Государственное санитарно-эпидемиологическое нормирование _Российской    Федерации_

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Определение остаточных количеств пенцикурона в зерне и соломе зерновых колосовых культур методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

Методические указания МУК 4.1.3519—17

Издание официальное

Москва • 2018

Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Определение остаточных количеств пенцикурона в зерне и соломе зерновых колосовых культур методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

Методические указания МУК 4.1.3519—17

7.1.    Подготовка органических растворителей

7.1.1. Очистка ацетонитрила

Ацетонитрил, содержащий воду, предварительно осушают, добавляя в него гранулированный безводный хлористый кальций из расчета не менее 100 г/дм³. Выдерживают его над осушителем в течение 5—6 часов. Затем ацетонитрил сливают с осушителя в круглодонную колбу со шлифом объемом 4 ООО см³ аппарата для перегонки растворителей.

Ацетонитрил перегоняют при температуре 81,5 °С, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше 81,5 °С, отбрасывают.

7.1.2. Приготовление бидистиллированной воды

Дистиллированную воду помещают в круглодонную колбу со шлифом объемом 4 ООО см³ от аппарата для перегонки растворителей, добавляют к ней марганцовокислый калий из расчета 1 г/дм³ и кипятят в течение 6 часов.

Собирают фракции, отогнанные при температуре 100,0 °С, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше 100,0 °С, отбрасывают.

7.2. Приготовление растворов для проведения анализа

7.2.1.    Приготовление градуировочных растворов

7.2.1.1.    Стандартный раствор Ns 1 с концентрацией пенцикурона

100.0    мг/см³.

Взвешивают 10 мг пенцикурона в мерной колбе объемом 100 см³. Навеску растворяют в ацетонитриле и доводят объем до метки ацетонитрилом. Полученный стандартный раствор № 1 используют для приготовления стандартных растворов для хроматографического исследования и установления градуировочной характеристики. Стандартный раствор № 1 хранят в холодильнике в течение 120 суток.

7.2.1.2.    Стандартный раствор Ns 2 с концентрацией пенцикурона

10.0    мкг/см³.

Из стандартного раствора № 1 отбирают пипеткой 1 см³, помещают в мерную колбу объемом 10 см³ и доводят объем до метки ацетонитрилом. Стандартный раствор № 2 используют для приготовления стандартных растворов для хроматографического исследования и установления градуировочной характеристики. Стандартный раствор № 2 хранят в холодильнике в течение 30 суток.

7.2.1.3.    Стандартный раствор Ns 3 с концентрацией пенцикурона

1.0    мкг/см³.

Из стандартного раствора № 2 отбирают пипеткой 1 см³, помещают в мерную колбу объемом 10 см³ и доводят объем до метки смесью аце-

тонитрила с водой в соотношении 70: 30. Стандартный раствор № 3 используют для установления градуировочной характеристики и хранят в холодильнике в течение 7 суток.

7.2.1.4.    Стандартный раствор Ms 4 с концентрацией пенцикурона 0,5 мкг/см³.

Из стандартного раствора № 3 отбирают пипеткой 5 см³, помещают в мерную колбу объемом 10 см³ и доводят объем до метки смесью ацетонитрила с водой в соотношении 70:30. Стандартный раствор Ns 4 используют для установления градуировочной характеристики и хранят в холодильнике в течение 7 суток.

7.2.1.5.    Стандартный раствор Ms 5 с концентрацией пенцикурона 0,2 мкг/см³.

Из стандартного раствора № 3 отбирают пипеткой 2 см³, помещают в мерную колбу объемом 10 см³ и доводят объем до метки смесью ацетонитрила с водой в соотношении 70: 30. Стандартный раствор № 5 используют для установления градуировочной характеристики и хранят в холодильнике в течение 7 суток.

7.2.1.6.    Стандартный раствор Ms 6 с концентрацией пенцикурона 0,1 мкг/см³.

