Государственное санитарно-эпидемиологическое нормирование _Российской    Федерации_

4.L МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Определение остаточных количеств карфентразон-этила по метаболиту карфентразону в зерне кукурузы, семенах подсолнечника и рапса, растительных маслах методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

Методические указания МУК 4.1,2378—08

Издание официальное

Москва * 2009

Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Определение остаточных количеств карфентразон-этила по метаболиту карфентразону в зерне кукурузы, семенах подсолнечника и рапса, растительных маслах методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

Методические указания МУК 4.1.2378-08

МУК 4Л .2378-08

ваться в желтый цвет, водой до нейтральной реакции промывных вод, перегоняют над поташом.

7.2. Приготовление смеси растворителей для экстракции

В мерную колбу вместимостью 1000 см³ помещают 900 см³ ацетонитрила, 100 см³ дистиллированной воды и 10 см³ уксусной кислоты, тщательно перемешивают.

7.3. Приготовление 2% раствора уксусной кислоты в этилацетате

В мерную колбу вместимостью 1000 см³ помещают 600-700 см³ этилацетата, вносят 20 см³ уксусной кислоты, тщательно перемешивают.

7.4. Приготовление 0,2 N раствора гидроксида калия

В мерную колбу вместимостью 1000 см³ помещают 11,2 г гидроксида калия, растворяют в 600-700 см³ деионизованной воды, доводят водой до метки, тщательно перемешивают,

7.5. Приготовление 6 N раствора серной кислоты

В мерную колбу вместимостью 1000 см³ помещают 400 - 500 см³ деионизованной воды, вносят 336 см³ концентрированной серной кислоты, перемешивают, доводят водой до метки, вновь перемешивают,

7.6. Приготовление 5%-ного раствора бикарбоната натрия

В мерную колбу вместимостью 3000 см³ помещают 50 г бикарбоната натрия, растворяют в 600-700 см³ деионизованной воды, доводят водой до метки, тщательно перемешивают.

10

МУК 4.1.2378-08

7.7. Подготовка подвижной фазы для ВЭЖХ

В мерную колбу вместимостью 1000 см³ помещают 380 см³ ацетонитрила, 620 см³ деионизированной воды, 1 см³ орто-фосфорной кислоты, перемешивают, фильтруют и дегазируют.

7.8. Кондиционирование хроматографической колонки

Промывают колонку подвижной фазой (приготовленной по п. 7.7) при скорости подачи растворителя 0,4 см³/мин до установления стабильной базовой линии.

7.9* Приготовление градуировочных растворов и растворов внесения

7.9Л. Исходный раствор карфентразона для градуировки (концентрация 100 мкг/сму. В мерную колбу вместимостью 100 см³ помещают 0,1 г карфентразона (аналитический стандарт в виде кислоты), растворяют в 50-70 см³ метанола, доводят метанолом до метки, тщательно перемешивают.

В случае использования в качестве аналитического стандартного образца натриевой соли карфентразона, проводят выделение свободной кислоты. С этой целью готовят раствор натриевой соли карфентразона в метаноле с концентрацией карфентразона 2.5 мг/см³, (0.2825 г образца на 100 см³ раствора). Аликвоту полученного раствора объемом 1 см³ помещают в коническую колбу вместимостью 200-250 см³, вносят 100 см³ деионизованной воды, перемешивают, с помощью 6 N серной кислоты доводят pH раствора до 1-2 (контроль по индикаторной бумаге), переносят его в делительную воронку вместимостью 250 см³ и проводят экстракцию карфентразона хлористым метиленом (трижды порциями по 50 см³). Объединенный дихлорметановый экстракт (нижняя фаза) пропускают через слой безводного сульфата натрия, переносят в колбу для упаривания вместимостью 250 см³, упаривают досуха. Остаток, растворяя порциями ацетонитрила по 6-7 см³, переносят в мерную колбу вместимостью 25 см³, доводят ацетонитрилом до метки, перемешивают.

Раствор хранится в холодильнике в течение 3-х месяцев.

