Государственное санитарно-эпидемиологическое нормирование _Российской    Федерации_

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Определение остаточных количеств ацетамиприда в зерне гороха, капусте, моркови и луке методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

Методические указания МУК 4.1.3515—17

Издание официальное

Москва * 2018

Федеральная служба по надзору в сфере зашиты прав потребителей и благополучия человека

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Определение остаточных количеств ацетамиприда в зерне гороха, капусте, моркови и луке методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

Методические указания МУК 4.1.3515—-17

С - аттестованное значение массовой концентрации ацетамиприда в градуировочном растворе;

С* - результат контрольного измерения массовой концентрации ацетамиприда в градуировочном растворе;

Лк<мтр. - норматив контроля градуировочного коэффициента, %. (Лсомр = ю % при Р = 0,95).

7.6. Проверка хроматографического поведения ацетамиприда на патроне для твердофазной экстракции

В круглодонную колбу емкостью 10 см³ отбирают 1 см³ стандартного раствора ацетамиприда с концентрацией 0,5 мкг/см³. Отдувают растворитель током воздуха. Остаток растворяют в 1 см³ элюента № 1 и переносят на подготовленный патрон. Промывают патрон 3 см³ элюента № 1, элюат отбрасывают. Затем элюируют ацетамиприд 10 см³ этил-ацетата со скоростью 1—2 капли в секунду. Отбирают фракции по 2 см³, упаривают досуха, растворяют в 1 см³ подвижной фазы и анализируют по п. 9.3.

Фракции, содержащие ацетамиприд, объединяют и вновь анализируют. Устанавливают уровень вещества в элюате, определяют полноту смывания с патрона и необходимый для очистки объем элюата.

8. Отбор проб и хранение

Отбор проб производится в соответствии с «Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов» (№2051-79 от 21.08.79). Отбор проб зерна гороха проводят в соответствии с ГОСТ 6201-68 «Горох шлифованный. Технические условия». Пробы гороха хранят в бумажной или тканевой упаковке при комнатной температуре. Пробы капусты отбирают в соответствии с ГОСТ 1724-85 «Капуста белокочанная свежая, заготовляемая и поставляемая. Технические условия (с Изменениями № 1—4)»; моркови - в соответствии с ГОСТ 1721-85 «Морковь столовая свежая, заготовляемая и поставляемая. Технические условия»; лука - в соответствии с ГОСТ 1723-86 «Лук репчатый свежий заготовляемый и поставляемый. Технические условия». Пробы капусты, моркови и лука хранят до анализа в герметичной таре в морозильной камере при температуре не выше -18 °С.

9. Проведение определения

9.1. Определение ацетамиприда в зерне гороха, в капусте, моркови, луке Навеску измельченной матрицы 10 г помещают в полипропиленовую центрифужную пробирку вместимостью 50 см³, последовательно добавляют 10 см* ацетонитрила, 4 г безводного сульфата магния, 1 г хлористого натрия, 1 г цитрата натрия двуводного и 0,5 г динатрия цитрата сесквигидрата. В случае зерна гороха, добавляют 10 мл воды. Пробирку плотно закрывают и помещают в перемешивающее устройство на 10 мин, затем центрифугируют в течение 10 мин при скорости 4 000 об./мин. От верхнего ацетонитрильного слоя отбирают 5 см , переносят в центрифужную пробирку вместимостью 15 см , содержащую 150 мг смеси первичных и вторичных аминов и 900 мг безводного сульфата магния. Пробирку плотно закрывают и помещают в перемешивающее устройство на 10 мин, затем центрифугируют в течение 10 мин при скорости 4 000 об./мин. От верхнего ацетонитрильного слоя отбирают 1 см³ и упаривают растворитель в токе воздуха при температуре не выше 40 °С. Сухой остаток чистят на патроне для твердофазной экстракции по п. 9.2.

9.2. Очистка на патроне для твердофазной экстракции

Остаток в колбе, полученный при упаривании экстрактов (п. 9.1), растворяют в 1 см³ элюента № 1 и переносят на подготовленный патрон (п. 7.2). Промывают патрон 5 см³ элюента № 1. Ацетамиприд элюируют 8 см³ этилацетата. Элюат упаривают досуха в токе воздуха при температуре не выше 40 °С. Сухой остаток растворяют в 1 см³ подвижной фазы и анализируют по п. 9.3.