Из стандартного раствора № 3 отбирают пипеткой 1 см³, помещают в мерную колбу объемом 10 см³ и доводят объем до метки смесью ацетонитрила с водой в соотношении 70 :30. Стандартный раствор № 6 используют для установления градуировочной характеристики и хранят в холодильнике в течение 7 суток.

7.2.1.7.    Стандартные растворы пенцикурона с концентрацией 5,0; 2,5; 2,0; 1,0; 0,5 и 0,25 мкг/см³ для внесения в контрольные образцы.

Из стандартного раствора № 2 методом последовательного разведения ацетонитрилом готовят растворы, содержащие по 5,0; 2,5; 2,0; 1,0; 0,5 и 0,25 мкг/см³ пенцикурона и используют их для внесения в контрольные образцы. Стандартные растворы для внесения хранят в холодильнике не более месяца.

7,3, Установление градуировочной характеристики

Градуировочную характеристику, выражающую зависимость площади (высоты) пика от концентрации пенцикурона в растворе (мкг/см³), устанавливают методом абсолютной калибровки по 4 растворам для градуировки с концентрацией 1,0; 0,5; 0,2 и 0,1 мкг/см³.

В инжектор хроматографа вводят по 20 мм³ каждого градуировочного раствора и анализируют в условиях хроматографирования по п. 9.3. Осуществляют не менее 5 параллельных измерений.

7.4. Подготовка колонки с флоризилом для очистки экстракта и проверка хроматографического поведения пенцикурона на ней

7.4.1. Подготовка колонки с флоризилом для очистки экстракта В пластиковую или стеклянную колонку диаметром 15 мм помещают 4 г флоризила с зернением 60/100 меш и, аккуратно постукивая по стенкам колонки, формируют слой адсорбента. На слой флоризила наносят слой безводного сернокислого натрия толщиной 1 см.

Непосредственно перед использованием колонку последовательно промывают 10 см³ смеси гексана с этилацетатом в соотношении 1 : 1, а затем 20 см³ гексана.

7.4.2. Проверка хроматографического поведения пенцикурона на колонке с флоризилом В концентратор объемом 100 см³ вносят 1 см³ стандартного раствора пенцикурона в ацетонитриле с концентрацией 1,0 мкг/см³ и выпаривают его досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °С. Сухой остаток растворяют в 2 см³ этилацетата, тщательно обмывая стенки концентратора, добавляют 8 см³ гексана, перемешивают и наносят на подготовленную колонку. Элюат собирают в концентратор объемом 100 см³, упаривают досуха, сухой остаток растворяют в 2 см³ смеси ацетонитрила с водой в соотношении 70 :30 и 20 мм³ пробы вводят в хроматограф.

Исходную колбу обмывают 15 см³ смеси гексана с этилацетатом в соотношении 2:1, вносят на сорбент в колонке. Элюат собирают и упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °С.

Сухой остаток растворяют в 2 см³ смеси ацетонитрила с водой в соотношении 70 : 30 и 20 мм³ пробы вводят в хроматограф.

Определяют фракции, содержащие пенцикурон, полноту смывания с колонки и необходимый объём элюата.

Изучение поведения пенцикурона на колонке проводят каждый раз при отработке методики или поступлении новой партии флоризила.

7.5. Подготовка колонки с окисью алюминия для очистки экстракта и проверка хроматографического поведения пенцикурона на ней

7.5.1. Подготовка колонки с окисью алюминия для очистки экстракта В пластиковую или стеклянную колонку диаметром 15 мм помещают 3 г окиси алюминия с зернением 40/250 меш и, аккуратно постукивая по стенкам колонки, формируют слой адсорбента. Непосредственно перед использованием колонку промывают 10 см³ ацетонитрила.

