Государственное санитарно-эпидемиологическое нормирование Российской Федерации

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАТОРЫ

ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ ПЕСТИЦИДОВ В ПИЩЕВЫХ ПРОДУКТАХ, СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННОМ СЫРЬЕ И ОБЪЕКТАХ ОКРУЖАЮЩЕЙ СРЕДЫ

Сборник методических указаний МУК 4.1.1994-4.1.2002-05

Издание официальное

Москва, 2009

УТВЕРЖДАЮ Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере зашиты прав потребителей и благополучия человека,

Главный государственною санитарный врач Рос    и.

МУК 4.1.194*1

“JLI_» .     ^:

Дата введения: с i    I*'*»’

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ по измерению концентраций Имазетапира в воздухе рабочей зоны и атмосферном воздухе населенных мест методом высокоэффективной жидкостной

хроматографии

Настоящие методические указания устанавливают метод высокоэффективной

жидкостной хроматографии для определения в воздухе рабочей зоны и атмосферном

воздухе массовой концентрации имазетапира в диапазонах 0,2 - 2,0 мг/м³ (воздух

рабочей зоны) и 0,02 - 0,2 мг/м³ (атмосферный воздух).

Имазетапир - действующее вещество препарата ТАПИР, ВК (100 г/л);

фирма производитель ООО “Агро Эксперт Групп" (Россия)

(К5)-5-этил-2-(4-изопропил-4-метил-5-оксо-2-имидозолин-2-ил) никотиновая кислота (IUPAC).

CijtHisNjOj

Мол. масса 289.3

Имазетапир - бесцветное кристаллическое вещество. Температура плавления 169-173°С. Температура кипения 180°С (с разложением). Давление паров при 60°С <

0.013 мПа. Растворимость в органических растворителях при 25°С (в г/дм³): ацетон -

S2

Результат измерений должен иметь тот же десятичный разряд, что и погрешность.

И. Контроль погрешности измерений

Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется 8 соответствии с ГОСТ ИСО 5725-1-6. 2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений».

12. Разработчики

Юдина Т.В., Федорова Н.Е., Волкова В.Н. (Федеральный научный центр гигиены им. Ф.Ф. Эрисмана. г. Мытищи Московской обл.);

48..2. гептан - 0.9; диметилсульфоксид - 422; дихлорметан - 185; изопропанол - 17; метанол - 105; толуол - 5. Растворимость в воде при 25°С: 1,4 г/дм³. Коэффициент распределения н-октанол/вода:    log    Р    «    1,04    (pH    5).    Быстро    разлагается на свету:

DT4o 3 дня. Константа диссоциации: рКа| 2.1, рКа2 3.9

Агрегатное состояние в воздухе -аэрозоль.

Кратком токсикологическая характеристика:

Острая пероральная токсичность (LDjo) для крыс и мышей >5000 мг/кг; острая дермальная токсичность (LDjo) для кроликов >2000 мг/кг; острая ингаляционная токсичность (LC50) 3,27 мг/дм³.

Область применения препарата

Имазетапир - системный гербицид против сорной растительности на посевах бобовых культур.

Ориентировочный безопасный уровень воздействия (ОБУВ) имазетапира в воздухе рабочей зоны - 2.0 мг/м³; в атмосферном воздухе - 0.04 мг/м³.

1. Погрешность измерений

Методика обеспечивает выполнение измерений с погрешностью, не превышающей ± 25%, при доверительной вероятности 0,95.

2. Метод измерений

Измерения концентраций имазетапира выполняют методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) на обращенной фазе с ультрафиолетовым детектором.

Концентрирование имазетапира из воздуха осуществляют на бумажные фильтры "синяя лента”, экстракцию с фильтров проводят водным этанолом.

Нижний предел измерения в анализируемом объеме пробы - 1.0 нг.

Определению не мешают компоненты препаративной формы.

