Государственное санитарно-эпидемиологическое нормирование _Российской    Федерации___

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Измерение концентраций полиоксина Б в воздухе рабочей зоны, атмосферном воздухе населенных мест и смывах с кожных покровов операторов методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

Методические указания МУК 4.1.3353—16

Издание официальное

Москва • 2017

Федеральная служба по надзору в сфере зашиты прав потребителей и благополучия человека

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Измерение концентраций полиоксина Б в воздухе рабочей зоны, атмосферном воздухе населенных мест и смывах с кожных покровов операторов методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

Методические указания МУК 4.1.3353—16

навливают площади пиков полиоксина Б, на основании которых строят градуировочную зависимость.

7.5. Условия хроматографирования Измерения выполняют при следующих режимных параметрах: Жидкостный хроматограф с быстроеканирующим ультрафиолетовым детектором, снабженный дегазатором, автоматическим пробоотборником и термостатом колонки

Хроматографическая колонка стальная, длиной 150 мм, внутренним диаметром 4,6 мм, заполненная обращенно-фазным сорбентом с привитыми алкильными группами для удерживания гидрофильных соединений, зернением 5 мкм

Рабочая длина волны: 270 нм

Температура колонки: 25 °С

Подвижная фаза: мстанол-вода (15 : 85, по объему)

Скорость потока элюента: 0,7 см³/мин Объем вводимой пробы: 20 мм³ Линейный диапазон детектирования: 4—24 нг.

7.6. Подготовка салфеток для проведения смыва

7.6.1.    Приготовление раствора натрия углекислого с массовой долей 5 %(5%о раствор).

Навеску (25 -t 0,1) г натрия углекислого помещают в мерную колбу вместимостью 500 см³, растворяют в деионизированной воде, доводят водой до метки, перемешивают.

7.6.2.    Подготовка салфеток для проведения смыва.

Вырезают салфетки (лоскуты) из белой бязи размером 10 х 10 см, затем их последовательно обрабатывают 5 %-м раствором углекислого натрия (при кипячении), водой до нейтральной реакции промывных вод, 2-кратно промывают этиловым спиртом, сушат на воздухе при комнатной температуре. До использования салфетки хранят в герметично закрытой стеклянной таре.

8. Отбор и условия хранения проб

8.1. Воздушная среда Отбор проб осуществляют в соответствии с требованиями ГОСТ 17.2.4.02—81 «ОПА. Общие требования к методам определения загрязняющих веществ в воздухе населенных мест», с требованиями ГОСТ 12.1.005—88 «ССБТ. Общие санитарно-гигиенические требования к воздуху рабочей зоны» и Руководства Р 2.2.2006—05 (приложение 9, обязательное) «Общие методические требования к организации и проведению

МУК 4.1.3353—16

контроля содержания вредных веществ в воздухе рабочей зоны», п. 2 «Контроль соответствия максимальным ПДК».

Воздух с объемным расходом 1—2 дм³/мин аспирируют через пробоотборные трубки, заполненные пористым полимерным сорбентом. Для определения вещества на уровне предела обнаружения (0,2 мг/м³) необходимо отобрать 2 дм³ воздуха (воздух рабочей зоны), для атмосферного воздуха необходимо отобрать 25 дм* воздуха на уровне предела обнаружения (0,016 мг/м³). Экспонированные трубки, герметизированные заглушками, помещают в полиэтиленовые пакеты. Срок хранения отобранных проб в морозильнике при температуре -18 °С - 7 дней.

8.2. Смывы с кожных покровов

Смывы проводят в конце работы или после выполнения отдельных операций с открытых и закрытых спецодеждой или другими СИЗ участков тела (лоб, лицо, шея, грудь, предплечье, голень, кисти рук, включая межнальцевые промежутки).

До работы выбирают участок кожи, обрабатывают его для удаления загрязнений, фиксируют площадь (не менее 200 см²). При необходимости отбирают фоновые смывы.

Смыв выполняют способом обмыва фиксированного участка кожи этиловым спиртом, помещая 20 см³ в стеклянную емкость с металлической крышкой. Тканевой салфеткой, смоченной растворителем, с помощью пинцета (индивидуально) обмывают этот участок сверху вниз. Операцию повторяют дважды.