П

МУК 4.1.2378-08

Растворы № 1-5 готовят объемным методом путем последовательного разбавления исходного раствора.

7.9.2,    Раствор Ns 1 карфентразона для градуировки и внесения (концентрация 10 мкг/см³). В мерную колбу вместимостью 100 см³ помещают 10,0 см³ исходного раствора с концентрацией 100 мкг/см³ (п. 7.9.1.), доводят до метки подвижной фазой (приготовленной по п. 7.7), тщательно перемешивают.

Раствор хранится в холодильнике в течение месяца.

Этот раствор используют для приготовления проб зерна кукурузы, семян рапса и подсолнечника с внесением при оценке полноты извлечения карфентразона из исследуемых образцов, а также контроле качества результатов измерений методом добавок. Для внесения в образцы растительного масла используют раствор с концентрацией 10 мкг/см³, приготовленный в изопропаноле,

7.9.3.    Рабочие растворы №№ 2-5 карфентразона для градуировки

(концептраг{ия 0J - 1.0 мкг/см³), В 4 мерные колбы вместимостью 100 см³ помещают по 1.0, 2.0, 5.0 и 10.0 см³ раствора № I с концентрацией 10 мкг/см³ (п. 7,9.2.), доводят до метки подвижной фазой, тщательно перемешивают, получают рабочие растворы    2    -    5    с    кон

центрацией карфентразона 0.1, 0.2, 0.5 и 1.0 мкг/см³, соответственно.

Растворы хранятся в холодильнике в течение месяца.

7.10. Установление градуировочной характеристики

Градуировочную характеристику, выражающую зависимость площади (высоты) пика от концентрации карфентразона в растворе (мкг/см³), устанавливают методом абсолютной калибровки по 4-м растворам для градуировки №№ 2-5.

В инжектор хроматографа вводят по 20 мм³ каждого градуировочного раствора и анализируют в условиях хроматографирования по п. 9.4. Осуществляют не менее 3-х параллельных измерений.

7.11. Подготовка колонки с силикагелем для очистки экстракта

Нижнюю часть стеклянной колонки длиной 25 см, внутренним диаметром 8-10 мм уплотняют тампоном из стекловаты, медленно выливают в колонку (при открытом кране) суспензию 5 г силикагеля в

12

МУК 4.1.2378-08

15-20 см³ гексана. Дают растворителю стечь до верхнего края сорбента и помещают на него слой безводного сульфата натрия высотой 1,5 см. После этого колонка готова к работе.

7.72. Проверка хроматографического поведения карфентразона на колонке с силикагелем

В круглодонную колбу вместимостью 10 см³ помещают 0,5 см³ раствора карфентразона с концентрацией 10 мкг/см³ (п. 7.9.2.), растворитель упаривают досуха, добавляют 3 см³ этилацетата, помещают на ультразвуковую баню на 30 сек, вносят 2 см³ гексана, перемешивают, вновь помещают на ультразвуковую баню на 30 сек и наносят на колонку, подготовленную по п. 7.11. Промывают колонку последовательно 50 см³ гексана, 25 см³ смеси гексан- этилацетат (1:1, по объему) и 50 см³ этилацетата, элюат отбрасывают.

Затем колонку промывают 70 см³ 2%-ного раствора уксусной кислоты в этилацетате (п. 7.3.) со скоростью 1-2 капли в сек. Фракционно (по 10 см³) отбирают элюат, упаривают, остатки растворяют в 1 см³ подвижной фазы, анализируют содержание карфентразона по п. 9.4.

Фракции, содержащие карфентразон, объединяют и вновь анализируют.

Устанавливают уровень вещества в элюате, определяют полноту смывания с колонки и необходимый для очистки объем элюента.

ПРИМЕЧАНИЕ: Проверку хроматографического поведения карфентразона следует проводить обязательно, поскольку профиль вымывания может изменяться при использовании новой партии сорбентов и растворителей.

