Федеральная сдужба по напору к сфере защиты нрав потреби!еден и G.iaiонодучня чедовека

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Методические указания по методам контроля

Сборник

МУК 4.1.2593—10; 4.1.2595—10; 4.1.2673—10; 4.1.2674—10; 4.1.2680—2682—10; 4.1.2685—10; 4.1.2686—10; 4.1.2688—10; 4.1.2689—10; 4.1.2691—10

1

ББК51.21

M54

M54 Методические указания по методам контроля: Сборник.— М.: Федеральный центр гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора. 2010.—179 с.

ББК 51.21

© Росно ipeona.i юр, 2010 © Федеральный цен ip гигиены н

эпидемиологии Росно ipeon ад юра, 2010

2

0.005М раствора орто(|юс<|юрной кислоты 2.5 мл 2М раствора Н₃РО, вносят в мерную колбу на 1 л и доводят до метки деионизированным бидистиллятом.

Для приготовления элюента № 1 в колбе на 1000 см³ смешивают 500 см³ н-гексана и 500 см³ этилацетата. Для приготовления элюента №2 в колбе на 1000см³ смешивают 100см³ н-гексана и 900см³ этилацетата.

2.5.3.1. Приготовление стандартного и градуировочных растворов

Берут точную навеску имидаклопрнда (50 мг). переносят в мерную колбу на 100 см³, растворяют навеску в ацетоннтрилс и доводят до метки. (Стандартный раствор с концентрацией 0.5 мг/ см³). Градуировочные растворы с концентрациями 0.1, 0.2. 0.5 и 1.0 мкг/см³ готовят методом последовательного разбавления по объему, используя раствор подвижной фазы (смесь ацетонитрил: 0.005М Н_чРО, (22 : 78. по объему).

Стандартный раствор можно хранить в холодильнике при температуре 0—1 °С в течение 1 месяца, градуировочные растворы - в течение суток.

При изучении полноты извлечения имидаклопрнда используют ацетонитрильные растворы веществ*]. Растворы внесения с концентрациями 0.1 и 1.0 мкг/см³ готовят из стандартного раствора методом последовательного разбавления по объему ацетонитрилом.

2.5.4. Установление градуировочной характеристики

Для построения градуировочного графика (площадь пика - концентрация имидаклопрнда в растворе) в хроматограф вводят по 20 мм³ градуировочных растворов (не менее 3-х параллельных измерений для каждой концентрации, нс менее 4-х точек по диапазону измеряемых концентраций). измеряют площади пиков и строят график зависимости среднего значения площади пика от концентрации имидаклопрнда в градуировочном растворе (мкг/см³).

Граду провочную характеристику необходимо проверять при замене реактивов, хроматографической колонки или элементов хроматографической системы, а также при отрицательном результате контроля градуировочного коэффициента.

Градуировочную зависимость признают стабильной при выполнении следующего условия:

Iс-с.

МУК 4.1.2595—10

С - аттестованное значение массовой концентрации бифентрнна в градуировочном растворе;

Се - результат контрольного измерения массовой концентрации бифентрнна в градуировочном растворе;

Х*ошр. - норматив контроля градуировочного коэффициента. %. (>*стр = 8 % при Р = 0,95).

2.5.5.    Подготовка колонки с силикагелем для очистки экстракта

В нижнюю часть стеклянной колонки длиной 25 см и внутренним диаметром 1 см помещают тампон из стекловаты, закрывают кран и вносят суспензию 5 г силикагеля в 30 см³ смеси гексан - этилацетат (50 : 50. по объему). Дают растворителю стечь до верхнего края сорбента. Колонку последовательно промывают 30 см³ элюента № 2 и 30 см³ элюента № 1 со скоростью 1—2 капли в секунду, после чего она готов;! к работе.