9.3. Условия хроматографирования Ультраэффективный жидкостной хроматограф с быстросканирую-щим УФ-детектором, снабженный дегазатором, автоматическим пробоотборником и термостатом колонки. Аналитическая колонка, заполненная сорбентом с привитыми монофункциональными полярными группами С18, (100x2,1) мм, 1,7 мкм. Температура колонки: (30±1)°С. Подвижная фаза: смесь ацетонитрила и 0,005 М ортофосфорной кислоты в соотношении 20 : 80. Скорость потока элюента: 0,2 см³/мин. Рабочая длина волны УФ-детектора: 245 нм. Объем вводимой пробы: 10 мм³.

10. Обработка результатов анализа

Количественное определение проводят методом абсолютной калибровки. Содержание ацетамиприда в пробе (X, т/кг) вычисляют по формуле:

_v S_gKV 100

^х-~г- /

/- полнота извлечения ацетамиприда, приведенная в табл. 2, %;

S_x - площадь пика ацетамиприда на хроматограмме испытуемого образца, (AU);

К - градуировочный коэффициент, найденный на стадии построения соответствующей градуировочной зависимости;

К-объем экстракта первичный, см³, равен 10 см³;

Р - навеска анализируемого образца, г.

Содержание остаточных количеств ацетамиприда в образце вычисляют как среднее из двух параллельных определений.

Образцы, дающие пики большие, чем стандартный раствор ацетамиприда с концентрацией 0,5 мкг/см³, разбавляют подвижной фазой.

11. Проверка приемлемости результатов параллельных определений

За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предела повторяемости:

2\Х,-Х₃\100

(Х,+Х₂)

X_Jy Х₂ - результаты параллельных определений, мг/кг; г - значение предела повторяемости (г = 2,8<г_г).

При невыполнении условия выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.

12. Оформление результатов

Результат анализа представляют в виде:

(-VIA), мг/кг при вероятности Р = 0,95, где

X - среднее арифметическое результатов определений, признан ных приемлемыми, мг/кг;

А - граница абсолютной погрешности, мг/кг:

S - граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций), %.

В случае если содержание компонента меньше нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде:

«содержание вещества в пробе «менее нижней границы определения» (например: менее 0,025 мг/кг*, где * 0,025 мг/кг - предел определения ацетамиприда в капусте).

13. Контроль качества результатов измерений

Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-1-6-02 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений».

13.1.    Стабильность результатов измерений контролируют перед проведением измерений, анализируя один из градуировочных растворов.

13.2.    Плановый внутрилабораторный оперативный контроль процедуры выполнения анализа проводится с применением метода «добавок».

Величина добавки Q должна удовлетворять условию: ^с»=^д,.;г+^А,..г'.где

± А, _х (± А_{я х},) - характеристика погрешности (абсолютная погрешность) результатов анализа, соответствующая содержанию компонента в испытуемом образце (расчетному значению содержания компонента в образце с добавкой, соответственно), мг/кг; при этом:

А_д = ± 0,84 А, где А - граница абсолютной погрешности, мг/кг:

6 - граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций), %.

Результат контроля процедуры К_к рассчитывают по формуле:

К_к = Х'- Х-Сь где

X⁷, Х_у Cq - среднее арифметическое результатов параллельных определений (признанных приемлемыми по п. 11) содержания компонента в образце с добавкой, испытуемом образце, концентрация добавки соответственно, мг/кг.

Норматив контроля К рассчитывают по формуле:

К = у1<х'+<.г    (!)

Проводят сопоставление результата контроля процедуры (А'*) с нормативом контроля (К).

Если результат контроля процедуры удовлетворяет условию

ЮйК    (2)

процедуру анализа признают удовлетворительной.

При невыполнении условия (2) процедуру контроля повторяют. При повторном невыполнении условия (2) выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимают меры к их устранению.

13.3. Проверка приемлемости результатов измерений, полученных в условиях воспроизводимости.

Расхождение между результатами измерений, выполненных в двух разных лабораториях, не должно превышать предела воспроизводимости (А):

X_Jy Х₂ - результаты измерений в двух разных лабораториях, мг/кг; R - предел воспроизводимости (в соответствии с диапазоном концентраций), %.

Определение остаточных количеств ацетамиприда в зерне гороха, капусте, моркови и луке методом высокоэффективной жидкостной

хроматографии

Методические указания МУК 4.1.3515—17

Компьютерная верстка Е. В. Ломановой

Подписано а печать 25.12.18 Формат 60x88/16    Печ.    л. 1,0

Тираж 100 экз.    Заказ    83

Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека 127994, Москва, Вадковский пер., д. 18, стр. 5,7

Оригинал-макет подготовлен к печати и тиражирован Федеральным центром гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора 117105, Москва, Варшавское ш., 19а Реализация печатных изданий, тел.: 8 (495) 633-86-59

ББК 51.23 0-60

0-60 Определение остаточных количеств ацетамиприда в зерне гороха, капусте, моркови и луке методом высокоэффективной жидкостной хроматографии: Методические указания.—М.: Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, 2018.—14 с.