8. Отбор проб

Отбор проб производится в соответствии с правилами, определенными ГОСТами 13586.3-83 «Зерно. Правила приемки и методы отбора проб», 10583-76 «Рапс. Требования при заготовках и поставках», 22391-89 «Подсолнечник. Требования при заготовках и поставках», 10852-86 «Семена масличные. Правила приемки и методы отбора проб», «Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов» (№ 2051 - 79 от 21.08.79 г).

13

МУК 4.1.2378-08

Отобранные пробы зерна кукурузы, семян рапса и подсолнечника хранят в упаковке из хлопчатобумажной ткани не более 3-х месяцев. Для длительного хранения образцы замораживают и хранят при температуре -18°С.

Пробы масла (помещенные в стеклянные флаконы) хранят в холодильнике в течение 3-х месяцев.

Перед анализом образцы зерна и семян измельчают.

9* Выполнение определения

9.1.    Зерно кукурузы

9.1.1.    Экстракция

Образец измельченного зерна кукурузы массой 20 г помещают в коническую колбу вместимостью 250 см³, вносят 100 см³ смеси аце-тонитрил-вода-уксусная кислота (90:10:1, по объему) и помещают на встряхиватель на 1 час.

Раствор фильтруют на воронке Бюхнера через двойной бумажный фильтр «красная лента» под вакуумом. Осадок на фильтре дважды промывают смесью ацетонитрил-вода-уксусная кислота (90:10:1, по объему) порциями по 30 см³. Объединенные экстракт и промывки переносят в делительную воронку вместимостью 500 см³ и проводят очистку поп. 9.1.2.

9.1.2. Очистка экстракта перераспределением в системе несмешивающихся растворителей

К экстракту, полученному по п. 9.1.1, помещенному в делительную воронку, добавляют 20 см³ 0,1 N раствора гидроксида калия, перемешивают и оставляют на 30 мин. Затем в делительную воронку вносят 50 см³ гексана, интенсивно ее встряхивают в течение 2-х мин. После полного разделения фаз верхний гексановый слой отделяют и отбрасывают. Операцию промывки щелочного раствора повторяют новой порцией гексана объемом 30 см³.

Нижний водный слой помещают в круглодонную колбу вместимостью 500 см³, подкисляют с помощью 6 N раствора серной кислоты до pH 2-3 (контролируя его значение по универсальной индикаторной бумаге), упаривают до водного остатка (объем 30- 40 см³) при температуре 40°С, переносят его в делительную воронку вместимостью

14

МУК 4.1.2378-08

250 см³, вносят 100 см³ деионизованной воды (предварительно ополоснув ею колбу), 10 см³ насыщенного раствора хлористого натрия, перемешивают. Затем вносят в воронку 50 см³ хлористого метилена, интенсивно встряхивают в течение 2-х мин. После полного разделения фаз нижний органический слой отделяют, переносят в коническую колбу вместимостью 250 см³.

Операцию экстракции водной фазы повторяют еще дважды, используя по 30 см³ хлористого метилена.

Объединенный дихлорметановый экстракт переносят в колбу для упаривания, пропуская через слой (1.5-2 см) безводного сульфата натрия, помещенного в конусную химическую воронку на бумажном фильтре. Упаривают досуха и очищают на колонке с силикагелем по п. 9.1.3.

9.13, Очистка экстракта на колонке с силикагелем

Остаток, полученный по п. 9,1.2, 9.2.2 и 9.2.3., находящийся в круглодонной колбе, растворяют в 3-х см³ этилацетата, помещая на ультразвуковую баню на 30 сек, добавляют 2 см³ гексана, перемешивают, вновь помещают на ультразвуковую баню на 30 сек. Затем раствор наносят на колонку, подготовленную по п. 7,11. Колбу обмывают трижды порциями гексана по 3 см³, которые также наносят на колонку. Промывают колонку последовательно 50 см³ гексана, 25 см³ смеси гек-сан-этилацетат (1:1, по объему) и 50 см³ этилацетата, элюат отбрасывают.