2.5.6.    Проверка хроматографического поведения имидаклоприда

на колонке с силикагелем

В круглодонную колбу емкостью 10 см³ отбирают 0.1 см³ стандартного раствора имидаклоприда с концентрацией 10 мкг/см³. Отдувают растворитель током теплого воздуха (температура нс выше 40 °С). остаток растворяют в 5 см³ элюента № 1 и наносят на колонку. Колбу обмывают еще 5 см³ элюента № 1 и также вносят на колонку. Промывают колонку 120 см³ элюента № 1. которые отбрасывают, затем 100 см³ элюента № 2 со скоростью 1—2 капли в секунду. Отбирают фракции по 10 см³ каждая, упаривают, остаток растворяют в 2 см³ подвижной фазы для ВЭЖХ (п. 2.5.3) и анализируют на содержание имидаклоприда по п. 2.6.3.

Фракции, содержащие имидаклоприд. объединяют, упаривают досуха. остаток растворяют в 2 см³ подвижной фазы для ВЭЖХ и вновь анализируют по п. 2.6.3. Рассчитывают содержание имидаклоприда в элюатс. определяя полноту' вымывания вещества из колонки и необходимый для этого объем элюента.

Примечание: параметры удерживания имидаклоприда и сопутствующих коэкстрактивных веществ могу т меняться при использовании новой партии сорбента и растворителей.

2.5.7. Подготовка приборов и средств измерения

Установка и подготовка всех приборов и средств измерения проводится в соответствии с требованиями технической документации.

29

2.6. Проведение определения

2.6.1. Извлечение имидакпоприда из проб томатного сока

Навеску томатного сока (20г) в мерном цилиндре доводят до 100 см³ дистиллированной водой и помещают в делительную воронку объёмом 250 см³. В воронку добавляют 30 см³ гексана, встряхивая делительную воронку в течение 1—2 минут (верхний органический слой отбрасывают). Промывку гексаном повторяют дважды. Водную фату экстрагируют трижды дихлорметаном порциями по 30 см³, встряхивая делительную вороню каждый раз в течение 2—3 мин и собирая нижний органический слой.* Объединённый дихлормстановый экстракт промывают в делительной воронке дважды 0.025М раствором NaOH порциями по 25 см³, пропускают через слой безводного сульфата натрия (2 г), осушитель промывают 10—15 мл хлористого метилена. После этого экстракт выпаривают досуха на ротационном испарителе при температуре нс выше 40 °С. Дальнейшую очистку экстракта проводят по п. 2.6.2.

Внимание! Отделение водного слоя следует производить только после полного расслоения жидкостей в делительной воронке.

* В случае образования сравнительно стойких эмульсий для сокращения времени расслоения можно добавить в делительную воронку: на стадии промывки экстрактов гексаном - небольшое количество (до 5 см³) этилового спирта, а на стадии псрсэкстракции - насыщенный раствор хлорида натрия (15—20 см³).

2.6.2. Очистка экстракта на колонке с силикагелем

Сухой остаток в колбе, полученный при упаривании очищенного по п. 2.6.2 экстракта, количественно переносят двумя порциями по 5 см³ смеси гексан - этилацетат (50 : 50. по объему) в кондиционированную хроматографическую колонку (п.2.5.5.). Промывают колонку 70 см³ элюента № 1. Элюат отбрасывают. Имидаклоприд элюируют 80 см³ элюента № 2. собирая элюат в грушевидную колбу емкостью 250 см³. Раствор выпаривают досуха на ротационном испарителе при температуре нс выше 40 °С. Сухой остаток растворяют в 2 см³ подвижной фазы для ВЭЖХ и 20 мм³ раствор;! вводят в жидкостный хроматограф.

2.6.3. Условия хроматографирования

Жидкостный хроматограф «Альянс» фирмы Waters с УФ детектором (Waters 2487). Рабочая длина волны 268 нм. Прсдколонка Sun Fire

МУК 4.1.2595—10

для защиты аналитической колонки. Колонка Sun Fire (250 х 4.6) мм. 5 мкм (Waters. USA). Подвижная фаза: ацетонитрил - 0.005М H,POj в соотношении 22 : 78. Скорость потока 1 cmV.mhh. Объем вводимой пробы 20 мм³.