Срок хранения экспонированных проб смывов, помещенных в герметично закрытые емкости, в морозильнике при температуре -18 °С -7 дней.

9. Выполнение измерений

9.1. Воздушная среда Содержимое экспонированных сорбционных трубок (сорбент и стекловату) переносят в химический стакан вместимостью 150 см³, заливают 5—6 см³ смесью метиловый спирт-вода (в соотношении 95 : 5, по объему), помещают на ультразвуковую баню на 2 минуты, затем помещают на встряхиватель на 20 минут. Растворитель сливают, содержимое трубки еще дважды обрабатывают новыми порциями смеси метиловый спирт-вода объемом 5—6 см³, выдерживая на встряхивателе по 10 минут.

Объединенный экстракт переносят (через воронку) в круглодониую колбу, упаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре бани не выше 35 °С почти досуха, оставшийся растворитель отду-

11

вают потоком теплого воздуха. Остаток растворяют в 2 см³ подвижной фазы и анализируют при условиях хроматографирования, указанных в п. 7.5.

Пробу вводят в испаритель хроматографа не менее двух раз. Устанавливают площадь пика действующего вещества, с помощью градуировочного графика определяют концентрацию полиоксина Б в хроматографируемом растворе.

9.2. Смывы с кожных покровов

Пробу смыва сливают (через воронку) в колбу для упаривания, с помощью пинцета извлекают салфетку, помещают в конусную химическую воронку, установленную в муфту колбы для упаривания, тщательно отжимают и промывают этиловым спиртом дважды порциями по 10 см³, предварительно ополаскивая растворителем емкость, в которой находилась проба.

Объединенный раствор упаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре бани не выше 40 °С почти досуха, оставшийся растворитель отдувают потоком теплого воздуха. Остаток растворяют в 2 см³ подвижной фазы, подготовленной по п. 7.1, и анализируют при условиях хроматографирования, указанных в п. 7.5.

Пробу вводят в испаритель хроматографа не менее двух раз. Устанавливают площадь пика полиоксина Б с помощью градуировочного графика, определяют концентрацию полиоксина Б в хроматографируемом растворе.

Образцы, дающие пики, большие, чем градуировочный раствор с концентрацией 2,4 мкг/см³, разбавляют подвижной фазой (не более чем в 50 раз).

10. Обработка результатов анализа

10.1. Воздушная среда Концентрацию вещества в пробе воздуха (А), мг/м³, рассчитывают по формуле:

С — концентрация полиоксина Б в хроматографируемом растворе, найденная по градуировочному графику в соответствии с величиной площади хроматографического пика, мкг/см³;

W- объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, см³;

V,- объем пробы воздуха, отобранный для анализа, приведенный к стандартным условиям (давление 760 мм рт. ст., температура 20 °С), дм³.

МУК 4.1.3353—16

у _ Я ■ Р ■ Ut ' ~ 273 + Т *

Г - температура воздуха при отборе проб (на входе в аспиратор), °С; Р - атмосферное давление при отборе пробы, мм рт. ст.; и - расход воздуха при отборе пробы, дм³/мин; t - длительность отбора пробы, мин;

R - коэффициент, равный 0,386 для воздуха рабочей зоны и 0,357 для атмосферного воздуха.

10.2. Смывы с кожных покровов Концентрацию вещества в пробе смыва Х_у мкг/смыв, рассчитывают по формуле:

X~CW_y где

С - концентрация вещества в хроматографируемом растворе, найденная по градуировочному графику в соответствии с величиной площади хроматщрафического пика, мкг/см³;

W- объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, см³. Примечание. Идентификация и расчет концентрации вещества в пробах могут быть проведены с помощью компьютерной программы обработки хроматографических данных, включенной в аналитическую систему.

