Государственное санитарно-эпидемиологическое нормирование _Российской    Федерации_

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Определение остаточных количеств метомила в зеленой массе и зерне кукурузы, семенах подсолнечника и в растительных маслах методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

Методические указания МУК 4Л.3521—17

Издание официальное

Москва • 2018

Федеральная служба по надзору в сфере зашиты прав потребителей и благополучия человека

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Определение остаточных количеств метомила в зеленой массе и зерне кукурузы, семенах подсолнечника и в растительных маслах методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

Методические указания МУК 4.1.3521—17

7.1.2. Очистка ацетона Ацетон помешают в круглодонную колбу со шлифом объемом 4 ООО см³ от аппарата для перегонки растворителей, добавляют к нему марганцовокислый калий из расчета 1 г/дм³.

Ацетон перегоняют при температуре 56,2 °С, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше 56,2 °С, отбрасывают.

7.1.3. Приготовление бидистиллированной воды

Дистиллированную воду помещают в круглодонную колбу со шлифом объемом 4 ООО см³ от аппарата для перегонки растворителей, добавляют к ней марганцовокислый калий из расчета 1 г/дм³ и кипятят в течение 6 часов.

Собирают фракции, отогнанные при температуре 100,0 °С, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше 100,0 °С, отбрасывают.

7.1.4. Очистка хлористого метилена Хлористый метилен промывают равным объемом 5%-го раствора натрия углекислого (безводного), осушают, добавляя в него гранулированный безводный хлористый кальций из расчета не менее 100 г/дм³. Выдерживают его над осушителем в течение 12—24 часов. Затем хлористый метилен сливают с осушителя в круглодонную колбу со шлифом объемом 4 000 см³ аппарата для перегонки растворителей. Хлористый метилен перегоняют при температуре 40,0 °С, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше 40,0 °С, отбрасывают.

7.1.5. Очистка гексана Гексан, содержащий воду, предварительно осушают, добавляя в него гранулированный безводный хлористый кальций из расчета не менее 100 г/дм³. Выдерживают его над осушителем в течение 5—6 часов. Затем гексан сливают с осушителя в круглодонную колбу со шлифом объемом 4 000 см³ аппарата для перегонки растворителей.

Гексан перегоняют при температуре 68,7 °С, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше 68,7 °С, отбрасывают.

7.2. Приготовление растворов для проведения анализа

7.2.1. Приготовление рабочих растворов

7.2.1.1. Приготовление 2%-го раствора сульфата натрия.

В мерную колбу на 1 000 см³ переносят 20 г безводного сульфата натрия, добавляют 200—300 см³ дистиллированной воды, перемешивают до полного растворения и доводят водой объем в колбе до метки.

7.2.2. Приготовление градуировочных растворов

7.2.2.1.    Стандартный раствор Ns / с концентрацией метомила

1.0    мг/см³.

Взвешивают 50 мг метомила в мерной колбе объемом 50 см³. Навеску растворяют в ацетоне и доводят объем до метки ацетонитрилом. Полученный стандартный раствор № 1 используют для приготовления стандартных растворов для хроматографического исследования и установления градуировочной характеристики. Стандартный раствор № 1 хранят в холодильнике в течение 120 суток.

7.2.2.2.    Стандартный раствор № 2 с концентрацией метомила

10.0    мкг/см³.

Из стандартного раствора № 1 отбирают пипеткой 1 см³, помещают в мерную колбу объемом 100 см³ и доводят объем до метки ацетонитрилом. Стандартный раствор № 2 используют для приготовления стандартных растворов для хроматографического исследования и установления градуировочной характеристики. Стандартный раствор № 2 хранят в холодильнике в течение 30 суток.

7.2.2.3.    Стандартный раствор №3 с концентрацией метомила

1.0    мкг/см³.

Из стандартного раствора № 2 отбирают пипеткой 1 см³, помещают в мерную колбу объемом 10 см³ и доводят объем до метки смесью ацетонитрила с водой в соотношении 15:85. Стандартный раствор №3 используют для приготовления стандартных растворов для хроматографического исследования и установления градуировочной характеристики. Стандартный раствор № 3 хранят в холодильнике в течение 7 суток.

7.2.2.4.    Стандартный раствор Ns 4 с концентрацией метомила 0,5 мкг/см³.

