Государственное санитарно-эпидемиологическое нормирование _Российской    Федерации_

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Определение остаточных количеств флутоланила и его метаболитов М-2, М-4, М-101 и М-102 в воде, почве и клубнях картофеля методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим детектированием

Методические указания МУК 4.1.3522—17

Издание официальное

Москва • 2018

Федеральная служба но надзору в сфере зашиты прав потребителей и благополучия человека

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Определение остаточных количеств флутоланила и его метаболитов М-2, М-4, М-101 и М-102 в воде, почве и клубнях картофеля методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометричсским детектированием

Методические указания МУК 4.1.3522—17

3.2. Реактивы

Флутоланил, CAS 66332-96-5, аналитический стандарт с содержанием действующего вещества не менее 99,6 %

М-2, аналитический стандарт с содержанием действующего вещества не менее 99,8 %

М-4, аналитический стандарт с содержанием действующего вещества не менее 100,0 % М-101, CAS 360-64-5, аналитический стандарт с содержанием действующего вещества не менее 100,0 %

М-102, CAS 433-97-6, аналитический стандарт с содержанием действующего вещества не менее 99,8 %

Азот, осч

Ацетонитрил, осч, УФ-200 нм Вода дистиллированная и (или) бидистиллированная (вода дистиллированная, перегнанная повторно в стеклянной емкости) Гидроксид аммония, не менее 25 % по аммиаку, (аммиак водный), чда Кальций хлористый, ч Кислота муравьиная, чда Кислота соляная, хч Метилен хлористый, хч Натрий сернокислый, безводный, хч Натрий хлористый, хч

Примечание. Допускается использование реактивов с аналогичными или лучшими характеристиками.

3.3. Вспомогательные устройства и материалы Аппарат для встряхивания проб с возвратнопоступательным направлением колебаний, с максимальной загрузкой 10 кг, с амплитудой колебаний 30 мм и скоростью от 10 до 300 колебаний в минуту

Банки полипропиленовые с крышками для экстракции вместимостью 250 см³ Вата медицинская гигроскопическая хлопковая нестерильная

Виалы объемом 2 см³, закрываемые завинчивающейся или запрессовывающейся крышкой с тефлонированной резиновой прокладкой, прокалываемой микрошприцем для автоматического дозатора проб Ванна ультразвуковая с потребляемой мощностью 140 Вт, рабочей частотой 50 Гц, рабочим объемом 4,5 дм³ Воронки делительные на 250 см³ Воронки лабораторные, стеклянные Испаритель ротационный вакуумный с ручным подъемником, с диагональным конденсором и объемом испарительной колбы от 50 до 3 ООО см³, с изменяемой скоростью вращения штока испарителя от 5 до 240 об./мин, с водяной баней с антикоррозионным покрытием объемом 5 дм³ и с диапазоном температур от 20 до 100 °С

Колбы конические плоскодонные на 100, 250 и 1 000 см³

Колбы круглодонные со шлифом (концентраторы) на 100,250 и 4 000 см³ ТС Колонка хроматографическая стальная длиной 100 мм, с внутренним диаметром 4,6 мм, зернением 3,5 мкм, заполненная сорбентом с привитыми полярными группами С18 Насос диафрагменный, химически стойкий на 100 % с мощностью электропривода 245 Вт, предельным вакуумом 100 мбар/абс., с избыточным давлением 1 бар и скоростью откачки 34 дм³/мин

Предколонка хроматографическая стальная длиной 12,5 мм, внутренним диаметром

2,1 мм, зернением 5 мкм, заполненная сорбентом с привитыми полярными группами С18 Стаканы стеклянные термостойкие объемом 100—500 см³

Установка для перегонки растворителей с круглодонной колбой объемом 4 000 см³ и

приемной конической колбой объемом 1 ООО см³

Фильтры обеззоленные нейтральные, быстро фильтрующие диаметром 11 см, зольность одного фильтра 0,00072 г    'ГУ 6-09-1678—95

Центрифуга лабораторная настольная с максимальным рабочим числом оборотов 4 000 об./мин, с рабочим объемом ротора 200 см³ х 4 ячейки, выбираемый временной диапазон работы от 0 до 100 минут и с набором полипропиленовых банок емкостью 200 см³

Шарики из углеродистой стали для экстракции диаметром 8 мм

Примечание. Допускается применение оборудования с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.

4. Требования безопасности

4.1.    При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007-76, требования электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ Р 12.1.019-09, а также требования, изложенные в технической документации на комплекс жидкостного хроматографа с масс-спектрометричсским детектором.

