Государственное санитарно-эпндсмно.кн ичсское нормирование _Российской    Федерации_

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Определение вредных веществ в биологических средах

Сборник методических указаний МУК 4.1.2102—4.1.2116—06

Издание официальное

Москва • 2008

Федеральная сдужба по напору в сфере защиты нрав ноз ребшедей н G.iaioiio.ivmiih че.ювека

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Определение вредных веществ в биологических средах

Сборник методических указаний МУК 4.1.2102—4.1.21*16—06

МУК 4.1.2110—06

7.3.3.    Хлористоводородная кислота, 2 люль дм³. В мерную колбу вместимостью 1 дм³, наполненную до половины объема дистиллированной водой, прибавляют 61.0 см³ концентрированной хлористоводородной кислоты (плотность 1.19 г/см³), доводят дистиллированной водой до метки и перемешивают.

7.3.4.    2,4-Динитрофенилгидразин, 0,2 %-й раствор в 2М хлористоводородной кислоте. В мерную колбу на 100 см³ вносят 0.2 г 2.4-динит-рофенилгидразина и доводят до метки 2М раствором хлористоводородной кислоты.

7.3.5.    Исходный раствор альдегидов для калибровки (раствор А): 4 см³ ГСО формальдегида с концентрацией 1,0 мг/см³ (4.0 мг). 5.0 мм³ (3,9 мг) ацетальдегида. 5.0 мм³ (4,03 мг) пропионового альдегида. 5.0 мм³ (4.08 мг) масляного альдегида, переносят в мерную колбу вместимостью 200 см³, содержащую дистиллированную воду, в которую предварительно добавляют 5 см³ 0.2 %-го раствора 2.4-динитро(|>снилгидразина и доводят водой до метки. Стандартные растворы готовят с предварительным охлаждением альдегидов и дистиллированной воды. Используют свежеприготовленный раствор. Содержание альдегидов в растворе А составляет (с учетом плотности и содержания основного вещества): формальдегида -

20.00    мкг/см³; ацетальдегида - 19.5 мкг/см³; пропионового альдегида -

20.1    мкг/см³; масляного альдегида - 20.4 мкг/см³.

Исходный раствор ацетона для качибровки (раствор В)\ 5.0 мм³ (3.96 мг) ацетона переносят в мерную колбу вместимостью 200 см³, содержащую дистиллированную воду, в которую предварительно добавляют 5 см³ 0.2 %-го раствора 2.4-динитрофсннлгидразина и доводят водой до метки. Используют свежеприготовленный раствор. Содержание ацетона в растворе В составляет (с учетом плотности и содержания основного вещества) 19.8 мкг/см³.

7.3.6.    Получение 2.4-динитрофеннлгндразонов формальдегида, ацетальдегида. пропионового альдегида, масляного альдегида и ацетона (используются для идентификации гидразонов альдегидов и ацетона в анализируемых пробах). Эквимолярные количества 2.4-динитрофенил-гидразина и альдегида (или ацетона) кипятят в очищенном от альдегидов и кетонов этиловом спирте 1 ч в присутствии каталитических количеств хлористоводородной кислоты. Выпавший в осадок 2.4-днннтро-феннлгидразон соответствующего альдегида (или ацетона) отфильтровывают и пере кристалл изо вывают из этанола до постоянной температуры плавления.

МУК 4.1.2110—06

7.4. Подготовка хроматографической колонки

Колонку устанавливают на хроматограф и подают элюирующую жидкость, подготовленную в соответствии с п. 7.3.2. со скоростью 100 мм/мин до установления равновесия колонки, которое определяют по стабильности нулевой линии детектора.

7.5. Установление градуировочной характеристики

7.5.1.    Строят две зависимости площади хроматографического пика от концентрации альдегидов и ацетона в крови в диапазонах 0.001— 0.010 мкг/см³ и 0.01—0.10 мкг/см³ - для альдегидов. 0.01—0,10 мкг/см³ и 0.1—2.0 мкг/см³ - для ацетона. Градуировочные характеристики устанавливают по пяти сериям растворов для градуировки. Каждую серию, состоящую из пяти растворов, готовят из растворов А и В (см. п. 7.3.5).