Из стандартного раствора № 3 отбирают пипеткой 5 см³, помещают в мерную колбу объемом 10 см³ и доводят объем до метки смесью ацетонитрила с водой в соотношении 15:85. Стандартный раствор №4 используют для хроматографического исследования и установления градуировочной характеристики. Стандартный раствор №4 хранят в холодильнике в течение 7 суток.

7.2.2.5.    Стандартный раствор Ns 5 с концентрацией метомила 0,25 мкг/см³.

Из стандартного раствора № 4 отбирают пипеткой 5 см³, помещают в мерную колбу объемом 10 см³ и доводят объем до метки смесью ацетонитрила с водой в соотношении 85 : 15. Стандартный раствор №5

используют для хроматографического исследования и установления градуировочной характеристики. Стандартный раствор № 5 хранят в холодильнике в течение 7 суток.

7.2.2.6.    Стандартный раствор Ns 6 с концентрацией метомила 0,1 мкг/см³.

Из стандартного раствора № 3 отбирают пипеткой 1 см³, помещают в мерную колбу объемом 10 см³ и доводят объем до метки смесью ацетонитрила с водой в соотношении 15:85. Стандартный раствор №6 используют для хроматографического исследования и установления градуировочной характеристики. Стандартный раствор № 6 хранят в холодильнике в течение 7 суток.

7.2.2.7.    Стандартные растворы метачила в ацетонитриле с концентрацией 2,0; 1,0; 0,5 и 0,2 мкг/см³ для внесения в контрольные образцы.

Методом последовательного разведения ацетонитрилом стандартного раствора №2 готовят растворы, содержащие по 2,0; 1,0; 0,5 и 0,2 мкг/см³ и используют эти растворы для внесения в контрольные образцы. Стандартные растворы для внесения хранят в холодильнике не более 7 суток.

7.2.2.8.    Стандартные растворы метомила в ацетоне с концентрацией 2,0; 1,0; 0,5 и 0,2 мкг/см³ для внесения в контрольные образцы растительных масел.

Методом последовательного разведения ацетоном стандартного раствора №2 готовят растворы, содержащие по 2,0; 1,0; 0,5 и 0,2 мкг/см³ и используют эти растворы для внесения в контрольные образцы растительных масел. Стандартные растворы для внесения хранят в холодильнике не более месяца.

7.3. Установление градуировочной характеристики

Градуировочную характеристику, выражающую зависимость площади (высоты) пика от концентрации метомила в растворе (мкг/см³), устанавливают методом абсолютной калибровки по 4 растворам для градуировки с концентрацией 1,0; 0,5; 0,25 и 0,1 мкг/см³.

В испаритель хроматографа вводят по 20 мм³ каждого градуировочного раствора и анализируют в условиях хроматографирования по п. 9.4. Осуществляют не менее 5 параллельных измерений.

7.4. Подготовка колонки с флоризилом для очистки экстракта и проверка хроматографического поведения метомила на ней

7.4.1. Подготовка колонки с флоризилом для очистки экстракта В пластиковую или стеклянную колонку диаметром 15 мм помешают 4 г флоризила с зернением 60/100 меш и, аккуратно постукивая по стенкам колонки, формируют слой адсорбента. На слой флоризила наносят слой безводного сернокислого натрия толщиной 1 см.

За день перед использованием колонку промывают 15 см³ ацетона, тщательно отжимают, а непосредственно перед использованием колонку промывают 15 см³ гексана.

7.4.2. Проверка хроматографического поведения метомила на колонке с флоризилом В концентратор объемом 100 см³ вносят 1 см³ стандартного раствора метомила в ацетонитриле с концентрацией 1,0 мкг/см³ и выпаривают его досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °С. Сухой остаток растворяют в 1 см³ ацетона, тщательно обмывая стенки концентратора, добавляют 4 см³ гексана, перемешивают и наносят на подготовленную колонку. Элюат собирают в концентратор и выпаривают досуха при температуре не выше 30 °С. Исходную колбу обмывают 10 см³ смеси гексана с ацетоном в соотношении 4:1, вносят на колонку. Затем колонку последовательно промывают шестью порциями смеси гексана с ацетоном в соотношении 1 : 2 объемом 5 см³ каждая. Каждую порцию собирают отдельно в концентраторы и выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °С.

Сухой остаток растворяют в 2 см³ смеси ацетонитрила с водой в соотношении 15 : 85 и 20 мм³ пробы вводят в хроматограф.

Определяют фракции, содержащие метомил, полноту смывания с колонки и необходимый объём элюата.