ISBN 978-5-7508-1674-3

1.    Разработаны сотрудниками ФГБНУ «Всероссийский НИИ защиты растений» (И. А. Цибульская, Т. Д. Черменская) и ООО «Инновационный центр защиты растений» (Е. Ю. Алексеев).

2.    Рекомендованы к утверждению Комиссией по санитарно-эпидемиологическому нормированию Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 24 ноября 2017 г. № 1).

3.    Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека. Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации А. Ю. Поповой 29 декабря 2017 г.

4.    Введены впервые.

ББК 51.23

ISBN 978-5-7508-1674-3

С Роспотребнадзор, 2018

УТВЕРЖДАЮ Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека. Главный государственный санитарный врач Российской Федерации

А. Ю. Попова

29 декабря 2017 г.

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Определение остаточных количеств ацетамиприда в зерне гороха, капусте, моркови и луке методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

Методические указания МУК 4.1J515—17

Настоящие методические указания устанавливают порядок применения метода высокоэффективной жидкостной хроматографии для определения массовой концентрации ацетамиприда в зерне гороха, капусте, моркови и луке в диапазоне концентраций 0,025—0,25 мг/кг.

Методические указания носят рекомендательный характер.

Ацетамиприд

(E)-N 1 -[(6-хлор-3-пиридил)мстил]-Ь^т2-циано-К 1 -метилацетамидин (1UPAC).

Структурная формула:

сталлы.

Температура плавления: 98,9 °С. Давление пара: < 1 х Ю"³ МРа (25 °С).

Коэффициент распределения в системе н-октанол-вода: К*,* log Р = 0,80 (25 °С).

Растворимость в воде 4 250 мг/дм³ при 25 °С. Растворимость в органических растворителях: хорошо растворим в ацетоне, метаноле, этаноле, дихлорметане, хлороформе, ацетонитриле и тетрагидрофуране.

Стабилен в буферных при pH 4, 5, 7. Медленно разлагается при pH 9 и 45 °С. Устойчив к воздействию света. Слабое основание, рК_а0,7.

Краткая токсикологическая характеристика. Острая пероральная токсичность LDjo 146-217 мг/кг (крысы). При подкожном введении LD50 для крыс > 2 ООО мг/кг. Ингаляционная токсичность LCso > 0,29 мг на 1 дм³ воздуха (крысы). Практически не раздражает кожу и слизистую глаз у 1сроликов.

Область применения. Системный инсектицид - агонист никотиновых ацетилхолиновых рецепторов, влияющий на синапсы центральной нервной системы насекомых.

Используется для подавления развития тлей, трипсов и чешуекрылых посредством обработки почвы и листьев растений на широком спектре овощных и плодовых культур при нормах расхода 75—700 г/га.

Гигиенические нормативы для ацетамиприда в России: МДУ (мг/кг) - зерно хлебных злаков, картофель - 0,5; рапс (зерно, масло) -0,1; огурцы, томаты - 0,3; плодовые семечковые - 0,8*; сахарная свекла - 0,1; ВМДУ плодовые семечковые - 0,8*.

1. Погрешность измерений

При соблюдении всех регламентированных условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности Р = 0,95 не превышает значений, приведенных в табл. 1, для соответствующих диапазонов концентраций.

Таблица 1

Метрологические параметры

Анализи руемый объект Диапазон определяемых кон-цепграций, мг/кг Показатель точности*' (границы относительной погрешности (/>« 0,95), % Показатель повторяемости (относительное срел-неквадра-тическое отклонение повторяемости). Or, % Показатель воспроизводимости (относительное средне-квадратическое отклонение воспроиз-водим ости), Or, % Предел повторяемости (значение допустимого расхождения между двумя результатами параллельных определении), г, % Предел воспроизводимости (значение допустимого расхождения между двумя результатами измерений, полученных в разных лабораториях), Rt % (Р = 6,95) Зерно гороха 0,025—0,25 25 10 12,5 28 36 Капуста 0,025-0,25 25 10 12,5 28 36 Морковь 0,025—0,25 25 10 12,5 28 36 Лук-репка 0,025—0,25 25 10 12,5 28 36 соогветствует расширенной неопределенности UomH (в относительных единицах) при коэффициенте охвата к = 2

Таблица 2 Полнота извлечения ацетамипрнда, стандартное отклонение, доверительный интервал среднего результата для п = 20, Р = 0,95

