Государственное санитарно-эпидемиологическое нормирование _Российской    Федерации_

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Измерение остаточного содержания клотианидина в зеленой массе, зерне и масле кукурузы, семенах, масле и зеленой массе подсолнечника методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

Методические указания МУК 4Л.3063—13

Издание официальное

Москва • 2013

Федеральная служба по надзору в сфере защизы прав потребителей и благополучия человека

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Измерение остаточного содержания клогианидина в зеленой массе, зерне и масле кукурузы, семенах, масле и зеленой массе подсолнечника методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

Методические указания МУК 4.1J063—13

8.4.2.    Гоадуировочныйраствор клотианидина

с массовой концентрацией 10 мкг/см³ (раствор № 1)

В мерную колбу вместимостью 100 см³ помещают 10 см³ исходного раствора клотианидина с массовой концентрацией 100 мкг/см' (п. 8.4.1), разбавляют ацетонтрилом до метки. Этот раствор используют для приготовления градуировочных растворов № 2—5.

Для приготовления проб с внесением при оценке полноты извлечения клотианидина методом «внесено-найдено» используется ацетоновый раствор вещества с концентрацией 10 мкг/см³.

Градуировочный раствор № 1 и ацетоновый раствор клотианидина хранят при температуре не выше -18 °С. Срок хранения - не более 1 месяца.

8.4.3.    Градуировочные растворы клотианидина

с массовой концентрацией 0,02—0,2 мкг/см³ (растворы Л£> 2—5)

В 4 мерные колбы вместимостью 100 см³ помещают 0,2, 0,4, 1,0 и 2,0 см³ градуировочного раствора № 1 клотианидина с массовой концентрацией 10 мкг/см³, доводят до метки подвижной фазой, приготовленной по н. 8.2, тщательно перемешивают. Получают растворы с массовой концентрацией клотианидина 0,02,0,04, 0,1 и 0,2 мкг/см³ соответственно.

Растворы готовят непосредственно перед использованием.

8.5. Градуировка хроматографа

Градуировочную характеристику, выражающую зависимость площади пика (мкВ • с) от концентрации клотианидина в растворе (мкг/см³), устанавливают методом абсолютной калибровки по 4 растворам для градуировки.

В инжектор хроматографа вводят по 5 мм³ каждого градуировочного раствора (п. 8.4.3) и анализируют при условиях п. 7.2. Осуществляют не менее трех параллельных определений. Расхождение между параллельными определениями не должно превышать предела повторяемости г.

По полученным данным строят градуировочную характеристику.

8.6. Контроль стабильности градуировочной характеристики

Контроль стабильности градуировки проводят не реже 1 раза в три месяца, а также при смене реактивов или изменении условий анализа.

Доя контроля стабильности используют вновь приготовленные градуировочные растворы с массовой концентрацией исследуемого вещества в начале, середине и конце диапазона измерений, которые анализируют в точном соответствии с методикой.

Градуировочную характеристику считают стабильной, если для каждого контрольного образца выполняется условие:

г—— ■ 100 < K_v, где

Suxu, Sc_P - значение площади пика клотиапидина в образце для контроля, измеренное и найденное по градуировочной характеристике соответственно, мкВ • с;

Кр - норматив контроля,    * 0,5 - 6_У где

±5- грашщы относительной погрешности, % (табл. 1).

Если условие стабильности не выполняется только для одного образца, то повторно анализируют этот образец для исключения результата, содержащего грубую ошибку.

Если градуировка нестабильна, выясняют причины нестабильности и повторяют контроль стабильности с использованием других образцов для градуировки, предусмотренных методикой. При повторном обнаружении нестабильности градуировки прибор градуируют заново.

8.7. Подготовка колонки с флоризилом для очистки экстракта

В нижнюю часть стеклянной колонки длиной 25 см и внутренним диаметром 10 мм помещают тампон из стекловаты и затем в неб всыпают 10 г сухого флоризила. Колонку промывают 30 см³ этилацетата со скоростью 1—2 капли в секунду. Дают растворителю стечь до верхнего края сорбента и помещают на него слой безводного сульфата натрия высотой 1 см. Через колонку пропускают 15 см³ этилацетата со скоростью 1—2 капли в секунду, после чего колонка готова к работе.