7.5.2.    Для приготовления градуировочных смесей собирается суммарная проба мочи объемом нс менее 1.5 дм³ (от нескольких человек). В соответствии с п. 8 проводят анализ пробы мочи на содержание альдегидов и ацетона. При наличии анализируемых веществ в холостой пробе вычитают их (|юновос содержание при построении калибровки.

7.5.3.    Растворы хтя установления градуировочных характеристик готовят в мерных колбах вместимостью 50 см³. Для этого в каждую колбу вносят растворы А и В в соответствии с табл. 1 и 2. доводят объем до метки мочой и перемешивают. Анализируют свежеприготовленные растворы.

Таблица 1

Рас творы для установления градуировочной характеристики при определении в моче альдегидов в лиана юне концентраций 0,001—0,010 мкг/см³ и аце тона в диапазоне концет раций 0,01—0,10 мкг/см³

Номер раствора	1	2	3	4	5
Объем рас шора А, см3	0,0025	0,005	0,010	0,015	0,025
Массовая концентрация формальдегида, мкг/см	0,001	0,002	0,004	0,006	0,01
Массовая концентрация ацетат ь-дегида, мкг/см3	0,001	0,002	0,004	0,006	0,01
Массовая концентрация пропио-нового альдегида, мкг/см7	0,001	0,002	0,004	0,006	0,01
Массовая концентрация масляного альдегида, мкг/см3	0,001	0,002	0,004	0,006	0,01
Объем раствора В, см3	0,025	0,050	0,100	0,150	0,250
Массовая концентрация ацетона, мкг/см3	0,01	0,02	0,04	0,06	0,10

МУК 4.1.2110—06

Таблица 2 Pac t коры для установления градуировочном характеристики при определении к моче альдегидов в диапазоне концентраций 0,01—0,10 мкг/см3 н ацетона в диапазоне концентраций 0,1—2,0 мкг/см3

11омер раствора 1 2 3 4 5 Объем раствора А, с Nr* 0,025 0,050 0,100 0,150 0,250 Массовая концентрация формальдегида, мкг/см3 0,01 0,02 0,04 0,06 0,10 Массовая концентрация ацетальдегида, мкг/см3 0,01 0,02 0,04 0,06 0,10 Массовая концентрация пропионового а. и», iei ида, мкг/сыг 0,01 0,02 0,04 0,06 0,10 Массовая конце!прация масляною альдегида, мкг/см* 0,01 0,02 0,04 0,06 0,10 Объем раствора В, см3 0,25 0,50 1,25 2,50 5,00 Массовая концентрация ацетона, мкг/см3 0,1 0,2 0,5 1,0 1,98

В делительную воронку помещают 50 см³ градуировочного раствора. добавляют 2,5 см³ 0,2 %-го раствора 2.4-динитрофснилгидра тина в 2М хлористоводородной кислоте. 2 капли концентрированной хлористоводородной кислоты. 5 см³ гексана и экстрагируют 15 мин. После расслоения гексана и мочи верхний слой (гексановый) переносят в центрифужную пробирку с завинчивающейся крышкой и центрифугируют 20 мин со скоростью 1 500 об./мин. затем 2 см³ гексана переносят в бюк-су и высушивают в потоке воздуха. Высушенный остаток растворяют в 0.5 см³ элюента и аликвотную часть (10 мм³) анализируют в условиях: элюент - (ацетонитрил : вода = 60 : 40) + 2.5 % уксусной кислоты +

1 % диэтиламина;

колонка 80 х 2 мм. заполнена Диасорбом Ci₆

Градуировочный коэффициент рассчитывают по формуле:

±c,/s,

„ 1 = 1

п

104

МУК 4.1.2110—06

С,- концентрация вещества в граду про войной смеси, мкг/см³;

S, - среднее значение пяти измерений площади пика /-й концентрации. единицы оптической плотности (с.о.п.);

п - количество градуировочных смесей (п = 5).