11. Оформление результатов измерений

Результат количественного анализа представляют в виде:

• результат анализа X в мг/м³, характеристика погрешности 5, % (таблица), Р = 0,95 или

X ± А мг/м³, Р = 0,95, где

X - среднее арифметическое результатов определений, мг/м³;

Д - граница абсолютной погрешности, мг/м³;

S - граница относительной погрешности методики (показатель точности по диапазону концентраций, таблица), %.

Результат измерений должен иметь тот же десятичный разряд, что и погрешность.

Если содержание вещества менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде:

13

МУК 4.1.3353—16

«содержание полиоксина Б в пробе воздуха рабочей зоны - менее 0,27 мг/м³; в пробе атмосферного воздуха - менее 0,016 мг/м³; в пробе смыва - менее 0,4 мкг/смыв»*

* - 0,2 мг/м³; 0,016 мг/м³; 0,4 мкг/смыв - пределы обнаружения при отборе 2 дм³ воздуха рабочей зоны; при отборе 25 дм³ атмосферного воздуха; в пробе смыва (фиксированная площадь смыва, 200 см*) соответственно.

12. Контроль качества результатов измерений

Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-(1-6)—02 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений».

12,1, Контроль стабильности градуировочной характеристики проводят в начале и по окончании каждой серии анализов.

При контроле стабильности градуировочной характеристики проводят измерения не менее трех образцов растворов для градуировки, содержание полиоксина Б в которых должно охватывать весь диапазон концентраций от 0,2 до 2,4 мкг/см .

Градуировочная характеристика считается стабильной, если для каждого из используемого для контроля градуировочного раствора сохраняется соотношение:

\x-c\-m

А ~ --- <    В, где

С

X - концентрация полиоксина Б в пробе при контрольном измерении, мкг/см³;

С - известная концентрация градуировочного раствора полиоксина Б, взятая для контроля стабильности градуировочной характеристики, мкг/см³;

В - норматив контроля погрешности градуировочной характеристики, % (В « 10 % при Р = 0,95).

Если величина расхождения (А) превышает 10 %, то делают вывод о невозможности применения градуировочной характеристики для дальнейших измерений. В этом случае выясняют и устраняют причины нестабильности градуировочной характеристики и повторяют контроль ее стабильности с использованием других градуировочных растворов полиоксина Б, предусмотренных МВИ. При повторном обнаружении нестабильности градуировочной характеристики устанавливают ее заново согласно п. 7.4.

Стабильность результатов измерений контролируют перед проведением измерений, анализируя один из градуировочных растворов.

МУК 4.1.3353—16

12.2. Плановый внутрилабораторный оперативный контроль процедуры выполнения анализа проводится методом добавок.

Образцами для контроля являются реальные пробы воздушной среды и смывов с кожных покровов. Объем отобранных для контроля процедуры выполнения анализа проб воздуха и смывов с кожи должен соответствовать удвоенному объему, необходимому для проведения анализа по методике; фиксированная площадь смыва должна быть увеличена в 2 раза. После отбора проб экстракт с трубки, а также пробу смыва делят на две равные части, первую из которых анализируют в точном соответствии с прописью методики и получают результат анализа исходной рабочей пробы - X. Во вторую часть делают добавку анализируемого компонента (величина добавки С₀ должна соответствовать 50— 150 % от содержания компонента в пробе, общая концентрация не должна превышать верхнюю границу диапазона измерения) и анализируют в точном соответствии с прописью методики, получая результат анализа рабочей пробы с добавкой - X. Результаты анализа исходной рабочей пробы (X) и рабочей пробы с добавкой (X) получают в условиях повторяемости (один аналитик, использование одного набора мерной посуды, одной партии реактивов и т. д.).

Величина добавки С₀ должна удовлетворять условию:

С„ > А,ц + Д,.,., где

(±Д_л£,) - характеристика погрешности (абсолютная погрешность) результатов анализа, соответствующая содержанию компонента в испытуемом образце (расчетному значению содержания компонента в образце с добавкой), мг/м³, мкг/смыв.

Допустимо характеристику погрешности результатов анализа при внедрении методики в лаборатории устанавливать на основе выражения Д_Л = ±0,84 Д с последующим уточнением по мере накопления информации, где Д - граница абсолютной погрешности, мг/м³, мкг/смыв;

8- граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций, таблица), %.