8.8. Определение объёма элюента, необходимого для полного вымывания клотианидина из колонки с флоризилом

При отработке методики или поступлении новой партии флоризила проводят определение объбма элюента, необходимого для полного вымывания клотианидина из колонки с флоризилом.

В круглодонную колбу вместимостью 10 см³ помещают 0,1 см³ градуировочного раствора № 1 клотианидина с концентрацией 10 мкг/см³ в ацетонитриле (п. 8.4.2), раствор упаривают досуха, остаток растворяют в 2 см³ этилацетата, помещая в ультразвуковую ванну на 1 мин. Раствор наносят на колонку с флоризилом, подготовленную по п. 8.7. Колбу обмывают 3 см³ этилацетата, которые также вносят в колонку. Промывают колонку 50 см³ этилацетата со скоростью 1—2 капли в секунду, элюат отбрасывают. Затем через колонку пропускают 50 см³ смеси эгилацетат-

ацетонитрил с объемным соотношением компонентов 1:1, отбирая последовательно по 5 см³ элюата. Каждую фракцию упаривают, остатки растворяют в 1 см'^> ацетонитрила, помещая в ультразвуковую ванну на 1 мин., вносят 2 см³ подвижной фазы, подготовленной по п. 8.2, перемешивают и хроматографируют в соответствии с условиями п. 7.2.

По результатам обнаружения клотианидина в каждой из фракций определяют объем смеси этилацетат- ацетонитрил с объемным соотношением 1:1, необходимый для полного вымывания клотианидина из колонки.

9. Отбор и хранение проб

Отбор проб производится в соответствии с «Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов» (от 21.08.79 №2051—79) и правилами, определенными ГОСТ Р 50436-92 «Зерновые. Отбор проб зерна», ГОСТ 13634 90 «Кукуруза. Требования при заготовке и поставке», ГОСТ 10852-86 «Семена масличные. Правила приемки и методы отбора проб», ГОСТ 11291—93 «Масло подсолнечника. Требования при заготовках и поставках», ГОСТ 27262-87 «Корма растительного происхождения. Методы отбора проб» и ГОСТ 27978-88 «Корма зеленые. Технические условия».

Пробы зерна кукурузы и семян подсолнечника высушивают до стандартной влажности и хранят в бумажных или тканевых мешочках в сухом, хорошо проветриваемом шкафу, недоступном для грызунов. Пробы зелёной массы замораживают и хранят при температуре не выше -18 °С. Масло хранят в плотно закрытой стеклянной или полиэтиленовой таре в холодильнике при температуре 0—4 °С. В некоторых случаях масло получают из зерна кукурузы и семян подсолнечника экстракцией 0р1дническими неполярными растворите.чями (петролейный и диэтило-вый эфиры) непосредственно перед проведением анализа.

10. Проведение определения

10.1. Экстракция клотианидина

10.1.1. Зерно кукурузы, семена подсолнечника. Образец размолотого зерна или семян массой 10 г помещают в плоскодонную колбу вместимостью 250 см³, добавляют 100 см³ смеси ацетон-вода с объемным соотношением компонентов 3:1, перемешивают и колбу помещают на встряхиватель на 40 мин. Суспензию фильтруют под вакуумом на воронке Бюхнера через бумажный фильтр в колбу Бунзена вместимостью

250 см . Остаток на фильтре промывают 50 см³ приведённой выше смеси. Экстракт и промывную жидкость переносят в химический стакан, перемешивают, измеряют объем раствора и ‘Л его часть, эквивалентную 5 г образца, переносят в круглодонную колбу вместимостью 250 см³. Дальнейшую очистку экстракта проводят по п. 9.2.

