Государственное санитарно-эпидемиологическое нормирование _Российской    Федерации_

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Измерение концентраций трифенацина (по дифенацину) в атмосферном воздухе населенных мест методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

Методические указания МУК 4.1.3069—13

Издание официальное

Москва • 2013

Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Измерение концентраций трифенацина (по дифенацину) в атмосферном воздухе населенных мест методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

Методические указания МУК 4.1.3069—13

МУК 4.1.3069—13

8. Отбор и хранение проб воздуха

Отбор проб проводят в соответствии с требованиями ГОСТ 17.2.4.02-81 «Охрана природы. Атмосфера. Общие требования к методам определения загрязняющих веществ в воздухе населенных мест».

В течение 26 мин отбирают 2 параллельные пробы, для чего воздух аспирируют с объемным расходом 6дм³/мин через 2 установленных параллельно фильтродержателя (аллонжа), в каждый из которых помещен бумажный фильтр высокой плотности.

Для измерения концентрации дифенацина на уровне 0,8 ОБУВ для атмосферного воздуха необходимо отобрать 312,5 дм³ воздуха (две параллельные пробы по 156,25 дм³ воздуха). Срок хранения отобранных проб, помещенных в полиэтиленовые пакеты, в морозильной камере при температуре -18 °С 30 дней.

9. Выполнение измерений

Две параллельно отобранные пробы воздуха объединяют, экспонированные фильтры переносят в химический стакан вместимостью 150 см³, заливают 20 см³ ацетона, помещают на ультразвуковую баню на 1 мин. Растворитель сливают, фильтры обрабатывают новыми порциями ацетона объемом 15 см³ еще дважды, выдерживая на ультразвуковой бане последовательно 1 мин, затем 30 с.

Объединенный экстракт упаривают в грушевидной колбе на ротационном вакуумном испарителе при температуре бани не выше 35 °С почти досуха, оставшийся растворитель отдувают потоком теплого воздуха. Остаток растворяют в 1 см³ подвижной фазы (подготовленной по п. 7.2) и анализируют при условиях хроматографирования, указанных в п. 7.5.1.

Пробу вводят в испаритель хроматографа не менее двух раз. Устанавливают площадь пика действующего вещества, с помощью градуировочного графика определяют концентрацию дифенацина в хроматографируемом растворе.

Образцы, дающие пики большие, чем градуировочный раствор с концентрацией 1,0 мкг/см³, разбавляют подвижной фазой (не более чем в 50 раз).

10. Обработка результатов анализа

Концентрацию трифенацииа (по дифенацину) в пробе воздуха (Я), мг/м³, рассчитывают по формуле:

10

МУК 4.1.3069—13

С - концентрация дифенацина в хроматографируемом растворе, найденная по градуировочному графику в соответствии с величиной площади хроматографического пика, мкг/см³;

W- объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, см³;

V, - объем пробы воздуха, отобранный для анализа, приведенный к нормальным условиям (давление 760 мм рт. ст., температура 0 °С), дм³.

2 RPu-273 + Т ’

Т-температура воздуха при отборе проб (на входе в аспиратор), °С; Р - атмосферное давление при отборе пробы, мм рт. ст.; и - расход воздуха при отборе пробы, дм³/мин;

/ - длительность отбора пробы, мин;

R - коэффициент, равный 0,357 для атмосферного воздуха;

2 - коэффициент, учитывающий объединение при анализе 2-х параллельно экспонированных проб.

Примечание. Идентификация и расчет концентрации вещества в пробах могут быть проведены с помощью компьютерной программы обработки хроматографических данных, включенной в аналитическую систему.

11. Оформление результатов измерений

Результат количественного анализа представляют в виде:

• результат анализа X в мг/м³, характеристика погрешности % (табл.), Р = 0,95 или

( X ± А) мг/м³, Р = 0,95, где

X- среднее арифметическое результатов определений, признанных приемлемыми, мг/м³;

Д - граница абсолютной погрешности, мг/м³;

S — граница относительной погрешности методики (показатель точности по диапазону концентраций, табл.), %.

Результат измерений должен иметь тот же десятичный разряд, что и погрешность.

11

Если содержание вещества менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде:

«содержание трифенацина (по дифенацину) в пробе атмосферного воздуха - менее 0,00016мг/м³»*

*- 0,00016 мг/м³ - предел обнаружения при отборе 312,5 дм³ атмосферного воздуха.

12. Контроль качества результатов измерений

Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-(1-6)-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений».