7,5.2. Проверка хроматографического поведения пенцикурона на колонке с окисью алюминия В концентратор объемом 100 см³ вносят 1 см³ стандартного раствора пенцикурона в ацетонитриле с концентрацией 1,0мкг/см³ и упаривают его досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °С. Сухой остаток растворяют в 10 см³ ацетонитрила, тщательно обмывают стенки концентратора и вносят на сорбент в подготовленной колонке. Элюат собирают в концентратор и упаривают досуха при температуре не выше 30 °С.

Исходный концентратор последовательно обмывают пятью порциями по 5 см³ ацетонитрила. Каждую порцию собирают отдельно в концентраторы объемом по 100 см³ и упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °С.

Сухой остаток растворяют в 2 см³ смеси ацетонитрила с водой в соотношении 70 : 30 и 20 мм³ пробы вводят в хроматограф.

Определяют фракции, содержащие пенцикурон, полноту смывания с колонки и необходимый объём элюата.

Изучение поведения пенцикурона на колонке проводят каждый раз при отработке методики или поступлении новой партии окиси алюминия.

7.6. Подготовка концентрирующих патронов № 1 для очистки экстрактов и проверка хроматографического поведения пенцикурона на них

7.6.1. Подготовка концентрирующих патронов № 1 для очистки экстракта Все процедуры происходят с использованием вакуума, скорость потока растворов через патрон не должна превышать 5 см³/мин.

Патрон № 1 устанавливают на алонж с отводом для вакуума, сверху в патрон вставляют шприц с разъемом типа Люер объемом не менее 10 см³ (используют как емкость для элюентов).

Кондиционирование: концентрирующий патрон промывают 10 см³ смеси гексана с этилацетатом в соотношении 1:1, затем 10 см³ гексана. Элюаты отбрасывают.

Нельзя допускать высыхания поверхности патрона.

7.6.2. Проверка хроматографического поведения пенцикурона на концентрирующих патронах № 1 В концентратор объемом 100 см³ вносят 1 см³ стандартного раствора пенцикурона в ацетонитриле с концентрацией 1,0 мкг/см³ и упаривают его досуха на ротационном вакуумном испарителе при темпе-

ратуре не выше 30 °С. Сухой остаток растворяют в 2 см³ этилацетата, тщательно обмывая стенки концентратора, прибавляют 8 см³ гексана, перемешивают и вносят на сорбент подготовленного патрона. Элюат собирают в концентратор объемом 100 см³, упаривают досуха, сухой остаток растворяют в 2 см³ смеси ацетонитрила с водой в соотношении 70 : 30 и 20 мм³ пробы вводят в хроматограф.

Исходный концентратор обмывают последовательно двумя порциями смеси гексана с этилацетатом в соотношении 4 : 1 объемом по 10 см³ каждая, обмывают стенки концентратора и вносят на сорбент патрона. Элюаты после прохождения каждой порции элюентов собирают в отдельные концентраторы объемом по 100 см³, упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °С.

Сухой остаток каждой фракции растворяют в 2 см³ смеси ацетонитрила с водой в соотношении 70 : 30 и 20 мм³ пробы вводят в хроматограф.

Определяют фракции, содержащие пенцикурон, полноту смывания с патрона и необходимый объём элюата.

Изучение поведения пенцикурона на концентрирующих патронах № 1 проводят каждый раз при отработке методики или поступлении новой партии патронов.

8. Отбор и хранение проб

Отбор проб проводится в соответствии с «Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов», №2051-79 от 21.08.79, а также в соответствии с ГОСТ 13586.3-83 «Зерно. Правила приемки и методы отбора проб», ГОСТ Р ИСО 6497-11 «Корма для животных. Отбор проб».

Отобранные пробы зерна и соломы подсушивают до стандартной влажности и хранят в бумажных или тканевых мешочках в сухом, хорошо проветриваемом шкафу, недоступном для фызунов.