Контроль проводят путем сравнения результата контрольной процедуры К_к с нормативом контроля К.

Результат контрольной процедуры К_к рассчитывают по формуле:

К^Х'-Х-С* где

15

ББК 51.24 И37

И37 Измерение концентраций полиоксина Б в воздухе рабочей зоны, атмосферном воздухе населенных мест и смывах с кожных покровов операторов методом высокоэффективной жидкостной хроматографии: Методические указания.—М.: Федеральный центр гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора, 2017.—16 с.

ISBN 978—5—7508—1542—5

1.    Разработаны ФБУН «Федеральный научный центр гигиены им. Ф.Ф. Эрисмана» Роспотребнадзора (Т. В. Юдина, Н. Е. Федорова,

Л. П. Мухина).

2.    Рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемиологическому нормированию Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 17 декабря 2015 г. № 2).

3.    Утверждены руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека. Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации А. Ю. Поповой 10 марта 2016 г.

4.    Введены впервые.

ББК 51.24

Ответственный за выпуск Н. В. Митрохина

Редактор К. В. Шмат Компьютерная верстка Е. В. Ломановой

Подписано в печать 07.02.17 Формат 60x88/16    Печ. л. 1,0

Тираж 125 экз.    Заказ 11

Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека 127994, Москва, Вадковский пер., я 18, стр. 5,7

Оригинал-макет подготовлен к печати и тиражирован отделением издательского обеспечения отдела научно-методического обеспечения Федерального центра гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора 117105, Москва, Варшавское ш., 19а Реализация печатных изданий, тсл./факс: 8 (495) 952-50-89

© Роспотребнадзор, 2017 ©Федеральный центр гигиены и

эпидемиологии Роспотребнадзора, 2017

МУК 4.1.3353—16

УТВЕРЖДАЮ Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека. Главный государственный санитарный врач Российской Федерации

А. Ю. Попова

10 марта 2016 г.

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Измерение концентраций полиоксина Б в воздухе рабочей зоны, атмосферном воздухе населенных мест и смывах с кожных покровов операторов методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

Методические указания МУК 4.1.3353—16

Свидетельство об аттестации № РОСС RU.0001.310430/0241.26Л0.15.

Настоящие методические указания устанавливают порядок применения метода высокоэффективной жидкостной хроматографии для определения в воздухе рабочей зоны, атмосферном воздухе населенных мест и смывах с кожных покровов операторов массовой концентрации полиоксина Б в диапазоне 0,2—2,0 мг/м³, 0,016—0,16 мг/м³ и 0,4— 4,0 мкг/смыв соответственно.

Методические указания носят рекомендательный характер.

Полиоксин Б

Химический класс - аллофуроновые кислоты.

5-(Е)-(2-амино-5-0-карбамоил-2-дезокси-Ь-ксилонамидо)-1,5-диде-зокси-1 -(1,2,3,4-тетрагидро-5-гидроксиметил-2,4-диоксипирим идин-1 -ил)-Р-1>аллофурановая кислота (IUPAC).

C17H25N5O13.

Молекулярная масса 507,41.

3

МУК 4.1.3353—16

Таблица 1 Метрологические параметры

Анализи руемый объект Диапазон опреде ляемых концен траций мг/м\ мкг/смыв Показа тель точности (граница относи тельной погреш ности), +5%, Р ■* 0,95 Показатель повторяемости (среднеквадратичное отклонение повторяемости), ап% Показатель воспроизводимости (среднеквадратичное отклонение воспроизводимости). Or, % Показатель воспроизводимости (среднеквадратичное отклонение воспроизводимости), г,% Предел воспроизводимости (значение допустимого расхождения между двумя результатами измерений, полученными в разных лабораториях), /?,% Атмосферный воздух о о' © 17 4,1 6 12 17 Воздух рабочей зоны 0,2—2,0 17 4,1 6 12 17 Смывы с кожных покровов 0,4—4,0 16 4,8 6,7 13 18