Анализируемый объект Предел определения, мг/кг Диапазон определяемых концентраций, мг/кг (мг/дм3) Полнота извлечения, % Стандартное отклонение, S Доверительный интервал среднего результата, ± % Зерно гороха 0,025 0,025—0,25 85,2 7,70 3,37 Капуста 0,025 0,025—0,25 87,0 5,85 2,56 Морковь 0,025 0,025—0,25 81,5 3,04 1,33 Лук 0,025 0,025—0,25 82,6 4,78 2,09

2. Метод измерений

Метод основан на определении ацетамипрнда методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с использованием ультрафиолетового (УФ) детектора после извлечения из образцов ацетонитрилом в присутствии нитратного буфера, насыщенного сульфатом магния, и обеспечивающего разделение водной и органической фаз; очистке ацетонитрильного экстракта с помощью дисперсионной твердофазной экстракции при одновременном удалении воды безводным сульфатом магния и на патронах для твердофазной экстракции.

Идентификация ацетамипрнда проводится по времени удерживания, количественное определение - методом абсолютной калибровки.

Избирательность метода обеспечивается сочетанием условий подготовки проб и хроматографирования.

3. Средства измерений, реактивы, вспомогательные устройства и материалы

3.1. Средства измерений

Жидкостный хроматограф с УФ-детектором, снабженный дегазатором, автоматическим пробоотборником и термостатом колонки Весы лабораторные аналитические, наибольший предел взвешивания 150 г, предел

допустимой погрешности 5 мг    ГОСТ 53228-08

Весы лабораторные аналитические, наибольший предел взвешивания 81/210 г, предел допустимой погрешности 0,1/0,3 мг    ГОСТ 53228-08

Дозаторы пипеточные переменного объема от 10 до 100 мм³ и от 100 до 1 000 мм³    ГОСТ 23932-90

Колбы мерные на 100, 500 и 1 000 см³    ГОСТ 23932-90

Цилиндры мерные на 50 и 100 см³    ГОСТ 23932-90

Примечание. Допускается использование средств измерения с аналогичными или лучшими характеристиками.

3.2. Реактивы

Ацетонитрил для ВЭЖХ Вода для лабораторного анализа (бидистил-лированная, деионизованная)

Гексан, чда

Кислота ортофосфорная 98 %, хч Ацетамиприд с содержанием основного вещества 99,9 %

Динатрия цитрат сесквигидрат, 99 %

Магний сернокислый безводный, 99 %

Натрия цитрат двуводный, 99 %

Натрий хлористый, чда Патроны для твердофазной экстракции, заполненные гидрофильным слабокислотным сорбентом на основе силикагеля, объем 1 мл    ТУ 4215-002-0545-931—94

Подвижная фаза для ВЭЖХ: смесь ацетонитрила и 0,005М ортофосфорной кислоты в соотношении 20: 80 Смесь первичных и вторичных аминов,

№ 5982-5753.

Элюент № 1: гексан-этилацетат в соотношении 1 : 1 по объему

Этил ацетат, хч    ГОСТ 22300-76

Примечание. Допускается использование реактивов с более высокой квалификацией, нс требующих дополнительной очистки растворителей.

3.3. Вспомогательные устройства и материалы Аналитическая колонка, заполненная сорбентом с привитыми монофункциональными полярными группами С18, (100 х 2,1) мм,

1,7 мкм

Вакуумный манипулятор для работы с патронами для твердофазной экстракции

Воздушный испаритель Мельница зерновая A11В Пробирки полипропиленовые центрифужные с крышками объемом 50 и 15 с-м³ Устройство перемешивающее (50—200 колебаний в минуту)    ТУ 4389-007-44330709—11

Центрифуга со скоростью вращения 4 000 об./мин

Примечание. Допускается использование вспомогательных устройств и материалов с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.

4. Требования безопасности

4.1.    При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007-76, требования по электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019-09, а также требования, изложенные в технической документации на жидкостный хроматограф.

4.2.    Помещение лаборатории должно быть оборудовано приточновытяжной вентиляцией, соответствовать требованиям пожарной безопасности по ГОСТ 12.1.004-91 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009-83. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать ПДК (ОБУВ), установленных ГН 2.2.5.1313—03 и ГН 2.2.5.2308—07.

Организация обучения работников безопасности труда - по ГОСТ 12.0.004-90.

4.3.    При работе с газами, находящимися в баллонах под давлением до 15 МПа (150 кгс/см²), необходимо соблюдать Федеральные нормы и правила в области промышленной безопасности «Правила промышленной безопасности опасных производственных объектов, на которых используется оборудование, работающее под избыточным давлением» (утв. Приказом Ростехнадзора от 25.03.2014 №116). Запрещается открывать вентиль баллона, не установив на нем понижающий редуктор.