Таблица

Значения характеристики погрешности, нормативов оперативного контроля точности, повторяемости, воспроизводимости

Анали зируе мый объект Диапазон опреде ляемых концен траций, мг/м3 Показатель точности (границы относи тельной погрешно сти, Р ~ 0,95), ± 5, % Показатель повторяемости (среднеквадратичное отклонение повторяемости), мг/м3 Предел повторяемости (значение допустимого расхождения между двумя результатами параллельных определений), г, мг/м3 Предел воспроизводимости (значение допустимого расхождения между двумя результатами измерений, полученных в разных лабораториях), R, мг/м3 (Р = 0,95) Атмо сферный воздух 0,00016— 0,0032 21 0,05 • X o' 0,20 • X

Х~ среднее значение массовой концентрации анализируемого компонента в пробе (мг/м³).

12.1. Контроль стабильности градуировочной характеристики проводят в начале и по окончании каждой серии анализов.

При контроле стабильности градуировочной характеристики проводят измерения не менее трех образцов растворов для градуировки, содержание дифенацина в которых должно охватывать весь диапазон концентраций от 0,05 до 1,0 мкг/см³.

Градуировочная характеристика считается стабильной, если для каждого из используемого для контроля градуировочного раствора сохраняется соотношение:

МУК 4.1.3069—13

-Cl-100 A = J-^-<    В, где

X- концентрация дифенацина в пробе при контрольном измерении, мкг/см³;

С - известная концентрация градуировочного раствора дифенацина, взятая для контроля стабильности градуировочной характеристики, мкг/см³;

В ~ норматив контроля погрешности градуировочной характеристики, % (равен 10 % при Р = 0,95).

Если величина расхождения (А) превышает 10 %, делают вывод о невозможности применения градуировочной характеристики для дальнейших измерений. В этом случае выясняют и устраняют причины нестабильности градуировочной характеристики и повторяют контроль ее стабильности с использованием других градуировочных растворов дифенацина, предусмотренных МВИ. При повторном обнаружении нестабильности градуировочной характеристики устанавливают ее заново согласно п. 7.5.

Стабильность результатов измерений контролируют перед проведением измерений, анализируя один из градуировочных растворов.

12.2. Плановый внутрилабораторный оперативный контроль процедуры выполнения анализа проводится методом добавок.

Образцами для контроля являются реальные пробы воздушной среды. Объем отобранных для контроля процедуры выполнения анализа проб воздуха должен соответствовать удвоенному объему, необходимому для проведения анализа по методике. После отбора проб экстракт с фильтра делят на две равные части, первую из которых анализируют в точном соответствии с прописью методики и получают результат анализа исходной рабочей пробы -X. Во вторую часть делают добавку анализируемого компонента (С₀) и анализируют в точном соответствии с прописью методики, получая результат анализа рабочей пробы с добавкой -X. Результаты анализа исходной рабочей пробы (X) и рабочей пробы с добавкой (X) получают в условиях повторяемости (один аналитик, использование одного набора мерной посуды, одной партии реактивов и т. д.).

Величина добавки С_д должна удовлетворять условию:

С_й>А_лД+ Д_лХ,,где

13

± Д_{;; х} (±Д_лХ,) - характеристика погрешности (абсолютная погрешность) результатов анализа, соответствующая содержанию компонента в испытуемом образце (расчетному значению содержания компонента в образце с добавкой соответственно), мг/м³, при этом:

^^±0,84 А, где А - граница абсолютной погрешности, мг/м³;

100

S - граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций, табл.), %.

Результат контроля процедуры К_к рассчитывают по формуле: К_к~Х'-Х-С_д, где

X', X, С₀ - среднее значение массовой концентрации анализируемого компонента в образце с добавкой, испытуемом образце, концентрация добавки соответственно (мг/м³).

Норматив оперативного контроля точности К рассчитывают по формуле (табл.):

Проводят сопоставление результата контроля процедуры (К_к) с нормативом контроля (К).

Если результат контроля процедуры удовлетворяет условию

\щ<к    0)

процедуру анализа признают удовлетворительной.

При невыполнении условия (1) процедуру контроля повторяют. При повторном невыполнении условия (1) выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимают меры по их устранению.

12.3. Проверка приемлемости результатов измерений, полученных в условиях воспроизводимости.