Таблица 2

Анализируемый объект Метрологические параметры, Р = 0,95, л = 20 предел обнаружения, мг/м3, мкг/смыв диапазон определяемых концентраций, мг/м3 полнота извлечения вещества, % стандартное отклонение, % доверительный интервал среднего результата, ±, % Атмосферный воздух 0,016 0,016—0,16 91,8 2,3 1,2 Воздух рабочей зоны 0,2 0,2—2,0 91,8 2,3 1,2 Смывы с кожных покровов 0,4 0,4—4,0 88,5 6,2 3,3

2. Метод измерений

Измерения концентраций полиоксина Б выполняют методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) на обращенной фазе с ультрафиолетовым детектором.

Концентрирование вещества из воздуха осуществляют на пробоотборные трубки, заполненные пористым полимерным сорбентом, экстракцию с трубок проводят смесыо метиловый спирт-вода (в соотношении 95 : 5, по обьему). Смыв с кожных покровов проводят этиловым спиртом.

5

Нижний предел измерения в анализируемом объеме пробы - 4 нг. Средняя полнота извлечения с трубок: 91,8 %, с поверхности кожи - 88,5 %.

3. Средства измерений, вспомогательные устройства, реактивы и материалы

3.1. Средства измерений Жидкостный хроматограф с быстроскани-рующим ультрафиолетовым детектором, снабженный дегазатором, автоматическим пробоотборником и термостатом колонки Барометр-анероид с диапазоном измерения атмосферного давления 5—790 мм рт. ст.

Весы лабораторные аналитические, наибольший предел взвешивания 110 г, предел допустимой погрешности ± 0,2 мг

Гигрометр с диапазоном измерений относительной влажности от 30 до 90 %

Меры массы

Пробоотборное устройство 2-канальное, с диапазонами расхода 0,2—1,0 дм³/мин и 5,0—1,0 дм³/мин и пределом допустимой погрешности ± 5—7 %

Термометр лабораторный шкальный, пределы измерения -35 °С—55 °С Цилиндры мерные 2-го класса точности вместимостью 100, 500 и 1 000 см³

Примечание. Допускается использование средств измерения с аналогичными или лучшими характеристиками.

3.2. Реактивы

Полиоксин Б, аналитический стандарт с содержанием основного компонента 97,6 % (полиоксин)

Метиловый спирт (метанол), хч

Вода для лабораторного анализа (бидистилли-

рованная или деионизованная)

Натрий углекислый (карбонат натрия), хч Спирт этиловый (этанол) ректификованный

Примечание. Допускается использование реактивов с более высокой квалификацией, не требующих дополнительной очистки растворителей.

МУК 4.1.3353—16

3.3. Вспомогательные устройства, материалы

Аппарат для встряхивания или орбитальный шейкер, диапазон регулировки оборотов 50—

ГОСТ 25336-82 ТУ 9398-005-0576-908

ГОСТ 9737-93 ГОСТ 427-75

ТУ 9471-002-10471723—03

ГОСТ 25336-82 ГОСТ 21241-89

ГОСТ 1770-74

Ректификационная колонна с числом теоретических тарелок не менее 30 Ротационный вакуумный испаритель с мембранным насосом, обеспечиваюшим вакуум до 10 мбар Стаканы химические с носиком, вместимостью 150 см³    ГОСТ 25336-82

Стекловата Стеклянные палочки

Трубки для отбора проб воздуха 2-секционные (длиной 100 мм, внутренним диаметром 8 мм), заполненные полимерным сорбентом на основе сополимера дивинилбензола и стирола, обработанным ионообменной смолой (100 мг сорбента во фронтальной секции, 50 мг - в задней) - (пробоотборные трубки)

Хроматографическая колонка стальная, длиной 150 мм, внутренним диаметром 4,6 мм, заполненная обращенно-фазным сорбентом с привитыми алкильными группами для удерживания гидрофильных соединений, зернением 5 мкм Шприц для ввода образцов для жидкостного хроматографа вместимостью 50—100 мм³

Примечание. Допускается применение оборудования с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.

7

4. Требования безопасности

4.1.    При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007—76, требования по электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ Р 12.1.019-09, а также требования, изложенные в технической документации на жидкостный хроматограф.