10.1.2.    Зеленая масса. Образец измельченного растительного материала массой 25 г помещают в стакан гомогенизатора вместимостью 500 см³, приливают 125 см³ смеси ацетон-вода с объемным соотношением компонентов 3 : 1 и гомогенизируют 3 мин при 8 000 обУмин. Го-могенат фильтруют под вакуумом на воронке Бюхнера через бумажный фильтр в колбу Бунзена вместимостью 250 см³. Осадок на фильтре промывают 50 см³ смеси ацетон-вода с объемным соотношением 3:1. Экстракт и промывную жидкость переносят в химический стакан, перемешивают, измеряют объём раствора и V₅ его часть (эквивалентную 5 г образца) переносят в кругло донную колбу вместимостью 100 см³. Дальнейшую очистку экстракта проводят по п. 9.2.

10.1.3.    Масло. Образец масла массой 5 г вносят в делительную воронку вместимостью 100 см³, добавляют 20 см³ гексана, перемешивают. К раствору добавляют 50 см³ смеси метанол-вода с объемным соотношением компонентов 8:2 и воронку интенсивно встряхивают в течение двух минут. После разделения фаз декантируют водно-метанольпый слой в круглодонную колбу через слой ваты, помещённой в конусную воронку. Маслянистый остаток повторно обрабатывают 50 см³ смеси метанол-вода с объемным соотношением 8 :2 и водно-метанольную фазу фильтруют через вату. Вату на фильтре промывают 10 см³ смеси метанол-вода с объемным соотношением 8 :2, фильтрат объединяют с вод-но-метанольными экстрактами и переносят в круглодонную колбу вместимостью 250 см³. Дальнейшую очистку экстракта проводят по п. 10.2.

10.2. Очистка экстракта перераспределением в системе несмешивающихся растворителей

Отобранные аликвоты экстрактов растительного материала (пл. 10.1.1, 10.1.2), а также экстракт масла (п. 10.1.3) упаривают на ротационном вакуумном испарителе до водного остатка объемом 3—5 см³ при температуре не выше 40 °С. К водному остатку приливают 20 см³ деионизованной воды, перемешивают и переносят в делительную воронку вместимостью 100 см³. В воронку вносят 30 см³ хлористого метилена, интенсивно встряхивают в течение 2 мин. После разделения фаз нижний органический слой собирают в делительную воронку вместимостью 250 см³, а водную фазу экстрагируют еще дважды, используя по

30 см³ хлористого метилена. К объединенной дихлорметановой фракции в делительной воронке вместимостью 250 см³ приливают 25 см³ водного раствора углекислого калия с молярной концентрацией 0,05 моль/дм³ (п. 8.1), содержимое интенсивно встряхивают в течение двух минут. После разделения фаз нижний органический слой, содержащий клотиани-дин, фильтруют через слой безводного сульфата натрия в круглодонную колбу и затем упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °С. Дальнейшую очистку экстракта проводят по п. 10.3.

10.3. Очистка экстракта на колонке с флоризилом

Сухой остаток экстрактов зерна, семян, масла или зелёной массы, полученный по п. 10.2, растворяют в 3 см³ этил ацетата, помещая в ультразвуковую ванну на 1 мин. Раствор наносят на колонку, подготовленную по п. 8.4. Колбу обмывают 3 см³ этилацетата, который также наносят на колонку. Колонку промывают 40 см³ этилацетата со скоростью 1—2 капли в секунду, элюат отбрасывают. Клотианидин элюируют из колонки 25 см³ смеси этилацетат-ацетонитрил с объемным соотношением компонентов 1 : 1 непосредственно в круглодонную колбу вместимостью 100 см³. Раствор упаривают досуха па ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °С. Сухой остаток экстракта зерна, семян и масла растворяют в 5 см³, а зелёной массы в 12,5 см³ подвижной фазы для ВЭЖХ (п. 8.2), раствор помещают в ультразвуковую ванну на 1 мин и анализируют на содержание клотианидина по п. 11.

Полнота извлечения клотианидина при проведении всех операций подготовки пробы не менее 81 %.

