Государственное санитарно-эпидемиологическое нормирование _Российской    Федерации_

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Определение остаточных количеств дифлубензурона в ягодах и соке винограда методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

Методические указания МУК 4.1.3512—17

Издание официальное

Москва • 2018

Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Определение остаточных количеств дифлубензурона в ягодах и соке винограда методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

Методические указапня МУК 4.1.3512—17

Контр. - норматив контроля градуировочного коэффициента, % (Контр. - 10 % при Р = 0,95).

7.5.    Проверка хроматографического поведения дифлубензурона на патроне на основе силикагеля с постоянной активностью

Патрон кондиционируют последовательно промывая элюентом № 3 и гексаном (по 6 см⁵). В испарительную колбу емкостью 50 см³ отбирают 0,1 см³ раствора дифлубензурона в ацетонитриле концентрации 10 мкг/см³, добавляют 3 см³ элюента № 2 и помещают колбу в ультразвуковую ванну на 2 мин. Раствор вносят в кондиционированный патрон. Колбу обмывают 3 см³ элюента № 2 и также вносят в патрон. Затем патрон промывают 6 см³ элюента № 3. Отбирают фракции по 3 см³ каждая, упаривают, сухой остаток растворяют в 2 см³ подвижной фазы для ВЭЖХ в ультразвуковой ванне (10 с) и анализируют на содержание дифлубензурона по п. 9.3.1.

Фракции, содержащие дифлубензурон, объединяют, упаривают досуха, остаток растворяют в 2 см³ подвижной фазы для ВЭЖХ и вновь анализируют по п. 9.3.1. Рассчитывают содержание дифлубензурона в элюате, определяя полноту вымывания вещества и необходимый для очистки экстракта объем элюента.

7.6.    Проверка хроматографического поведения дифлубензурона

на патроне с гидрофобным сорбентом с привитыми гексадецилъными группами

Патрон с гидрофобным сорбентом с привитыми гсксадецильными группами кондиционируют, последовательно промывая ацетонитрилом и водой (по 6 см³).

В круглодонную колбу емкостью 50 см³ вносят 10 см³ воды, добавляют 0,1 см³ раствора дифлубензурона в ацетонитриле концентрации 10 мкг/см³, перемешивают и полученную смесь вносят в кондиционированный патрон. Патрон промывают 6 см³ элюента № 4 и 6 см³ ацетонитрила. Отбирают фракции по 3 см³ каждая, упаривают, остаток растворяют в 2 см³ подвижной фазы для ВЭЖХ в ультразвуковой ванне (10 с) и анализируют на содержание дифлубензурона по п. 9.3.2. Фракции, содержащие дифлубензурон, объединяют, упаривают досуха, остаток растворяют в 2 см³ подвижной фазы для ВЭЖХ и вновь анализируют по п. 9.3.2. Рассчитывают содержание дифлубензурона в элюате, определяя полноту вымывания вещества и необходимый для очистки экстракта объем элюента.

Примечание: профиль вымывания дифлубензурона с патрона может меняться при использовании новой партии патронов и растворителей.

7.7. Подготовка приборов и средств измерения Установка и подготовка всех приборов и средств измерения проводится в соответствии с требованиями технической документации.

8. Отбор проб

Отбор проб производится в соответствии с «Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов» (№2051-79 от 21.08.79), а также в соответствии с ГОСТ 32786-14 «Виноград столовый свежий. Технические условия». Пробы ягод винограда хранят до анализа в герметично закрытом двойном полиэтиленовом пакете в морозильной камере при температуре не выше -18 °С в течение 6 месяцев. Пробы виноградного сока хранят в холодильнике при температуре 0—4 °С в стеклянной таре с притертой пробкой в течение недели.

9. Проведение определения

9.1. Определение дифлубензурона в ягодах винограда 9.1.1 .Экстракция. Для экстракции дифлубензурона навеску ягод массой (10 ± 0,1) г помещают в 50-см³ пробирку, добавляют 30 см³ ацетонитрила, измельчают, перемешивают 1—2 мин вручную либо на встряхиватслс, центрифугируют 10 мин при 4 000 об./мин, супернатант декантируют в мерный цилиндр на 100 см³. Экстракцию повторяют два раза. Объем объединенных растворов доводят ацетонитрилом до 100 см³. Для последующего анализа отбирают 20 см³ раствора (или аликвоту 20 % экстракта) и переносят в испарительную колбу объемом 50 см³. Растворитель упаривают из полученного раствора на роторном испарителе при температуре не выше 40 °С. Дальнейшую очистку экстракта проводят по пунктам 9.1.2 и 9.1.3.