9. Выполнение определения

9.1. Зерно зерновых колосовых культур

9.1.1. Экстракция

Образец измельченного зерна массой 10 г помещают в полипропиленовую банку для экстракции объемом 250 см³, прибавляют 50 см³ ацетонитрила и помещают на 30 минут на аппарат для встряхивания проб. Экстракт фильтруют в концентратор объемом 250 см³ через бумажный фильтр низкой плотности. Экстракцию повторяют еще два

раза, используя по 50 см³ ацетонитрила и помещая каждый раз на 15 минут на аппарат для встряхивания проб. Экстракты фильтруют, объединяют в концентраторе объемом 250 см³ и упаривают досуха при температуре не выше 30 °С.

9.1.2.    Очистка экстракта на колонке с окисью алюминия Сухой остаток, полученный по п. 9.1.1, растворяют в 10 см³ ацетонитрила, тщательно обмывают стенки концентратора, наносят на подготовленную колонку, элюат собирают в концентратор. Исходную колбу обмывают 10 см³ ацетонитрила и смыв вносят на колонку. Элюаты объединяют в концентраторе объемом 100 см³ и упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °С.

9.1.3. Очистка экстракта на концентрирующих патронах № 1 Сухой остаток, полученный по п. 9.1.2, растворяют в 2 см³ этил-ацетата, тщательно обмывая стенки концентратора, прибавляют 8 см³ гексана, перемешивают и вносят на заранее подготовленный патрон. Элюат собирают в концентратор объемом 100 см³. Исходный концентратор обмывают 10 см³ смеси гексана с этилацетатом в соотношении 4 : 1 и полученный раствор вносят на патрон. Элюаты объединяют в концентраторе объемом 100 см³, упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °С.

Сухой остаток растворяют в 5 см³ смеси ацетонитрила с водой в соотношении 70 : 30 и 20 мм³ пробы вводят в хроматограф.

9.2. Солома зерновых колосовых культур

9.2.1. Экстракция Образец измельченной соломы массой 5 г помещают в полипропиленовую банку для экстракции объемом 250 см³, прибавляют 50 см³ ацетонитрила и помещают на 30 минут на аппарат для встряхивания проб. Экстракт фильтруют в концентратор объемом 250 см³ через бумажный фильтр низкой плотности. Экстракцию повторяют еще два раза, используя по 50 см³ ацетонитрила и помещая каждый раз на 15 минут на аппарат для встряхивания проб. Экстракты фильтруют и объединяют в концентраторе объемом 250 см³ и упаривают досуха при температуре не выше 30 °С.

9.2.2.    Очистка экстракта на колонке с окисью алюминия Сухой остаток, полученный по п. 9.2.1, растворяют в 10 см³ ацетонитрила и проводят очистку экстракта, как указано в п. 9.1.2 «Очистка экстракта на колонке с окисью алюминия».

9.2.3. Очистка экстракта на колонке с флоризилом

Сухой остаток, полученный по п. 9.2.2, растворяют в 2 см³ этил-ацетата, тщательно обмывая стенки концентратора, добавляют 8 см³ гексана, перемешивают и вносят на заранее подготовленную колонку, элюат отбрасывают. Исходную колбу обмывают 15 см³ смеси гексана с этилацетатом в соотношении 2:1, смыв вносят на колонку, элюат собирают в концентратор объемом 100 см³ и упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °С.

Сухой остаток растворяют в 2,5 см³ смеси ацетонитрила с водой в соотношении 70 : 30 и 20 мм³ пробы вводят в хроматограф.

9.3. Условия хроматографирования

Хроматографическая система, включающая:

-хроматограф жидкостный с диодно-матричным детектором, снабженный термостатом для колонок с диапазоном температур от 15 до 80 °С и с возможностью использования стандартного автосамплера с дозирующим объемом от 0,1 до 100 мм³ для автоматического ввода пробы в хроматографическую систему;

-компьютерное программное обеспечение, контролирующее работу всего прибора, обеспечивающее сбор и хранение всех хроматограмм в процессе проведения хроматографического анализа, обеспечивающее обработку результатов измерений, вывод и расчет хроматограмм и количественный анализ.