7.6. Отбор проб

Для отбора проб мочи используют чистую стеклянную посуду объемом 100 см³ с плотно закрывающейся крышкой. Срок хранения пробы в холодильнике -12 ч.

8. Выполнение измерений

Проводят два параллельных измерения образца мочи. В делительную воронку вместимостью 250 см³ помещают 50.0 см³ мочи, добавляют 2.5 см³ 0.2 %-го раствора 2.4-динитрофенилгидразина в 2М хлористоводородной кислоте. 2 капли концентрированной хлористоводородной кислоты. 5 см³ гексана и экстрагируют 15 мин. После отстаивания верхний слой (гексановый) переносят в центрифужную пробирку с завинчивающейся крышкой и центрифугируют 20 мин со скоростью 1 500 об./мин. После расслоения жидкостей 2 см³ гексанового экстракта переносят в бюксу и высушивают в потоке воздуха. Высушенный остаток растворяют в 0.5 см³ элюента. вводят в хроматограф аликвотную часть (10 мм³) и анализируют в условиях, указанных в п. 7.5.

Идентификацию хроматографических пиков 2.4-динитрофенил-гидразонов формальдегида, ацетальдегида, пропионового и масляного альдегидов и ацетона проводят путем сравнения времен удерживания хроматографических пиков в анализируемой пробе и в растворах 2.4-ди-нитрофенилгидразонов альдегидов и ацетона, полученных согласно п. 7.3.6.

9. Вычисление результатов измерения

Концентрацию альдегидов и ацетона в моче (мкг/см³) вычисляют по формуле:

X =S_t -Я, где

X- концентрация вещества в анализируемой пробе, мкг/см³;

Si - площадь пика соответствующего 2,4-динитрофснилгидразона альдегида (или ацетона) в анализируемой пробе, с.о.п.:

К - градуировочный коэффициент.

За результат измерения X принимают среднее арифметическое двух параллельных измерений Л'/. ЛЧ расхождение между которыми не должно превышать значения предела повторяемости г„ (табл. 3).

105

МУК 4.1.2110—06

Результат измерения представляют в виде (X ± А) мкг/см³, где А - характеристика погрешности, мкг/см³, при Р = 0.95 равная:

6-Х

100

5 - относительное значение характеристики погрешности. %.

10. Внутренний оперативный контроль результатов измерений

Внутренний контроль качества (ВКК) результатов измерений -повторяемость, внутрилабораторная прецизионность (воспроизводимость). точность - осуществляют с целью получения оперативной ин-формации о качестве результатов измерений и принятия при необходимости оперативных мер по его повышению в соответствии с нормативным документом МИ 2335—2003 «ГСОЕИ. Внутренний контроль качества результатов количественного химического анализа».

Методика выполнения измерений обеспечивает получение результатов измерений с нормативами, не превышающими значений, приведенных в табл. 3 и 4.

Таблица 3

Значения пределов повторяемости и воспроизводимое i н при доверительной вероятности /'=0,95

Наименование определяемого компонента и диапазон измерений, мкг/см3 11редел повторяемости (относительное значение допускаемого расхождения между двумя результатами параллельных определений), г„,% Предел внутрилабораторной воспроизводимости (относительное значение допускаемого расхождения между двумя результатами измерений, полученными в одной лаборатории, но в разных условиях). Формальдегид, от 0,001 до 0,1 вкл. 26,8 27,2 Ацетальдегид, от 0,001 до 0,1 вкл. 16,8 24,7 11рсн цю! ювый атьдегид от 0,001 до 0,1 вкл. 24,5 26,1 Масляный альдегид, от 0,001 до 0,1 вкл. 23,7 25,9 Ацетон, от 0,01 до 2,0 вкл. 24,9 26,8