9.1.2. Очистка на патроне с привитыми гексадецилъными группами. Экстракт растворяют в 2 см³ ацетонитрила и добавляют 8 см¹ воды. Кондиционируют патрон как описано в п. 7.6 и вводят в него экстракт (скорость потока не более 2 мл/мин). Обмывают колбу с остатком экстракта элюентом № 1 (12 см³), промывают патрон этим раствором, элю-ат отбрасывают. Патрон подсушивают током воздуха 1 мин. Аналит смывают в испарительную колбу объемом 50 см³ ацетонитрилом (объем 3 см³). Растворитель отгоняют из полученного раствора на роторном испарителе при температуре не выше 40 °С. Далее очистку экстракта проводят по п. 9.1.3.

9.1.3. Очистка на патроне с гидрофильным сорбентом с постоянной активностью. Патрон кондиционируют по п. 7.5. Экстракт, очищенный по п. 9.1.2, растворяют в 2 см³ элюента № 2 и вносят в кондиционированный патрон. Колбу обмывают 5 см³ элюента № 2 и также вносят в патрон. Элюат отбрасывают. Аналит смывают элюентом № 3 (3 см³) в испарительную колбу объемом 50 см³. Растворитель упаривают из полученного раствора на роторном испарителе при температуре не выше 40 °С.

Для проведения анализа растворяют сухой остаток в 1,2 см³ ацетонитрила в ультразвуковой ванне (10 с) и добавляют 0,8 см³ воды. После перемешивания в ультразвуковой ванне (10 с) 10 мм³ раствора вводят в хроматограф и проводят анализ по п. 9.3.

9.2. Определение дифлубензурона в виноградном соке Патрон с привитыми гексадецильными группами кондиционируют как описано в п. 7.6 и вносят в него 2 см³ сока (скорость вытекания раствора с патрона должна быть не более 2 см³/мин). Промывают колбу с остатком сока и картридж 6 см³ элюента № 4, а затем 6 см³ элюента № 1. Патрон подсушивают током воздуха 1 мин. Аналит смывают в испарительную колбу объемом 50 см³ ацетонитрилом (объем 3 см³). Растворитель упаривают из полученного раствора на роторном испарителе при температуре не выше 40 °С.

Для проведения анализа растворяют сухой остаток в 1,2 см³ ацетонитрила в У 3-ван не (10 с) и добавляют 0,8 см³ воды. После перемешивания в У3-ваш1е (10 с) 10 мм³ раствора вводят в хроматограф и проводят анализ по п. 9.3.

9.3. Условия хроматографирования Ультраэффективный жидкостной хроматограф с быстросканирую-щим УФ-детектором, снабженный дегазатором, автоматическим пробоотборником и термостатом колонки. Аналитическая колонка, заполненная сорбентом с привитой алкильной цепью С18, модифицированной монофункциональной полярной группой, (50 х 2,1) мм, 1,7 мкм. Температура колонки (30 ± 1) °С. Подвижная фаза: смесь ацетонитрила и воды в соотношении 60 :40 (по объему). Скорость потока элюента: 0,25 см³/мин. Рабочая длина волны УФ-детектора 260 нм. Объем вводимой пробы 10 мм³. Время удерживания дифлубензурона (1,50 ± 0,07) мин.

10. Обработка результатов анализа

Количественное определение проводят методом абсолютной калибровки, содержание дифлубензурона в пробе (Х₉ мг/кг) вычисляют по формуле:

S_XKV 100

Р ‘ /

S_x - площадь пика дифлубензурона на хроматограмме испытуемого образца, мм² (AU);

К - градуировочный коэффициент, найденный на стадии построения соответствующей градуировочной зависимости;

V - объбм пробы, подготовленной для хроматографического анализа, см³;

Р - навеска анализируемого образца, г;

/- полнота извлечения дифлубензурона, приведенная в табл. 2, %.