Колонка хроматографическая стальная длиной 150 мм с внутренним диаметром 4,6 мм, зернением 5 мкм, заполненная сорбентом с привитыми полярными группами С18.

Предколонка хроматографическая с внутренним диаметром 4,6 мм, зернением 5 мкм, заполненная сорбентом с привитыми полярными группами С18.

Температура колонки: 25 °С.

Подвижная фаза: ацетонитрил-вода в соотношении 70 : 30.

Скорость потока элюента: 0,6 см³/мин.

Длина волны: 240 нм.

Чувствительность не менее 14 mAU (миллиединиц абсорбции) на шкалу.

Объем вводимой пробы: 20 мм³.

Линейный диапазон детектирования сохраняется в пределах 2—20 нг.

10. Обработка результатов

Для обработки результатов хроматографического анализа используется компьютерное программное обеспечение химического анализа, которое входит в хроматографическую систему.

В случае если содержание компонента менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде:

«содержание вещества в пробе менее 0,05 мг/кг+».

♦ 0,05 мг/кг - предел обнаружения.

13. Контроль качества результатов измерений

Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений, а также контроль стабильности градуировочной характеристики осуществляется в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-1-6-02 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений».

13.1, Контроль стабильности градуировочной характеристики.

Контроль стабильности градуировочной характеристики проводят в начале и по окончании каждой серии анализов.

При контроле стабильности градуировочной характеристики проводят измерения не менее трех образцов концентраций для градуировки, содержание пенцнкурона в которых должно охватывать весь диапазон концентраций от 0,1 до 1,0 мкг/см³.

Градуировочная характеристика считается стабильной, если для каждого из используемого для контроля градуировочного раствора сохраняется соотношение:

X- концентрация пенцикурона контрольного измерения, мкг/см³;

С - известная концентрация градуировочного раствора пенцикурона в ацетоне, взятая для контроля стабильности градуировочной характеристики, мкг/см³;

2 - погрешность градуировочной характеристики, %.

Если величина расхождения (А) превышает 2 %, делают вывод о невозможности применения градуировочной характеристики для дальнейших измерений. В этом случае выясняют и устраняют причины нестабильности градуировочной характеристики и повторяют контроль ее стабильности с использованием других градуировочных растворов пенцикурона, предусмотренных МВИ. При повторном обнаружении нестабильности градуировочной характеристики определяют ее заново согласно п. 7.3.

Стабильность результатов измерений контролируют перед проведением измерений, анализируя один из градуировочных растворов.

13.2. Плановый внутрилабораторный оперативный контроль процедуры выполнения анализа проводится методом «добавок».

Величина добавки С_д должна удовлетворять условию:

С, = Д₄* + Д_л,,, где

±Д_Л* (±А_кХ,) - характеристика погрешности (абсолютная погрешность) результатов анализа, соответствующая содержанию компонента в испытуемом образце (расчетному значению содержания компонента в образце с добавкой соответственно) мг/кг, при этом:

А_л = ± 0,84 Д, где Д - граница абсолютной погрешности, мг/кг:

5 - граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций, табл. 1), %.

Результат контроля процедуры К_к рассчитывают по формуле:

К_к = Х'-Х-С_д> где

X¹ у X у С_д - среднее арифметическое результатов параллельных определений (признанных приемлемыми по п. И), содержания компонента в образце с добавкой, испытуемом образце и концентрация добавки соответственно, мг/кг.

Норматив контроля К рассчитывают по формуле:

Проводят сопоставление результата контроля процедуры (К_к) с нормативом контроля (К).

Если результат контроля процедуры удовлетворяет условию

Ю<К,    (2)

процедуру анализа признают удовлетворительной.

При невыполнении условия (2) процедуру контроля повторяют. При повторном невыполнении условия (2) выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимают меры по их устранению.

13.3. Проверка приемлемости результатов измерений, полученных в условиях воспроизводимости.