МУК 4.1.2110—06

Таблица 4 Диапазон измерении, значения показателей точности, повторяемости, воспроизводимости

Наименование определяемого компонента и диапазон измерений, мг/дм3 (мкг/см3) 1 Указатель повторяемости (относительное среднеквадратическое отклонение повторяемости), ог, % Пока затель воспроизводимости (относительное среднеквадратическое отклонение воспроизводимости). Or, % Показатель точности (границы относительной погрешности при вероятности Р- 0,95), ± 6, % Формальдегид от 0,001 до 2,0 вкл. 9,9 10,7 26,0 Ацетальдегид, от 0,001 до 0,1 вкл. 7,1 9,3 20,0 11ропионовый альдегид, от 0,001 до 0,1 вкл. 7,6 13,3 25,0 Масляный альдегид, от 0,001 до 0,1 вкл. 8,5 10,6 19,0 Ацетон, ог 0,01 до 2,0 вкл. ПД 14,4 25,0

10.1. Контроль стабильности градуировочного графика

Контроль стабильности градуировочной характеристики проводят 1 раз в квартал в анализируемой серии измерений. Определяют содержание исследуемых соединений в градуировочных растворах, которые соответствует началу, середине и концу диапазона измерений. Градуировка признается стабильной, если расхождение между заданными и измеренными значениями концентраций нс превышает 5 %.

10.2. Контроль повторяемости

Относительное расхождение между результатами двух измерений, выполненных в соответствии с методикой одним оператором при измерении образцов одной и той же рабочей пробы, с использованием одних и тех же средств измерений и реактивов в течение возможно минимального интервала времени, нс должно превышать значения предела повторяемости г_п (табл. 3).

Повторяемость результатов параллельных определений признают удовлетворительной, если выполняется условие:

Y    Y    <Г    ^ max

шах ^Л min ^ j qq *    ^

г„ - значение предела повторяемости. %;

107

Определение вредных веществ в биологических средах: Сборник методических указаний.—М.: Федеральный центр гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора. 2008.—183 с.

1.    Рекомендованы к утверждению Комиссией по санитарно-эпидемиологическому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 11.07.06 №2).

2.    Утверждены и введены в действие Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека. Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации 9 августа 2006 г.

3.    Введены впервые.

ЬКК 28.072

<    Роспотребнадзор, 2008

<    Федеральный центр iтн ненм и

эпидемиологии Роспотребнадзора, 2008

МУК 4.1.2102-4.1.2116—06

Содержание

Измерение массовой концешрации селена в моче методом атомко-

абсорбционной спектрометрии: МУК 4.1.2102—06............................................4

Определение массовой концентрации ванадия в пробах крови методом атомно-абсорбционной спектрометрии с электротермической

атомизацией: МУК 4.1.2103—06........................................................................14

Определение массовой концентрации меди, магния, кадмия в пробах мочи

методом атомно-абсорбционной спектрометрии: МУК 4.1.2104—06..................25

Определение массовой концентрации марганца, свинца, магния в пробах

волос методом атомно-абсорбционной спектрометрии: МУК 4.1.2105—06 37

Определение массовой концентрации марганца, свинца, магния в пробах крови методом атомно-абсорбционной спектрометрии:

МУК 4.1.2106—06................................................................................................50

Определение массовой концентрации фенола в биосредах (моча)

газохроматографическим методом: МУК 4.1.2107—06....................................63

Определение массовой концентрации фенола в биосредах (кровь)

газохроматографическим методом: МУК 4.1.2108—06....................................74

Определение массовой концентрации 2-хлорфенола в биосредах (моча)

газохроматографическим методом: МУК 4.1.2109—06....................................85

Определение массовой концентрации формальдегида, ацетальдегида, пропионового альдегида, масляного альдегида и ацетона в пробах мочи методом высокоэффективной жидкостной хроматографии:

МУК 4.1.2110—06................................................................................................96

Измерение массовой концентрации формальдегида, ацетальдегида, пропионового альдегида, масляного альдегида и ацетона в пробах крови методом высокоэффективной жидкостной хроматографии:

МУК 4.1.2111—06..............................................................................................ПО

Определение массовой концентрации хлороформа, 1,2-дихлорэтана, гетрахлормешна. хлорбензола в биосредах (кровь)

газохроматографическим методом: МУК 4.1.2112—06..................................125

Определение массовой концентрации хлороформа, 1,2-дихлорэтана, тетрахлорметана в биосредах (моча) методом газохроматографического

анализа равновесного пара: МУК 4.1.2113—06...............................................137

Определение массовой концентрации хлороформа. 1,2-дихлорэтана, тетрахлорметана, хлорбензола в биосредах (моча)

газохроматографическим методом: МУК 4.1.2114—06..................................149

Определение массовой концепграции хлороформа, 1,2-дихлорэтана,

тетрахлорметана в биосредах (кровь) методом газохромато1рафического

анализа равновесного пара: МУК 4.1.2115—06...............................................162

Определение массовой концентрации стирола в пробах крови методом

высокоэффективной жидкостной хромаго1рафии: МУК 4.1.2116—06.........174

МУК 4.1.2110—06

УТВЕРЖДАЮ Руководитель Федеральной службы по надзору в с(|>ерс защиты прав потребителей и благополучия человека. Главный государственный санитарный врач Российской Федерации

Г. Г. Онищенко

9 августа 2006 г.

Дата введения: I сентября 2006 г.

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Определение массовой концентрации формальдегида, ацетальдегида, пропнонового альдегида, масляного альдегида и ацетона в пробах мочи методом

высокоэффективной жидкостной хроматографии

Методические указания _МУК    4.1.2110—06_

1. Область применения

Методические указания по определению концентрации алифатических альдегидов и ацетона в моче предназначены для использования Федеральной службой по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, лечебными и научными учреждениями, работающих в области профпатологии и экологии человека, научно-исследовательскими институтами, занимающимися вопросами гигиены окружающей среды.

Методические указания разработаны с целью обеспечения контроля за содержанием альдегидов и ацетона в биологических средах у населения, проживающего в районах с повышенным уровнем загрязнения окружающей среды.

Методические указания разработаны в соответствии с требованиями ГОСТ Р 8.563-96 «ГСОЕИ. Методики выполнения измерений». ГОСТ Р1.5—92 «ГСС. Общие требования к построению, изложению, оформлению и содержанию стандартов».

Методика выполнения измерения обеспечивает определение альдегидов в моче в диапазоне концентраций 0.001—0.10 мкг/см³. ацетона -0.01—2.0 мкг/см³ с погрешностью, не превышающей 26% - для фор-

96

МУК 4.1.2110—06

мальдсгада. 20 % - для ацетальдегида. 25 % - для ацетона. 25 % - для пропионового альдегида. 19% - для масляного альдегида, при доверительной вероятности Р = 0.95.

Формальдегид (НСНО)    Молекулярная масса 30.03

Формальдегид (муравьиный альдегид, метаналь) - бесцветный ra j с резким раздражающим запахом. Температура кипения: -19.2 °С. плотность: 0.8153 г/см³. Хорошо растворим в воде, спиртах и других полярных растворителях. При низких температурах смешивается с неполярными растворителями (толуолом, диэтиловым эфиром, этилацетатом) [5]. Обладает раздражающим, сенсибилизирующим и кожно-резорбтнв-ным действием, оказывает гспатотропный эффект, относится к веществам. обусловливающим канцерогенную опасность [3].

