Утверждено Министерством Здравоохранения СССР

"29 " июля    1991г.

» 6129-91

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ГРУППОВОЙ ИДЕНТИФИКАЦИИ ХЛОРОРГАНИЧЕСКИХ ПЕСТИЦИДОВ И ИХ МЕТАБОЛИТОВ В ВИОМАТЕРИАЛЕ,ПРОДУКТАХ ПИТАНИЯ И ОБЪЕКТАХ ОКРУЖАЮЩЕЙ СРЕДЫ МЕТОДОМ АДСОРБЦИОННОЙ ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ

1.    Краткая характеристика препаратов

Краткие характеристики действующих веществ хлорорганических пести-• _

цидов(4,4-ДДГ и его производные,альдрин,ГПХ,ГПХЭ.даконил,дилор,кельтан, ПХП)и их метаболитов (полихлорфенолы и полихлорбензолы) приведены в кшг-гах:"Методы определения микроколичеств пестицидов в продуктах питания, кормах и внешней средо",М..Колос,1977,368 с.;Клисенко М.А..Александрова Л.Г."Определение остаточных количеств пестицидов".Киев,Здоровье.1983,

248 с;"Методические указания по определению микроколичеств пестицидов в продуктах питания, кормах и внешней среде",ч.1.,М.,1987, 276 с.

2. Meтодика групповой идентификации ХОП и их метаболитов

2.1.Основные положения

2.1.1. Принцип метода

Метод основан на извлечении ХОП и их метаболитов из различных субстратов, очистке и концентрировании экстрактов, последующей идентификз-ции отдельных групп ХОП с помощью адсорбционной ЮКХ при спектрофото-мотрическом детектировании.

2.1.2. Метрологическая характеристика метода

Параметры анализа хлорорганических пестицидов и их метаболитов

Разработчики:М.А.Клисенко,Е.И.Давидюк,В.Ф.Демченко,ВНИИГИНТОКС,г.Киев

9

методом адсорбционной ВЭЖХ представлены в таблице.

2.1.3.Избирательность метода

Метод групповой идентификации ХОП и их метаболитов избирателен в присутствиии азот-.фосфорорганических пестицидов и других органических примесей.

2.2.Реактивы и растворы

Ацетон, осч., ТУ 6-09-3513-86

н-Гексаы, ч._# ТУ 6-09-3375-78

Натрия сульфат безводный, ч., ГОСТ 4166-76

Серная кислота, чда, ГОСТ 4204-77

Фильтры "синяя лента"

Стандартный раствор многокомпонентной смеси ХОП и их метаболитов в н-гексане с концентрацией индивидуальных компонентов по 100 мкг/мл

10

2.3-Приборы и посуда

Хроматограф микроколоночный жидкостный типа "Кйилихром"

Колонка стандартная металлическая ( 50 х 2 мм) с сорбентом "Силасорб-600",5 мкм, Cbemapol (ЧССР)

Весы аналитические типа ВЛКТ-50.Г0СТ 24104-80 Испаритель ротационный типа ИР-1 М2,ТУ 25-1173-84 Линейка металлическая,ГОСТ 25706-83 Воронки конические,ГОСТ 25336-82

Колбы круглодонные со шлифом на 100 мл, ГОСТ 25336-82

Колбы плоскодонные с пришлифованной пробкой на 100 мл,ГОСТ 25336-82

Пипетки мерные на 1 мл, ГОСТ 1770-74

Пробирки мерные на 10 мл, ГОСТ 1770-74

Цилиндры мерные на 50 и 100 мл, ГОСТ 1770-74

2.4.Отбор, хранение и подготовка проб

Отбор, хранение и подготовка проб к анализу проводится в соответствии с "Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции пищевых продуктов и окружающей среды для определения пестицидов", утвержденных Заместителем Главного Государственного санитарного врача СССР 21.08.79 за » 2051-79.