ББК 51.23 0-60

0-60 Определение остаточных количеств пенцикурона в зерне и соломе зерновых колосовых культур методом высокоэффективной жидкостной хроматографии: Методические указания.—М.: Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, 2018.—20 с.

ISBN 978-5-7508-1664-4

1.    Разработаны Российским государственным аграрным университетом - МСХА им. К. А. Тимирязева, Учебно-научный консультационный центр «Агроэкология пестицидов и агрохимикатов» Минсельхоза России (А. В. Довгилевич, Е. В. Довгилевич, Ю. Н. Савушкин,

Е. Н. Тестова).

2.    Рекомендованы к утверждению Комиссией по санитарно-эпидемиологическому нормированию Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 24 ноября 2017 г. № 1).

3.    Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации А. Ю. Поповой 29 декабря 2017 г.

4.    Введены впервые.

ББК 51.23

Редактор Л. С. Кучурова Компьютерная верстка Е. В. Ломановой

Подписано в печать 18.12.18 Формат 60x88/16    Печ.    л. 1,25

Тираж 100 экз.    Заказ    69

Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека 127994, Москва, Вадковский пер., д. 18, стр. 5,7

Оригинал-макет подготовлен к печати и тиражирован Федеральным центром гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора 117105, Москва, Варшавское ш., 19а Реализация печатных изданий, тел./факс: 8 (495) 952-50-89

О Роспотребнадзор, 2018

Растворимость в воде: 0,3 мг/дм³ при 20 °С.

В воде гидролизуется: DT₅₀ - 64—302 дня при 20 °С.

Растворимость в органических растворителях (г/дм³, при 20 °С): ацетон - 89,4, ацетонитрил - 24,9; гексан - 0,12; диметилсульфоксид -152,9; хлористый метилен > 250; этилацетат - 43,8.

Пенцикурон слабо передвигается в почве, относительно стабилен, разлагается с образованием п-хлорбензиламина и п-хлорбензилформа-мида.

В растениях слабо разлагается с образованием гидроксилирован-ных метаболитов (частично в виде конъюгатов).

Из организма теплокровных более 74 % выводится с мочой и фекалиями в течение 3 дней в неизменном виде и в виде метаболитов. Основной путь разложения - гидроксилирование фенильной группы с образованием диольных и триольных производных, которые быстро выводятся в виде коньюгатов с сульфатами и глюкуроновой кислотой.

Краткая токсикологическая характеристика. Пенцикурон относится к веществам, малоопасным по оральной (ЛД50 для крыс составляет более 5 000 мг/кг) и дермальной (ЛД50 для кроликов более 2 000 мг/кг) токсичности, но к чрезвычайно опасным веществам по ингаляционной токсичности (ЛК50 для крыс (4 часа) более 268 мг/м³, аэрозоль). Не вызывает покраснения кожи, слабо раздражает слизистую оболочку глаз. Не проявляет тератогенных и онкогенных свойств.

Область применения. Пенцикурон - контактный фунгицид с длительным защитным действием. Рекомендуется для опрыскивания и опыливания растений, для обработки семян или внесения в почву. Применяется для подавления ризоктониоза и частично фитофтороза картофеля, пирикуляриоза риса, болезней всходов хлопка, овощей, сахарной свеклы, декоративных растений.

Пенцикурон используется также в качестве компонента смесевых препаратов с имидаклопридом, тирамом и тебуконазолом.

В России установлены следующие гигиенические нормативы: ДСД - 0,02 мг/кг массы человека; ОДК в почве - 0,2 мг/кг; ПДК в воде водоемов - 0,015 мг/дм³; ПДК в воздухе рабочей зоны - 2,0 мг/м³; ПДК в атмосферном воздухе - 0,05 мг/м³.

МДУ в продукции (мг/кг): картофель - 0,1.

ВМДУ в импортируемой продукции (мг/кг): зерно зерновых колосовых - 0,05.