Изучение поведения метомила на колонке проводят каждый раз при отработке методики или поступлении новой партии флоризила.

7.5. Подготовка колонки с окисью алюминия для очистки экстракта и проверка хроматографического поведения метомила на ней

7.5.1. Подготовка колонки с окисью алюминия для очистки экстракта В пластиковую или стеклянную колонку диаметром 15 мм помещают 5 г окиси алюминия с зернением 40/250 меш и, аккуратно посту-

кивая по стенкам колонки, формируют слой адсорбента. Непосредственно перед использованием колонку промывают 10 см³ ацетонитрила.

7.5.2. Проверка хроматографического поведения метомила на колонке с окисью алюминия

В концентратор объемом 100 см³ вносят 1 см³ стандартного раствора метомила в ацетонитриле с концентрацией 1,0 мкг/см* и выпаривают его досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °С. Сухой остаток растворяют в 5 см³ ацетонитрила, тщательно обмывают стенки концентратора и наносят на подготовленную колонку. Элюат собирают в концентратор и выпаривают досуха при температуре не выше 30 °С.

Исходный концентратор последовательно обмывают пятью порциями по 5 см³ ацетонитрила. Каждую порцию собирают отдельно в концентраторы объемом по 100 см³ и выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °С.

Сухой остаток растворяют в 2 см³ смеси ацетонитрила с водой в соотношении 15 : 85 и 20 мм³ пробы вводят в хроматограф.

Определяют фракции, содержащие метомил, полноту смывания с колонки и необходимый объём элюата.

Изучение поведения метомила на колонке проводят каждый раз при отработке методики или поступлении новой партии окиси алюминия.

8. Отбор и хранение проб

Отбор проб проводится в соответствии с «Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов» №2051-79 от 21.08.79, а также в соответствии с ГОСТ 13586.3-83 «Зерно. Правила приемки и методы отбора проб», ГОСТ Р ИСО 6497-11 «Корма для животных. Отбор проб», ГОСТ 10852—86 «Семена масличные. Правила приемки и методы отбора проб», ГОСТ 22391-89 «Подсолнечник. Требования при заготовках и поставках», ГОСТ 1129-13 «Масло подсолнечное. ТУ», ГОСТ 8808— 2000 «Масло кукурузное. ТУ», ГОСТ Р 53510-09 «Масло соевое. ТУ», ГОСТ 32190-13 «Масла растительные. Правила приемки и методы отбора проб».

Пробы зеленой массы кукурузы хранят в холодильнике в полиэтиленовых пакетах при температуре 0—4 °С в течение суток. Для дли-

тельного хранения пробы замораживают и хранят в морозильной камере при температуре -18 °С.

Отобранные пробы семян подсолнечника и зерна кукурузы подсушивают до стандартной влажности и хранят в бумажных или тканевых мешочках в сухом, хорошо проветриваемом шкафу, недоступном для грызунов.

Пробы растительных масел хранят в стеклянной герметично закрытой таре в холодильнике при температуре 4 °С не более 10 суток.

9. Выполнение определения

9.1. Зеленая масса и зерно кукурузы

9.1.1. Экстракция и очистка полученного экстракта перераспределением в системе несмешивающихся растворителей

Образец измельченной зеленой массы массой 10 г или зерна кукурузы массой 20 г помещают в полипропиленовую банку для экстракции объемом 250 см³, прибавляют 50 см^ ацетонитрила и помещают на 30 минут на аппарат для встряхивания проб. Ацетонитрильный экстракт фильтруют в делительную воронку объемом 250 см* через бумажный фильтр низкой плотности. Экстракцию повторяют двумя порциями ацетонитрила объемом по 40 см³ каждая, помещая каждый раз на 15 минут на аппарат для встряхивания проб. Экстракты фильтруют и объединяют в делительной воронке объемом 250 см³.

К ацетонитрильному экстракту прибавляют 50 см³ гексана и встряхивают делительную воронку 2 минуты. После полного разделения фаз в делительной воронке верхний слой (гексан) отбрасывают, а нижний слой (ацетонитрил) возвращают в делительную воронку и повторяют процедуру еще раз, используя 50 см³ гексана. Нижний ацетонитрильный слой собирают в концентратор объемом 250 см³, пропуская его через слой безводного сульфата натрия, и выпаривают до водного остатка при температуре не выше 30 °С.