Содержание осгаточных количеств дифлубензурона в анализируемом образце вычисляют как среднее из 2 параллельных определений.

Образцы, дающие пики большие, чем стандартный раствор дифлубензурона 1 мкг/см³ разбавляют подвижной фазой.

11. Проверка приемлемости результатов параллельных определений

За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает придела повторяемости:

Хи - результаты параллельных определений, мг/кг; г - значение предела повторяемости (г = 2,8<т_г).

При невыполнении условия (1) выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.

12. Оформление результатов

Результат анализа представляют в виде:

(X ± А), мг/кг при вероятности Р = 0,95, где

X - среднее арифметическое результатов определений, признанных приемлемыми, мг/кг;

Д - граница абсолютной погрешности, мг/кг:

S - граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций), %.

В случае если содержание компонента менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде:

«содержание вещества в пробе «менее нижней границы определения» (например: менее 0,01 мг/кг*, где * 0,01 мг/кг - предел обнаружения дифлубензурона в ягодах винограда).

13. Контроль качества результатов измерений

Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-1-6-02 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений».

13.1.    Стабильность результатов измерений контролируют перед проведением измерений, анализируя один из градуировочных растворов.

13.2.    Плановый внутри-лабораторный оперативный контроль процедуры выполнения анализа проводится с применением метода «добавок».

Величина добавки Q должна удовлетворять условию:

Q = А,, + ^д,.;г - где

±Л_лХ(±Л_лХ,) - характеристика погрешности (абсолютная погрешность) результатов анализа, соответствующая содержанию компонента в испытуемом образце (расчетному значению содержания компонента в образце с добавкой, соответс твенно), мг/кг; при этом:

А, = ± 0,84 А А - граница абсолютной погрешности, мг/кг:

100

S - граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций), %.

Результат контроля процедуры К_к рассчитывают по формуле:

K_K = X-X-C_dt где X, Х_у Cq - среднее арифметическое результатов параллельных определений (признанных приемлемыми по п. 11) содержания компонента в образце с добавкой, испытуемом образце, концентрация добавки соответственно, мг/кг.

Норматив контроля К рассчитывают по формуле:

/Г = 7^д1г+^Д1г    (О

Проводят сопоставление результата контроля процедуры (К_к) с нормативом контроля (К).

Если результат контроля процедуры удовлетворяет условию

1 К\*К,    (2)

процедуру анализа признают удовлетворительной.

При невыполнении условия (2) процедуру контроля повторяют. При повторном невыполнении условия (2) выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимают меры к их устранению.

13.3. Проверка приемлемости результатов измерений, полученных в условиях воспроизводимости.

Расхождение между результатами измерений, выполненных в двух разных лабораториях, не должно превышать предела воспроизводимости (К):

X/, Xj - результаты измерений в двух разных лабораториях, мг/кг,

R - предел воспроизводимости (в соответствии с диапазоном концентраций), %.

Определение остаточных количеств дифлубензурона в ягодах и соке винограда методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

Методические указания МУК 4.1.3512—17

Редактор Л. С. Кучурова Компьютерная верстка Е. В. Ломановой

Подписано в печать 25.12.18 Тираж 100 эю.

Федеральная служба по надаору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека 127994, Москва, Вадковский пер., д. 18, стр. 5,7

Оригинал-макет подготовлен к печати и тиражирован Федеральным центром гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора 117105, Москва, Варшавское ш., 19а Реализация печатных изданий, тел.: 8 (495) 633-86-59

ББК51.23

0-60

0-60 Определение остаточных количеств дифлубензурона в ягодах и соке винограда методом высокоэффективной жидкостной хроматографии: Методические указания.—М.: Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, 2018.—15 с.

ISBN 978-5-7508-1670-5

1.    Разработаны сотрудниками ФГБНУ «Всероссийский НИИ защиты растений» (И. А. Цибульская, А. О. Берестецкий).

2.    Рекомендованы к утверждению Комиссией по санитарно-эпидемиологическому нормированию Федеральной службы по надзору в сфере защиты нрав потребителей и благополучия человека (протокол от 24 ноября 2017 г. № I).

3.    Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека. Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации А. Ю. Ионовой 29 декабря 2017 г.

4.    Введены впервые.

