Государственное санитарно-эпидемиологическое нормирование _Российской    Федерации_

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Определение остаточных количеств пираклостробина в зеленой массе и зерне гороха, в ботве и корнеплодах сахарной свеклы методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

Методические указания МУК 4.1.3208—14

Издание официальное

Москва • 2015

Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Определение остаточных количеств пираклостробина в зеленой массе и зерне гороха, в ботве и корнеплодах сахарной свеклы методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

Методические указания МУК 4.1.3208—14

ББК 51.23

060

060 Определение остаточных количеств гтираклостробина в зеленой массе и зерне гороха, в ботве и корнеплодах сахарной свеклы методом высокоэффективной жидкостной хроматографии: Методические указания.—М.: Федеральный центр гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора, 2015.—24 с.

ISBN 978—5—7508-1392—6

1.    Разработаны Российским государственным аграрным университетом -МСХА им. К. А. Тимирязева, Учебно-научный консультационный центр «Агроэкология пестицидов и агрохимикатов» Минсельхоза России (В. А. Калинин,

Е. В. Довгилевич, А. В. Довгилевич, Е. Н. Тестова).

2.    Рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемиологическому нормированию Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 26 июня 2014 г. № 1).

3.    Утверждены руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации А. Ю. Поповой 30 июля 2014 г.

4.    Введены впервые.

ББК 51.23

Редактор Н. В. Кожока Технический редактор Е. В. Ломанова

Подписано в печать 16.06.15 Формат 60x84/16    Уел.    печ.    л.    1,39

Тираж 150 экз.    Заказ    44

Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека 127994, Москва, Вадковский пер., д. 18, стр. 5,7

Оригинал-макет подготовлен к печати и тиражирован отделом издательского обеспечения Федерального центра гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора 117105, Москва, Варшавское ш., 19а Отделение реализации, тел./факс 8(495)952-50-89

О Роспотребнадзор, 2015 © Федеральный центр гигиены и

эпидемиологии Роспотребнадзора, 2015

МУК 4.1.3208—14

УТВЕРЖДАЮ Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека. Главный государственный санитарный врач Российской Федерации

А. Ю. Попова

30 июля 2014 г.

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Определение остаточных количеств нираклостробина в зеленой массе и зерне гороха, в ботве и корнеплодах сахарной свеклы методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

Методические указания МУК 4.1.3208—14

Свидетельство о метрологической аттестации №01.00282-2008/ 0188.19.12.13 от 19.12.2013.

Настоящие методические указания устанавливают порядок применения метода высокоэффективной жидкостной хроматографии для определения уровня остаточных количеств пираклостробина в зеленой массе гороха и ботве сахарной свеклы в диапазоне 0,2—2,0 мг/кг, в зерне гороха и корнеплодах сахарной свеклы в диапазоне 0,1—1,0 мг/кг. Методические указания носят рекомендательный характер.

Название действующего вещества по ИСО: пираклостробин.

Название действующего вещества по ИЮПАК: метил N-{2-[l-(4-хлорфенил)-! Н-пиразол-З-илоксиметил] фенил}(Н-метокси)карбамат.

Структурная формула: ¹

Эмпирическая формула: C19H18CIN3O4.

Молекулярная масса: 387,8.

Цвет, запах: химически чистый пираклостробин представляет собой белый или светло-бежевый кристаллический порошок без запаха.

Температура плавления: 63,7—65,2 °С.

Давление паров: 2,6 х 10~⁵ мПа (при 20 °С).

Коэффициент распределения октанол-вода: K^logP = 3,99 (при 22 °С).

Растворимость в воде: 1,9 мг/дм¹ (при 20 °С).

Растворимость в органических растворителях (г/дм¹ при 20 °С): ацетон - более 200, ацетонитрил - более 980, изопропанол - 40, метанол -140.

Стабилен в течение более 30 дней при pH 5,7 и температуре 25 °С; подвержен фотолизу в воде - ДТ₅₀ составляет менее 2 ч.

Краткая токсикологическая характеристика. Пираклостробин относится к малоопасным по острой оральной (ЛД50 для крыс более 5 000 мг/кг) и дермальной токсичности (ДЦ$о Для крыс более 2 000 мг/кг), но к умеренно опасным веществам по ингаляционной токсичности (ЛК₅₀ для крыс (4 ч) от 4 000 до 7 000 мг/м¹). Не вызывает раздражения слизистых оболочек глаз и кожи и не обладает мутагенным, тератогенным, эмбриотоксическим, канцерогенным действием.

Область применения. Пираклостробин - фунгицид из группы стро-билуринов контактного и глубинного действия с длительным защитным эффектом. Высокоэффективен против возбудителей ложной и мучнистой настоящей росы, в том числе против рас возбудителя, устойчивых к металаксилу и производным триазола.