Время удерживайия имидаклоприда 12.1 ±0.2 мин.

Линейный диапазон детектирования 0.1—1.0 мкг/см³.

2.6.4. Обработка результатов анализа

Количественное определение проводят методом абсолютной калибровки. содержание имидаклоприда в образцах воды, почвы или растительных материалов (X. мг/кг) вычисляют по формуле:

51    - площадь пика имидаклоприда в стандартном растворе, мм;

5₂    - площадь пика имидаклоприда в анализируемой пробе, мм;

V- объем пробы, подготовленной для хроматографического анализа. см³;

Р - навеска анализируемого образца, г:

С - концентрация стандартного раствора имидаклоприда. мкг/см³.

Содержание остаточных количеств имидаклоприда в анализируемом образце вычисляют как среднее из 2-х параллельных определений.

Образцы, дающие пики большие, чем стандартный раствор имидаклоприда 1 мкг/см³. разбавляют подвижной фазой для ВЭЖХ.

3. Проверка приемлемости результатов параллельных определении

За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает прадеда повторясмостн( 1):

2-\Х_х -ИХ)

(*, +*₂>

Х\,Х₂ - результаты параллельных определений, мг/кг: г - значение предела повторяемости (г = 2.8о_г).

При невыполнении условия (1) выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.

31

МУК 4.1.2595—10

4. Оформление результатов

Результат анализа представляют в виде:

(X ± Д) мг/кг при вероятности Р = 0.95. где

X - среднее арифметическое результатов определений, признанных приемлемыми, мг/кг;

Д- граница абсолютной погрешности, мг/кг;

Д = 5 -Х/100,

6 - граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций). %.

В случае, если содержание компонента менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в biuc:

«содержание вещества в пробе «менее нижней границы определения» (например: менее 0.01 мг/кг*. где *-0.01 мг/кг - предел обнаружения).

5. Контроль качества результатов измерений

Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-1-6-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений».

5.1.    Стабильность результатов измерений контролируют перед проведением измерений, анализируя один из градуировочных растворов.

5.2.    Плановый внутрилабораторный оперативный контроль процедуры выполнения анализа проводится с применением метода добавок. Величина добавки С$должна удовлетворять условию:

Сд = Дл.Х + Дл.х', ГДС

± Д_лх (± Дл. х') - характеристика погрешности (абсолютная погрешность) результатов анализа, соответствующая содержанию компонента в испытуемом образце (расчетном) значению содержания компонента в образце с добавкой, соответственно), мг/кг: при этом:

Д_л = ± 0.84 Д где

Д - граница абсолютной погрешности, мг/кг:

Д = 5- Х/100.

МУК 4.1.2595—10

6 - граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций). %.

Результат контроля процедуры К_к рассчитывают по формуле:

K_IC = X'-X-Q, где

X', X. Со - среднее арифметическое результатов параллельных определений (признанных приемлемыми по п. 4) содержания компонента в образце с добавкой, испытуемом образце, концентрация добавки, соответственно, мг/кг.

Норматив контроля К рассчитывают по формуле:

k = Ja\_x.+a\_x

Проводят сопоставление результата контроля процедуры (К_к) с нормативом контроля (К).

Если результат контроля процедуры удовлетворяет условию

|KJ<K.    (2)

процедуру анализа признают удовлетворительной.

При невыполнении условия (2) процедуру контроля повторяют. При повторном невыполнении условия (2) выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимают меры к их устранению.

5.3. Проверка приемземости результатов измерений, полученных в условиях воспроизводимости:

Расхождение между результатами измерений, выполненных в двух разных лабораториях, нс должно превышать предела воспроизводимости (R):

Х\,Х₂ - результаты измерений в двух разных лабораториях, мг/кг;

R - предел воспроизводимости (в соответствии с диапазоном концентраций), %.

6. Требования техники безопасности

При проведении работы необходимо соблюдать требования безопасности. установленные для работ с токсичными, едкими, легковоспламеняющимися веществами (ГОСТ 12.1005-88).

