Государственное санитарно-эпидемиологическое нормирование Российской Федерации

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАТОРЫ

ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ ПЕСТИЦИДОВ В ПИЩЕВЫХ ПРОДУКТАХ, СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННОМ СЫРЬЕ И ОБЪЕКТАХ ОКРУЖАЮЩЕЙ СРЕДЫ

Сборник методических указаний МУК 4.1.1994-4.1.2002-05

Издание официальное

Москва, 2009

УТВЕРЖДАЮ Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека.

Главный государственный санитарный врач Росс и йскр£р{1>е дер|ц и и,

Г.Г. Онищенко

_ 200/г.

Дата введения: . !    Ли    •

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ по измерению концентраций Бродифакума в воздухе рабочей зоны и атмосферном воздухе населенных мест методом высокоэффективной жидкостной

хроматографии

Настоящие методические указания устанавливают метод высокоэффективной жидкостной хроматографии для определения в воздухе рабочей зоны и атмосферном воздухе массовой концентрации бродифакума в диапазонах 0,0005 - 0,01 мг/м³ (воздух рабочей зоны) и 0,00016 - 0,0032 мг/м³ (атмосферный воздух).

Бродифакум - действующее вещество препарата Килрат, Г (0,05 г/кг); фирма производитель ООО "Северо-Кавказский Агрохим” (Россия) 3-(3-(4'-Бромбифенил-4-ил)-1,2,3.4-тетрагидро-1 -нафтил)-4-гидроксикумарин (IUPAC)

Вг

CjiHijBrO) Мол масса 523.4

Бродифакум - белое порошкообразное вещество (технический продукт - цвет от белого до желтовато - белого или бежевого). Температура плавления 228-232"С.

л ь X . з

Д =----.    МГ/М

100

Результат измерений должен иметь тот же десятичный разряд, что и погрешность.

11. Контроль погрешности измерений

Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений оошесгеляется в соответствии с ГОСТ ИСО 5725-1-6. 2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений».

12. Разработчики

Юдина Т В . Федорова Н Е.. Волкова В.Н. (Федеральный научный центр гигиены им. Ф.Ф. Эрисмана. г. Мытищи Московской обл.);

гг

Рис. I. График зависимости площади хроматографического пика от содержания бродифакума в растворе

S = 2096.2 ♦ 712088 хС (г-0.9985).

где Ь - ллошадь хроматографического пика бродифакума. отн. ед.: С • копнен грация бролифакч мп п растворе. мкг/см'*: г - коэффициент корреляции.

Жидкостной хроматограф “Perkin-Elmer" (США) с ультрафиолетовым детектором (рабочая длина волны 280 нм), колонка (25 см х 4 мм), содержащая Кромлсил 100 CI8 (8 мкм). подвижная фаза: метанол - вода - орто-фосфорная кислота (97:3:0.05. по объему), чувствительность 0.005 ед. оптической плотности на шкалу, объем вводимой пробы 20 мм\

Давление паров при 20°С « 0,001 мПа. Растворимость в органических растворителях при 20°С (в мг/дм³): ацетон - 20, хлороформ - 3; бензол - <6. Растворимость в воле при 20°С (в мг/дм³): 3.8x10‘³ (pH 5,2); 0,24 (pH 7,4); 10 (pH 9.3). Коэффициент распределения н-октанол/вода: K<_)W log Р * 8,5. Термически (50°С) и фотолитически стабилен (30 дней на прямом солнечном свете). Является очень слабой кислотой.

Агрегатное состояние в воздухе - пары и аэрозоль

Краткая токсикологическая характеристика

Острая пероральная токсичность (LDjo) для самцов крыс, мышей - 0.4 мг/кг: кроликов - 0.2 мг/кг: самок морских свинок - 2.8 мг/кг; кошек - около 25 мр'кг. собак - 0.25-3.6 мг/кг; острая дермальная токсичность (LD*>) для кроликов 0.25 -0.63 мг/кг; острая ингаляционная токсичность (LCso) 5 мг/м³.

Область применения препарата

Бродифакум - родентицид антикоагулянтного типа, активен против всех видов грызунов. Выпускается в виде готовой брикетированной приманки.

