитрила и помещая на 5 минут в ультразвукову ю ванну. Экстракты фильтруют, объединяют в концентраторе объемом 250 см' и упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 40 °С.

Далее проводят очистку экстракта как указано в п. 10.1.2.

Сухой остаток растворяют в 2 см³ смеси ацетонитрила с 0.005 М водным раствором ортофосфорной кислоты в соотношении 35 : 65 и 10 мм ’ пробы вводят в хроматофаф.

10.3. Условия хроматографирования

Хроматофафическая система, включающая:

-    хроматограф жидкостной с диодно-матричным детектором, снабженный термостатом для колонок, с диапазоном температур от 15 до 80 °С и с возможностью использования стандартного автосамплера с дозирующим объемом от 0,1 до 100 мм³ для автоматического ввода пробы в хроматофафическуто систему;

-    компьютерное профаммное обеспечение, контролирующее работу' всего прибора, обеспечивающее сбор и хранение всех хроматограмм в процессе проведения хроматофафического анализа, обеспечивающее

обработку результатов измерений, вывод и расчет хроматограмм и количественный анализ.

Колонка хроматографическая стальная, длиной 250 мм, с внутренним диаметром 4.6 мм, зернением 5 мкм, заполненная сорбентом с привитыми полярными группами С18.

Температура колонки: 30 °С.

Подвижная фаза: ацетонитрил с 0,005 М водным раствором орто-фосфорной кислоты в соотношении 35 : 65 (но объему) при хроматографировании в изократическом режиме. Соотношение в режиме градиентного элюирования ацетонитрила с 0,005 М водным раствором ортофос-форной кислоты (%. по объему): до 11 минуты - 35 : 65: с II по 17 минуту 70 : 30; с 17 по 22 минуту - 35 : 65.

Скорость потока элюента: 1.0 см /мин.

Длина волны: 250 нм.

Чувствительность не менее 10 mAU (миллиединиц абсорбции) на шкалу.

Объем вводимой пробы: 10 мм’.

Линейный диапазон детектирования сохраняется в пределах 2—20 нг.

Примечание. При хроматографировании проб корнеплодов сахарной свеклы длительное!ь инъекции должна быть нс менее 17 минут, для ботвы сахарной свеклы - не менее 30 минут при работе в изократическом режиме в указанных выше условиях хроматографирования, для тою. чтобы выходящие в этот интервал времени матричные ники не искажали результат следующею хроматографического анализа.

Образцы, дающие пики больше, чем стандартный раствор форам-сульфурона с концентрацией 1.0 мкг/см ’, соответственно разбавляют.

XI. Обработка результатов анализа

Для обработки результатов хроматографического анализа используется компьютерное программное обеспечение химического анализа, которое входит в хроматографическую систему.

Альтернативная обработка результатов.

Содержание форамсульфурона в пробах рассчитывают по формуле, без учета полноты извлечения вещества из проб:

V объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, см³; т масса анализируемого образца, г;

Р - содержание форамсульфурона в аналитическом стандарте. %.

XII. Проверка приемлемости результатов параллельных определений

За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предела повторяемости:

²1-У/ - -У;| 10° ^

(х, + х₂) ~^г

А'/, X] - результаты параллельных определений, мг/кг или мг/лм , г - значение предела повторяемости (табл. 1), при л ом г- 2,8 * а_г. При невыполнении условия (I) выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.

XIII. Оформление результатов

Результат анализа представляют в виде:

( X ± А) мг/кг при вероятности Р - 0,95, где .V - среднее арифметическое результатов определений, признанных приемлемыми, мг/кг;

Д- граница абсолютной погрешности, мг/кг;

S - граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций, табл. 1), %.

В случае если содержание компонента менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде:

- при определении остаточного количества форамсульфурона в корнеплодах сахарной свеклы содержание вещества в пробе менее 0,01 мг/кг;

Примечание: 0,01 мг/кг - предел обнаружения определяемой концентрации форамсульфурона в корнеплодах сахарной свеклы:

- при определении остаточного количества форамсульфурона в ботве сахарной свеклы содержание вещества в пробе менее 0,05 мг/кг.