ББК 51.23

ISBN 978-5-7508-1670-5

С Роспотребнадзор, 2018

УТВЕРЖДАЮ Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека. Главный государственный санитарный врач Российской Федерации

А. Ю. Попова

29 декабря 2017 г.

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Определение остаточных количеств дифлубеизурона в ягодах и соке винограда методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

Методические указания __МУК    4.13512—17_

Свидетельство о метрологической аттестации № 01.5.04.238/01.00043/2016. Настоящие методические указания устанавливают порядок применения метода высокоэффективной жидкостной хроматографии для определения массовой концентрации дифлубеизурона в ягодах и соке винограда в диапазоне концентраций 0,01—0,1 мг/кг.

Методические указания носят рекомендательный характер. Дифлубеизурон

1 -(4-хлорфенил)-3-(2,6-дифторбензоил)мочевина (ШРАС). Н-{[(4-хлорфенил)амино]карбонил}-2,6-дифторбензамид (С.А.). Структурная формула:

Брутто формула: C14H9CIF2N2O2.

Молекулярная масса: 310,7.

Бесцветное кристаллическое вещество (технический - кристаллы от белых до желтых).

Температура плавления: 228 °С (технический: 210-230 °С). Давление паров при 25 °С: 1,2 х 1(Г⁴МПа.

Коэффициент распределения н-октанол/вода: K_ow log Р - 3,89. Растворимость (г/л) при 20 °С: н-гексан - 0,063; толуол - 0,29; ди-хлорметан - 1,8; метанол - 1,1; вода -0,08 мг/л (при pH 7 и 25 °С).

Вещество стабильно в кислых средах (20 °С, pH 5-7, DT₅₀ > 150 дней), разлагается в щелочных растворах (при pH 9 DT₅₀ 42 дня).

Краткая токсикологическая характеристика. Острая пероральная токсичность (LD50) для мышей и крыс - более 4 640 мг/кг; острая дермальная токсичность (LD₅o) Для кроликов - более 2 ООО мг/кг, для крыс - более 10 ООО мг/кг; острая ингаляционная токсичность (LC₅₀) для крыс - более 2,88 мг/л. Токсичен для пчел. СК₅₀ для рыб 130—150 мг/л при экспозиции 96 ч.

Мутагенный и онкогенный эффекты при использовании препарата не наблюдались.

Гигиенические нормативы для дифлубензурона в России:

МДУ для яблок - 0,1 мг/кг.

Область применения препарата. Несистемный регулятор роста насекомых с контактным и кишечным действием. Используется для уничтожения широкого диапазона насекомых-вредителей, питающихся листьями лесных и плодовых деревьев, а гакже плодами. Эффективен против яблонной плодожорки, листоверток и др.

1. Погрешность измерений

При соблюдении всех регламентированных условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности Р = 0,95 не превышает значений, приведенных в табл. 1 для соответствующих диапазонов концентраций.

Таблица 1

Метрологические параметры

Объект анали за Диапазон опреде ляемых концен траций, мг/кг, мг/кг Показатель точности*' (границы относительной погрешности (Р - 0,95), ±5, % Показатель повторяемости (относительное срсднеква-дратичсс-кое отклонение повторяемости), ап % Показатель воспроизводимости (относительное средне-квадратическое отклонение воспроизводимости), aRy % 11редсл повторяемости (значение допустимого расхождения между результатами параллельных определений), г, % Предел воспроизводимости (значение допустимого расхождения между результатами измерений, полученных в разных лабораториях), Я, % Ягоды от 0,01 до 0,1 вкл. 24 9 12 25 34 Сок от 0,01 до 0,1 вкл. 24 9 12 25 34 ^Соответствует расширенной неопределенности £/«**. при коэффициенте охвата^ 2

Таблица 2 Полнота извлечения дифлубензурона, стандартное отклонение, доверительный интервал среднего результата для п — 20, Р= 0,95

Анализируемый объект Предел обнару жения, мг/кг Диапазон определяемых концентраций, мг/кг (мг/дм3) Полнота извлечения, % Стандартное отклонение, S Доверительный интервал среднего результата, ± % Ягоды 0,01 0,01—0,1 88,6 4,5 2,1 Сок 0,01 0,01—0,1 92,3 4,1 1,8

2. Метод измерений

Методика основана на определении дифлубензурона методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с УФ-детектором после его извлечения из образцов ацетонитрилом и очистке экстрактов на патронах для твердофазной экстракции (ТФЭ).