Ацетальдегид (СНзСНО)    Молекулярная масса 44.05

Ацетальдегид (уксусный альдегид) - бесцветная жидкость с удушающим запахом. Температу ра кипения:    20.16    °С.    плотность:

0.778 г/см³. Смешивается во всех соотношениях с водой и большинством органических растворителей [1]. Оказывает наркотическое, раздражающее. мутагенное и канцерогенное действие [3].

Пропионовый альдегид (СЬЬСН_:СНО) Молекулярная масса 58.08 Пропноновый альдегид (пропаналь) - бесцветная жидкость с характерным запахом. Температу ра кипения:    48.8    °С.    плотность:

0.8058 г/см³. Растворим в воде, смешивается со многими органическими растворителями [4]. Оказывает наркотическое действие, вызывает изменения со стороны дыхательной системы, паренхиматозных органов, угнетает гемопоэз [3].

Масляный альдегид (СН _ч(СН2)_:СНО) Молекулярная масса 72.11 Масляный альдегид (бутаналь) - бесцветная прозрачная жадность с резким запахом. Температу ра кипения: 75.7 °С. плотность: 0.817 г/см³ [2]. Растворим в воде, смешивается со многими органическими растворителями. Оказывает наркотическое, раздражающее и кожно-резорбтнв-ное действие [3].

Ацетон (СН3СОСН3)    Молеку    лярная    масса    58.08

Ацетон (диметилкетон) - летучая бесцветная жидкость с характерным запахом. Температура кипения: 56.1 °С. плотность: 0.792 г/см³ [1]. Смешивается с водой и органическими растворителями (эфиром, хлороформом. бензолом, четыреххлористым углеродом). Обладает наркотическим и кожно-резорбтивным действием, угнетает репроду ктивную функцию. Преимущественно действует на центральную нервну ю систему [3].

МУК 4.1.2110—06

2. Сущность метода

Методика основана на предварительном переводе альдегидов и ацетона в соответствующие 2,4-динитрофенилгцдразон производные, концентрировании продуктов дериватизации из биологического материала экстракцией гексаном, высушивании гексанового экстракта, растворении высушенного остатка в ацетонитриле и анализе на жидкостном хроматографе.

Измерение концентрации альдегидов и ацетона выполняют методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с использованием УФ-дстсктора.

Измерению не мешают спирты, органические кислоты, кетоны и другие альдегиды.

3. Средства измерении, вспомогательные устройства, материалы, растворы и реактивы

При выполнении измерений применяют следующие средства измерений. вспомогательные устройства, материалы и реактивы.

3.1. Средства ишерений Жидкостный хроматограф «Милихром-4» с ультрафиолетовым детектором Весы лабораторные ВЛР-2(Х) аналитические Гири Г2-210 Термометр стеклянный Микрошприцы МШ-10 Цилиндр мерный, вместимостью 50 см³ Пипетки граду проваиные, вместимостью 1. 5 и 10 см³

Колбы мерные, вместимостью 50. 100. 200 и 1 ООО см³

Редуктор кислородный Стандартные образцы:

Формальдегид в воде с концентрацией 1.0 мг/см³

3.2. Вспомогательные устройства Колонка металлическая длиной 8 см и внутренним диаметром 2 мм. заполненная сорбентом Диасорб Ск, зернением 5—6—7 мкм

Центрифуга ЦЛМН-Р10-01 -«Элскон»    ТУ 944.3-001-245.23530—97

Дистиллятор    ТУ 61-1 -721 —79

Сушильный шкаф ШСС-80 П УХЛ 4.2    ТУ    16.531.743—83

МУК 4.1.2110—06

Диэтиламин. ч. перегнанный для хроматографии ТУ 6-09-68—89 Раствор гепарина в ампулах (5 ООО ед. в 1 см³)

3. ■/. Матери ал ы Гслий газообразный    ТУ 51 -940—80

3.5. Растворы

Хромовая смесь

Элюент для хроматографии

2 М водный раствор хлористоводородной кислоты

0.2 %-й раствор 2.4-дннитрофснилгндразина в

2М хлористоводородной кислоте

Исходный раствор альдегидов для калибровки

Исходный раствор ацетона дтя калибровки

Допускается применение других типов средств измерений, вспомогательного оборудования, химрсактнвов и материалов, по метрологическим и техническим характеристикам нс уступающих перечисленным.