Расхождение между результатами измерений, выполненных в условиях воспроизводимости (разное время, разные операторы, разные лаборатории), не должно превышать предела воспроизводимости (R):

\Х,I ~Х₂\ < Я, где

14

МУК 4.1.3069—13

R== 0,20* X;

X = ‘/2 (Xj + X₂), где X_u X₂ - результаты измерений в условиях воспроизводимости (разное время, разные операторы, разные лаборатории), мг/м³.

R - предел воспроизводимости (табл.), мг/м³.

Если выполняется условие (2), то воспроизводимость измерений считается удовлетворительной.

При превышении норматива контроля вопроизводимости эксперимент повторяют, при повторном превышении указанного норматива выясняют причины и по возможности их устраняют.

Измерение концентраций трифевацина (по дифенацину) в атмосферном воздухе населенных мест методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

Методические указания МУК 4.1.3069—13

Редактор Н. В. Кожока Технический редактор Е. В. Ломанова

Подписано в печать 28.11.13

Тираж 200 экз.

Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека 127994, Москва, Вадковский пер., д. 18, стр. 5, 7

Оригинал-макет подготовлен к печати и тиражирован отделом издательского обеспечения Федерального центра гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора 117105, Москва, Варшавское ш., 19а Отделение реализации, тел./факс 8(495)952-50-89

ББК 51.21 И37

ИЗ 7    Измерение концентраций трифенацина (по дифенацину) в

атмосферном воздухе населенных мест методом высокоэффективной жидкостной хроматографии: Методические указания.—М.: Федеральный центр гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора, 2013.—15 с.

ISBN 978—5—7508—1205-9

1.    Разработаны ФБУН «Федеральный научный центр гигиены им. Ф. Ф. Эрисмана» Роспотребнадзора (Т. В. Юдина, Н. Е. Федорова,

В. Н. Волкова).

2.    Рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемиологическому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 30 мая 2013 г. №» 1).

3.    Утверждены руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г. Г. Онищенко 19 июля 2013 г.

4.    Введены впервые.

ББК 51.21

ISBN 978—5—7508—1205—9

© Роспотребнадзор, 2013 © Федеральный центр гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора, 2013

МУК 4.1.3069—13

Молекулярная масса: 340,4.

Твердое вещество светло-желтого цвета. Температура плавления 145—147 °С. Давление паров 1,37 х 10~⁵ мПа (при 25 °С). Растворимость в органических растворителях (в г/кг): хлороформ - 204; толуол - 73; ксилол - 50; ацетон - 29; этанол - 2,1; н-гептан - 1,8. Практически не растворим в воде - менее 0,3 мг/дм³. Растворим в щелочах с образованием солей. Стабилен в течение 14 дней при pH 6—9, гидролизуется (< 24 ч) при pH 4. Быстро разлагается в воде на солнечном свету. Слабая кислота, образует водорастворимые соли щелочных металлов.

Агрегатное состояние в атмосферном воздухе - аэрозоль

Краткая токсикологическая характеристика

Острая пероральная токсичность (LD50) в мг/кг: для крыс - 2,3; мышей - 340; кроликов - 35; кошек - 14,7; собак - 3—7,5; острая дермальная токсичность (LD₅₀) для крыс - менее 200 мг/кг; острая ингаляционная токсичность (LC₅₀) для крыс — менее 2 мг/дм³ (4 ч).

Область применения

Дифенацин - ротентицид класса индандионов, обладающий антикоагулянтной активностью, рекомендуется для борьбы с грызунами в открытом грунте (осень, зима, весна) на зимующих культурах (зерновые, пастбищные травы, древесные, кустарниковые насаждения и др.), в защищенном грунте на всех культурах независимо от сезона. Применяется в виде приманки.

1. Погрешность измерений

Методика обеспечивает выполнение измерений с погрешностью, не превышающей ± 25 %, при доверительной вероятности 0,95.

2. Метод измерений

Измерения концентраций трифенацина (по дифенацину) выполняют методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) на обращенной фазе с ультрафиолетовым детектором.

Концентрирование вещества из воздуха осуществляют на бумажный фильтр высокой плотности, экстракцию с фильтров выполняют ацетоном.

Нижний предел измерения в анализируемом объеме пробы - 1 нг. Средняя полнота извлечения с фильтров - 90,2 %.

4

МУК 4.1.3069—13

3. Средства измерений, реактивы, вспомогательные устройства и материалы

ЗА. Средства измерений

Жидкостный хроматограф с ультрафиолетовым детектором с переменной длиной волны Барометр-анероид с диапазоном измерения атмосферного давления 5—790 мм рт. сг.