4.2.    Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности по ГОСТ 12.1.004-91 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009-83. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать норм, установленных ГЫ 2.2.5.1313—03 «Предельно допустимые концентрации (ПДК) вредных веществ в воздухе рабочей зоны». Организация обучения работников безопасности труда - по ГОСТ 12.0.004—91.

5. Требования к квалификации операторов

Измерения в соответствии с настоящей методикой может выполнять специалист, имеющий опыт работы на жидкостном хроматографе с масс-спектрометрическим детектором, освоивший данную методику и подтвердивший экспериментально соответствие получаемых результатов нормативам контроля погрешности измерений.

6. Условия измерений

При выполнении измерений соблюдают следующие условия:

-    процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха (20 ± 5) °С, относительной влажности не более 80 % и нормальном атмосферном давлении;

-    выполнение измерений на жидкостном хроматографе с масс-спектрометрическим детектором проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

7. Подготовка к выполнению определений

Выполнению измерений предшествуют следующие операции: очистка растворителей (при необходимости), приготовление растворов, кондиционирование хроматографической колонки, установление градуировочных характеристик.

7А. Подготовка органических растворителей 7. /. 1. Очистка ацетонитрила

Ацетонитрил, содержащий воду, предварительно осушают, добавляя в него гранулированный безводный хлористый кальций из расчета не менее 100 г/дм³. Выдерживают его над осушителем в течение 5—6 часов. Затем ацетонитрил сливают с осушителя в круглодонную колбу со шлифом объемом 4 ООО см³ аппарата для перегонки растворителей.

Ацетонитрил перегоняют при температуре 81,5 °С, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше 81,5 °С, отбрасывают.

7А.2. Приготовление бидистиллированной воды

Дистиллированную воду помещают в круглодонную колбу со шлифом объемом 4 ООО см³ от аппарата для перегонки растворителей, добавляют к ней марганцовокислый калий из расчета 1 г/дм³ и кипятят в течение 6 часов.

Собирают фракции, отогнанные при температуре 100,0 °С, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше 100,0 °С, отбрасывают.

7./.3. Очистка хлористого метилена

Хлористый метилен промывают равным объемом 5%-го раствора натрия углекислого (безводного), осушают, добавляя в него гранулированный безводный хлористый кальций из расчета не менее 100 г/дм³. Выдерживают его над осушителем в течение 12—24 часов. Затем хлористый метилен сливают с осушителя в круглодонную колбу со шлифом объемом 4 000 см³ аппарата для перегонки растворителей. Хлористый

метилен перегоняют при температуре 40,0 °С, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше 40,0 °С, отбрасывают.

7.2. Приготовление растворов для проведения анализа

7.2.1. Приготовление рабочих растворов

7.2.1.1.    Приготовление 5%-го раствора гидрокарбоната натрия

В мерную колбу на 1 ООО см⁵ переносят 50 г гидрокарбоната натрия, добавляют 200—300 см³ дистиллированной воды, перемешивают до полного растворения и доводят водой объем в колбе до метки.

7.2.1.2.    Приготовление подкисленного ацетонитрила для экстракции

В мерную колбу объемом 1 дм³ помещают 500 см³ ацетонитрила,

прибавляют 10,0 см³ муравьиной кислоты, перемешивают, объем доводят до метки ацетонитрилом.

7.2.1.3.    Приготовление 0,1%-го водного раствора муравьиной кислоты

В мерную колбу объемом 1 дм³ помещают 500 см³ бидистиллиро-ванной воды, прибавляют 1,0 см³ муравьиной кислоты, перемешивают, объем доводят до метки бидисгиллированной водой. Раствор используется как компонент подвижной фазы.

7.2.1 А. Приготовление 0,1%-го раствора муравьиной кислоты в ацетонитриле

В мерную колбу объемом 1 дм³ помещают 500 см³ ацетонитрила, прибавляют 1,0 см³ муравьиной кислоты, перемешивают, объем доводят до метки ацетонитрилом. Раствор используется как компонент подвижной фазы.

7.2.1.5.    Приготовление 10 мМ водного раствора гидроксида аммония (по аммиаку)

В мерную колбу объемом 1 дм³ помещают 500 см³ бидистиллиро-ванной воды, прибавляют 0,75 см³ 25%-го раствора гидроксида аммония, перемешивают, объем доводят до метки бидистиллированной водой. Раствор используется как компонент подвижной фазы.