11. Выполнение измерений

11.1.    В инжектор хроматографа вводят 5 мм³ очищенного экстракта анализируемой пробы (пп.10.1—10.3), анализируют при условиях (п. 7.2) и регистрируют хроматограмму. Каждый экстракт хроматографируют дважды.

11.2.    Для каждого образца повторяют операции по пп. 10.1—10.3,

11.1.

12. Обработка результатов измерений

12.1. Для обработки результатов хроматографического анализа используется программа сбора и обработки хроматографической информации.

Альтернативная обработка результатов.

По градуировочной характеристике находят значение массовой концентрации клотианидина в экстрактах. С, шаг/ см³.

Массовую долю клотианидина Х_у мг/кг в образцах зерна, семян, масла и зелбной массы рассчитывают по формуле

С К

_    экстр

/77-0,81

С - значение массовой концентрации клотианидина в экстрактах, мкг/ см³;

^экстр объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, см^;

т - масса анализируемой части образца, соответствующая доле экстракта, использованной для очистки на колонке с флоризилом и последующего хроматографического определения, г,

0,81 - коэффициент извлечения клотианидина, учитывающий все процедуры подготовки пробы.

12.2. За результат измерений принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, если выполняется условие приемлемости

Цх_х-х_г\л*о

(X, +Х₂)    -    ’

Xjs Х₂ - результаты параллельных определений массовой доли клотианидина, мг/кг,

г - значение предела повторяемости, % (табл. 1).

Если условие (3) не выполняется, выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и повторяют выполнение измерений в соответствии с требованиями МВИ.

12.3. Результат анализа в документах, предусматривающих его использование, представляют в виде:

Х±0,0\-6-Х, при/⁵ = 0,95,

X - среднее арифметическое значение результатов п определений, признанных приемлемыми, мг/кг.

± 3 - границы относительной погрешности измерений, % (табл. 1).

В случае, если полученный результат измерений ниже нижней границы диапазона измерений, то результат анализа представляют в виде:

«массовая доля клотианидина в зерне, семенах и масле менее 0,02 мг/кг»;

«массовая доля клотианидина в зелёной массе менее 0,05 мг/кг».

Экстракты, при хроматографировании которых получают аналитический сигнал клотианидина, превышающий аналитический сигнал, получаемый при хроматографировании градуировочного раствора с массовой концентрацией 0,2 мкг/см³, разбавляют, но не более чем в 10 раз, и анализируют в соответствии с данной методикой.

13. Проверка приемлемости результатов измерепий, полученных в условиях воспроизводимости

13.1. Проверку приемлемости результатов измерений в условиях воспроизводимости проводят:

а) при возникновении спорных ситуаций между двумя лаборато

риями;

б) при проверке совместимости результатов измерений, полученных при сличительных испытаниях (при проведении аккредитации лабораторий и инспекционного контроля).

13.2.    Для проведения проверки приемлемости результатов измерений в условиях воспроизводимости каждая лаборатория использует пробы, оставленные на хранение.

13.3.    Расхождение между результатами измерений, выполненных в условиях воспроизводимости (разное время, разные операторы, разные лаборатории), не должно превышать предела воспроизводимости (R)

2\Х_х-Х_г\-Ш

X_t, Х₂ - результаты измерений массовой доли клотианидина, выполненных в условиях воспроизводимости (разное время, разные операторы, разные лаборатории), мг/кг;

R - предел воспроизводимости. % (при этом R - 2,77 • <т*).

Если предел воспроизводимости не превышен, то приемлемы все результаты измерений и в качестве окончательного результата используют их среднеарифметическое значение. Если предел воспроизводимости превышен, то выполняют процедуры, изложенные в ГОСТ Р ИСО 5725-6—2002 (п. 5.3.3).

При разногласиях руководствуются ГОСТ Р ИСО 5725-6 - 2002 (п. 5.3.4).