Весы лабораторные аналитические, наибольший предел взвешивания 110 г, предел допустимой погрешности ± 0,2 мг Колбы мерные 2-100-2 и 2-1000-2 Меры массы

Пипетки градуированные 2-го класса точности вместимостью 1,0, 2,0, 5,0, 10,0 см³ Пробоотборное устройство 2-канальное, с диапазоном расхода 0,2—1,0 дм³/мин и 1,0— 5,0 дм³/мин

Термометр лабораторный шкальный ТЛ-2, цена деления 1 °С, пределы измерения 0—55 °С Цилиндры мерные 2-го класса точности вместимостью 100, 500 и 1 000 см³ Гигрометр с диапазоном измерений относительной влажности от 30 до 90 %

Примечание. Допускается использование средств измерения с аналогичными или лучшими характеристиками.

3.2. Реактивы

Дифенацин (дифацинон, ратиндан), аналитический стандарт с содержанием основного компонента 98,2 %

Ацетон, осч

Ацетонитрил для хроматографии, хч

Вода для лабораторного анализа (бидистилли-

рованная или деионизованная)

Калий марганцово-кислый (перманганат калия), хч

Калий углекислый (карбонат калия, поташ), хч, прокаленный

Кислота ортофосфорная, хч, S5 %

5

Спирт этиловый (этанол) ректификованный    ГОСТ Р 51652-2000 или

ГОСТ 18300-87

Фосфор (V) оксид (фосфорный ангидрид,

пентоксид фосфора), хч    ТУ 6-09-4173—85

Примечание. Допускается использование реактивов с более высокой квалификацией, не требующих дополнительной очистки растворителей.

3.3. Вспомогательные устройства, материалы

Аппарат для встряхивания Бумажные фильтры высокой плотности Воронка Бюхнера

Воронки конусные диаметром 40—45 мм Груша резиновая Колба Бунзена

Колбы круглодонные на шлифе вместимостью 150 см³

Мембраны микропористые капроновые Набор для фильтрации растворителей через мембрану

Насос водоструйный

Пинцет медицинский нержавеющий

Стаканы химические с носиком, вместимостью

150 см³

Стекловата

Стеклянные палочки

Ректификационная колонна с числом теоретических тарелок не менее 30 Ротационный вакуумный испаритель с мембранным насосом, обеспечивающим вакуум до 10 мбар Установка для перегонки растворителей Фильтродержателъ

Хроматографическая колонка стальная, длиной 250 мм, внутренним диаметром 4,6 мм, заполненная обращенно-фазным сорбентом с привитыми монофункциональными полярными группами С8, зернением 5 мкм Шприц для ввода образцов для жидкостного хроматографа вместимостью 50—100 мм³

Примечание. Допускается использование вспомогательных средств измерений, устройств и материалов с аналогичными или лучшими техническими характсристи ками.

6

МУК 4.1.3069—13

4. Требования безопасности

4.1.    При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007—76, требования по электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ Р 12.1.019-2009, а также требования, изложенные в технической документации на жидкостный хроматограф.

4.2.    Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности по ГОСТ 12.1.004-91 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009-83. Содержание вредных веществ в воздухе на должно превышать ПДК (ОБУВ), установленных ГН 2.2.5.1313—03 и 2.2.5.2308—07. Организация обучения работников безопасности труда -по ГОСТ 12.0.004-90.

5. Требования к квалификации оператора

К выполнению измерений допускают специалиста, прошедшего обучение, освоившего методику, владеющего техникой, имеющего опыт работы на жидкостном хроматографе и подтвердившего соответствие получаемых результатов нормативам контроля погрешности измерений по п. 12.

6* Условия измерений

При выполнен™ измерений соблюдают следующие условия:

•    процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха (20 ± 5) °С и относительной влажности не более 80 %;

•    выполнение измерений на жидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

7. Подготовка к выполнению измерений

Выполнению измерений предшествуют следующие операции: очистка органических растворителей (при необходимости), подготовка подвижной фазы для ВЭЖХ, кондиционирование хроматографической колонки. приготовление растворов для градуировки и внесения, установление градуировочной характеристики, подготовка бумажных фильтров средней плотности.

7.7. Очистка органических растворителей

7.1.1, Ацетонитрил

Ацетонитрил кипятят с обратным холодильником над пентоксидом фосфора (на 1 дм³ ацетонитрила 20 г пентоксида фосфора) не менее 1 ч.