33

МУК 4.1.2593—10; 4.1.2595—10; 4.1.2673—10; 4.1.2674—10, 4.1.2680—2682—10; 4.1.2685—10; 4.1.2686—10; 4.1.2688—10; 4.1.2689—10; 4.1.2691—10

Содержание

Определение остаточных количеств Флурохлоридона в почве, семенах и масле подсолнечника методом газожидкостной хроматографии: МУК 4.1.2593—10........................................................4

Определение остаточных количеств имидаклоприда в томатном соке методом высокоэффективной жидкостной

хроматографии: МУК 4.1.2595—10.......................................................21

Определение остаточных количеств дитнанона в ботве и клубнях карто(|юля методом высокоэффективной жидкостной

хроматографии: МУК 4.1.2673—10.......................................................35

Определение остаточных количеств бифентрнна в семенах и масле рапса методом капиллярной газожидкостной

хроматографии: МУК 4.1.2674—К).......................................................47

Определение остаточных количеств метаза хлора в капусте методом капиллярной газожидкостной хроматографии:

МУК 4.1.2680—10...................................................................................59

Определение остаточных количеств пиклорама в семенах и масле рапса методом капиллярной газожидкостной

хроматографии: МУК 4.1.2681—10.......................................................71

Определение остаточных количеств тстраконазола в ботве и корнеплодах сахарной свеклы методом газожидкостной

хроматографии: МУК 4.1.2682—10.......................................................87

Измерение концентраций топрамезона в воздухе рабочей зоны и смывах с кожных покровов операторов методом высокоэффективной жидкостной хроматографии:

МУК 4.1.2685—10.................................................................................101

Определение остаточных количеств Бста-цифлутрина в ботве и корнеплодах сахарной свеклы методом капиллярной

газожидкостной хроматографии: МУК 4.1.2686—10.........................115

Определение остаточных количеств азоксистробина в зеленой массе, семенах и масле рапса методом высокоэффективной

жидкостной хроматографии: МУК 4.1.2688—10................................135

Определение остаточных количеств димстоморфа в ягодах винограда и виноградном соке методом высокоэффективной

жидкостной хроматографии: МУК 4.1.2689—10................................149

Определение остаточных количеств ацетамиприда в семенах и масле рапса методом высокоэффективной жидкостной хроматографии: МУК 4.1.2691—10.....................................................163

3

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Определение остаточных количеств имидаклоприда в томатном соке методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

Методические указания МУК 4.1.2595—10

ББК 51.21

060

060 Определение остаточных количеств имидаклоприда в томатном соке методом высокоэффективной жидкостной хроматографии:    Методические указания.—М.:    Федеральный

центр гигиены и эпидемиологии Роспотрсбнадюра. 2010.— 14 с.

1.    Разработаны: Всероссийский НИИ защиты растений (В. И. Дол-женко. И. Л. Цибульская. Т. Д. Черменская. Н. Г. Ковров).

2.    Рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемиологическому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол № 3 от 03.12.2009 г.)

3.    Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты нрав потребителей и благополучия человека. Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г. Г. Онищенко 26 марта 2010 г.

4.    Введены в действие с 26 марта 2010 г.

5.    Введены впервые.

МУК 4.1.2595—10

УТВЕРЖДАЮ Руководитель Федеральной службы по надзору в с(|юрс защиты прав потребителей и благополучия человека. Главный государственный санитарный врач Российской Федерации

Г. Г. Онищенко

26 марта 2010 г.

Дата введения: 26 марта 2010 г.

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Определение остаточных количеств нмидаклопрнда в томатном соке методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

Методические указания МУК 4.1.2595—10

Настоящие методические указания устанавливают метод измерения массовой концентрации имндаклоприда в томатном соке в диапазоне концентраций 0,01—0,1 мг/кг.

1. Вводная часть

Действующее вещество: имидаклоприд. Структурная формула:

Брутто формула: C9H10CIN5O2.

Мол. масса: 255,7.