Карфентразон элюируют с колонки 50 см³ 2%-ного уксусной кислоты в этилацетате со скоростью 1-2 капли в сек, собирая элюат в круглодонную колбу. Раствор упаривают досуха при температуре не выше 35°С, для полного удаления следов уксусной кислоты в колбу вносят 4-5 см³ гексана и вновь упаривают. Остаток в колбе растворяют в 2-х см³ подвижной фазы и анализируют содержание карфентразона по п, 9.4.

9.2* Семена рапса, подсолнечника

9.2. L Экстракция

Образец измельченных семян рДпса и подсолнечника массой 20 г помещают в коническую колбу вместимостью 250 см³, вносят 100 см³

15

МУК 4.1.2378-08

смеси ацетонитрил-вода-уксусная кислота (90:10:1, по объему) и помещают на встряхиватель на 1 час.

Раствор фильтруют на воронке Бюхнера через двойной бумажный фильтр «красная лента» под вакуумом. Осадок на фильтре дважды промывают смесью ацетонитрил-вода-уксусная кислота (90:10:1, по объему) порциями по 30 см³. Объединенные экстракт и промывки переносят в делительную воронку вместимостью 500 см³ и проводят очистку по п. 9.2.2.

9.2.2. Очистка экстракта перераспределением в системе

несмешивающихся растворителей

К экстракту, полученному по п. 9.2.1, помещенному в делительную воронку, добавляют 20 см³ 0,1 N раствора гидроксида калия, перемешивают и оставляют на 30 мин. Затем в делительную воронку вносят 50 см³ гексана, интенсивно ее встряхивают в течение 2-х мин. После полного разделения фаз верхний гексановый слой отделяют и отбрасывают. Операцию промывки щелочного раствора повторяют новой порцией гексана объемом 30 см³.

Нижний водный слой помещают в круглодонную колбу вместимостью 500 см³, подкисляют с помощью 6 N раствора серной кислоты до pH 2-3 (контролируя его значение по универсальной индикаторной бумаге), упаривают до водного остатка (объем 30- 40 см³) при температуре 40°С, переносят его в делительную воронку вместимостью 250 см³, вносят 100 см³ деионизованной воды (предварительно ополоснув ею колбу), 10 см³ насыщенного раствора хлористого натрия, перемешивают. Затем вносят в воронку 50 см³ хлористого метилена, интенсивно встряхивают в течение 2-х мин. После полного разделения фаз нижний органический слой отделяют, переносят в коническую колбу вместимостью 250 см³.

Операцию экстракции водной фазы повторяют еще дважды, используя по 30 см³ хлористого метилена.

Объединенную органическую фазу переносят в новую делительную воронку вместимостью 250 см³, вносят 25 см³ 5%-ного раствора бикарбоната натрия, интенсивно встряхивают делительную воронку в течение 2-х мин. Для облегчения расслаивания образовавшейся эмульсии (в частности при анализе проб подсолнечника) воронку помещают в морозильную камеру на 15 мин (или холодильник на 1 час). Допустимо перед помещением пробы в холодильник перелить раствор в кони-

МУК 4.1.2378-08

ческую колбу с пришлифованной пробкой. После полного разделения фаз верхний водный слой отделяют, перенося в коническую колбу вместимостью 250 см³.

Операцию экстракции дихлорметанового раствора повторяют, используя 25 см³ 5%-ного раствора бикарбоната натрия. Для облегчения расслаивания фаз воронку (или коблу) снова помещают в холодильник или морозильную камеру.

Водные фазы объединяют в стакане, фракцию хлористого метилена отбрасывают.

Водный раствор переносят в делительную воронку вместимостью 100 см³, вносят в воронку 25 см³ гексана, интенсивно встряхивают в течение 1 мин. После полного разделения фаз верхний органический слой отделяют и отбрасывают. Операцию промывки водной фазы повторяют новой порцией гексана объемом 25 см³.