ББК 51.23 ИЗ 7

ИЗ 7    Измерение остаточного содержания клотианядина в зеле

ной массе, зерне и масле кукурузы, семенах, масле и зеленой массе подсолнечника методом высокоэффективной жидкостной хроматографии: Методические указания.—М.: Федеральный центр гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора, 2013. —16 с.

ISBN 978—5—7508—'1181—6

1.    Разработаны сотрудниками ПТУ Всероссийский НИИ фитопатологии (Т. А. Назарова, О. Д. Микитюк, А. М. Макеев).

2.    Рекомендованы к утверждению Комиссией по государстветюму санитарно-эпидемиологическом)' нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 30 мая 2013 г. № 1).

3.    Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека. Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г. Г. Онищенко 14 июля 2013 г.

4.    Введены впервые.

ББК 51.23

Редактор Л. С. Кучурова Технический редактор Е. В. Ломанова

Подписано в печать 11.09.13 Формат 60x88/16    Печ. л. 1,0

Тираж 200 экз.    Заказ 41

Федеральная служба по надзору в сфере зашиты прав потребителей н благополучия человека 127994, Москва, Вадковский пер., д. 18, стр. 5,7

Оригинал-макет подготовлен к печати и тиражирован отделом издательского обеспечения Федеральною uenipa гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора 117105, Москва, Варшавское ш., 19а Отделение реализации, тел./факс (495)952-50-89

О Роспотребнадзор, 2013 С¹ Федеральный центр гигиены и

эпидемиологии Роспотребнадзора, 2013

УТВЕРЖДАЮ Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека. Главный государственный санитарный врач Российской Федерации

Г. Г. Онищенко

14 июля 2013 г.

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Измерение остаточного содержания клотнанидина в зеленой массе, зерне и масле кукурузы, семенах, масле н зеленой массе подсолнечника методом

высокоэффективной жидкостной хроматографии

Методические указания _МУК    4.13063—13_

Свидетельство о метрологической аттестации от 14.12.2012 № 01.00225/205-78-12.

1. Назначение и область применения

Настоящие методические указания устанавливают порядок применения метода высокоэффективной жидкостной хроматографии для определения массовых концентраций клотианидина в зерне и масле кукурузы, семенах и масле подсолнечника в диапазоне 0,02—0,20 мг/кг, в зелёной массе кукурузы и подсолнечника в диапазоне 0,05—0,50 мг/кг.

Методические указания носят рекомендательный характер.

Название действующего вещества по ИСО: клотианидин.

Название действующего вещества по ИЮПАК: (Е)-1-(2-хлор-1,3-тиазол-5-илметил)-3-метил-2-нитрогуанидин.

Структурная формула:

Эмпирическая формула: C₆H₈C1N₅0₂S. Молекулярная масса: 249,7.

Бесцветный порошок без запаха. Температура плавления: 176,8 °С. Давление паров при 25 °С: 1,3 х 10"⁷мПа. Коэффициент распределения в системе н-октанол/вода: K_ow logP = 0,7 (при 25 °С). Растворимость (г/дм³) при 20 °С: ацетон - 15,2; метанол - 6,26; этилацетат - 2,03; дихлор метан — 1,32; гептан 0,001; вода - 0,327.

В почве в аэробных условиях клотианидин разрушается очень медленно: DT50 = 148-—I 155 дней.

Краткая токсикологическая характеристика

Острая пероральная токсичность (LD50) для крыс > 5 000 мг/кг; острая дермальная токсичность (LD50) для крыс >2 000 мг/кг; острая ингаляционная токсичность (LC5©) для крыс >6 141 мг/м³ воздуха. Клотианидин не оказывает раздражающего действия на кожу кролика. LC₅₀ для рыб >100 мг/дм³ (96 ч).

Инсектицид нетоксичен для птиц, дафний, земляных червей, почвенных микроорганизмов и опасен для пчел при прямом контакте.

Область применения

Клотианидин - инсектицид нервно-паралитического действия, обладает широким спектром активности против сосущих, грызущих и почвенных насекомых на овощных культурах, фруктовых и цитрусовых деревьях, рисе, кукурузе, подсолнечнике и рапсе. Вещество обладает системной активностью и может использоваться как в качестве протравителя, так и для обработки почвы и надземных органов растений.