Примечание: 0.05 мг/кг - предел обнаружения определяемой концентрации форамсульфурона в ботве сахарной свеклы.

BEKS 1.23 0-60

0-60 Определение остаточных количеств форамсульфурона в ботве и корнеплодах сахарной свеклы методом высокоэффективной жидкостной хроматографии: Методические указания.—М.: Федеральная служба по надзору в сфере зашиты прав потребителей и благополучия человека, 2020.—24 с.

ISBN 978-5-7508-1722-1

1.    Разработаны ФГБОУ ПО «Российский государственный аграрный университет - МСХЛ имени К.Л. Тимирязева. Учебно-научный консультационный ценф «Агроэкология пестицидов и агрохимикатов» Минсельхоза России (А. В. Довгилевич. Ь. И. Довтилевнч, А. С*. Поликарпов. Ь. 11. Тестова).

2.    Утверждены Руководителем Федеральной сл>жбы но надзору в сфере защиты нрав потребителей и благополучия человека. Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации А. К). Ионовой 11 октября 2019 I.

3.    Введены впервые.

БЬК 51.23

Компьютерная верезка Ь. В. Ломановой Подписано в печам. 28 01 2020

Тираж 100 экз.

Федеральная служба по нал юру в сфере зашиты прав 1ютребителей и благополучия человека 127994. Москва. Валковский пер., л. 18. cip 5. 7

Оршинал-макст 1ЮЛЮГовлен к печати и тиражирован Федеральным Петром гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора 117105. Москва. Варшавское ш.. 19А Реализация печатных изданий, тел /факс: 8(495)633-86-59

С Росно I ребнапор. 2020

XIV. Контроль качества результатов измерений

14.1. Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений, а также контроль стабильности градуировочной характеристики осуществляется в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-1-6.

Контроль стабильности градуировочной характеристики.

Контроль стабильности градуировочной характеристики проводят в начале и по окончании каждой серии анализов.

При контроле стабильности фадуировочной характеристики проводят измерения не менее двух образцов концентраций для градуировки, содержание форамсульфурона в которых должно охватывать весь диапазон концентраций от 0,07 до 1,0 мкг/см'.

Градуировочная характеристика считается стабильной, если для каждого из используемых для контроля градуировочных растворов сохраняется соотношение:

X - концентрация форамсульфурона контрольного измерения, мкг/см':

С - известная концентрация фадуировочного раствора форамсульфурона в смеси ацетонитрила с 0,005 М водным раствором ортофосфор-ной кислоты в соотношении 35 : 65. взятая для контроля стабильности фадуировочной характеристики, мкг/см³:

10 - погрешность фадуировочной характеристики. %.

Если величина расхождения (.4) превышает 10%. делают вывод о невозможности применения фадуировочной характеристики для дальнейших измерений. В этом случае выясняют и устраняют причины нестабильности фадуировочной характеристики и повторяют контроль ее стабильности с использованием других градуировочных растворов форамсульфурона, предусмотренных настоящими МУК. При повторном обнаружении нестабильности фадуировочной характеристики определяют ее заново согласно п. 8.3.

14.2. Плановый внутрилабораторный оперативный контроль процедуры выполнения анализа проводится методом добавок.

Величина добавки С» должна удовлетворять условию:

<■’., =    + Д,у-'^гле

±Д_гХ- (±Д_>Г) - характеристика погрешности (абсолютная погрешность) результатов анализа, соответствующая содержанию компонента в испытуемом образце (расчетному значению содержания компонента в образце с добавкой соответственно), мг/кг, при этом:

УТВЕРЖДАЮ Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере зашиты прав потребителей и благополучия человека. Главный государственный санитарный врач Российской Федерации

А. Ю. Попова

11 октября 2019 г.