Водный слой переносят в делительную воронку вместимостью 250 см³, подкисляют с помощью 6 н раствора серной кислоты до pH 1 -2 (контролируя его значение по универсальной индикаторной бумаге), вносят в воронку 50 см³ хлористого метилена, интенсивно встряхивают в течение 2-х мин. После полного разделения фаз нижний органический слой отделяют, переносят в круглодонную колбу вместимостью 150 см³, фильтруя через слой (1.5-2 см) безводного сульфата натрия, помещенный на бумажном фильтре в химической воронке.

Операцию экстракции водной фазы повторяют, используя 25 см³ хлористого метилена.

Объединенный в круглодонной колбе экстракт, пропущенный через слой сульфата натрия, упаривают досуха и подвергают дополнительной очистке на колонке по п. 9.1.3.

9.3. Масло 9.3.1. Экстракция

Образец масла массой 20 г помещают в коническую колбу вместимостью 200 - 250 см^, растворяют в 25 см³ гексана, вносят 100 см³ смеси ацетонитрил-вода-уксусная кислота (90:10:1, по объему) и интенсивно встряхивают в течение 2-х мин.

Для облегчения расслаивания образовавшейся эмульсии колбу помещают в морозильную камеру на 15 мин (или холодильник на 1 час). Смесь осторожно переливают в делительную воронку, после

МУК 4.1.2378*08

полного разделения фаз нижний водно-ацетонитрильный слой отделяют, перенося в новую делительную воронку вместимостью 250 см³ , и подвергают очистке по п. 9.2.2. Гексановый раствор отбрасывают.

9.3.2. Очистка экстракта перераспределением в системе несмешивающихся растворителей

К экстракту, полученному по п. 9.3.1, помещенному в делительную воронку, добавляют 15 см³ 0,1 N раствора гидроксида калия, перемешивают и оставляют на 30 мин. Затем в делительную воронку вносят 50 см³ гексана, интенсивно ее встряхивают в течение 2-х мин. После полного разделения фаз нижний водно-ацетонитрильный слой отделяют, перенося в коническую колбу. Верхний гексановый слой отбрасывают.

Ацетонитрильную фазу вновь переносят в делительную воронку и повторяют операцию промывки еще дважды, используя по 25 см³ гексана.

Нижний водно-ацетонитрильный слой помещают в круглодонную колбу вместимостью 250 см³, подкисляют с помощью 6 N раствора серной кислоты до pH 2-3 (контролируя его значение по универсальной индикаторной бумаге), упаривают до водного остатка (объем 30-40 см³) при температуре 40°С, переносят его в делительную воронку вместимостью 250 см³, вносят 100 см³ деионизованной воды (предварительно ополоснув ею колбу), 10 см³ насыщенного раствора хлористого натрия, перемешивают. Затем вносят в воронку 50 см³ хлористого метилена, интенсивно встряхивают в течение 2-х мин.

После полного разделения фаз нижний органический слой отделяют, переносят в круглодонную колбу вместимостью 250 см³, фильтруя через слой (1.5-2 см) безводного сульфата натрия, помещенный на бумажном фильтре в химической воронке.

Операцию экстракции водной фазы повторяют еще дважды, используя 20 см³ хлористого метилена.

Объединенный в круглодонной колбе экстракт, пропущенный через слой сульфата натрия, упаривают досуха и подвергают дополнительной очистке на колонке по п. 9.1.3.

18

МУК 4.1.2378-08

9А. Условия хроматографирования

Измерения выполняют при следующих режимных параметрах: Жидкостный хроматограф «Perkin Elmer» с ультрафиолетовым детектором

Колонка стальная, длиной 25 см, внутренним диаметром 2,0 мм, содержащая Сферисорб S 5 ODS 2, зернением 5 мкм Температура колонки: комнатная

Подвижная фаза: ацетоиитрил-вода-орто-фосфорная кислота (380:620:1, по объему)

Скорость потока элюента: 0,4 см³/мин Рабочая длина волны: 244 нм Чувствительность: 0,005 ед. абсорбции на шкалу Объем вводимой пробы: 20 мм³

Ориентировочное время выхода карфентразона: 9.5-9.9 мин. Образцы, дающие пики, большие, чем градуировочный раствор карфентразона с концентрацией 1 мкг/см³, разбавляют подвижной фазой для ВЭЖХ (подготовленной по п. 7.7.).