3. Средства измерений, вспомогательные устройства, реактивы и материалы

3.1. Средства измерений Жидкостной хроматограф с ультрафиолетовым Номер в Государственном детектором с переменной длиной волны (фирмы Waters, реестре средств измерений США)    15311-02

S3

Барометр-анероид М-67	ТУ 2504-1797-75
Весы аналитические ВЛА-200	ГОСТ 24104
Колбы мерные 2-50-2, 2-100-2 и 2-1000-2	ГОСТ 1770
Меры массы	ГОСТ 7328
Пипетки градуированные 2-го класса точности вместимостью 1.0,2,0, 5,0, 10 см1	ГОСТ 29227
Пробирки градуированные вместимостью 5 или 10 см5 Пробоотборное устройство ОП-442ТЦ (ЗАО “ОПТЭК”,	ГОСТ 1770
г. Санкт-Петербург) или аспирационное устройство ЭА-1	ТУ 25-11-1414-78
Термометр лабораторный шкальный ТЛ-2, цена деления 1°С. пределы измерения 0 - 55°С	ТУ 215-73Е
Цилиндры мерные 2-го класса точности вместимостью 10. 500 и 1000 см3	ГОСТ 1770
Допускается использование средств измерения с аналогичными или лучшими характеристи кам и. 3.2. Реактивы
Имазетапир с содержанием основного вещества 99.5% (фирма SUPELCO)
Ацетонитрил для хроматографии, х.ч.	ТУ 6-09-4326-76
Вола бидистиллированная, деионизованная или перегнанная ГОСТ 6709 над КМп04
Кислота орто-фосфорная, хч, 85%	ГОСТ 6552
Метиловый спирт (метанол), хч	ГОСТ 6995
Этиловый спирт (этанол) ректификованный	ГОСТ Р 51652 или ГОСТ 18300

Допускается использование реактивов иных производителей с аналогичной или более высокой квалификацией.

3.3. Вспомогательные устройства, материалы Аппарат для встряхивания типа АВУ-бс    ТУ 64-1 -2851 -78

Баня ультразвуковая фирмы Донау (Швейцария)

Бумажные фильтры "синяя лента", обеззоленные    ТУ    6-09-2678-77

&

Воронки конусные диаметром 30*37 мм Г руша резиновая

Колбы круглодонные на шлифе вместимостью 100 см³ ГОСТ 9737 Мембранные фильтры капроновые, диаметром 47 мм

Стекловата

Стеклянные палочки

Установка для перегонки растворителей

Набор для фильтрации растворителей через мембрану

Хроматографическая колонка стальная, длиной 25 см,

внутренним диаметром 4.0 мм. содержащая Кромасил

100 С18, зернением 8 мкм

Шприц для ввода образцов для жидкостного хроматографа вместимостью 50 - 100 мм³

Допускается применение хроматографических колонок и другого оборудования с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.

4. Требования безопасности

4.1.    При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007, требования электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019, а также требования, изложенные в технической документации на жидкостной хроматограф.

4.2.    Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности по ГОСТ 12.1.004 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать норм, установленных ГЫ 2.2.5.1313-03 «Предельно-допустимые концентрации (ПДК) вредных веществ в воздухе рабочей зоны». Организация обучения работников безопасности труда - по ГОСТ 12 0.004

SS

5. Требования к квалификации операторов

К выполнению измерений лопускают специалистов, имеющих квалификацию не ниже лаборанта-исследователя. с опытом работы на жидкостном хроматографе.

К проведению пробоподготовки допускают оператора с квалификацией «лаборант», имеющего опыт работы в химической лаборатории.

6. Условия измерений

При выполнении измерений соблюдают следующие условия:

•    процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха (20±5)°С и относительной влажности не более 80%.

•    выполнение измерений на жидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

7. Подготовка к выполнению измерений

Выполнению измерений предшествуют следующие операции:    очистка

ацетонитрила, подготовка подвижной фазы для ВЭЖХ, кондиционирование хроматографической колонки, приготовление растворов для градуировки, установление градуировочной характеристики, подготовка фильтров для отбора проб воздуха, отбор проб.

7. / Очистка ацетонитрила

Ацетонитрил кипятят с обратным холодильником над пентоксидом фосфора не менее I часа, после чего перегоняют, непосредственно перед употреблением ацетонитрил повторно перегоняют над прокаленным карбонатом калия

7.2. Подготовка подвижной фазы для ВЭЖХ

В мерную колбу вместимостью 1000 см³ помещают 750 см³бидистиллированной или деионизированной воды. 1.0 см³ орто-фосфорной кислоты. 250 см³ ацетонитрила, перемешивают, фильтруют и дегазируют.