9.1.2. Очистка экстракта перераспределением в системе несмешивающихся растворителей

Сухой остаток, полученный по п. 9.1.1, растворяют в 3 см³ ацетона, тщательно обмывая стенки концентратора, прибавляют 50 см³ 2%-го раствора сульфата натрия, тщательно обмывая стенки концентратора, и переносят смыв в делительную воронку объемом 250 см³. Затем концентратор обмывают еще 50 см³ 2%-го раствора сульфата натрия, и все смывы объединяют в делительной воронке.

Метомил экстрагируют тремя порциями хлористого метилена объемом по 30 см³, каждый раз встряхивая делительную воронку 2 минуты. После полного разделения фаз в делительной воронке нижний слой (хлористый метилен) собирают в концентратор объемом 250 см³ через слой безводного сульфата натрия. Осушитель обмывают 10 см³ хлористого метилена, объединяют смыв с основным экстрактом и выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °С.

Далее проводят очистку пробы на колонках с флоризилом.

9.1.3. Очистка экстракта на колонке с флоризилом

Сухой остаток, полученный по п. 9.1.2, растворяют в 1 см³ ацетона, тщательно обмывая стенки концентратора, добавляют 4 см³ гексана, перемешивают и вносят на подготовленную колонку. Колонку промывают сначала 10 см³ смеси гексана с ацетоном в соотношении 4 : 1, а затем 5 см³ смеси гексана с ацетоном в соотношении 1 :2, элюаты отбрасывают. Метомил элюируют с колонки 25 см³ смеси гексана с ацетоном в соотношении 1 : 2, элюат собирают в концентратор объемом 100 см³ и выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °С.

9.1.4. Очистка экстракта на колонке с окисью алюминия

Сухой остаток, полученный в п. 9.1.3, растворяют в 5 см³ ацетонитрила, тщательно обмывают стенки концентратора и вносят на подготовленную колонку с 5 г окиси алюминия, элюат отбрасывают. Метомил элюируют с колонки 25 см³ ацетонитрила, элюат собирают в концентратор объемом 100 см³ и выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °С.

Сухой остаток растворяют в 2 см³ смеси ацетонитрила с водой в соотношении 15 : 85 и 20 мм³ пробы вводят в хроматограф.

9.2. Растительные масла

9.2.1. Экстракция и очистка полученного экстракта перераспределением в системе несмешивающихся растворителей

Из пробы растительного масла отбирают навеску массой 20 г и помещают в полипропиленовую банку для экстракции объемом 250 см³. Навеску растворяют в 50 см³ гексана, прибавляют туда 50 см³ ацетонитрила и помещают на 5 минут в ультразвуковую ванну, а затем на аппарат для встряхивания проб на 10 минут. После этого содержимое банки переносят в делительную воронку объемом 250 см³. После полного разде-

ления фаз в делительной воронке нижний ацетонитрильный слой собирают в стакан объемом 250 см³, а верхний слой (гексан) возвращают в банку для экстракции объемом 250 см³ и повторяют экстракцию дважды в тех же условиях. Ацетонитрил объединяют в стакане объемом 250 см³, а гексан отбрасывают.

Объединенный ацетонитрильный экстракт возвращают в чистую делительную воронку объемом 250 см³ и промывают двумя порциями гексана объемом 50 см³, встряхивая делительную воронку 2 минуты. Гексан отбрасывают, а ацетонитрил собирают в концентратор объемом 250 см³ через слой безводного сульфата натрия и выпаривают до маслянистого остатка на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °С.

Далее проводят очистку экстракта как указано в п. 9.1.2 «Очистка экстракта перераспределением в системе несмешивающихся растворителей» и п. 9.1.4 «Очистка экстракта на колонке с окисью алюминия».

Сухой остаток растворяют в 2 см³ смеси ацетонитрила с водой в соотношении 15 : 85 и 20 мм³ пробы вводят в хроматограф.

9.3. Семена подсолнечника

9.3.1. Экстракция

Образец измельченных семян массой 20 г помещают в полипропиленовую банку для экстракции объемом 250 см³, прибавляют 50 см³ ацетонитрила и помещают на 10 минут в ультразвуковую ванну, а затем на аппарат для встряхивания проб на 5 минут. Ацетонитрильный экстракт фильтруют в концентратор объемом 250 см³ через бумажный фильтр низкой плотности. Экстракцию повторяют двумя порциями ацетонитрила объемом по 50 см³ каждая, помещая каждый раз на 10 минут в ультразвуковую ванну, а затем на аппарат для встряхивания проб на 5 минут. Экстракты фильтруют и объединяют в концентраторе объемом 250 см³ и выпаривают до маслянистого остатка на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °С.