4. Требования к безопасности

4.1.    При работе с реактивами соблюдают требования безопасности, установленные дтя работ с токсичными, едкими и легковоспламеняющимися веществами по ГОСТ 12.1.005-88.

4.2.    При выполнении измерений с использованием жидкостного хроматографа соблюдают правила электробсзопасностн в соответствии с ГОСТ 12.1.019-79, противопожарной безопасности - ГОСТ 12.1.004-85 и меры безопасности, указанные в «Руководстве по правилам эксплуатации прибора».

5. Требования к квалификации оператора

К выполнению измерений допускаются лица, имеющие квалификацию нс ниже инженсра-химика и владеющие техникой жидкостно-хроматографического анализа.

6. Условия измерений

6.1.    При подготовке проб к анализу и приготовлении растворов соблюдают следующие условия:

•    температу ра воздуха 15—25 °С:

•    атмосферное давление 630—800 мм рт. ст.;

•    влажность воздуха нс более 80 % при температуре 25 °С.

6.2.    Выполнение измерений на жидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендуемых технической документацией к прибору.

МУК 4.1.2110—06

7. Подготовка к выполнению измерении

Перед выполнением измерений проводят следующие работы: подготовке! посуды и растворителей, приготовление растворов, подготовка хроматографической колонки, установление градуировочной характеристики.

7.1. Подготовка посуды

Используемую посуду замочить на 1 ч в хромовой смеси, промыть проточной водопроводной водой, ополоснуть дистиллированной водой и просушить при температу ре 120 °С.

7.2. Подготовка растворите. чей

7.2.1.    Очистка ацетонитрила от примесей. В колбу вместимостью 2 дм³ помещают 1 дм³ ацетонитриле! и 20 г КМпО,. кипятят с шариковым холодильником в течение 1 ч. затем перегоняют с дефлегматором при температу ре 81.6 °С. отбирая фракции по 200 см³. Когда в колбе останется около 200 см³ продукта, перегоню прекращают. Остаток можно смешивать с новой порцией растворителя. Первую фракцию (200 см³) отбрасывают. а остальные проверяют на поглощение в УФ-области (оптическая плотность при 200 нм нс должна превышать 0.05 о.с./см).

7.2.2.    Очистка диэтила.мина от примесей. В колбу вместимостью 1.0 дм³ помещают 0.5 дм³ диэтиламина и перегоняют с прямым холодильником. Первую и последнюю порции (50 см³) отбрасывают, оставляют среднюю порцию. Перегнанный раствор должен быть бесцветным.

7.2.3.    Очистка этилового спирта от альдегидов и кетонов. К 1 дм³ 96 %-го спирта добавляют 2 г 2.4-диннтрофснилгидразина. 0.5 см³ концентрированной хлористоводородной кислоты и кипятят с шариковым холодильником 1 ч. Перегоняют с дефлегматором в приборе со стеклянными шлифами, отбрасывая первые и последние 100 см³. после этого отгоняют вторично.

7.3. Приготовчепие растворов

7.3.1.    Хромовая смесь. В термостойкий стакан вместимостью 2 дм³ насыпают 50 г хромово-кислого калия, осторожно приливают по палочке частями, тщательно перемешивая. 1 дм³ концентрированной серной кислоты.

7.3.2.    Элюент для хроматографии. Смешивают 40 см³ дистиллированной воды с 60 см³ очищенного ацетонитрила. Подвижную фазу фильтруют через воронку Шотта (пор 16) и дегазируют барботировани-см гелия в течение 5 мин со скоростью 50—60 см³/мин. Затем добавляют 2.5 %уксусной кислоты и 1 % диэтила.мина (объемные %).

101