7.3. Кондиционирование хроматографической колонки

Промывают колонку подвижной фазой (приготовленной по п. 7.2) при скорости подачи растворителя 1,0 см³/мин до установления стабильной базовой линии.

SC

7.4. Приготовление градуировочных растворов

7.4.1 Исходный раствор имазетапира для градуировки (концентрация 100 мкг/см³) В мерную колбу вместимостью 100 см³ вносят 0,0100 г имазетапира, добавляют 50-70 см³ метанола, помещают на ультразвуковую баню на 1 мин для растворения, доводят метанолом до метки, тщательно перемешивают Раствор хранится в холодильнике в течение 3-х месяцев.

Растворы №    1-5    готовят объемным методом путем последовательного

разбавления исходного раствора для градуировки.

7 4 2 Раствор N° 1 имазетапира для градуировки (концентрация 10 мкг/см³)

В мерную колбу вместимостью 100 см³ помешают 10 см³ исходного градуировочного раствора имазетапира с концентрацией 100 мкг/см³ (п. 7.4.1.). разбавляют метанолом до метки, перемешивают. Раствор хранится в холодильнике в течение месяца.

7 4 3 Рабочие растворы № 2-6 имазетапира для градуировки (концентрация 0.1 - 1.0 мкг/см³)

В 5 мерных колб вместимостью 100 см³ помещают по 1.0. 2.С. 3.0. 5.0 и 10.0 см' градуировочного раствора .№1 с концентрацией 10 мкг/см³ (л. 7.4.2.). доводят до метки подвижной фатой для ВЭЖХ (подготовленной но п. 7.2.), тщательно перемешивают, получают рабочие растворы Х°Х® 2 - 6 с концентрацией имазетапира 0.1,0.2.0 3.0.5 и I 0 мкг/см³. соответственно.

Растворы хранятся э холодильнике в течение 2-х недель.

7.5. Установление градуировочной характеристики

Градуировочную характеристику. выражающую зависимость площади пика (мв*сек) от концентрации имазетапира в растворе (мкг/см³), устанавливают методом абсолютной калибровки по 5-и растворам для градуировки ХаМв 2 - 6.

В инжектор хроматографа вводят по 20 мм³ каждого градуировочного раствора и анализируют в условиях хроматографирования по п. 7.5.1. Осуществляют не менее 3-х параллельных измерений. Устанавливают площадь пика действующего вещества.

Градуировочный график проверяют ежедневно по анализу 2-х растворов для градуировки различной концентрации. Если значения площадей отличаются более, чем на 8% от данных, заложенных в градуировочную характеристику, ее строят заново, используя свежеприготовленные рабочие растворы для градуировки.

S7

7.5.1. Условия хроматографирования

Измерения выполняют при следующих режимных параметрах:

Жидкостной хроматограф «Breeze» с ультрафиолетовым детектором (фирма Waters. США)

Колонка стальная длиной 150 мм. внутренним диаметром 4.6 мм. содержащая Symmetry® С18. зернением 5 мкм

Температура колонки: комнатная

Подвижная фаза: ацетонитрил - вода - орто-фосфорная кислота (25:75:0.1. по объему)

Скорость потока элюента: 1,0 см³/мин

Рабочая длина волны: 240 нм

Чувствительность: 0,005 ед. абсорбции на шкалу

Объем вводимой пробы: 20 мм³

Ориентировочное время выхода имазетапира: 7,8-8,1 мин.

Образцы, дающие пики, большие, чем градуировочный раствор имазетапира с концентрацией 1.0 мкг/см³, разбавляют подвижной фазой для ВЭЖХ (подготовленной

по п 7.2.).

7.6. Подготовка фильтров для отбора проб воздуха

Бумажные фильтры «синяя лента» последовательно промывают этанолом и ацетонитрилом порциями 25-30 см³, сушат на воздухе при комнатной температуре. До использования фильтры хранят в герметично закрытой стеклянной таре.