9.3.2. Очистка экстракта перераспределением в системе несмешивающихся растворителей

К масляному остатку в концентраторе, полученному по п. 9.3.1, прибавляют 50 см³ гексана, перемешивают, тщательно обмывая стенки концентратора, и переносят в делительную воронку объемом 250 см³. Метомил экстрагируют тремя порциями ацетонитрила объемом по 20 см³, каждый раз интенсивно встряхивая воронку 2 минуты. После полного разделения фаз в делительной воронке нижний слой (ацетонит-

рил) объединяют в конической колбе объемом 250 см³. Гексан отбрасывают.

Ацетонитрильный экстракт переносят в чистую делительную воронку объемом 250 см³ и промывают двумя порциями гексана по 50 см³, каждый раз интенсивно встряхивая воронку 2 минуты. Ацетонитрил собирают в концентратор объемом 250 см³, пропуская его через слой безводного сульфата натрия, и упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °С.

Далее проводят очистку экстракта как указано в п. 9.1.2 «Очистка экстракта перераспределением в системе несмешивающихся растворителей», 9.1.3 «Очистка экстракта на колонке с флоризилом» и п. 9.1.4 «Очистка экстракта на колонке с окисью алюминия».

Сухой остаток растворяют в 2 см³ смеси ацетонитрила с водой в соотношении 15 : 85 и 20 мм³ пробы вводят в хроматограф.

9.4. Условия хроматографирования

Хроматографическая система, включающая:

- хроматограф жидкостный с диодно-матричным детектором, снабженный термостатом для колонок с диапазоном температур от 15 до 80 °С и с возможностью использования стандартного автосамплера с дозирующим объемом от 0,1 до 100,0 мм³ для автоматического ввода пробы в хроматографическую систему;

-компьютерное программное обеспечение, контролирующее работу всего прибора, обеспечивающее сбор и хранение всех хроматограмм в процессе проведения хроматографического анализа, обеспечивающее обработку результатов измерений, вывод и расчет хроматограмм и количественный анализ.

Колонка хроматографическая стальная длиной 150 мм с внутренним диаметром 4,6 мм, зернением 5 мкм, заполненная сорбентом с привитыми полярными группами С18.

Предколонка хроматографическая с внутренним диаметром 4,6 мм, зернением 5 мкм, заполненная сорбентом с привитыми полярными группами С18.

Температура колонки: 30 °С.

Подвижная фаза: ацетонитрил-вода в соотношении 15 : 85.

Скорость потока элюента: 0,7 см³/мин.

Длина волны: 233 нм.

Чувствительность не менее 10 mAU (миллиединиц абсорбции) на шкалу.

Объем вводимой пробы: 20 мм³.

Линейный диапазон детектирования сохраняется в пределах 2—20 нг.

10. Обработка результатов

Для обработки результатов хроматографического анализа используют компьютерное программное обеспечение химического анализа, которое входит в хроматографическую систему.

Альтернативная обработка результатов.

Содержание метомила в пробах рассчитывают по формуле без учета полноты извлечения вещества из проб:

S_WAV

_ ^пр

“ 100-S_m-m

X- содержание метомила в пробе, мг/кг;

- высота (площадь) пика стандарта, мм;

S_np - высота (площадь) пика образца, мм;

А - концентрация стандартного раствора, мкг/см³;

V - объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, см³; т - масса анализируемого образца, г (см³);

Р - содержание метомила в аналитическом стандарте, %.

11. Проверка приемлемости результатов параллельных определений

За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предела повторяемости:

Xh Х₂ - результаты параллельных определений, мг/кг; г - значение предела повторяемости (табл. 1), при этом г = 2,8 х о_г. При невыполнении условия (1) выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.

12. Оформление результатов

Результат анализа представляют в виде:

( X ± Д) мг/кг при вероятности Р = 0,95, где

X - среднее арифметическое результатов определений, признанных приемлемыми, мг/кг;

ББК 51.23 0-60

0-60 Определение остаточных количеств метомила в зеленой массе и зерне кукурузы, семенах подсолнечника и в растительных маслах методом высокоэффективной жидкостной хроматографии: Методические указания.—М.: Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, 2018.—23 с.