1-(6-.\лор-3-пиридилмстти)-^-нитроимидазолидин-2-илидсамин(1иРАС). 1 -[(6-хлор-З -п иридинил)метил] -Ы-нитро-2-имндаэолидинимин (С А).

23

МУК 4.1.2595—10

Химически чистый имидаклоприд представляет собой бесцветные кристаллы со слабым характерным запахом.

Температура плавления 144 °С. Давление паров 4 х 10 мРа (20 °С). 9 х 10'⁷ мРа (25 °С).

Коэффициент pile пределен ня в системе нчжганол-вода lgP = 0.57 (21 °С).

Растворимость (г/л) при 20 °С: в воде - 0.61; дихлорметанс - 55; изопропаноле - 1.2; толу оле - 0.68; н-гсксанс <0.1.

Стабилен к гидролизу при pH 5—11.

Острая пероральная токсичность LD*, для крыс - 450 мг/кг. Острая дермальная токсичность LD50 (24 часа) для крыс - более 5000 мг/кг. Нс ирритант для глаз и кожи (кролики). Острая ингаляционная токсичность LC50 (4 часа) для крыс - более 5323 мг/м³. 69 мг/м³ воздуха (аэрозоль). LCso (96 часов) для рыб - 211 (237) мг/л.

Имидаклоприд практически не токсичен для птиц. пчёл. дождевых червей, водорослей.

Мутагенной и тератогенной активности в стандартных тестах нс обнаружено.

Гру ппа токсичности по ЕРА - II. ВОЗ - II.

Область применения. Имидаклоприд - системный инсектицид нервно-паралитического действия группы нсоникотнноидов. Эффективно уничтожает листовую тлю. белокрылку. минёров, трипсов. колорадского жу ка, долгоносиков на хлопчатнике, рисе, картофеле, кукурузе, сахарной свекле, овощных культурах, цитрусовых, косточковых и семечковых плодовых в течение вегетационного периода. Может использоваться хзя обработки, как почвы, гак и надземных органов растений.

Гигиенические нормативы: МДУ имидаклоприда в томатах -0,1 мг/кг.

2. Методика определения имидаклоприда в томатном соке методом ВЭЖХ

2.1. Основные положения

2.1.1. Принцип метода

Методика основана на определении имидаклоприда методом ВЭЖХ с использованием УФ детектора после его извлечения из образцов водно-ацето новой смесью с последующей очисткой псрсраспрсдс-

МУК 4.1.2595—10

лснисм между двумя нссмсшивающимися растворителями и на колонке с силикагелем.

2.1.2. Метрологическая характеристика метода Метрологическая характеристика метода представлена в табл. 1 и 2.

Таблица 1 Метрологическая характеристика метода

Объект анализа Диапазон измеряемых кон-центраций, мг/кг 11оказагель точности (граница относительной iioipeiiiiiocm), ±6, % Стандартное отклонение повторяемое ли, ог, % Предел повторяемое ги, г, % Предел воспроизводимости, R, % Томатный сок 0,01—0,1 50 4,6 12,7 14,8

Таблица 2 По. пни а извлечения вещества, стандартное отклонение, доверительный интервал среднего результата для полного диапазона копнен Гранин (п = 16) приведены в таблице 2

Объект анализа Предел обнару жены, мг/кг Диапазон измеряемых концентраций, мг/кг Среднее значение определения, % Стандартное отклонение S,% Доверительный интервал среднего результата, ±% Сок яблок 0.01 0.01 -0.1 83.3 3.28 3.42

2.1.3. Избирательность метода Избирательность метода определения имидаклоприда достигается условиями подготовки проб и хроматографического анализа.