Ориентировочный безопасный уровень воздействия (ОБУВ) бродифакума в воздухе рабочей зоны - 0.001 мг/м³; в атмосферном воздухе - 0,0002 мг/м³.

1. Погрешность измерений

Методика обеспечивает выполнение измерений с погрешностью не превышающей ♦ 25%, при доверительной вероятности 0.95.

2. Метод измерений

Измерения концентраций бродифакума выполняют методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) на обрашенмой фазе с ультрафиолетовым детектором.

Концентрирование бродифакума из воздуха осуществляют на последовательно соединенные бумажные фильтры "синяя лента" и фильтры из пенополиуретана, экстракцию с фильтров проводят этанолом.

Нижний предел измерения в анализируемом объеме пробы - 0.5 нг.

Определению не мешают компоненты препаративной формы.

3. Средства измерений, вспомогательные устройства, реактивы и материалы

3.1. Средства измерений Жидкостной хроматограф с ультрафиолетовым

детектором с переменной длиной волны (фирмы Perkin-Flmer. США)
барометр-анероид М-67	ТУ 2504-1797-75
Весы аналитические ВЛА-200	ГОСТ 24104
Колбы мерные 2-50-2. 2-100-2 и 2-1000-2	ГОСТ 1770
Меры массы	ГОСТ 7328
Пипетки градуированные 2-го класса точности вместимостью 1.0. 2.0. 5.0. 10 см-'	ГОСТ 29227
Пробирки град>ированные вместимостью 5 или 10 см* Пробоотборное устройство ОП-442ТЦ (ЗАО “ОПТЭК”,	ГОСТ 1770
г. Санкт-Петербург) или аспирационное устройство ЭА-1	ТУ 25-11-1414-78
Термометр лабораторный шкальный ТЛ-2. цена деления ГС. пределы измерения 0 • >5°С	ТУ 215-73Е
Цилиндры мерные 2-го класса точности вместимостью 10. 500 и 1000 см*	ГОСТ 1770
Допускается использование средств измерения с : характеристиками 3.2. Реактивы	аналогичными или

Ьролифакум гсхническиА с содержанием основного вещества не менее 95% (фирмы ООО «Валмбрента Кемикалс»)

Вода бидметиллированмая. деионизованная или перегнанная ГОСТ 6709 нал KMnOj

Кислота орто-фосфорная, хч. 85%    ГОСТ    6552

Метиловый спирт (метанол), хч    ГОСТ    6995

Этиловый спирт (этанол) ректификованный    ГОСТ    Р    51652    или

ГОСТ 18300

Допускается использование реактивов иных производителей с аналогичной или более высокой квалификацией

3.3. Вспомогательные устройства, материалы Аппарат для встряхивания типа АВУ-6с    ТУ    64-1-285)-78

Ьамя ультразвуковая фирмы Донау (Швейцария)

лГ

03 «Предельно-допустимые концентрации (ПДК) вредных веществ в воздухе рабочей юны» Организация обучения работников безопасности труда - по ГОСТ 12.0.004

5. Требования к квалификации операторов

К выполнению измерений допускают специалистов, имеющих квалификацию не ниже лаборанта-исследователя. с опытом работы на жидкостном хроматографе.

К проведению пробоподготовки допускают оператора с квалификацией «лаборант», имеющего опыт работы в химической лаборатории.

6. Условия измерений

При выполнении измерений соблюдают следующие условия:

•    процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха (20±5)°С и относительной влажности не более 80%.

•    выполнение измерений на жидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

7. Подготовка к выполнению измерений

Выполнению измерений предшествуют следующие операции: очистка метанола перегонкой с дефлегматором (при необходимости), подготовка подвижной фазы для ВЭЖХ. кондиционирование хроматографической колонки, приготовление растворов для градуировки, установление градуировочной характеристики, подготовка фильтров для отбора проб воздуха, отбор проб.

7.1. Подготовка подвижной фазы для ВЭЖХ

В мерную колбу вместимостью 1000 см³ помещают 30 см³ бидистиллированной или деионизированной воды, 0,5 см³ орто-фосфорной кислоты, 970 см³ метанола, перемешивают, фильтруют и дегазируют.

7.2. Кондиционирование хроматографической колонки

Промывают колонку подвижной фазой (приготовленной по п. 7.1) при скорости подачи растворителя 1,0 см³/мин до установления стабильной базовой линии.