2.5.Подготовка к анализу 2.5.1.Приготовление элюента

Элюирующую смесь - н-гексан-ацетон в объемном соотношении 6:1 готовят в день проведения анализа проб: цилиндром вместимостью на 100 мл отмеряют 90 мл н-гексана, который выливают в плоскодонную колбу с пришлифованной пробкой,туда же приливают 15 мл ацетона,колбу закрывают пробкой и ее содержимое перемешивают при легком взбалтывании, затем элюи-рующую смесь фильтруют через складчатый фильтр с прокаленным сульфатом, натрия в сосуд для элюента.

12

2.5.2.Подготовка хроматографической систем* к проведению анализа Подготовку прибора к хроматографическому анализу начинают с промывки насоса и заполнения его свежеприготовленным элюентом, затем приступают к промывке хроматографической системы прибора и заполнению кюветы сравнения используемым элюентом.После установления равномерного нулевого сигнала детектора и снижения шумов до минимума проводят анализ групповой идентификации ХОП и их метаболитов.

2.6.Проведение анализа

2.6•1•Подготовка пробы к проведению анализа методом ВЭХХ Пробы биоматериала (органы.ткани теплокровных или человека; биологические жидкости:кровь,моча,желчь,грудное молоко).пищевых продуктов или объектов окружающей среды, массой (или объемом), указанной в известных методиках определения ХОП и (или) их метаболитов ,экстрагируют органическим растворителем,согласно описанию хода проведения анализа.Для удаления из гексанового экстракта пробы сопутствующих органических примесей природного происхождения,а также азот-.фосфорорганических пестицидов и продуктов их превращения, влияющих на анализ смеси хлорорганических соединений, проводится предварительная их переэкстракция в концентрированную серную кислоту, затем гексановый экстракт высушивают сульфатом натрия и упаривают на ротационном испарителе при 60°С до небольшого объема,который переносят в мерную пробирку и упаривают досуха в токе азота особой чистоты. Сухой остаток пробы растворяют в 0,2 мл влюента (смесь н-гексана с ацетоном (6:1)и проводят хромвтографическое разделение и идентификацию отдельных групп ХОП и их метаболитов.

13

2.6.2.    Хроматографическое разделение и идентификация отдельных групп ХОП и их метаболитов

Разделение и групповая идентификация ХОП и их метаболитов осуществляется при следующих условиях хроматографирования:

неподвижная фаза -"Силасорб-600",5 мкм,подвижная фаза - гексан-ацетон в объемном соотношении 6:1; скорость элюирующего потока 200 мкл/мин; детектор переменно-волновой спектрофотометр с проточной ячейкой 1,6 мкл; под диапазон чувствительности Э,2А; время измерения выходного сигнала 0,6 с;скорость протяжки диаграммной ленты 720 мм/ч; длина волны ( А. ) поглощения светового потока(нмОпределяется идентифицируемой группой соединений.

Близкие обьемы удерживания (V уд.)представителей отдельных групп хлорорганических соединений и подбор соответствующей длины волны позволяют разграничить зоны хроматографирования, характерные для разных групп,что обеспечивает их идентификацию в сложной пестицидной смеси пробы при сопоставлении с зонами хроматографирования стандартной смеси соответствующих групп соединений.

2.6.3. Примеры идентификации отдельных групп ХОП в многокомпонентной смеси неизвестного состава пробы.

Пример 1. Из 0,2 мл сконцентрированного раствора пробы в элюенте 20 мкл вводят в хроматографическую колонку и проводят анализ при 280 нм в ранее описанном режиме.

При этой длине волны, близкой к А макс, некоторых из исследуемых соединений можно идентифицировать:

1/группу хлорбензолов ( V уд. 160-180 мкл );

2/группу хлорфенолов ( V уд. 230-530 мкл );

14

З/группу соединений .представителей различных классов ХОП-альдрин, ГХПК.ГПХ,ГТТХЭ и некоторых других (V уд.180-300 мкл).