5. Требования к квалификации операторов

Измерения в соответствии с настоящей методикой может выполнять специалист, имеющий опыт работы на жидкостном хроматографе, освоивший данную методику и подтвердивший экспериментально соответствие получаемых результатов нормативам контроля погрешности измерений.

6. Условия измерений

При выполнении измерений выполняют следующие условия:

-    процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха (20 ± 5) °С и относительной влажности не более 80 %;

-    выполнение измерений на жидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

7. Подготовка к определению

7.1. Кондиционирование колонки

Перед началом анализа аналитическую колонку кондиционируют в потоке подвижной фазы (0,1—0,2см³/мин) до стабилизации нулевой линии.

7.2. Кондиционирование патрона для твердофазной экстракции

Патрон промывают 2,5 см³ этилацетата, затем 3 см³ элюента № 1.

7.3. Приготовление растворов

7.3.1.    0,005 М раствор ортофосфорной кислоты: (0,5 ±0,01) г 98 % ортофосфорной кислоты помещают в мерную колбу объемом 1 дм³, растворяют в деионизированной воде и доводят объем до метки.

7.4. Приготовление основного и градуировочных растворов

1 АЛ. Основной раствор ацетамиприда с концентрацией 0,5 мг/см³: точную навеску ацетамиприда (50 ± 0,5 мг) помещают в мерную колбу вместимостью 100 см³, растворяют в ацетонитриле и доводят объем до метки ацетонитрилом.

7.4.2.    Приготовление градуировочных растворов. Градуировочные растворы с концентрациями ацетамиприда 0,02, 0,05, 0,1, 0,2 и 0,5 мкг/см³ готовят методом последовательного разбавления по объему, используя ацетонитрил).

7.4.2.1.    Раствор Ms 1 с концентрацией 1,0 мкг/см³: в мерную колбу вместимостью 100 см³ вносят 0,2 см³ основного раствора и доводят до метки подвижной фазой.

7.4.2.2.    Раствор Ms 2 с концентрацией 0,5 мкг/см³: в мерную колбу вместимостью 10 см³ помещают 5,0 см³ раствора № 1 и доводят объем до метки подвижной фазой.

7.4.2.3.    Раствор № 3 с концентрацией 0,2 мкг/см³: в мерную колбу вместимостью 10 см³ помещают 2,0 см³ раствора № 1 и доводят объем до метки подвижной фазой.

7.4.2.4.    Раствор Ns 3 с концентрацией 0,1 мкг/см: в мерную колбу вместимостью 10 см³ помещают 1,0 см³ раствора № 1 и доводят объем до метки подвижной фазой.

7.4.2.5.    Раствор Ns 4 с концентрацией 0,05 мкг/см³: в мерную колбу вместимостью 10 см³ помещают 1,0 см³ раствора № 2 и доводят объем до метки подвижной фазой.

7.4.2.6.    Раствор Ns 5 с концентрацией 0,02 мкг/см³: в мерную колбу вместимостью 10 см³ помещают 1,0 см³ раствора № 3 и доводят объем до метки подвижной фазой.

Основной раствор ацетамиприда можно хранить в холодильнике при температуре 0—4 °С в течение 6 месяцев, градуировочные растворы - в течение недели.

При изучении полноты определения ацетамиприда используют ацетонитрильные растворы веществ, приготовленные из основного раствора методом последовательного разбавления по объему ацетонитрилом.

7.5. Построение градуировочного графика

Для установления градуировочной характеристики (площадь пика - концентрация ацетамиприда в растворе) в хроматограф вводят по 10 мм³ градуировочных растворов (не менее 3 параллельных измерений для каждой концентрации, не менее 4 точек по диапазону измеряемых концентраций). Затем измеряют площади пиков и строят график зависимости среднего значения площади пика от концентрации ацетамиприда в градуировочном растворе.

Методом наименьших квадратов рассчитывают градуировочный коэффициент (К) в уравнении линейной регрессии:

С -К S, где

S - площадь пика градуировочного раствора.

Градуировку признают удовлетворительной, если значение коэффициента линейной корреляции оказывается не ниже 0,99.

Градуировочную характеристику необходимо 1гроверять при замене реактивов, хроматографической колонки или элементов хроматографической системы, а также при отрицательном результате контроля 1радуировочного коэффициента.

Градуировочную зависимость признают стабильной при выполнении следующего условия:

^|С^1-Ю0^_,где