7.2.1.6.    Приготовление 10 мМ раствора гидроксида аммония в ацетонитриле

В мерную колбу объемом 1 дм³ помещают 500 см³ ацетонитрила, прибавляют 0,75 см³ 25%-го раствора гидроксида аммония, перемешивают, объем доводят до метки ацетонитрилом. Раствор используется как компонент подвижной фазы.

7.2.1.7.    Приготовление б Мраствора соляной кислоты

Мерным цилиндром отбирают 246 см³ концентрированной соляной кислоты и осторожно переносят в мерную колбу на 500 см³, куда

предварительно наливают около 100 см^? дистиллированной воды. Затем раствор перемешивают и после охлаждения доводят водой объем в колбе до метки (при приготовлении раствора соблюдать осторожность и работать под тягой).

7.2.2. Приготовление градуировочных растворов

7.2.2.1. Стандартный раствор № 1 с концентрацией флутоланила 1,0 мг/см³

Взвешивают 10 мг флутоланила в мерной колбе объемом 10 см³. Навеску растворяют в ацетонитриле и доводят объем до метки ацетонитрилом. Полученный стандартный раствор № 1 используется для приготовления стандартных растворов для хроматографического исследования и установления градуировочной характеристики. Стандартный раствор № 1 хранится в холодильнике в течение 6 месяцев.

12.2.2. Стандартный раствор №2 с концентрацией М-2 1,0 мг/см³ Взвешивают 10 мг М-2 в мерной колбе объемом 10 см³. Навеску растворяют в ацетонитриле и доводят объем до метки ацетонитрилом. Полученный стандартный раствор № 2 используется для приготовления стандартных растворов для хроматографического исследования и установления фадуировочной характеристики. Стандартный раствор № 2 хранится в холодильнике в течение 6 месяцев.

1.2.2.3. Стандартный раствор Ns 3 с концентрацией М-4 1,0 мг/см³ Взвешивают 10 мг М-4 в мерной колбе объемом 10 см³. Навеску растворяют в ацетонитриле и доводят объем до метки ацетонитрилом. Полученный стандартный раствор № 3 используется для приготовления стандартных растворов для хроматофафического исследования и установления фадуировочной характеристики. Стандартный раствор № 3 хранится в холодильнике в течение 6 месяцев.

1.2.2 А. Стандартный раствор Ns 4 с концентраций M-J01 1,0 мг/см³ Взвешивают 10 мг М-101 в мерной колбе объемом 10 см³. Навеску растворяют в ацетонитриле и доводят объем до метки ацетонитрилом. Полученный стандартный раствор № 4 используется для приготовления стандартных растворов для хроматофафического исследования и установления фадуировочной характеристики. Стандартный раствор №4 хранится в холодильнике в течение 6 месяцев.

1.22.5. Стандартный раствор Ns 5 с концентрацией М-102 1,0 мг/см³ Взвешивают 10 мг М-102 в мерной колбе объемом 10 см³. Навеску растворяют в ацетонитриле и доводят объем до метки ацетонитрилом. Полученный стандартный раствор № 5 используется для приготовления стандартных растворов для хроматофафического исследования и уста-

новления градуировочной характеристики. Стандартный раствор № 5 хранится в холодильнике в течение 6 месяцев.

7.2.2.6. Стандартный раствор №6 с концентрацией флутолани-па, М-2, М-4, М-101 и М-102 по 10,0мкг/см³

Из стандартных растворов № 1, 2, 3, 4 и 5 отбирают пипеткой по 1 см³ каждого раствора и помещают в мерную колбу объемом 100 см³. Доводят объем до метки ацетонитрилом при перемешивании. Стандартный раствор № 6 используется для приготовления стандартных растворов для внесения в контрольные образцы. Стандартный раствор № 6 хранят в холодильнике не более 2 месяцев.

12.2.1. Стандартные растворы флутоланила, М-2, М-4, М-101 и М-102 с концентрацией по 2,0; 1,0; 0,4; 0,2 и 0,1 мкг/см³ для внесения в контрольные образцы

Методом последовательного разведения ацетонитрилом стандартного раствора № 6 готовят растворы, содержащие по 2,0; 1,0; 0,4; 0,2 и 0,1 мкг/см³ и используют эти растворы для внесения в контрольные образцы.