7.3. Приготовление градуировочных растворов

7.3.1 Исходный раствор бродифакума для градуировки (концентрация КШ мкг/смВ мерную колбу вместимостью 100 см³ вносят 0.0100 г бродифакума. добавляют 50-70 см³ метанола, помещают на ультразвуковую баню на 1 мин для

растворения, доводят метанолом до метки, тщательно перемешивают. Раствор хранится в холодильнике в течение 3-х месяцев.

Растворы N? 1-5 готовят объемным методом путем последовательного разбавления исходного раствора для градуировки.

7 3.2. Раствор № I бродифакума для градуировки (концентрация 5 мкг/см*)

В мерную колбу вместимостью 100 см¹ помещают 5 см³ исходного градуировочного раствора бродифакума с концентрацией 100 мкг/см* (п. 7.3.1.1. разбавляют метанолом до метки, перемешивают. Раствор хранится в холодильнике в течение месяца.

7 3.3. Рабочие растворы N°2-5 бродифакума для градуировки (концентрация 0 025 - 0 5 мкг/см*)

В 5 мерных колб вместимостью 100 см³ помещают по 0.5. 1.0. 2.0 и 10 0 см* градуировочного раствора Ksl с концентрацией 5 мкг/см³ (п. 7.3.2.). доводят до метки подвижной фазой для ВЭЖХ (подготовленной по л. 7.2.), тщательно перемешивают, получают рабочие растворы .N«N9 2 - 5 с концентрацией бродифакума 0.025. 0 05. 0.1. и 0 5 мкг/см³. соответственно.

Растворы хранятся в холодильнике в течение 2-х недель.

7.4. Установление градуировочной характеристики Градуировочную характеристику. выражающую зависимость плошали пика ютн. единицы) от концентрации бродифакума в растворе (мкг/см³). устанавливаю! методом абсолютной калибровки по 4-м растворам для градуировки JfeNv 2-5.

В инжектор хроматографа вводят по 20 мм³ каждого градуировочного раствора и анализируют в условиях хроматографирования по п. 7.4.1. Осуществляют не менее 3-х параллельных измерений. Устанавливают площадь пика действующего вещества.

Градуировочный график проверяют ежедневно по анализу 2-х растворов для градуировки различной концентрации. Если значения площадей отличаются более, чем на 11% от данных, заложенных в градуировочную характеристику, ее строят заново, используя свежеприготовленные рабочие растворы для градуировки.

7.4.1. Условия хроматографирования

Колонка стальная, длиной 25 см. внутренним диаметром 4.0 мм. содержащая Кромасил 100 С 18. зернением 8 мкм

Температура колонки комнатная

/<£

Подвижная фаза: метанол-вода-орто-фосфорная кислота (97:3:0.05. по объему)

Скорость потока элюента: 1.0 см³/мин

Рабочая длина волны: 280 нм

Чувствительность: 0.005 ед абсорбции на шкалу

Объем вводимой пробы: 20 мм*

Ориентировочное время выхода бродифакума: 4.8-5.0 мин.

Образцы, дающие пики, большие, чем градуировочный раствор бродифакума с концентрацией 0.5 мкг/см⁵. разбавляют подвижной фазой для ВЭЖХ (подготовленной по п. 7.I.).

7.5. Подготовка фильтров для отбора проб воздуха

Из пенополиуретана вырезают фильтр толщиной 2 -2.5 мм. диаметром 48-50 мм. соответствующим внутреннему диаметру фильтродержателя. Диаметр бумажного фильтра «синяя лента» также должен соответствовать внутреннему диаметру фильтродержателя.

Фильтры из пенополиуретана и бумаги последовательно по 3 раза промывают на воронке Бюхнера этанолом порциями 25-30 см⁵, сушат с помощью разряжения, создаваемого водоструйным насосом, затем на воздухе при комнатной температуре До использования фильтры хранят в герметично закрытой стеклянной таре

7.6. Отбор проб

7.6 I Воздух рабочей зоны

Отбор проб проводят в соответствии с требованиями ГОСТ 12.1.005-88 “ССБТ Общие санитарно-гигиенические требования к воздуху рабочей зоны". Воздух со скоростью 4 - 5 дм³/мин аспирируют через пробоотборную систему - последовательно соединенные бумажный фильтр “синяя лента" и фильтр из пенополиуретана, помешенные в фильтродержатель.