ISBN 978-5-7508-1655-2

1.    Разработаны Российским государственным аграрным университетом - МСХА им. К.А. Тимирязева, Учебно-научный консультационный центр «Агроэкология пестицидов и агрохимикатов» Минсельхоза России (А. В. Довгилевич, Е. В. Довгилевич, Ю. Н. Савуш-кин, Е. Н. Тестова).

2.    Рекомендованы к утверждению Комиссией по санитарно-эпидемиологическому нормированию Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 24 ноября 2017 г. № 1).

3.    Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации А. Ю. Поповой 29 декабря 2017 г.

4.    Введены впервые.

ББК S1.23

ISBN 978-5-7508-1655-2

О Роспотребнадзор, 2018

Л - граница абсолютной погрешности, мг/кг:

б - граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций, табл. 1), %.

В случае если содержание компонента менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде:

«.содержание вещества в пробе менее 0,01 мг/кг*».

* 0,01 мг/кг - предел обнаружения.

13. Контроль качества результатов измерений

Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений, а также контроль стабильности градуировочной характеристики осуществляется в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-1-6-02 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений».

13.1. Контроль стабильности градуировочной характеристики.

Контроль стабильности градуировочной характеристики проводят в начале и по окончании каждой серии анализов.

При контроле стабильности градуировочной характеристики проводят измерения не менее трех образцов концентраций для градуировки, содержание метомила в которых должно охватывать весь диапазон концентраций от 0,1 до 1,0 мкг/см³.

Градуировочная характеристика считается стабильной, если для каждого из используемого для контроля градуировочного раствора сохраняется соотношение:

(JT--С)-100 С

X- концентрация метомила контрольного измерения, мкг/см³;

С - известная концентрация градуировочного раствора метомила в смеси ацетонитрила с водой в соотношении 15 : 85, взятая для контроля стабильности градуировочной характеристики, мкг/см³;

3 - погрешность градуировочной характеристики, %.

Если величина расхождения (А) превышает 3 %, делают вывод о невозможности применения градуировочной характеристики для дальнейших измерений. В этом случае выясняют и устраняют причины нестабильности градуировочной характеристики и повторяют контроль ее стабильности с использованием других градуировочных растворов ме-

УТВЕРЖДАЮ Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере зашиты прав потребителей и благополучия человека. Главный государственный санитарный врач Российской Федерации

А. Ю. Попова

29 декабря 2017 г.

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Определение остаточных количеств метомила в зеленой массе и зерне кукурузы, семенах подсолнечника и в растительных маслах методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

Методические указания _МУК    4.13521—17_

Настоящие методические указания устанавливают порядок применения метода высокоэффективной жидкостной хроматографии для определения уровня остаточных количеств метомила в зеленой массе в диапазоне 0,02—0,2 мг/кг, в зерне кукурузы, семенах подсолнечника и в растительных маслах - в диапазоне 0,01—0,1 мг/кг. Методические указания носят рекомендательный характер.

Метомил

S-метил Ы-[[(метиламино)карбонил]окси]этанимидотиоат.

Структурная формула:

Эмпирическая формула: C5H10N2O2S.

Молекулярная масса: 162,2.

Агрегатное состояние: кристаллическое вещество.

Цвет, запах: белое вещество со слабым запахом серы.

Давление паров (при 25 °С): 0,72 МПа.

Температура плавления: 78—79 °С.

Коэффициент распределения октанол-вода: К** log P_ow= 0,093.

Растворимость в воде (г/дм³, при 25 °С): 57,9.

Растворимость в органических растворителях (г/дм³, при 25 °С): метанол - 1 ООО; ацетон - 730; этанол - 420; изопропанол - 220; толуол -30.

Метомил стабилен в воде в течение 30 дней (при 25 °С, pH 5 и 7); ДТ₅₀ около 30 дней (при 25 °С, pH 9). Термо- и фотостабилен.

Краткая токсикологическая характеристика. Метомил относится к веществам чрезвычайно опасным по острой оральной (ЛД50 для крыс

-    34 мг/кг), умеренно опасным по дермальной (ЛД50 для кроликов более 2 000 мг/кг) токсичностям и чрезвычайно опасным веществам по ингаляционной токсичности (ЛК50 (4 часа) для крыс 300 мг/м³ воздуха).

Область применения. Метомил - инсектицид и акарицид из группы карбаматов, ингибитор холинэстеразы желудочно-кишечного действия.

Применяется в России в качестве инсектицида широкого спектра действия для борьбы с вредителями плодовых и цитрусовых культур, винограда, хлопчатника, кукурузы, риса, табака, овощных культур при норме расхода 1—2 л/га по препарату.