Идентификация 4,4*-ДДТ и его производных достигается повторным хроматографированием при А 230 нм.Объемы удерживания соединений этой группы находятся в пределах 235-260 мкл,а V уд. 4,4'-ДДЭ -190 мкл.При данных условиях идентификации группы 4,4’-ДДТ и его производных не мешают присутствующие в пробе Х0П других классов(альдрин и другие), а также детектируемые на этой длине волны представители группы хлор-бензолов (3-ХФ,3.4-ДХФ,2,3.5.6-ТеХФ)с близкими объемами удерживания (230,250 мкл).Окончательную идентификацию спорных хроматографических сигналов осуществляют подбором необходимой длины волны и снятием развернутых спектров соединений(таблица 1).

Пример 2.Аликвотная часть конечного раствора исследуемой пробы в елюенте вводится в хроматограф и проводится групповое разделение смеси Х0П неизвестного состава при 230 нм. В атих условиях регистрируемые выходные сигналы позволяют идентифицировать следующие группы соединений:хлорбензолу(V уд.160-180 мкл);4,4’-ДДТ и его производные(V уд.235-260;7 уд.4.4’-ДДЭ 190 мкл).Однако идентификация последних может быть затруднена наличием в пробах хлорфенолов (3-,3*4- и 2,3.5,6-хлорфенолы имеют близкие с компонентами группы ДДТ объемы удерживания).Поэтому окончательную идентификацию осуществляют после повторного хроматографирования пробы при А. 220 нм,близкой к А макс.«указанных хлорфенольных соединений.Надежность идентификации может быть повышена снятием развернутого спектра поглощения при остановке процесса хроматографирования на соответствующем выходном сигнале с дискретностью 10 или 2 нм.

15

Пример 3. Аликвотную часть конечного раствора пробы в алюенте хроматографируют в описанном выше режиме при А, =280 нм.В атом случае возможна идентификация трех групп соединений: хлорбензолы, хлорфенолы и ХОП различных классов ( альдрин и др. )эа исключением ДДТ и его производных. Наложение хроматографической зоны ряда хлорфенольных соединений ( объем удерживания от 275 до 305 мкл ) и представителей хлорорганических пестицидов других классов не позволяют провести правильную идентификацию этих соединений, поэтому анализ повторяют при А. 310 нм.В этих условиях ДДТ и его производные и основная часть хлорфенолов ( за исключением 2,4.6-ТХФ, 2,3.4,6-ТеХФ и 2,3.4,5,6-ПХФ) не регистрируется.Объемы удерживания двух последних соединений не совпадают с хроматографической зоной ХОП ( 370 и 530 мкл ),что устраняет их влияние на идентификацию.Помехи 2,4.6-ТХФ можно устранить переключением спектрофотометра на 260 нм,при повторном анализе пробы, когда выходной сигнал этого соединения не регистрируется,или записав развернутый спектр 2,4.6-ТХФ, имеющий две А. макс. 220 и 300 нм.

При проведении число операций по хроматографическому разделению и идентификации может быть ограничено в соответствии с задачами проводимых исследований.

2.6.4.Обработка результатов анвлиза

Качественный состав идентифицируемых групп ХОП и их метаболитов определяется путем сопоставления их хроматографических зон в смеси неизвестного состава пробы и многокомпонентной стандартной смеси одентифицируемых групп соединений. После установления группового состава смеси хлорорганических пестицидов в анализируемой пробе.

исходя из наличия отдельных групп, выбирают наиболее аффективный метод ( ТСХ, ГЖХ, ВЭЖХ ) для дальнейшего количественного измерения индивидуальных компонентов отдельных групп и их метаболитов.

3.Требования безопасности Необходимо соблюдать общепринятые правила безопасности при работе с органическими растворителями, токсичными веществами, концентрированными кислотами.

17