Для измерения концентрации бродифакума на уровне 0.5 ОБУВ для воздуха рабочей зоны необходимо отобрать 50 дм³ воздуха. Срок хранения отобранных проб, помешенных в полиэтиленовые пакеты, в холодильнике при температуре не выше ♦4^,,С • 7 дней.

?.6.2. Атмосферный воздух

Отбор проб проводят в соответствии с требованиями ГОСТ 17.2.4.02-81 "ОПА. Обшие требования к методам определения загрязняющих веществ в воздухе населенных мест". Воздух с объемным расходом 5 дм³/мин аспирируют через пробоотборную систему - последовательно соединенные бумажный фильтр "синяя лента" и фильтр из пенополиуретана, помешенные в фильтродержатель

Для измерения концентрации бродифакума на уровне 0,8 ОБУВ для атмосферного воздуха необходимо отобрать 160 дм³ воздуха. Срок хранения отобранных проб, помещенных в полиэтиленовые пакеты, в холодильнике при температуре не выше +4°С - 7 дней.

8. Выполнение измерений

Экспонированные фильтры («синяя лента» + пенополиуретан) переносят в химический стакан вместимостью 100 см³. заливают 20 см³ этанола, помешают на встря.хиватель на 30 минут. Растворитель сливают, фильтр еше дважды обрабатывают новыми порциями этанола объемом 10 см³, выдерживая на встряхивателе по 10 минут.

Объединенный экстракт упаривают в грушевидной колбе на ротационном вакуумном испарителе при температуре бани не выше 40°С почти досуха, оставшийся растворитель отдувают потоком теплого воздуха. Остаток растворяют в 1 см'¹ подвижной фазы (подготовленной по п. 7 1.) и анализируют при условиях хроматографирования, указанных в п. 7.4.1.

Пробу вводят в инжектор хроматографа не менее двух раз. Устанавливаю г площадь пика, с помощью градуировочного графика определяют концентрацию бродифакума в хроматографируемом растворе.

Перед анализом опытной пробы проводят хроматографирование холостой (контрольной) пробы - экстракта неэкспонированных фильтров

9. Обработка результатов анализа

Массовую концентрацию бродифакума в пробе воздуха X. мг/м³. рассчитывают по формуле:

X » С * W/V,. где

С • концентрация бродифакумаа а хроматографируемом растворе, найденная по градуировочному графику в соответствии с величиной плошали хроматографического пика, мкг/см .

W • объем    экстракта,    подготовленного для хроматографирования, см¹:

V, - объем пробы    воздуха, отобранный    для анализа, приведенный    к

стандартным (давление 760 мм рт ст.. температура 20° С) при исследовании воздуха рабочей зоны или нормальным условиям (давление 760 мм рт. ст.. температура 0° С) при исследовании атмосферного воздуха, дм⁵.

V,- R ut/(273+T).

гле Г * температура воздуха при отборе пробы (на входе в аспиратор), град.С.

Р - атмосферное давление при отборе пробы, мм рт. ст. и - расход воздуха при отборе пробы. дм³/мин. t • длительность отбора пробы, мин.

R - коэффициент, равный 0.386 для воздуха рабочей зоны и 0.357 для атмосферного воздуха.

Примечание: Идентификация и расчет концентрации бродифакума в пробах могут быть проведены с помощью программ обработки хроматографических данных с применением компьютера, включенного в аналитическую систему.

10. Оформление результатов измерений

За результат анализа ( X ) принимается среднее арифметическое результатов дв\\ параллельных определений Х| и X; ( X * (Х| + Х;У2). расхождение между которыми не превышает значений норматива оперативного контроля сходимости (d):

IX, -Xjlsd.

d = d.....* X/100. мг/м³.

где d -норматив оперативного контроля сходимости, мг/м³;

d „тн -норматив оперативного контроля сходимости. % (равен 10%).

Результат количественного анализа представляют в виде:

• результат анализа X (мг/м³ ). характеристика погрешности 6. % (равна 25%). Р * 0.95 или

X ± Д мг/м'. Р * 0.95. где Д - абсолютная погрешность.