7

после чего перегоняют, непосредственно перед употреблением ацетонитрил повторно перегоняют над прокаленным карбонатом калия (на 1 дм³ ацетонитрила 10 г карбоната калия).

7.1.2. Ацетон

Ацетон перегоняют над небольшим количеством перманганата калия и прокаленным карбонатом калия или подвергают ректификационной перегонке на колонне с числом теоретических тарелок не менее 30.

7.2. Подготовка подвижной фазы для ВЭЖХ

В мерную колбу вместимостью 1 ООО см³ помещают 840 см³ ацетонитрила, добавляют 160 см³ бидистиллированной или деионизованной воды и 1,0 см³ ортофосфорной кислоты, перемешивают и фильтруют через мембранный фильтр.

7.3. Кондиционирование хроматографической колонки

Промывают колонку подвижной фазой (приготовленной по п. 7.2) при скорости подачи растворителя 1,0см³/мин до установления стабильной базовой линии.

7.4. Приготовление градуировочных растворов и растворов внесения

7.4.1.    Исходный раствор дифенацина для градуировки (концентрация 100 мкг/см³). В мерную колбу вместимостью 100 см³ помещают 0,01 г дифенацина, растворяют в 50—60 см³ ацетонитрила, доводят ацетонитрилом до метки, тщательно перемешивают.

Раствор хранят в морозильной камере при температуре -18 °С в течение 3 месяцев.

Растворы № 1—5 готовят объемным методом путем последовательного разбавления исходного раствора для градуировки.

7.4.2.    Раствор № 1 дифенацина для градуировки и внесения (концентрация 10 мкг/см³). В мерную колбу вместимостью 100 см³ помещают 10 см³ исходного раствора дифенацина с концентрацией 100 мкг/см³ (п, 7.4.1), разбавляют ацетонитрилом до метки.

Градуировочный раствор № 1 хранят в холодильнике при температуре 4—6 °С в течение месяца.

Этот раствор используют для приготовления проб с внесением при оценке полноты извлечения действующего вещества методом «внесено-найдено», а также контроле качества результатов измерений методом добавок.

7.4.3.    Рабочие растворы Ns 2—5 дифенацина для градуировки (концентрация 0,05—1,0 мкг/см³). В 4 мерные колбы вместимостью 100 см³

МУК 4.13069—13

помещают по 0,5; 1,0; 2,5 и 10,0 см³ градуировочного раствора № 1 с концентрацией 10 мкг/см³ (п. 7.4.2), доводят до метки подвижной фазой, приготовленной по п. 7.2, тщательно перемешивают, получают рабочие растворы №2—5 с концентрацией дифенацина 0,05; 0,1; 0,25 и 1,0 мкг/см³ соответственно.

Рабочие растворы сразу после приготовления помещают в холодильник, где они хранятся при температуре 4—6 °С не более 7 дней.

7.5.    Установление градуировочной характеристики

Градуировочную характеристику, выражающую зависимость площади пика от концентрации дифенацина в растворе, устанавливают методом абсолютной калибровки по 4 растворам для градуировки № 2—5.

В инжектор хроматографа вводят по 20 мм³ каждого градуировочного раствора и анализируют в условиях хроматографирования по п. 7.5.1. Осуществляют не менее 5 параллельных измерений. Устанавливают площади пиков, на основании которых строят градуировочную зависимость.

7.5. L Условия хроматографирования

Измерения выполняют при следующих режимных параметрах.

Жидкостный хроматограф с ультрафиолетовым детектором.

Хроматографическая колонка стальная, длиной 250 мм, внутренним диаметром 4,6 мм, заполненная обращенно-фазным сорбентом с привитыми монофункциональными полярными группами С8, зернением 5 мкм.

Температура колонки: комнатная.

Подвижная фаза:    ацетонитрил-вода-ортофосфорная кислота

(84 : 16 : 0,1, по объему).

Скорость потока элюента: 1,0 см³/мин.

Рабочая длина волны: 312 нм.

Объем вводимой пробы: 20 мм³.

Линейный диапазон детектирования: 1—20 нг.

7.6.    Подготовка фильтров для отбора проб воздуха

Диаметр бумажного фильтра должен соответствовать внутреннему диаметру фильтродержателя.

Фильтры последовательно по 3 раза промывают на воронке Бюхнера этанолом, затем ацетонитрилом порциями 25—30 см³, сушат с помощью разряжения, создаваемого водоструйным насосом, затем на воздухе при комнатной температуре. До использования фильтры хранят в герметично закрытой стеклянной таре.

9