10. Обработка результатов анализа

Содержание карфентразон-этила в пробе (X, мг/кг) по основному метаболиту карфентразону рассчитывают по формуле;

Ах VхК

X —----------- ,    где

m

А - концентрация карфентразона, найденная по градуировочному графику в соответствии с величиной площади хроматографического пика, мкг/см³;

V - объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, см³;

m - масса анализируемого образца, г;

К- коэффициент пересчета содержания карфентразона на карфентразон-этил, равный 1,07 (по соотношению молекулярных масс);

19

ББК 51.21 0 60

О 60 Определение остаточных количеств карфентразон-этила по метаболиту карфентразону в зерне кукурузы, семенах подсолнечника и рапса, растительных маслах методом высокоэффективной жидкостной хроматографии, Методические указания. - М: Федеральный центр гигиены и эпидемиологии Рос потребнадзо-ра, 2009. - 22 с.

1.    Разработаны Федеральным научным центром гигиены им, Ф.Ф. Эрисмана

(Юдина Т,В., Федорова Н.Е., Волкова В,Н., Иванов Г.Е.).

2.    Рекомендованы к утверждению Комиссией по сантарно- эпидемиологи

ческому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 3 апреля 2008 г. № 1).

3.    Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека. Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г. Онищенко 2 июля 2008 г,

4.    Введены в действие с 5 сентября 2008 г.

5.    Введены впервые.

Формат 60x88/16    Печ.    л.    1,5

Тираж 200 экз.

Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека 127994, Москва, Вадковский пер., д. 18/20

Тиражировано отделом издательского обеспечения Федерального центра гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора 117105, Москва, Варшавское ш., 19а Отделение реализации, тел./факс 952-50-89

© Роспотребнадзор, 2009 © Федеральный центр гигиены и

эпидемиологии Роспотребнадзора, 2009

11. Проверка приемлемости результатов параллельных определений

За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предела повторяемости (1):

2-\Х_х-Х_г

(Х_]+Х

где X], Х₂- результаты параллельных определений, мг/кг;

г- значение предела повторяемости (таблица 1), при этом

г = 2.8ст_г.

При невыполнении условия (1) выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.

12. Оформление результатов

Результат анализа представляют в виде:

(X ± Д) мг/кг при вероятности Р= 0.95,

где X- среднее арифметическое результатов определений, признанных приемлемыми, мг/кг;

А- граница абсолютной погрешности, мг/кг;

А =5 *Х/ 100,

где 5 - граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций, таблица 1), %.

Если содержание компонента менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде: «содержание карфентразон-этила в пробе менее 0,01 мг/кг»*

*- 0,01 мг/кг - предел обнаружения.

13. Контроль качества результатов измерений

Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-1-6-2002 «Точность (правильность и прецинзионность) методов и результатов измерений».

20

Химически чистый карфентразон-этил представляет собой вязкую желтую жидкость с легким нефтяным запахом. Температура плавления - 22,1°С, температура кипения 350-355°С/760 мм рт. ст. Давление паров при 25°С: 1,6 х 10'² мПа. Растворимость в толуоле ~ 0,9; гексане -0,03 (г/см³, 20°С); смешивается во всех соотношениях с ацетоном, дй-хлорметаном, этанолом и этилацетатом, Растворимость в воде -12 мг/см³ (при 20°С ), 22 мг/см³ (при 25°С ); 23 мг/см³ (при 30°С ). Коэффициент распределения в системе октанол/вода; Ko_WlogP ~ 3,36,

Карфентразон-этил в водной среде гидролитически стабилен при pH 5, в нейтральной и щелочной среде подвержен гидролизу: DT50 3,6 ч (pH 9), 8,6 дней (pH 7). Фотолитически не стабилен: DT50 * 8 дней.