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Определение остаточных количеств форамсульфурона в богве н корнеплодах сахарной свеклы методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

Методические указании МУК 4.1.3563—19

I. Общие положении и область применении

1.1.    Настоящие методические указания (далее МУК) устанавливают порядок применения метода высокоэффективной жидкостной хроматографии для определения уровня остаточных количеств форамсульфурона в ботве сахарной свеклы в диапазоне 0,05—0.50 мг/кг и в корнеплодах сахарной свеклы в диапазоне 0.01—0,10 мг/кг.

1.2.    Физико-химические свойства форамсульфурона.

Название действующего вещества по ИЮПАК: 1-(4,6-диметокси-пиримндин-2-ил)-3-[2-(диметилкарбамоил)-5-формамидофенил-сульфо-нил]мочевина.

Структурная формула:

н,с    сн, *s‘ N

Эмпирическая формула: C17H20N6O7S.

Молекулярная масса: 452,4.

Агрегатное состояние: порошок.

Цвет, запах: светло-бежевый, слабый кисловатый запах.

Давление насыщенного пара: 4.2 * 10 ¹¹ Па при 20 °С; 1,3 * 10 ¹⁰ Па при 25 °С.

Температура плавления: 199,5 °С.

Коэффициент распределения в системе октанол/вода при 20 °С: К_ол1оц Р = 1.44 (pH 2). 0,603 (pH 5), -0,78 (pH 7), -1,97 (pH 9), 0,60 (дистиллированная вода, pH 5.5—5,7).

Растворимость в воде (в г/дм' при 20 °С): 0,04 (при pH 5); 3.3 (при pi I 7); 94.6 (при pi 1 9).

Растворимость в органических растворителях (в г/дм' при 20 °С): ацетон - 1.925; ацетонитрил - 1.111; 1.2-дихлорэтан - 0,185: гептан < 0,01: метанол - 1,66; этилацетат - 0,362.

В водных растворах период полураспада DT₅₀ (25 ^СС): 3.7 дня (pH 4), 10.1 дня (pH 5), 128 дней (pH 7) и 132 дня (pH 9).

Фотолитически стабилен, в кислой среде неустойчив - при pH = 5 период полураспада равен 10 дней.

1.3.    Краткая токсикологическим характеристика: форамсульфу-рон относится к малоопасным по острой оральной (ЛДч₀ для крыс более 5 000 мг/кг) и дермальной (ЛД<о для крыс более 2 000 мг/кг) токсичности. но к умеренно опасным веществам по ингаляционной токсичности (ЛК₅₀ для крыс (4 часа) более 5 040 мг/.м’ воздуха).

Область применения: форамсульфурон - послевсходовый гербицид системного действия из класса сульфонилмочевин. В основном поглощается листьями, ингибирует синтез фермента ацетолактатсинтазы (ALS), участвующего в цепи биосинтеза аминокислот, и нарушает процессы синтеза белков, что вызывает прекращение деления клеток в меристем ных тканях.

1.4.    МУК предназначены для органов и организаций Федеральной службы по надзору в сфере зашиты прав потребителей и благополучия человека. осуществляющих контроль качества и безопасности продовольственного сырья и пищевых продуктов, а также могут быть использованы организациями, аккредитованными в установленном порядке на проведение исследований продовольственного сырья, пищевых продуктов.

1.5.    МУК носят рекомендательный характер.

II. Погрешность измерений

2.1. При соблюдении всех регламентированных условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятно-

сти Р = 0,95 не превышает значений, приведенных в табл. 1 для соответствующих диапазонов концентраций.

Полнота извлечения вещества, стандартное отклонение, доверительные интервалы среднего результата для полного диапазона концентраций (п = 20) приведены в табл. 2.