7.2.2.8. Стандартный раствор № 7 с концентрацией флутоланила, М-2, М-4 и М-101 по 10,0 мкг/см³

Из стандартных растворов № 1, 2, 3 и 4 отбирают пипеткой по 1 см³ каждого раствора и помещают в мерную колбу объемом 100 см³. Доводят объем до метки ацетонитрилом при перемешивании. Стандартный раствор № 7 используется для приготовления стандартных растворов для хроматографического исследования и для установления градуировочной зависимости. Стандартный раствор № 7 хранят в холодильнике не более 2 месяцев.

12.2.9. Стандартный раствор №8 с концентрацией М-102 10.0 мкг/см³

Из стандартного раствора № 5 отбирают пипеткой 1 см³ раствора и помещают в мерную колбу объемом 100 см³. Доводят объем до метки ацетонитрилом при перемешивании. Стандартный раствор № 8 используется для приготовления стандартных растворов для хроматсирафиче-ского исследования и для установления фадуировочной зависимости. Стандартный раствор № 8 хранят в холодильнике не более 2 месяцев.

7.2.2.10. Стандартные растворы флутоланила, М-2, М-4 и М-101 с концентрацией по 0,025; 0,01; 0,005 и 0,002 мкг/см³

Методом последовательного разведения ацетонитрилом стандартного раствора № 7 готовят растворы, содержащие по 0,025; 0,01; 0,005 и 0,002 мкг/см³ и используют эти растворы для установления фадуировочной зависимости для определения флутоланила и его метаболитов

М-2, М-4 и М-101 в воде. Стандартные растворы хранят в холодильнике не более 2 месяцев.

7.2.2.11.    Стандартные растворы флутоланила, М-2, М-4 и М-101 с концентрацией по 0,025; 0,01; 0,007 и 0,002 мкг/см³

Методом последовательного разведения стандартного раствора № 7 готовят растворы, содержащие по 0,025; 0,01; 0,007 и 0,002 мкг/см³ и используют эти растворы для установления градуировочной зависимости для определения флутоланила и его метаболитов М-2, М-4 и М-101 в почве. Стандартные растворы готовятся на основе матрицы, т. е. в качестве растворителя используется очищенный экстракт контрольного образца почвы, подготовленный по п. 9.2. Стандартные растворы хранят в холодильнике не более 7 дней.

7.2.2.12.    Стандартные растворы флутоланила, М-2, М-4 и М-101 с концентрацией по 0,025; 0,015; 0,005 и 0,002 мкг/см³

Методом последовательного разведения стандартного раствора №7 готовят растворы, содержащие по 0,025; 0,015; 0,005 и 0,002 мкг/см³ и используют эти растворы для установления градуировочной зависимости для определения флутоланила и его метаболитов М-2, М-4 и М-101 в клубнях картофеля. Стандартные растворы готовятся на основе матрицы, т. е. в качестве растворителя используется очищенный экстракт контрольного образца клубней картофеля, подготовленный по п. 9.3. Стандартные растворы хранят в холодильнике не более 7 дней.

7.2.2.13.    Стандартные растворы М-102 с концентрацией 0,25; 0,1; 0,05 и 0,02 мкг/см³

Методом последовательного разведения ацетонитрилом стандартного раствора №8 готовят растворы, содержащие по 0,25; 0,1; 0,05 и 0,02 мкг/см^г и используют эти растворы для установления градуировочной зависимости для определения М-102 в воде и почве. Стандартные растворы хранят в холодильнике не более 2 месяцев.

7.2.2.14.    Стандартные растворы М-102 с концентрацией 0,025; 0,015; 0,005 и 0,002 мкг/см³

Методом последовательного разведения стандартного раствора №8 готовят растворы, содержащие по 0,025; 0,015; 0,005 и 0,002 мкг/см³ и используют эти растворы для установления градуировочной зависимости для определения М-102 в клубнях картофеля. Стандартные растворы готовятся на основе матрицы, т. е. в качестве растворителя используется очищенный экстракт контрольного образца клубней картофеля, подготовленный по п. 9.3. Стандартные растворы хранят в холодильнике не более 7 дней.

7.3. Установление градуировочной характеристики

Градуировочные характеристики, выражающие отклик целевых ионов от концентрации флутоланила и его метаболитов в растворе (мкг/см³), устанавливают путем определения соотношения интенсивности (площади) пиков, отвечающих характеристичным ионам идентифицируемого компонента и аналитического стандарта на регистрируемых ионных масс-хроматограммах по 4 растворам для установления градуировочной характеристики.