Краткая токсикологическая характеристика

Острая пероральная токсичность (LD ₅₀) для крыс - 5143 мг/кг; острая дермальная токсичность (LD ₅₀) для крыс > 4000 мг/кг; острая ингаляционная токсичность (LK₅₀) для крыс > 5 мг/дм³ (4 часа).

Основным продуктом гидролитического разложения (метаболитом) карфентразон-этила в растениях, воде, почве является карфентра-зон (кислота).

Карфентразон

(Я,8)-2-хлор-3-[2-хлор-5-(4-дифторметил-4,5-дигидро-3-метил-5-

C13H1QCI2F3N3O3

Мол. масса 384,2

Область применения препарата

Карфентразон-этил - гербицид системного действия из группы триазолинонов, хорошо приникающий в растения через листья, но слабо передвигающийся по растению. Механизм действия связан с ингибированием активности протопорфирингеноксидазы. Высокоэффективен против широкого спектра двудольных сорняков.

4

МУК 4.1.2378-08

МДУ карфентазон-этила в зерне и масле кукурузы, семенах и

масле подсолнечника и рапса - 0,02 мг/г.

Метрологические характеристики метода

При соблюдении всех регламентированных условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и её составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности Р.=0,95 не превышает значений, приведенных в таблице 1 для соответствующих диапазонов концентраций.

Таблица 7

Метрологические параметры

Анализи руемый объект Диапазон определяемых концентраций, мг/кг Показатель точности (граница сгшосителыюй погрешности), ±6, % Р-0,95 Стандартное отклонение повторяемости, а г, % Предел повторяем о-стн, г, % Предел воспроизводимости, R, % Зерно кукурузы от 0,01 до 0,1 50 8,0 22 26 Семена рапса от 0,01 до 0,1 50 7Д 20 24 Семена подсолне чника от 0,01 до 0,1 50 7,2 20 24 Кукурузное масло от 0,01 до ОД 50 7,8 22 26 Рапсовое масло от 0,01 до ОД 50 7,6 21 25 Подсол нечное масло от 0,01 до ОД 50 ; 7,5 21 25

Полнота извлечения вещества, стандартное отклонение, доверительный интервал среднего результата для полного" диапазона концентраций (п = 20) приведены в таблице 2. Таблица 2

Анализируемый объект Метрологические параметры, Р = 0,95, п = 20 Предел обнару жения, мг/кг Диапазон определяемых концентраций мг/кг Среднее значение определения % Стандарт ное отклонение, S,% Доверительный интервал среднего результата, +,_% Зерно кукурузы 0,01 0,01-0,1 85Д 6,0 8,3 j Семена рапса 0,01 0,01 - ОД 83,2 5,0 6,9

5

МУК 4.1.2378-08

Семена подсолнечника 0,01 0,01-0,1 83,4 5,6 7,8 Кукурузное масло 0,01 0,01-0,1 88,6 6,4 8,9 Рапсовое масло 0,01 1 о Го ( о 86,2 6,0 8,3 Подсолнечное масло 0,01 о 0 1 о 84,8 5,4 7.5

2. Метод измерений

Методика основана на определении карфентразон-этияа по метаболиту карфентразону с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с ультрафиолетовым детектором (УФ) после его экстракции из анализируемых проб смесью ацетонитрил-вода-уксусиая кислота, очистки экстракта перераспределением между не-смешивающимися фазами и на колонке с силикагелем*

Количественное определение проводится методом абсолютной калибровки.

В предлагаемых условиях определения метод специфичен в присутствии 2,4-Д.

5*2, Реактивы

Карфентразон, аналитический стандарт с содержанием основного вещества 99,3% (фирма ФМС) или Карфентразона натриевая соль с содержанием основного вещества 99,2% (СОП 74-07 , НПК «БЛОК-1»)

Силикагель Si 60, для колоночной хромато!рафии, 0.2-0.5 мм (фирмы «Мерк», Германия)

Ацетонитрил для хроматографии, хч Вода деионизованная н-Г ексан, хч

Изопропиловый спирт (пропанол^), хч

Калий гидроксид, осч

Кислота орто-фосфорная, хч, 85%

Кислота серная, хч Кислота уксусная, ледяная, хч Метиловый спир т (метанол), хч Метилен хлористый (дихлорметан), хч Натрий углекислый кислый (бикарбонат), хч Натрий сернокислый, безводный, хч Натрий хлористый, хч

Этиловый эфир уксусной кислоты (этилацетат), ч

Допускается использование реактивов иных производителей с аналогичной или более высокой квалификацией.