Таблица 1

Метрологические параметры для форамсульфуроиа

Анализируемый объект Диапазон определяемых концентраций. мг/кг Показатель точности (ipa-шща относительной погрешности). ±6. % Р = 0.95 Стандартное отклонение повторяемости, ап °/о 11рсдел повторяемости. г.% 11 редел воспроизводимости. R, % Вотва сахарной 0.05—0.1 вкл. 50 3 8 11 свеклы 0,2—0.5 вкл. 3 9 12 Корнеплоды сахарной свеклы 0.01—0,1 вкл 50 4 10 14

Таблица 2

Полнота извлечении вешесгва. стандартное отклонение, доверительный интервал среднего результата для форамсульфуроиа

Анализируемый объект Метрологические параметры. Р = 0.95. п = 20 предел обнару жения. мг/кг диапазон определяемых концентраций. мг/кг полнота извлечения вещества. % стандартное отклонение. .S'. % доверительный ишерват среднего результата. ±. % Вотва сахарной свеклы 0.05 0.05—0.50 85.9 2.5 1.0 Корнеплоды сахарной свеклы 0,01 0.01—0.10 81.6 4.2 1.6

III. Метод измерения

Метод основан на определении форамсульфуроиа методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (далее - ВЭЖХ) с использованием диодно-матричного детектора после его экстракции из образцов ацетонитрилом, очистки экстракта перераспределением в системе не-смешнвающихся растворителей и на концентрирующих патронах для твердофазной экстракции с привитыми гидрофобными гексадецильными группами.

Идентификация вещества проводится по времени удерживания, а количественное определение - методом абсолютной калибровки.

В предлагаемых условиях анализа метод специфичен. Специфичность обеспечивается подбором состава подвижной фазы и выбором колонок различной полярности.

IV. Средства измерений, реактивы, вспомогательные устройства и материалы

4.1. Средства измерений Весы аналитические класса точности - специальный (I), с наибольшим пределом взвешивания до 110 г и дискретностью 0,0001 г Весы лабораторные общего назначения класса точности - средний (111) с наибольшим пределом взвешивания до 400 г и пределом допустимой погрешности ± 0,5 г

Колбы мерные объемом 10, 100, 500 и 1 000 см Пипетки мерные объемом 1,0; 2,0. 5.0 и 10,0 см рН-метр/милливольтметр с диапазоном измерения от 0 до 14 pH; ± 1099 мВ, снабженный электродной системой для измерения активности ионов водорода (pH) в растворах Хроматографическая система, включающая: хроматограф жидкостной с диодно-матричным детектором, снабженный термостатом для колонок с диапазоном температу р от 15 до 80 ^С‘С и с возможностью использования стандартного автосамилера с дозирующим объемом от 0,1 до 100 мм для автоматического ввода пробы в хроматографическу ю систему;

компьютерное программ нос обеспечение, контролирующее работу всего прибора, обеспечивающее сбор и хранение всех хроматограмм в процессе проведения хроматографического анализа, обеспечивающее обработку результатов измерений, вывод и расчет хроматограмм и количественный анализ Цилиндры мерные объемом 10. 25, 50. 100. 500 и 1000 см³    ГОСТ    1770

Примечание. Доиускаегся использование средств измерений с аналогичными или лучшими характеристиками.

4.2. Реактивы

Форамсульфурон, аналитический стандарт с содержанием действующего вещества не менее 98,3 %

Ацетонитрил, осч, УФ-200 нм Вода дистиллированная и (или) бидистиллированная (вода дистиллированная, перегнанная повторно в стеклянной

Концентрирующие патроны для твердофазной экстракции с привитыми гидрофобными гексадецильными группами с постоянной активностью с размером частиц 63—200 мкм (С 16) (объем - 1 см', масса сорбента - 0.6 г)

(далее - концентрирующий патрон № 1)

Метилен хлористый, хч

Натрий сернокислый, безводный, хч    ГОСТ 4166

Натрий углекислый, кислый, хч    ГОСТ    4201

Натрия гидроокись, хч    ГОСТ    4328

Примечание. Допускается использование реактивов иных производителей с аналогичными или лучшими характеристиками.