Градуировочную зависимость для определения флутоланила и его метаболитов М-2, М-4 и М-101 в воде устанавливают по 4 растворам для градуировки с концентрацией 0,025; 0,01; 0,005 и 0,002 мкг/см³ каждого компонента, приготовленным согласно п. 7.2.2.10.

Градуировочную зависимость для определения флутоланила и его метаболитов М-2, М-4 и М-101 в почве устанавливают по 4 растворам для градуировки с концентрацией 0,025; 0,01; 0,007 и 0,002 мкг/см³ каждого компонента, приготовленным согласно п. 7.2.2.11.

Градуировочную зависимость для определения флутоланила и его метаболитов М-2, М-4 и М-101 в клубнях картофеля устанавливают по 4 растворам для градуировки с концентрацией 0,025; 0,015; 0,005 и 0,002 мкг/см³ каждого компонента, приготовленным согласно п. 7.2.2.12.

Градуировочную зависимость для определения М-102 в воде и почве устанавливают по 4 растворам для градуировки с концентрацией 0,25; 0,1; 0,05 и 0,02 мкг/см , приготовленным согласно п. 7.2.2.13.

Градуировочную зависимость для определения М-102 в клубнях картофеля устанавливают по 4 растворам для градуировки с концентрацией 0,025; 0,015; 0,005 и 0,002 мкг/см³, приготовленным согласно п. 7.2.2.14.

В инжектор хроматографа вводят по 5 мм³ (при определении флутоланила и его метаболитов М-2, М-4 и М-101) или 10 мм³ (при определении М-102) каждого градуировочного раствора и анализируют в условиях хроматографирования по п. 9.4. Осуществляют не менее 5 параллельных измерений.

7.4. Подготовка и кондиционирование колонки для жидкостной хроматографии

Хроматографическую колонку с предколонкой устанавливают в термостате хроматографа и стабилизируют при температуре 40 °С 3— 4 часа.

8. Отбор проб и хранение

Отбор проб проводится в соответствии с «Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов» №2051—79 от 21.08.79, а также в соответствии с ГОСТ 31861-12 «Вода. Общие требования к отбору проб», ГОСТ 17.4.3.01—83 «Почвы. Общие требования к отбору проб», ГОСТ 28168—89 «Почвы. Отбор проб», ГОСТ 7176-85 «Картофель свежий продовольственный, заготовляемый и поставляемый. Технические условия», ГОСТ Р 51808-13 «Картофель продовольственный. Технические условия», ГОСТ 26832-86 «Картофель свежий для переработки на продукты питания. ТУ».

Пробы воды хранят в стеклянной герметично закрытой таре в холодильнике при температуре 4 °С не более 10 суток.

Для длительного хранения пробы почвы подсушивают при комнатной температуре в отсутствие прямого солнечного света. Сухие почвенные образцы могут храниться в темной таре в течение года. Перед анализом сухую почву просеивают через сито с отверстиями диаметром 1 мм.

Пробы клубней картофеля хранят в холодильнике в полиэтиленовых пакетах при температуре 0—4 °С в течение суток. Для длительного хранения пробы замораживают и хранят в морозильной камере при температуре -18 °С не более 3 лет.

9. Выполнение определения

9.1. Вода

9.1.1. Экстракция

Пробу воды объемом 100 см³ помещают в делительную воронку объемом 250 см³. Добавляют 15 г хлорида натрия и растворяют его путем встряхивания. Подкисляют водную фазу 6 М соляной кислотой до значения pH 2.

Флутоланил и его метаболиты экстрагируют тремя порциями хлористого метилена объемом по 30 см³ каждая, встряхивая делительную воронку каждый раз по 2 минуты. После полного разделения фаз в делительной воронке нижний слой (хлористый метилен) собирают через слой безводного сульфата натрия в концентратор объемом 250 см³ и выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре водяной бани не выше 40 °С.

ББК 51.21 0-60

0-60 Определение остаточных количеств флутоланила и его метаболитов М-2, М-4, М-101 и М-102 в воде, почве и клубнях картофеля методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим детектированием: Методические указания.—М.: Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, 2018.—31 с.

ISBN 978-5-7508-1648-4

1.    Разработаны Российским государственным аграрным университетом - МСХА им. К. А. Тимирязева, Учебно-научный консультационный центр «Агроэкология пестицидов и агрохимикатов» Минсельхоза России (А. В. Довгилсвич, Е. В. Довгилевич, Е. Н. Тестова, Р. А. Стрелецкий).

2.    Рекомендованы к утверждению Комиссией по санитарно-эпидемиологическому нормированию Федеральной службы по надзору в с4>ере зашиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 24 ноября 2017 г. № 1).