3.3. Вспомогательные устройства, материалы

Аппарат для встряхивания типа АВУ-6с Ахвлдистиллятор

Баня ультразвуковая фирмы Донау (Швейцария)

Бумажные фильтры «красная лента», обеззоленные или фильтры из хроматографической бумаги Ватман ЗММ Воронка Бюхнера

Воронки деятельные вместимостью 100,250 я 500 см³

Воронки конусные диаметром 30-37 и 60 мм

Г руша резиновая

Дефлегматор елочный

Индикаторная бумага универсальная

Колба Бунзена

Колбы плоскодонные вместимостью 100, 250 и 400 см³ Колбы круглодонные на шлифе вместимостью 10, 100,250 н500 см³

Мембранные фильтры капроновые, диаметром 47 мм Набор для фильтрации растворителей через мембрану Насос водоструйный вакуумный

Ротационный вакуумный испаритель В-169 фирмы Buchi, Швейцария

7

МУК 4,1.2378-08

Стаканы химические, вместимостью 10, 250 и 400 см³ ГОСТ 25336

Стекловата

Стеклянная колонка длиной 25 см, внутренним диаметром 8-10 мм

Стеклянные палочки Установка для перегонки растворителей Хроматографическая колонка стальная, длиной 25 см, внутренним диаметром 2,0 мм, содержащая Сферисорб S 5 ODS 2, зернением 5 мкм

Шприц для ввода образцов для жидкостного хроматографа вместимостью 50-100 мм³

Допускается применение хроматографических колонок и другого оборудования с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.

4. Требования безопасности

4Л. При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007, требования электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019, а также требования, изложенные в технической документации на жидкостной хроматограф.

4.2. Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности по ГОСТ 12.1.004 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать норм, установленных ГН 2.2.5.1313-03 «Предельнодопустимые концентрации (ПДК) вредных веществ в воздухе рабочей зоны». Организация обучения работников безопасности труда - по ГОСТ 12.0.004.

5. Требования к квалификации операторов

К выполнению измерений допускают специалистов, имеющих квалификацию не ниже лаборанта-исследователя, с опытом работы на жидкостном хроматографе.

К проведению пробоподготовки допускают оператора с квалификацией «лаборант», имеющего опыт работы в химической лаборатории.

8

МУК 4.1.2378-08

6. Условия измерений

При выполнении измерений соблюдают следующие условия:

*    процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха (20±5)°С и относительной влажности не более 80%.

•    выполнение измерений на жидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору -

7. Подготовка к выполнению измерений

Выполнению измерений предшествуют следующие операции: очистка органических растворителей (при необходимости), приготовление растворов, градуировочных растворов и растворов внесения, установление градуировочной характеристики, подготовка колонки с силикагелем для очистки экстракта, проверка хроматографического поведения вещества на колонке, отбор проб,

7.Л Подготовка органических растворителей

7.1.1. Очистка ацетонитрила

Ацетонитрил кипятят с обратным холодильником над пентокси-дом фосфора не менее 1 часа, после чего перегоняют, непосредственно перед употреблением ацетонитрил повторно перегоняют над прокаленным карбонатом калия.

7.1.2* Очистка этилацетата

Этилацетат промывают последовательно 5%-ным водным раствором карбоната натрия, насыщенным раствором хлористого кальция, сушат над безводным карбонатом калия и перегоняют или подвергают ректификационной перегонке на колонне с числом теоретических тарелок не менее 50.

7.1.3. Очистка н-гексана и хлористого метилена

Растворитель последовательно промывают порциями концентрированной серной кислоты, до тех пор, пока она не перестанет окраши-

9