1. Погрешность измерений

При соблюдении всех регламентированных условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности Р = 0,95 не превышает значений, приведенных в табл. 1 для соответствующих диапазонов концентраций.

Полнота извлечения вещества, стандартное отклонение, доверительные интервалы среднего результата для полного диапазона концентраций (я = 20) приведены в табл. 2.

Таблица 1

Метрологические параметры для пенцикурона

Анализируемый объект Диапазон определяемых концентраций, мг/кг Показатель точности (граница относительной погрешности) ±6, % Р = 0,95 Стандартное отклонение повторяемости, о„ % Предел повто ряемо сти, г>% Предел воспроизводимости, R, % Зерно зерно-вых колосовых 0,05—0,1 вкл. 50 2 5 6 0,2—0,5 вкл. 25 2 5 7 Солома зерно-вых колосовых 0,05—0,1 вкл. 50 2 6 9 0,2—0,5 вкл. 25 2 6 9

Таблица 2

Полнота извлечения вешества, стандартное отклонение, доверительный интервал среднего результата для пенцикурона

Анализируемый объект Метрологические параметры, Р - 0,95, л = 20 предел обнаружения, мг/кг диапазон определяемых концентраций, мг/кг полнота извлечения вещества, % стандартное отклонение S, % довери тельный интервал среднего результата, ±,% Зерно зерновых колосовых 0,05 0,05-0,5 85,6 2,4 1,0 Солома зерновых колосовых 0,05 0,05-0,5 75,4 2,9 1,0

2. Метод измерений

Метод основан на определении пенцикурона методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с использованием диодно-матричного детектора после его экстракции из образцов органиче-

ским растворителем, очистки экстракта на колонках с флоризилом, окисью алюминия и на концентрирующих патронах № 1.

Идентификация вещества проводится по времени удерживания, а количественное определение - методом абсолютной калибровки.

В предлагаемых условиях анализа метод специфичен. Специфичность обеспечивается подбором состава подвижной фазы и выбором колонок различной полярности.

3. Средства измерений, реактивы, вспомогательные устройства и материалы

3.1. Средства измерении

Весы аналитические класса точности - специальный (I) с наибольшим пределом взвешивания до 110 г и дискретностью 0,0001 г Весы лабораторные общего назначения класса точности - средний (III) с наибольшим пределом взвешивания до 400 г и пределом допустимой погрешности ± 0,5 г Колбы мерные на 10, 50,100, 500 и 1 000 см³ Пипетки мерные на 1,0; 2,0 и 5,0 см³ Хроматографическая система, включающая:

-    хроматограф жидкостный с диодноматричным детектором, снабженный термостатом для колонок с диапазоном температур от 15 до 80 °С и с возможностью использования стандартного авто сам плес>а

с дозирующим объемом от 0,1 до 100 мм³ для автоматического ввода пробы в хроматографическую систему;

-    компьютерное программное обеспечение, контролирующее работу всего прибора, обеспечивающее сбор и хранение всех хроматограмм в процессе проведения хроматографического анализа, обработку результатов измерений, вывод и расчет хроматограмм и количественный анализ

Цилиндры мерные на 10,25 и 50 см³

Примечание. Допускается использование средств измерений с аналогичными или лучшими характеристиками.

3.2. Реактивы

Пенцикурон, CAS 66063-05-6, аналитический стандарт с содержанием действующего вещества не менее 95,8 %

Алюминия окись для хроматографии, ч Ацетонитрил, осч, УФ-200 нм Вода дистиллированная и (или) б ид ист полированная (вода дистиллированная, перегнанная повторно в стеклянной емкости) n-Гексан, хч

Калий марганцовокислый, чда Кальций хлористый, ч

Концентрирующие патроны для твердофазной экстракции с гидрофильным слабокислым сорбентом, с постоянной активностью, с размером частиц 63—200 мкм (С) (объем -1 см³, масса сорбента - 0,6 г) (патрон № 1) Натрий сернокислый безводный, хч Флоризил (Магния силикат, 99 %, CAS 1343-88-0) для колоночной хроматографии, зернение 60/100 меш Этил ацетат, чда

Примечание. Допускается использование реактивов с аналогичными или лучшими характеристиками.