3.    Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере зашиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации А. Ю. Поповой 29 декабря 2017 г.

4.    Введены впервые.

ББК 51.21

ISBN 978-5-7508-1648-4

О Роспотребнадзор, 2018

Сухой остаток растворяют в 4 см³ ацетонитрила, пробу переносят в виалу объемом 2 см³ для автоматического дозатора проб и 5 мм³ (при определении флутоланила и его метаболитов М-2, М-4 и М-101) или 10 мм³ (при определении М-102) пробы вводят в хроматограф.

9.2. Почва

9.2.1. Экстракция

При экстракции в каждую банку с пробой и растворителем помещается по 5 шариков для экстракции, которые перед центрифугированием удаляются.

Образец почвы массой 20 г помещают в полипропиленовую банку для экстракции и центрифугирования объемом 200 см³, добавляют 50 см³ подкисленного ацетонитрила (п. 7.2.1.2) и помещают на 5 минут в ультразвуковую ванну, а затем на 15 минут на аппарат для встряхивания проб. Затем пробу центрифугируют в течение 5 минут при скорости

4    000 оборотов в минуту. Супернатант фильтруют через бумажный фильтр низкой плотности в мерный цилиндр объемом 100 см³. Экстракцию повторяют еще два раза, используя по 20 см³ подкисленного ацетонитрила и помещая пробы на 5 минут в ультразвуковую ванну, а затем на 15 минут на аппарат для встряхивания проб. Пробы центрифугируют в течение 5 минут при скорости 4 000 оборотов в минуту. Экстракты фильтруют, объединяют в мерном цилиндре объемом 100 см³. Объем экстракта в цилиндре доводят до метки 100 см³ подкисленным ацетонитрилом.

9.2.2. Подготовка экстракта для определения флутоланила и его метаболитов М-2, М-4 и М-101

Из объединенного экстракта, подготовленного по п. 9.2.1, берут аликвоту 12,5 см³ (V₈ часть), переносят ее в концентратор объемом 100 см³ и выпаривают до объема менее 5 см³ на ротационном вакуумном испарителе при температуре водяной бани не выше 40 °С.

Сконцентрированный экстракт из концентратора переносят в мерный цилиндр объемом 10 см³. Исходную колбу обмывают порцией ацетонитрила, необходимой для получения общего объема экстракта 5 см³ (5 см³ минус объем экстракта, перенесенного в цилиндр), помещают на

5    минут в ультразвуковую ванну и объединяют экстракт с предыдущим в мерном цилиндре объемом 10 см³. К ацетонитрильному экстракту в цилиндре добавляют 5 мл 0,1%-го водного раствора муравьиной кислоты.

Пробу переносят в виалу объемом 2 см³ для автоматического дозатора проб и 5 мм³ пробы вводят в хроматограф.

УТВЕРЖДАЮ Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главный государственный санитарный врач Российской Федерации

А. Ю. Попова

29 декабря 2017 г.

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Определение остаточных количеств флутоланила и его метаболитов М-2, М-4, М-101 и М-102 в воде, почве и

клубнях картофеля методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим детектированием

Методические указания __МУК    4.1.3522—17_

Настоящие методические указания устанавливают порядок применения метода высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим детектированием для определения массовых концентраций флутоланила и его метаболитов, содержащих 2-трифторме-тилбензойные кислотные группы (М-2, М-4, М-101 и М-102) в воде в диапазоне 0,001—0,010 мг/дм³ и в почве в диапазоне 0,01—0,1 мг/кг, а также уровня их остаточных количеств в клубнях картофеля в диапазоне 0,01—0,1 мг/кг. Методические указания носят рекомендательный характер.

Флутоланил

а, а, а-трифтор-З’-изопропокси-орто-толуанилид.

Структурная формула:

СН₃

I

О—сн—сн₃

Эмпирическая формула: Ci₇H₁₆F3N0₂.

Молекулярная масса: 323,34.

Агрегатное состояние: порошок.

Цвет, запах: белого цвета.

Давление паров: 4,1 х КГ⁴ МПа (25 °С).

Коэффициент распределения октанол/вода (при pH 7, 20 °С): Kow logP = 3,17.

Температура плавления: 104,6 °С.

Растворимость в воде (мг/дм³, 20 °С): 8,01.

Растворимость в органических растворителях (г/дм³, при 20 °С): ацетон - 606; этилацетат - 365; метанол - 322; толуол - 35.