Предлагается в России в качестве составного компонента комбинированных протравителей для предпосевной обработки семян рапса и сахарной свеклы при норме расхода 5—10 кг д.в./т семян, а также для обработки вегетирующих растений картофеля с нормой расхода до 12,5 г д.вУга.

2. Метрологические характеристики

При соблюдении всех регламентированных условий и проведении анализа в точном соответствии с данной методикой значение погрешности (и ее составляющих) результатов измерений не превышает значений, приведенных в таблице.

Таблица

Анализи руемый объект Диапазон измерений массовой доли клотианидина мг/кг Показатель точности (границы относительной погрешности) ±5, % при Р ==* 0,95 Показатель повторяемости (относительное среднеквад-рагическое отклонение повторяемости), % Показатель воспроизводимости (относительное срсдне-квадратиче-скос отклонение воспроизводимости), cRi % Предел повто ряемос ти, г,%, Р — 0,95, п = 2 Зерно кукурузы От 0,020 до 0,10 вкл. 33 5 9 14 Св. 0,10 до 0,20 вкл. 20 3 4,5 8 Семена подсолнеч- никз От 0,020 до 0,10 вкл. 34 7 11 19 Св. 0,10 до 0,20 вкл. 18 4 6 11 Масло кукурузы От 0,020 до 0,10 вкл. 35 9 14 25 Св. 0,10 до 0,20 вкл. 19 5 8 14 Масло подсолнеч- ника От 0,020 до 0,10 вкл. 32 8 12 22 Св. 0,10 до 0,20 вкл. 20 4 6 11 Зеленая масса кукурузы Or 0,05 до 0,10 вкл. 22 6 9 17 Св. 0,10 до 0,50 вкл. 13 3 4,5 8 Зеленая масса под-солнечника От 0,05 до 0,10 вкл. 24 6 9 17 Св. 0,10 до 0,50 вкл. 15 4 6 11

3. Метод измерений

Метод основан на экстракции клотианидина из зерна и зелёной массы кукурузы, семян и зелёной массы подсолнечника водным раствором ацетона, из масла кукурузы и подсолнечника водным раствором метанола, очистке экстрактов, содержащих клотнанидин, от коэкстрак-тивных компонентов перераспределением их в системе несмешиваю-щихся растворителей, а также на колонке с флоризилом, с последующим

измерением содержания клотианидина в очищенных экстрактах на жидкостном хроматографе с ультрафиолетовым детектированием и обработкой хроматограмм методом абсолютной градуировки.

4. Средства измерений, реактивы, вспомогательные устройства и материалы

4.1. Средства измерений Жидкостный хроматограф с ультрафиолетовым детектором с переменной длиной волны, снабженный дегазатором и термостатом колонки Весы аналитические с пределом взвешивания до 110 г и допустимой погрешностью 0,0001 г Весы лабораторные с пределом взвешивания 160 г и допустимой погрешностью 0,005 г Колбы мерные вместимостью 2-100-2,2-1000-2 Пипетки градуированные 1-1-2-1:1-1-2-2;

1-2-2-5; 1-2-2-10

Пробирки градуированные с пришлифованной пробкой П-2-5-0,1; П-2-10-0,2 Цилиндры мерные 1-25; 1-50; 1-100; 1-500;

1-1000

Шприц для ввода образцов для жидкостного хроматографа вместимостью 20—100 мм³

Примечание. Допускается использование средств измерения с аналогичными или лучшими характеристиками.

4.2. Реактивы Клотианидин с содержанием основного вещества не менее 99,4 %, аналитический стандарт Ацетон, чистый для анализа Ацетонитрил для хроматографии, хч Вода для лабораторного анализа (бидистиллированная, деионизованная) н-Гексан, хч Калий углекислый, хч Метилен хлористый (дихлорметан), хч Метиловый спирт (метанол), хч Натрий серно-кислый, безводный, хч Этиловый эфир уксусной кислоты (этилацетат), ч

5. Требования безопасности, охраны окружающей среды

5.1.    При работе с реактивами соблюдают требования безопасности, установленные для работы с токсичными, едкими и легковоспламеняющимися веществами по ГОСТ 12.1.007-76, 12.1.005—88.