Рекомендуется для борьбы с фитопатогенными грибами на зерновых, овощных и плодовых культурах с нормой расхода 50—-250 г д.в./га.

В России установлены следующие гигиенические нормативы: ДСД

-    0,03 мг/кг массы человека; ПДК в воде водоемов - 0,01 мг/дм¹; ОДК в почве - 0,2 мг/кг; ОБУВ в воздухе рабочей зоны - 1,0 мг/м¹; в атмосферном воздухе - 0,01 мг/м¹; МДУ в продукции (мг/кг): виноград - 2,0; плодовые (семечковые) - 0,3; зерно хлебных злаков - 0,5; кукуруза (зерно, масло), соя (масло) - 0,02 мг/кг; соя (бобы) - 0,05 мг/кг.

МДУ пираклостробина (в импортируемой продукции, мг/кг): семена и масло подсолнечника и рапса, клубни картофеля - 0,02; горох, плоды томата - 0,3; огурцы, лук-репка и капуста - 0,2; корнеплоды моркови

-    0,1; сахарная свекла - 0,2.

МУК 4.1.3208—14

1. Погрешность измерения

При соблюдении всех регламентированных условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности Р = 0,95 не превышает значений, приведенных в табл. 1 для соответствующих диапазонов концентраций.

Полнота извлечения вещества, стандартное отклонение, доверительные интервалы среднего результата для полного диапазона концентраций (п = 20) приведены в табл. 2.

Таблица 1

Метрологические параметры для пираклостробина

Анализируемый объект Диапазон определяемых концентраций, мг/кг Показатель точности (граница относительной погрешности), ± б, % Р = 0,95 Стандартное отклонение повторяемости, <гп % Предел повторяемости, г, % Предел воспроизводимости, R, % Зеленая масса гороха 0,2—2,0 вкл. 25 1,70 4,73 6,62 Зерно гороха 0,1—1,0 вкл. 25 1,59 4,42 6,19 Ботва сахарной свеклы 0,2—2,0 вкл. 25 1,61 4,48 6,27 Корнеплоды сахарной свеклы 0,1—1,0 вкл. 25 1,44 4,00 5,61

Таблица 2

Полнота извлечения вещества, стандартное отклонение, доверительный интервал среднего результата для пираклостробина

Анализируемый объект Метрологические параметры, Р = 0,95, п = 20 Предел обнару жения, мг/кг Диапазон определяемых концентраций, мг/кг Полнота извлечения вещества, % Стандартное отклонение, 5, % Доверительный интервал среднего результата, ±, % Зеленая масса гороха 0,2 0 1 о 72,69 1,97 0,67 Зерно гороха 0,1 0,1—1,0 86,37 1,50 0,61 Ботва сахарной свеклы 0,2 0 1 о 81,18 4,07 1,55 Корнеплоды сахарной свеклы 0,1 0,1—1,0 88,28 1,98 0,82

5

2. Метод измерений

Метод основан на определении пираклостробина методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с использованием диодно-матричного детектора после его экстракции из образцов органическим растворителем, очистки экстракта перераспределением между двумя несмешивающимися фазами, на колонках с окисью алюминия и на концентрирующих патронах № 1.

Идентификация веществ проводится по времени удерживания, а количественное определение - методом абсолютной калибровки.

В предлагаемых условиях анализа метод специфичен. Специфичность обеспечивается подбором состава подвижной фазы и выбором колонок различной полярности.

3. Средства измерений, реактивы, вспомогательные устройства и материалы

3.1. Средства измерений Весы аналитические класса точности по ГОСТ Р 53228—08 - специальный (I), с наибольшим пределом взвешивания до 110 г и дискретностью 0,0001 г

Весы лабораторные общего назначения класса точности по ГОСТ Р 53228-08 - средний (III) с наибольшим пределом взвешивания до 600 г и пределом допустимой погрешности + 0,038 г Колбы мерные на 10,25,50,100,500 и 1 000 см³ ГОСТ 1770-74 Пипетки мерные на 1,0; 2,0; 5,0 см³    ГОСТ 29227-91

рН-метр/милливольтметр с диапазоном измерения 0... 14 pH; ± 1 999 мВ Хроматографическая система, включающая:

-    хроматограф жидкостный с диодно-матричным детектором, снабжетгый термостатом для колонок с диапазоном температур от 15 до 80 °С и стандартным автосамплером с дозирующим объемом от 0,1 до 100 мм³ для автоматического ввода пробы в хроматографическую систему;

—    компьютерное программное обеспечение, контролирующее работу всего прибора, обеспечивающее сбор и хранение всех хромато-

МУК 4.1.3208—14

грамм в процессе проведения хроматографического анализа, обеспечивающее обработку результатов измерений, вывод и расчет хроматограмм и количественный анализ Цилиндры мерные на 10,25 и 50 см³    ГОСТ    1770—74

Примечание. Допускается использование средств измерений с аналогичными или лучшими характеристиками.