Идентификация дифлубензурона проводится по времени удерживания, количественное определение - методом абсолютной калибровки.

Избирательность метода обеспечивается сочетанием условий подготовки проб и хроматографирования.

3. Средства измерений, реактивы, вспомогательные устройства и материалы

3.1. Средства измерений Жидкостный хроматограф с быстросканирую-щим ультрафиолетовым детектором, снабженный дегазатором, автоматическим пробоотборником и термостатом колонки Весы аналитические с пределом взвешивания до 210 г и пределом допустимой погрешности 0,2 мг

Весы технические с пределом взвешивания до 400 г и допустимой погрешностью 0,1 г Колбы мерные на 10. 100 и 1 000 см³ Микродозаторы одноканальные переменного объема от 200 до 1 000 мм³ и от 1 до 5 см³ Цилиндры мерные на 50 и 100 см³

Примечание. Допускается использование средств измерения с аналогичными или лучшими характеристиками.

3.2. Реактивы

Ацетонитрил, хч

Вода бидистиллированная, деионизированная Дифлубензурон, аналитический стандарт 99,9 % Диэтиловый эфир, ч н-Гексан, хч

Подвижная фаза для ВЭЖХ: смесь ацетонитрил-вода (60 :40, по объему)

Элюент № 1: смесь вода-ацетонитрил (70 : 30, по объему)

Элюент № 2: смесь гексан-диэтиловый эфир (80 : 20, по объему)

Элюент № 3: смесь гексан-диэтиловый эфир (55 : 45, по объему)

Элюент № 4: смесь вода-ацетонтрил (95 : 5, по объему)

Примечание. Допускается использование реактивов с более высокой квалификацией, нс требующих дополнительной очистки растворителей.

3.3. Вспомогательные устройства и материалы

Аналитическая колонка, заполненная сорбентом с привитой алкильной цепью С18, модифицированной монофункциональной полярной группой, (50 х 2,1) мм, 1,7 мкм Аппарат для встряхивания проб Вакуумный водоструйный насос Воронки химические конусные Колбы круглодонные на шлифе вместимостью 50 и 100 см³

Колбы плоскодонные конические вместимостью 100 см³

Патроны для ТФЭ с привитыми гексадециль-ными группами, 0,4 г

Патроны для ТФЭ на основе силикагеля с постоянной активностью, 0,4 г Пробирки полипропиленовые центрифужные с крышками объемом 50 см³ Ротационный вакуумный испаритель с мембранным насосом, обеспечивающим вакуум до 10 мбар

Ультразвуковая ванна с рабочей частотой 35 кГц Центрифуга с максимальной рабочей частотой вращения 4 ООО обУмин

Примечание. Допускается использование вспомогательных устройств и материалов с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.

4. Требования безопасности

4.1.    При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007-76, требования по электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019-09, а также требования, изложенные в технической документации на жидкостный хроматограф.

4.2.    Помещение лаборатории должно быть оборудовано приточновытяжной вентиляцией, соответствовать требованиям пожарной безопасности по ГОСТ 12.1.004-91 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009-83. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать ПДК (ОБУВ), установленных ГН 2.2.5.1313—03 и ГН 2.2.5.2308—07.

Организация обучения работников безопасности труда - по ГОСТ 12.0.004-15.

4.3.    При работе с газами, находящимися в баллонах под давлением до 15 МПа (150 кгс/см²), необходимо соблюдать Федеральные нормы и правила в области промышленной безопасности «Правила промышленной безопасности опасных производственных объектов, на которых используется оборудование, работающее под избыточным давлением» (утв. Приказом Ростехнадзора от 25.03.2014 № 116). Запрещается открывать вентиль баллона, не установив на нем понижающий редуктор.

5. Требования к квалификации операторов

Измерения в соответствии с настоящей методикой может выполнять специалист, имеющий опыт работы на жидкостном хроматографе, освоивший данную методику и подтвердивший экспериментально соответствие получаемых результатов нормативам контроля погрешности измерений.