В России установлены следующие гигиенические нормативы: ДСД

-    0,01 мг/кг массы человека; ПДК в воде водоемов - 0,1 мг/дм³; ОДК в почве - 0,1 мг/кг; ОБУВ в воздухе рабочей зоны - 0,1 мг/м³; в атмосферном воздухе - 0,001 мг/м³; МДУ в продукции (мг/кг): лук - 0,2; томаты - 1,0; капуста - 0,03; виноград и плодовые семечковые - 0,3; горюх - 1,0.

ВМДУ в импортируемой продукции (мг/кг): зерно кукурузы - 0,02, семена подсолнечника - 0,05.

1. Погрешность измерений

При соблюдении всех регламентированных условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности Р = 0,95 не превышает значений, приведенных в табл. 1 для соответствующих диапазонов концентраций.

Полнота извлечения вещества, стандартное отклонение, доверительные интервалы среднего результата для полного диапазона концентраций (п = 20) приведены в табл. 2.

Таблица 1 Метрологические параметры для метомила

Анализируемый объект Диапазон определяемых концентраций, мг/кг Показатель точности (граница относительной погрешности), ±6, %, Р = 0,95 Стандартное отклонение повторяемости, ап % 11редел повторяемости, г, % Предел воспро изводи мости, я,% Зеленая масса кукурузы 0,02—0,05 вкл. 50 4 10 14 0,1—0,2 вкл. 25 10 27 37 Зерно кукурузы 0,01—0,1 вкл. 50 4 12 17 Семена подсолнечника 0,01—0,1 вкл. 50 3 8 11 Растительные масла 0,01—0,1 вкл. 50 4 10 14

Таблица 2 Полнота извлечения вещества, стандартное отклонение, доверительный интервал среднего результата для метомила

Анализируемый объект Метрологические параметры, Р = 0,95, п = 20 предел обнару жения, мг/кг диапазон определяемых концентраций, мг/кг полнота извлечения вещества, % стандартное отклонение, S,% доверительный интервал среднего результата, ±, % Зеленая масса кукурузы 0,02 0,01—0,1 85,0 5,8 2,3 Зерно кукурузы 0,01 0,01-0,1 75,0 3,7 1.3 Семена подсолнечника 0,01 0,02—0,1 78,1 1.9 0,7 Растительные масла 0,01 0,01—0,1 75.6 2,4 0,9

2. Метод измерений

Метод основан на определении метомила с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с использованием диодно-матричного детектора после его экстракции из образцов органическим растворителем, очистки экстракта перераспределением между двумя несмешивающимися фазами и на колонках с флоризилом и окисью алюминия.

Идентификация вещества проводится по времени удерживания, а количественное определение - методом абсолютной калибровки.

В предлагаемых условиях анализа метод специфичен. Специфичность обеспечивается подбором колонки и условий программирования.

3. Средства измерений, реактивы, вспомогательные устройства и материалы

ЗА. Средства измерении

Весы аналитические класса точности - специальный (I) с наибольшим пределом взвешивания до 110 г и дискретностью 0,0001 г Весы лабораторные общего назначения класса точности - средний (III) с наибольшим пределом взвешивания до 400 г и пределом допустимой погрешности ± 0,5 г Колбы мерные на 10, 50, 100, 500 и 1 000 см³ Пипетки мерные на 1,0; 2,0 и 5,0 см³ Хроматографическая система, включающая:

-    хроматограф жидкостный с диодноматричным детектором, снабженный термостатом для колонок с диапазоном температур от 15 до 80 °С и с возможностью использования стандартного автосамплера с дозирующим объемом от 0,1 до 100 мм³ для автоматического ввода пробы в хроматографическую систему;

-    компьютерное программное обеспечение, контролирующее работу всего прибора, обеспечивающее сбор и хранение всех хроматограмм в процессе проведения хроматографического анализа, обеспечивающее обработку результатов измерений, вывод и расчет хроматограмм и количественный анализ

Цилиндры мерные на 10, 25 и 50 см³

Примечание. Допускается использование средств измерений с аналогичными или лучшими характеристиками.