2.2. Реактивы и материалы

Ацетонитрил для ВЭЖХ. «В-230НМ» или хч Бумажные фильтры «красная лента»

Вода бидистиллированная. деионизированная Дихлормстан. хч

Имидаклоприд. аналитический стандарте содержанием д.в. 99.9 % (Sigma-Aldrich)

Натрий сернокислый безводный, свсжспрока-ленный ч

25

МУК 4.1.2595—10

Натрия гидроксид, хч    ГОСТ 4328-77

Натрия хлорид, чда    ГОСТ 4233-77

н-Гсксан. свсжспсрсгнаннын хч    ТУ 2631 -003-05807999-98

Подвижная фаза для ВЭЖХ: смесь ацетонитрил - 0.005М Н3РО4 (22 : 78. по объему)

Силикагель 60 для колоночной хроматографии (0.040—0.063 мм) (Merck. Германия)

Стекловата

Этиловый эфир уксусной кислоты, чда    ГОСТ    22300—76

Элюснт№ 1 для колоночной хроматографии: смесь гексан - этилацетат (50 50. по объему)

Элюент № 2 для колоночной хроматографии: смесь гексан - этилацетат (10 : 90. по объему)

Допускается использование реактивов квалификацией нс ниже указанных.

2.3. Приборы и посуда

Жидкостный хроматограф «Альянс» фирмы «Waters» с УФ детектором (Waters 2487) с дегазатором и автоматическим пробоотборником. Колонка Symmetry С-18. (250 х 4.6) мм. 5 мкм (Waters)

П редко донка Waters Symmetry С-18 Весы аналитические ВЛА-200 Ванна ультразвуковая «Серьга»

Ротационный испаритель вакуумный Buchi R-205

pH-метр универсальный ЭВ-74 Насос водоструйный Колбы плоскодонные на шлифах КШ500 29/32 ТС

Колбы круглодонные на шлифах КШ10 и

КШ250 29-32 ТС

Воронки лабораторные В-75-1 К)

Воронки делительные В Д-3-500 Цилиндры мерные вместимостью 50. 100. 500 и 1000 см³ Колбы мерные вместимостью 25.50. 100 и 1000 см³

Пипетки мерные вместимостью 1. 2. 5. 10 см³

26

МУК 4.1.2595—10

Колонки стеклянные (25 х 1) см

Допускается использование приборов и посуды с метрологическими характеристиками нс ниже указанных.

2.7. Отбор и хранение проб

Отбор проб производится в соответствии с ГОСТ 1725-85 «Томаты свежие. Требования при заготовке, поставке и реализации». Пробы томатного сока хранят до анализа в морозильной камере при температуре нс выше -18 °С в течение 2 месяцев, в холодильнике при 0—\ °С в герметичной упаковке нс более недели.

2.5.    Подготовка к определению

2.5. /. Подготовка и очистка реактивов и растворителей

Перед началом работы рекомендуется проверить чистоту применяемых органических растворителей. Для этого 100 см³ растворителя упаривают в ротационном вакуумном испарителе при температу ре + 40 °С до объема 1.0 см³ и хроматографируют. При обнаружении мешающих определению примесей очистку растворителей производят в соответствии с типовыми методиками.

2.5.2. Кондиционирование колонки

Перед началом анализа колонку (Symmetry С-18) кондиционируют в потоке подвижной фазы (1 см³ /мин) до стабилизации ну левой линии в течение 1—2 часов.

2.5.5.    Приготовление растворов

Для приготовления 1М раствора NaOH 40г едкого натра помещают в мерную колбу емкостью 10(Х) см³, растворяют при перемешивании в 600 см³ дистиллированной воды и доводят объем раствора до метки. Для приготовления 0.025М раствора NaOH 25 см³ 1М раствора едкого натра помещают в мерную колбу емкостью 1000 см³ и доводят объем раствора до метки дистиллированной водой.

Для приготовления подвижной фазы смешивают ацетонитрил с 0.005М H}POj в соотношении 22 : 78 по объему, используя мерные цилиндры.

Ятя приготовления 2М раствора ортофос(|юрной кислоты 200 г 98 % (или 225 г 87 %) кристаллической Н^РО, помещают в мерную колбу объемом 1 дм³, растворяют в 600 см³ дистиллированной воды и доводят объем до метки дистиллированной водой. Для приготовления

27