3.2. Реактивы Пираклостробин, аналитический стандарт с содержанием действующего вещества не менее 99,9 %

Алюминий окись для хроматографии, ч Ацетон, осч

Ацетонитрил, осч, УФ-200 нм Вода дистиллированная и (или) бидистиллированная (вода дистиллированная, перегнанная повторно в стеклянной емкости)

Гелий, очищенный n-Гексан, хч

Калий марганцово-кислый, чда Кальций хлористый, ч Кислота уксусная, ледяная Концентрирующие патроны для твердофазной экстракции со слабоосновным сорбентом с размером частиц 63—200 мкм с привитыми аминогруппами (объем - 1 см³, масса сорбента - 0,6 г) (патрон № 1)

Натрий серно-кислый, безводный, хч Натрий хлористый, хч Натрий углекислый, кислый, хч

Примечание. Допускается использование реактивов с аналогичными или лучшими характеристиками.

3.3. Вспомогательные устройства и материалы Алонж прямой с отводом для вакуума для работы с концентрирующими патронами    ГОСТ 25336-82

Аппарат для встряхивания проб с возвратнопоступательным направлением колебаний, с

7

МУК 4.1.3208—14

максимальной загрузкой 10 кг, с амплитудой колебаний 30 мм и скоростью от 10 до 300 колебаний в минуту

Башей полипропиленовые с крышками для экстракции вместимостью 250 см³ Ванна ультразвуковая с потребляемой мощностью 140 Вт, рабочей частотой 50 Гц, рабочим объемом 4,5 дм³

Вата медицинская гигроскопическая хлопковая нестерильная    ГОСТ 5556-81

Воронки делительные на 250 см³    ГОСТ 25336-82

Воронки лабораторные, стеклянные    ГОСТ 25336-82

Испаритель ротационный вакуумный с ручным подъемником, с диагональным конденсором и объемом испарительной колбы от 50 до 3 000 см³, с изменяемой скоростью вращения штока испарителя от 5 до 240 об./мин, с водяной баней с антикоррозионным покрытием объемом 5 дм³ и с диапазоном температур от 20 до 100 °С Колбы конические плоскодонные на 100,250 и 1 000 см³    ГОСТ    25336—82

Колбы круглодонные со шлифом (концентраторы) на 100,250 и 4 000 см³ТС    ТУ    92-891.029—91

Колонка хроматографическая стальная, длиной 150 мм, с внутренним диаметром 3,9 мм, зернением 5 мкм, заполненная сорбентом с привитыми полярными группами С18 Насос диафрагменный, химически стойкий на 100 %, с мощностью электропривода 245 Вт, предельным вакуумом 100 мбар/абс, с избыточным давлением 1 бар и скоростью откачки 34 дм³/мин

Предколонка хроматографическая стальная, длиной 12,5 мм, внутренним диаметром 2,1 мм, зернением 5 мкм, заполненная сорбентом с привитыми полярными группами С8 Стаканы стеклянные, термостойкие объемом 100—500 см³

8

МУК 4.1.3208—14

Установка для перегонки растворителей с круплодонной колбой объемом 4 ООО см³ и приемной конической колбой объемом 1 ООО см³

Фильтры бумажные, низкой плотности    ТУ 6-09-1678—86

Фильтры для очистки растворителей, диаметром 20 мм с отверстиями пор 20 мкм Шприц инъекционный многократного применения объемом 10 см³    ГОСТ 22967-90

Примечание: Допускается применение оборудования с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.

4. Требования безопасности

4.1.    При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007—76, требования электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ Р 12.1.019-09, а также требования, изложенные в технической документации па газовый хроматограф.

4.2.    Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности по ГОСТ 12.1.004-91 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009-83. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать норм, установленных ГН 2.2.5.1313—03 «Предельно допустимые концентрации (ПДК) вредных веществ в воздухе рабочей зоны». Организация обучения работников безопасности труда — по ГОСТ 12.0.004—91.

5. Требования к квалификации операторов

К выполнению измерений и обработке их результатов допускаются специалисты, имеющие опыт работы в химической лаборатории, прошедшие обучение и владеющие техникой проведения анализа, освоившие метод анализа в процессе тренировки и уложившиеся в нормативы контроля при проведении процедуры контроля погрешности анализа.

6. Условия измерений

При выполнении измерений соблюдают следующие условия:

- процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха (20 ± 5) °С, относительной влажности не более 80 % и нормальном атмосферном давлении;

9

1