4.2.    Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности по ГОСТ 12.1.004-91 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009-83. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать ПДК (ОБУВ), установленных ГН 2.2.5.1313—03 и ГН 2.2.5.2308—07. Организация обучения работников безопасности труда -по ГОСТ 12.0.004-90.

5. Требования к квалификации операторов

К выполнению измерений допускают специалиста, прошедшего обучение, освоившего методику, владеющего техникой, имеющего опыт работы на жидкостном хроматографе и подтвердившего соответствие получаемых результатов нормативам контроля погрешности измерений по п. 12.

6. Условия измерений

При выполнении измерений соблюдают следующие условия:

-    процессы приготовления рас творов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха (20 ± 5) °С и относительной влажности не более 80 %;

-    выполнение измерений на жидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

7. Подготовка к выполнению измерений

Выполнению измерений предшествуют следующие операции: подготовка подвижной фазы для ВЭЖХ, кондиционирование хроматографической колонки, приготовление растворов для градуировки и внесения, установление градуировочной характеристики, подготовка сорбционных трубок и салфеток для отбора проб, отбор проб.

7.7. Подготовка подвижной фазы для ВЭЖХ

В мерную колбу вместимостью 1 000 см³ помещают 150 см³ метанола, добавляют 850 см³ бидистиллированной или деионизованной воды, перемешивают, фильтруют через мембранный фильтр, дегазируют.

Подвижную фазу хранят в темном месте (в емкости из темного стекла) не более 14 дней.

8

МУК 4.1.3353—16

7.2. Кондиционирование хроматографической колонки для ВЭЖХ

Промывают колонку подвижной фазой, приготовленной по п. 7.1, при скорости подачи растворителя 1,0см³/мин до установления стабильной базовой линии.

7.3. Приготовление градуировочных растворов и растворов внесения

7.3.1.    Исходный раствор попиоксина Б для градуировки (концентрация 100 мкг/см³). В мерную колбу вместимостью 100 см³ помещают 0,01 г полиоксина Б, растворяют в 50—60 см³ метанола, доводят метанолом до метки, тщательно перемешивают.

Раствор хранят в морозильной камере при температуре -18 °С в течение месяца.

7.3.2.    Рабочий раствор № 1 полиоксина Б для градуировки и внесения (концентрация 10,0 мкг/см³). В мерную колбу вместимостью 100 см³ помещают 10,0 см³ исходного градуировочного раствора с концентрацией 100,0 мкг/см³ (п. 7.3.1), доводят до метки метанолом, тщательно перемешивают, получают рабочий раствор № 1 с концентрацией полиоксина Б 10,0 мкг/см³.

Раствор хранят в морозильной камере при температуре -18 °С в течение месяца.

Этот раствор используют для приготовления проб с внесением при оценке полноты извлечения действующего вещества методом «внесено-найдено» и контроля качества результатов измерений методом добавок.

7.3.3.    Рабочие растворы № 2—б полиоксина Б для градуировки (концентрация 0,2—2,4 мкг/см³). В 5 мерных колб вместимостью 100 см³ помещают 0,2; 0,5; 1,0; 2,0; 2,4 см³ исходного раствора полиоксина с концентрацией 100 мкг/см³ (п. 7.3.1), доводят до метки подвижной фазой, приготовленной по п. 7.2, тщательно перемешивают, получают рабочие растворы № 2—6 с концентрациями полиоксина Б 0,2; 0,5, 1,0, 2,0 и 2,4 мкг/см³.

Растворы хранят в холодильнике при температуре 4—6 °С не более 2 дней.

7.4. Установление градуировочной характеристики Градуировочную характеристику, выражающую линейную (с угловым коэффициентом) зависимость площади пика от концентрации полиоксина Б в растворе, устанавливают методом абсолютной калибровки по 5 растворам для градуировки.

В инжектор хроматографа вводят по 20 мм³ каждого градуировочного раствора и анализируют в условиях хроматографирования, указанных ниже. Осуществляют не менее 5 параллельных измерений. Уста-

9