Гидролитически стабилен при pH от 5 до 9.

Устойчив в почве, ДТ₅₀: 233 дня.

Краткая токсикологическая характеристика. Флутоланил относится к мало опасным веществам по острой пероральной (ЛДю для крыс более 10 000 мг/кг) и по дермальной токсичности (ЛД50 для крыс более 5 000 мг/кг массы тела) и к умеренно опасным веществам по ингаляционной токсичности (ЛК50 для крыс (4 часа) более 5 980 мг/м³). Не раздражает слизистую глаз и кожу кроликов.

Область применения. Флутоланил - фунгицид из класса оксатии-нов системного действия. Ингибирует комплекс сукцинатдсгидрогена-зы базидиомицстов. Сукцинатдегидрогеназа представляет собой белковый комплекс, который является составной частью внутренней митохондриальной мембраны и ключевым элементом в цепи переноса электронов млекопитающих.

В России установлены следующие гигиенические нормативы: ВДСД - 0,09 мг/кг массы тела человека.

ВМДУ для импортируемой продукции (мг/кг): рис - 2,0; картофель - 0,1.

Метаболиты флутоланила.

М-2

а, а, а-трифтор-4’-тидрокси-3’-изопропокси-орто-толуанилид. Структурная формула:

Эмпирическая формула: CnH|₆F₃N0₃. Молекулярная масса: 339,31.

М-4

а, а, а-трифтор-З’-гидрокси-орто-толуанилид. Структурная формула:

Эмпирическая формула: C|4HioF₃N0₂. Молекулярная масса: 281,23.

М-101

2-(трифторметил)бензамид. Структурная формула:

Эмпирическая формула: C₈H₆F₃NO. Молекулярная масса: 189,13.

М-102

2-(трифторметил)бензойная кислота. Структурная формула:

Эмпирическая формула: C₈H5F₃02.

Молекулярная масса: 190,12.

ВМДУ в импортируемой продукции (мг/кг): рис -2,0; картофель -0,1.

1. Погрешность измерений

При соблюдении всех регламентированных условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и се составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности Р = 0,95 не превышает значений, приведенных в табл. 1 для соответствующих диапазонов концентраций.

Полнота извлечения вещества, стандартное отклонение, доверительные интервалы среднего результата для полного диапазона концентраций (я = 20) приведены в табл. 2.

Таблица 1

Метрологические параметры для флутолаиила и его метаболитов М-2, М-4, М-101 и М-102

Анализи руемый объект Диапазон определяемых концентраций, мг/кг (мг/дм3) Показатель точности (граница относительной погрешности), ±5У % Р - 0,95 Стандартное отклонение повторяемости, ап % Предел повто ряемос ти, г,% Предел воспроизводимости, R, % 1 2 3 4 5 6 Флутоланил Вода 0,001 —0,010 вкл. 40 7 20 28 Почва 0,01—0,10 вкл. 50 3 9 13 Клубни картофеля 0,01—0,10 вкл. 50 5 14 19 М-2 Вода 0,001—0,010 вкл. 40 5 15 21 Почва 0,01—0,10 вкл. 50 3 8 12 Клубни картофеля 0,01—0.10 вкл. 50 4 10 14 М-4 Вода 0,001—0,010 вкл. 40 3 7 10 Почва 0,01—0,10 вкл. 50 3 9 13 Клубни картофеля 0,01—0,10 вкл. 50 6 17 24 М-101 Вода 0,001—0,010 вкл. 40 7 19 27 Почва 0,01—0,10 вкл. 50 3 9 13

МУК 4.1.3522—17

Продолжение табл. 1

Полнота извлечения вещества, стандартное отклонение, доверительный интервал среднего результата для флутоланила и его метаболитов М-2, М-4, М-101 и М-102