3.3. Вспомогательные устройства и материалы Алонж прямой с отводом для вакуума для работы с концентрирующими патронами    ГОСТ 25336-82

Аппарат для встряхивания проб с возвратнопоступательным направлением колебаний, с максимальной загрузкой 10 кг, с амплитудой колебаний 30 мм и скоростью от 10 до 300 колебаний в минуту

Банки полипропиленовые с крышками для экстракции вместимостью 250 см³ Вата медицинская гигроскопическая хлопковая нестерильная    ГОСТ 5556-81

В налы объемом 2 см³, закрываемые завинчивающейся или запрессовывающейся крышкой с тефлонированной резиновой прокладкой,

прокалываемой микрошприцем для автоматического дозатора проб Воронки лабораторные стеклянные Испаритель ротационный вакуумный с ручным подъемником, с диагональным конденсором и объемом испарительной колбы от 50 до 3 ООО см³, с изменяемой скоростью вращения штока испарителя от 5 до 240 об./мин, с водяной баней с антикоррозионным покрытием объемом 5 дм³ и с диапазоном температур от 20 до 100 °С Колбы конические плоскодонные на 100, 250 и 1 000 см³

Колбы круглодонные со шлифом (концентраторы) на 100,250 см³ и 4 000 см³ТС Колонка хроматографическая стальная длиной 150 мм, с внутренним диаметром 4,6 мм, зернением 5 мкм, заполненная сорбентом с привитыми полярными группами С18 Предколонка хроматографическая стальная длиной 12,5 мм, внутренним диаметром 4,6 мм, зернением 5 мкм, заполненная сорбентом с привитыми полярными группами С18 Насос диафрагменный, химически стойкий на 100 %, с мощностью электропривода 245 Вт, предельным вакуумом 100 мбар/абс, с избыточным давлением 1 бар и скоростью откачки 34 дм³/мин

Стаканы стеклянные, термостойкие объемом 100—2 000 см³

Установка для перегонки растворителей с круглодонной колбой объемом 4 000 см³ и приемной конической колбой объемом 1 000 см³

Фильтры обеззоленные нейтральные быстро фильтрующие диаметром 11 см, зольность одного фильтра 0,00072 г Шприц инъекционный многократного применения объемом 10 см³

Примечание. Допускается применение оборудования с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.

4. Требования безопасности

4.1.    При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007-76, требования электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019-09, а также требования, изложенные в технической документации на жидкостный хроматограф.

4.2.    Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности по ГОСТ 12.1.004-90 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009-83. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать норм, установленных ГН 2.2.5.1313—03 «Предельно допустимые концентрации (ПДК) вредных веществ в воздухе рабочей зоны». Организация обучения работников безопасности труда - по ГОСТ 12.0.004—90.

5. Требования к квалификации операторов

Измерения в соответствии с настоящей методикой может выполнять специалист, имеющий опыт работы на жидкостном хроматографе, освоивший данную методику и подтвердивший экспериментально соответствие получаемых результатов нормативам контроля погрешности измерений.

6. Условия измерений

При выполнении измерений соблюдают следующие условия:

-    процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха (20 ± 5) °С, относительной влажности не более 80 % и нормальном атмосферном давлении;

-    выполнение измерений на жидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

7. Подготовка к выполнению измерений

Выполнению измерений предшествуют следующие операции: очистка растворителей (при необходимости), приготовление растворов, кондиционирование хроматографической колонки, подготовка концентрирующих патронов № 1, колонок с флоризилом и окисью алюминия для очистки экстракта, проверка хроматографического поведения вещества на концентрирующих патронах № 1, на колонках с флоризилом и окисью алюминия, установление градуировочной характеристики.