7.7. Отбор проб

7.7. /. Воздух рабочей зоны

Отбор проб проводят в соответствии с требованиями ГОСТ 12.1.005-88 “ССБТ Общие санитарно-гигиенические требования к воздуху рабочей зоны*’. Воздух со скоростью 1 - 4 дм³/мин аспирируют через бумажный фильтр "синяя лента", помещенный в фильтродержатель.

Для измерения концентрации имазетапира на уровне 0.5 ОБУВ для воздуха рабочей зоны необходимо отобрать 0,5 дм³ воздуха. Срок хранения отобранных проб, помешенных в полиэтиленовые пакеты, в холодильнике при температуре не выше -*-4⁰С - 7 дней.

7 7.2. Атмосферный воздух

Отбор проб проводят в соответствии с требованиями ГОСТ 17.2.4.02-81 "ОПА. Общие требования к методам определения загрязняющих веществ в воздухе населенных мест”. Воздух с объемным расходом 4 дм³/мин аспирируют через бумажный фильтр “синяя лента”, помешенный в фильтродержатель.

Для измерения концентрации имазетапира на уровне 0.8 ОБУВ для атмосферного воздуха необходимо отобрать 16 дм³ воздуха. Срок хранения отобранных проб, помешенных в полиэтиленовые пакеты, в холодильнике при температуре не выше +4°С - 7 дней.

8. Выполнение измерений

Экспонированные фильтры «синяя лента» переносят в химический стакан вместимостью 100 см³, заливают 20 см³ смеси этанола с водой (9:1. по объему), помешают на встряхиватель на 10 минут. Растворитель сливают, фильтр еще дважды обрабатывают новыми порциями водного этанола объемом 10 см³, выдерживая на встряхивателе по 10 минут.

Объединенный экстракт упаривают в грушевидной колбе на ротационном вакуумном испарителе при температуре бани не выше 40°С почти досуха, оставшийся растворитель отдувают потоком теплого воздуха. Остаток растворяют в 5 см³ подвижной фазы (подготовленной по п. 7.2.) и анализируют при условиях хроматографирования, указанных в п. 7.5.1.

Пробу вводят в инжектор хроматографа не менее двух раз. Устанавливают плошадь пика, с помощью градуировочного графика определяют концентрацию имазетапира в хроматографируемом растворе.

Перед анализом опытной пробы проводят хроматографирование холостой (контрольной) пробы - экстракта неэкспонированных фильтров.

9. Обработка результатов анализа

Массовую концентрацию имазетапира в пробе воздуха X. мг/м³. рассчитывают по формуле:

X = С * W/V,, где

С - концентрация имазетапира в хроматографируемом растворе, найденная по градуировочному графику в соответствии с величиной плошали хроматографического пика, мкг/см³;

W - объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, см³:

V, - объем пробы воздуха, отобранный для анализа, приведенный к стандартным (давление 760 мм рт. ст., температура 20° С) при исследовании воздуха рабочей зоны или нормальным условиям (давление 760 мм рт. ст., температура 0" С) при исследовании атмосферного воздуха, дм³.

V,- R *Р* ш/(273+Т),

где Т * температура воздуха при отборе пробы (на входе в аспиратор), град.С,

Р - атмосферное давление при отборе пробы, мм рт. ст. и - расход воздуха при отборе пробы, дм³/мин,

(- длительность отбора пробы, мин.

R - коэффициент, равный 0,386 для воздуха рабочей зоны и 0,357 для атмосферного воздуха.

Примечание: Идентификация и расчет концентрации имазетапира в пробах могут быть проведены с помощью программ обработки хроматографических данных с применением компьютера, включенного в аналитическую систему

10. Оформление результатов измерений

За результат анализа (X) принимается среднее арифметическое результатов двух параллельных определений X_t и X? (X * (Х| + Хг)/2), расхождение между которыми не превышает значений норматива оперативного контроля сходимости (d):

IX. -X₂Ud.

d = d от* * Х/100, мг/м³, где d -норматив оперативного контроля сходимости, мг/м³;

d от. -норматив оперативного контроля сходимости, % (равен 10%).

Результат количественного анализа представляют в виде:

• результат анализа X (мг/м³). характеристика погрешности 6. % (равна 25%). Р ^в 0,95 или

Х± Д мг/м³. Р = 0.95. где Д - абсолютная погрешность.

6-Х 100 ’

60