6. Условия измерении

При выполнении измерений выполняют следующие условия:

- процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха (20 ± 5) °С и относительной влажности не более 80 %;

- выполнение измерений на жидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

7. Подготовка к определению

7.1. Кондиционирование колонки

Перед началом анализа колонку кондиционируют в потоке подвижной фазы (0,1—0,2 см³/мин) до стабилизации нулевой линии.

7.2. Приготовление растворов

1.2.1.    Для приготовления элюента Ms 1 смешивают в мерной колбе на 100 см* 30 см³ ацетонитрила и 70 см³ бидистиллированной воды, используя мерные цилиндры.

1.2.2.    Для приготовления элюента Ms 2 смешивают в мерной колбе на 100 см³ 80 см³ гексана и 20 см³ диэтилового эфира, используя мерные цилиндры.

1.2.3.    Для приготовления элюента Ms 3 смешивают в мерной колбе на 100 см³ 55 см³ гексана и 45 см³ диэтилового эфира, используя мерные цилиндры.

7.2.4.    Для приготовления элюента Ms 4 смешивают в мерной колбе на 100 см³ 5 см* ацетонитрила и 95 см³ бидистиллированной воды, используя мерные цилиндры.

7.2.5.    Для приготовления подвижной фазы в мерную колбу на 1 дм³ вносят 600 см³ ацетонитрила и доводят водой объем раствора до метки, встряхивая в течение 2 мин.

7.3. Приготовление основного и градуировочных растворов

1.3Л. Основной раствор с концентрацией 0,5мг/см³: точную навеску дифлубензурона (50 ± 0,5 мг) помещают в мерную колбу вместимостью 100 см³, растворяют в ацетонитриле и доводят объем до метки ацетонитрилом.

Градуировочные растворы с концентрациями дифлубензурона 0,1; 0,2; 0,5 и 1,0мкг/см³ готовят методом последовательного разбавления по объему, используя раствор подвижной фазы (смесь ацетонитрил-вода в соотношении 60 : 40).

7.3.2.    Раствор № 1 с концентрацией 1,0 мкг/см³'. в мерную колбу вместимостью 100 см³ вносят 0,2 см³ основного раствора и доводят до метки подвижной фазой.

7.3.3.    Раствор Ms 2 с концентрацией 0,5мкг/см³: в мерную колбу вместимостью 10 см³ помещают 5,0 см³ раствора № 1 и доводят объем до метки подвижной фазой.

7.3.4.    Раствор Мя 3 с концентрацией 0,2 мкг/см³: в мерную колбу вместимостью 10 см³ помещают 2,0 см³ раствора № 1 и доводят объем до метки подвижной фазой.

7.3.5.    Раствор №4 с концентрацией 0,1 мкг/см³: в мерную колбу вместимостью 10 см³ помещают 1,0 см³ раствора № 1 и доводят объем до метки подвижной фазой.

Основной раствор можно хранить в холодильнике при температуре О—4 °С в течение 1 месяца, градуировочные растворы - в течение суток.

При изучении полноты извлечения дифлубензурона в ягодах и соке винограда используют ацетонитрильные растворы вещества, приготовленные из основного раствора методом последовательного разбавления по объему ацетонитрилом.

7.4. Построение градуировочного графика

Для построения градуировочного графика (площадь пика — концентрация дифлубензурона в растворе) в хроматограф вводят по 10 мм^я градуировочных растворов (не менее 3 параллельных измерений для каждой концентрации, не менее 4 точек по диапазону измеряемых концентраций). Затем измеряют площади пиков и строят график зависимости среднего значения площади пика от концентрации дифлубензурона в градуировочном растворе.

Методом наименьших квадратов рассчитывают градуировочный коэффициент (К) в уравнении линейной регрессии:

С- K S, где

S - площадь пика градуировочного раствора.

Градуировку признают удовлетворительной, если значение коэффициента линейной корреляции оказывается не ниже 0,99.

Градуировочную характеристику необходимо проверять при замене реактивов, хроматографической колонки или элементов хроматографической системы, а также при отрицательном результате контроля градуировочного коэффициента.

Градуировочную зависимость признают стабильной при выполнении следующего условия:

|C-CJ

Ю0<Л_,.где

С — аттестованное значение массовой концентрации дифлубензурона в градуировочном растворе;

С_к - результат контрольного измерения массовой концентрации дифлубензурона в градуировочном растворе;