5.2.    При проведении анализов горючих и вредных веществ соблюдают требования противопожарной безопасности по ГОСТ 12.1.004-91 и должны быть в наличии средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009— 90. Обучение работающих правилам безопасности труда проводят согласно ГОСТ 12.0.004-90.

5.3.    При выполнении измерений с использованием хроматографа соблюдают правила электробезопасности в соответствии с ГОСТ 12.1.019—79 и инструкцией по эксплуатации прибора.

5.4.    Помещение лаборатории должно быть оборудовано приточновытяжной вентиляцией. Содержание вредных веществ в воздухе рабочей зоны не должно превышать ПДК (ОБУВ), установленных ГН 2.2.5.1313—03 и ГН 2.2.5.2308—07.

6. Требования к квалификации операторов

К выполнению измерений и обработке их результатов допускается специалист, прошедший обучение, имеющий опыт работы в лаборатории и владеющий техникой проведения хроматографического анализа, освоивший данную методику и подтвердивший соответствие получаемых результатов нормативам контроля погрешности измерений.

7. Требования к условиям измерений

При выполнении измерений соблюдают следующие условия.

7.1. Условия приготовления растворов и подготовки проб к анализу

— температу ра воздуха    (20 ± 5) °С;

— атмосферное давление    (84—106) кПа;

— относительная влажность воздуха    не более 80 %.

7.2. Условия хроматографического анализа

Температура колонки: 27 °С.

Подэижная фаза: ацетонитрил-вода (20: 80, в объемных соотношениях).

Скорость потока элюента: 0,8 см³/мин.

Рабочая длина волны: 270 им.

Чувствительность: 0,001 ед. абсорбции на шкалу.

Объем вводимой пробы: 5 мм³.

Линейный диапазон детектирования 0,1—1 нгг.

8. Подготовка к выполнению измерений

Измерениям предшествуют следующие операции: приготовление растворов, подвижной фазы для высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ), градуировочных растворов, кондиционирование хроматографической колонки, установление градуировочной характеристики, приготовление колонки с флоризилом и установление объема и состава элюента, необходимого для полного вымывания клотианидина из колонки с флоризилом.

8.1. Приготовление раствора углекислого калия с молярной концентрацией 0,05 моль/дм³ В мерную колбу вместимостью 1 ООО см³ помещают 6,9 г К₂С0₃, приливают 100 см³ деионизованной воды, перемешивают до растворения осадка, доводят объем водой до метки, перемешивают.

Срок хранения - 1 неделя.

8.2. Подготовка подвижной фиш для ВЭЖХ В мерную колбу вместимостью 1 ООО см³ помещают 200 см³ ацетонитрила, 800 см³ бидистиллированной воды, перемешивают, фильтруют через мембранный фильтр.

Срок хранения - 1 неделя.

8.3. Кондиционирование хроматографической колонки Хроматографическую колонку устанавливают в термостат хроматографа и стабилизируют при температуре 27 °С и скорости потока подвижной фазой 0,8 см³/мин не менее часа до установления стабильной базовой линии (дрейф базовой линии в течение 1 ч не более 5 %, а уровень шумов не более 2 % от верхнего значения шкалы).

8.4. Приготовление градуировочных растворов

8.4.1. Исходный градуировочный раствор клотианидина с массовой концентрацией 100 мкг/см В мерную колбу вместимостью 100 см³ помещают (0,010 ± 0,0001) г клотианидина, растворяют в 40—50 см³ ацетонитрила, доводят ацетонитрилом до метки, тщательно перемешивают.

Раствор хранят при температуре не выше -18 °С. Срок хранения -не более 3 месяцев.