4.3. Вспомогательные устройства, материалы Алонж прямой с отводом для вакуума для работы с концентрирующими патронами    ГОСТ 25336

Банки полипропиленовые с крышками для экстракции вместимостью 250 см³ Ванна ультразвуковая е потребляемой мощностью 140 Вт, рабочей частотой 50 Гц, рабочим объемом 4.5 дм³ Вата медицинская гигроскопическая хлопковая нестерильная    ГОСТ 5556

Впалы объемом 2 см . закрываемые завинчивающейся или запрессовывающейся крышкой

с тефлоннрованной резиновой прокладкой, прокалываемой микрошприцем для автоматического дозатора проб

Воронки делительные объемом 250 см    ГОСТ    25336

Воронки лабораторные, стеклянные    ГОСТ    25336

испаритель ротационный вакуумный с ручным

подъемником, с диагональным конденсором и

объемом испарительной колбы от 50 до

3 ООО см’, с изменяемой скоростью вращения

штока испарителя от 5 до 240 об./мин. с

водяной баней с антикоррозионным покрытием

объемом 5 дм³ и с диапазоном температур от

20 до 100 °С

Колбы конические плоскодонные объемом 100,

250 и I 000 см³    ГОСТ    25336

Колбы круглодонные со шлифом (концентраторы) на 100,250 см³ и 4000 см³ ТС Колонка хроматографическая стальная, длиной 250 мм. с внутренним диаметром 4,6 мм, зернением 5 мкм. заполненная сорбентом с привитыми полярными фупиами С18 Насос диафрагменный, химически стойкий на 100 %, с мощностью электропривода 245 Вт, предельным вакуумом 100 мбар/абс., с избыточным давлением 1 бар и скоростью откачки 34 дм³/мии

Стаканы стеклянные, термостойкие объемом 100    1000 см’    ГОСТ    25336

Установка для перегонки растворителей с круглодонной колбой объемом 4 000 см³ и приемной конической колбой объемом 1 000 см Фильтры обеззоленные нейтральные, быстро фильтрующие, диаметром 11 см. зольность одного фильтра 0.00072 г Фильтры мембранные для очистки растворителей. диаметром 47 мм, с отверстиями пор 0.45 мкм

Шприц инъекционный многократного

применения объемом 10 см ’    ГОСТ    22967

Примечание. Допускается применение хроматографических колонок и другого оборудования с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.

V. Требования безопасности

5.1.    При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007, требования электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019, а также гребования, изложенные в технической документации на жидкостный хроматограф.

5.2.    Помещение лаборатории должно соответствовать требованиям пожаробезопасности по ГОСТ 12.1.004 и иметь средства пожароту шения по ГОСТ 12.4.009. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать гигиенических нормативов¹.

VI. Требования к квалификации операторов

6.1.    Измерения в соответствии с настоящими МУК может выполнять специалист, имеющий опыт работы на жидкостном хроматографе, освоивший данную методику и подтвердивший экспериментально соответствие получаемых результатов нормативам контроля погрешности измерений.

VII. Условия измерений

7.1.    При выполнении измерений соблюдают следующие условия:

-    процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха (20 ± 5) °С, относительной влажности не более 80 %;

-    выполнение измерений на жидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

VIII. Подготовка к он редел ей ню

8.1.    Выполнению измерений предшествуют следующие операции: очистка растворителей (при необходимости), приготовление растворов, кондиционирование хроматографической колонки, подготовка колонок с окисью алюминия для очистки экстракта, проверка хроматографического поведения вещества на колонках с окисью алюминия, установление градуировочной характеристики.

Подготовка органических растворителей.

К 1.1. Очистка ацетонитрила

Ацетонитрил, содержащий воду, предварительно осушают, добавляя в него гранулированный безводный хлористый кальций из расчета не

1

l li 2.2.5.3532—18 «Предельно допустимые концентрации (НДК) вредных веществ в воздухе рабочей юны»: ГН 2.2.5.2308—07 «Ориентировочные безопасные >ровни ноией-етвия (ОБУВ) вредных веществ в воздухе рабочей юны».