Анализируемый объект	Метрологические параметры, Р = 0,95, п ~ 20
	предел обнаружения, мг/кг (мг/дм3)	диапазон определяемых концентраций, мг/кг	полнота извлечения вещества, %	стандартное отклонение, 5, %	доверительный интервал среднего результата, ±, %
Флутоланил
Вода	0,001	0,001-0,010	91,2	7,1	3,0
Почва	0,01	0,01—0,10	91.5	7,7	33
Клубни картофеля	0,01	0,01—0,10	95,4	4,3	1,9
М-2
Вода	0,001	0,001—0,010	87,1	7,9	3,2
Почва	0,01	0,01—0,10	883	6,0	2,5
Клубни картофеля	0,01	0,01—0,10	91,6	3,2	1,4
Вода	0,001	0,001—0,010	93,8	4,5	2,0
Почва	0,01	0,01—0,10	90,0	6,2	2,6
Клубни картофеля	0,01	0,01—0,10	93,7	4,4	1,9
М-101
Вода	0,001	0,001—0,010	75,6	4,4	1,6
Почва	0,01	0,01—0,10	100,3	6,8	3,2
Клубни картофеля	0,01	0,01—0,10	94,9	4,8	2,1
М-102
Вода	0,001	0,001—0,010	76,0	4,0	1,4
Почва	0,01	0,01—0,10	76,6	4,5	1,6
Клубни картофеля	0,01	0,01—0,10	83,4	4,8	1,9

2. Метод измерений

Метод основан на определении флутоланила и его метаболитов М-2, М-4, М-101 и М-102 с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии с использованием тандемного масс-спектрометричес-кого детектора (ВЭЖХ-МС-МС).

Определение флутоланила и его метаболитов М-2, М-4, М-101 и М-102 в воде проводится после их экстракции хлористым метиленом из подкисленного образца воды.

Определение флутоланила и его метаболитов М-2, М-4 и М-101 в почве проводится после их экстракции подкисленным ацетонитрилом и дальнейшего концентрирования и разбавления полученного экстракта.

Определение метаболита флутоланила М-102 в почве проводится после его экстракции подкисленным ацетонитрилом и дальнейшей очистки экстракта перераспределением между двумя несмешиваюшимися фазами.

Определение флутоланила и его метаболитов М-2, М-4, М-101 и М-102 в клубнях картофеля проводится после их экстракции подкисленным ацетонитрилом и дальнейшего концентрирования и разбавления полученного экстракта.

Идентификация флутоланила и его метаболитов М-2, М-4, М-101 и М-102 проводится по времени удерживания, наличию характеристических ионов в масс-спектрах хроматографически выделенных веществ и соотношению интенсивностей (площадей) пиков, отвечающих характеристическим ионам идентифицируемых компонентов и аналитических стандартов на регистрируемых ионных масс-хроматограммах. Концентрацию флутоланила и его метаболитов М-2, М-4, М-101 и М-102 определяют по площадям соответствующих хроматографических пиков на ионных масс-хроматограммах по методу абсолютной калибровки.

В предлагаемых условиях анализа метод специфичен. Специфичность метода достигается за счет использования масс-спектрометри-ческого детектора, регистрирующего одновременно несколько специфичных дочерних ионов, характеризующих вещество.

3. Средства измерений, реактивы, вспомогательные устройства и материалы

3.1. Средства измерений Весы аналитические класса точности - специальный (I) с наибольшим пределом взвешивания до 110 г и дискретностью 0,0001 г

Весы лабораторные общего назначения класса точности - средний (III) с наибольшим пределом взвешивания до 400 г и пределом допустимой погрешности ± 0,038 г Колбы мерные на 10, 25, 50,100, 500 и 1 000 см³

Пипетки мерные на 1,0; 2,0; 5,0 и 10,0 см³ рН-метр/милливольтметр с диапазоном измерения G—14 pH; ± 1 999 мВ Система высокоэффективной жидкостной хроматографии с тандемным масс-спектро-метрическим детектором, включающая:

-    модульный жидкостный хроматограф, состоящий из градиентного насоса на два растворителя, позволяющий регулировать поток элюента от 0,001 до 5,0 см³/мин и создавать давление от 0 до 600 бар; вакуумного дегазатора; термостата колонок с двумя независимо нагреваемыми зонами с диапазоном температур от 10 до 80 °С; автоматического дозатора проб с использованием виал на

2 см³. ВЭЖХ-система соединена с тандемным масс-спектрометрическим детектором типа тройная квадруполь с источником ионизации типа электроспрей и оснащенным двумя высокопроизводительными турбо-молекулярными насосами, позволяющим регистрировать отдельные ионы с заданными массами от 5 до 3 000 а.е.м.

-    компьютерную систему обработки данных, контролирующую работу всего прибора, обеспечивающую сбор и хранение всех масс-хроматограмм в процессе проведения хромато-масс-спектрометрического анализа, обеспечивающую обработку результатов измерений, вывод и расчет масс-хроматограмм и количественный анализ

Цилиндры мерные на 10,25,50, 100,500 и 1 000 см³

Примечание. Допускается использование средств измерений с аналогичными или лучшими характеристиками.