3.2. Реактивы Метомил, CAS 16752-77-5, аналитический стандарт с содержанием действующего вещества не менее 99,8 %

Алюминий окись для хроматографии, ч Ацетон, осч

Ацетонитрил, осч, УФ-200 нм Вода дистиллированная и (или) бидистилли-рованная (вода дистиллированная, перегнанная повторно в стеклянной емкости) n-Г ексан, хч

Калий марганцовокислый, чда Кальций хлористый, ч Метилен хлористый, хч Натрий сернокислый, безводный, хч Натрий углекислый, кислый, хч Флоризил (Магния силикат, 99 %, CAS 1343-88-0) для колоночной хроматографии, зернение 60/100 меш

Примечание. Допускается использование реактивов с аналогичными или лучшими характеристиками.

3.3. Вспомогательные устройства и материалы

Алонж прямой с отводом для вакуума для работы с концентрирующими патронами Аппарат для встряхивания проб с возвратнопоступательным направлением колебаний, с максимальной загрузкой 10 кг, с амплитудой колебаний 30 мм и скоростью от 10 до 300 колебаний в минуту

Банки полипропиленовые с крышками для экстракции вместимостью 250 см³ Ванна ультразвуковая с потребляемой мощностью 140 Вт, рабочей частотой 50 Гц, рабочим объемом 4,5 дм³

Вата медицинская гигроскопическая хлопковая нестерильная Воронки делительные на 250 см³ Воронки лабораторные стеклянные Испаритель ротационный вакуумный с ручным подъемником, с диагональным конденсо-

ром и объемом испарительной колбы от 50 до 3 ООО см³, с изменяемой скоростью вращения штока испарителя от 5 до 240 об./мин, с водяной баней с антикоррозионным покрытием объемом 5 дм³ и с диапазоном температур от 20 до 100 °С

Колбы конические плоскодонные на 100, 250 и 1 000 см³

Колбы круглодонные со шлифом (концентраторы) на 100,250 см³ и 4 000 см³ ТС Колонка хроматографическая стальная длиной 150 мм с внутренним диаметром 4,6 мм, зернением 5 мкм, заполненная сорбентом с привитыми полярными группами С18 Насос диафрагменный химически стойкий на 100 % с мощностью электропривода 245 Вт, предельным вакуумом 100 мбар/абс, с избыточным давлением 1 бар и скоростью откачки 34 дм³/мин

Предколонка хроматографическая с внутренним диаметром 4,6 мм, зернением 5 мкм, заполненная сорбентом с привитыми полярными группами С18

Стаканы стеклянные термостойкие объемом 100—2 000 см³

Установка для перегонки растворителей с круглодонной колбой объемом 4 000 см³ и приемной конической колбой объемом 1 000 см³ Фильтры обеззоленные нейтральные быстро фильтрующие диаметром 11 см, зольность одного фильтра 0,00072 г

Примечание. Допускается применение оборудования с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.

4. Требования безопасности 4.1. При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007—76, требования электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019-09, а также требования, изложенные в технической документации на жидкостный хроматограф.

4.2. Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности по ГОСТ 12.1.004-90 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009-83. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать норм, установленных ГН 2.2.5.1313—03 «Предельно допустимые концентрации (ПДК) вредных веществ в воздухе рабочей зоны». Организация обучения работников безопасности труда - по ГОСТ 12.0.004—90.

5. Требования к квалификации операторов

Измерения в соответствии с настоящей методикой может выполнять специалист, имеющий опыт работы на жидкостном хроматографе, освоивший данную методику и подтвердивший экспериментально соответствие получаемых результатов нормативам контроля погрешности измерений.

6. Условия измерений

При выполнении измерений соблюдают следующие условия:

-    процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха (20 ± 5) °С, относительной влажности не более 80 % и нормальном атмосферном давлении;

-    выполнение измерений на жидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

7. Подготовка к выполнению измерений

Выполнению измерений предшествуют следующие операции: очистка растворителей (при необходимости), приготовление растворов, кондиционирование хроматографической колонки, подготовка колонок с окисью алюминия и флоризилом для очистки экстракта, проверка хроматографического поведения вещества на колонках с окисью алюминия и флоризилом, установление градуировочной характеристики.

7.1. Подготовка органических растворителей

7.1.1. Очистка ацетонитрила

Ацетонитрил, содержащий воду, предварительно осушают, добавляя в него гранулированный безводный хлористый кальций из расчета не менее 100 г/дм³. Выдерживают его над осушителем в течение 5—6 часов. Затем ацетонитрил сливают с осушителя в круглодонную колбу со шлифом объемом 4 000 см³ аппарата для перегонки растворителей.

Ацетонитрил перегоняют при температуре 81,5 °С, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше 81,5 °С, отбрасывают.