МЕТОДИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

ПО КОНТРОЛЮ И ОЦЕНКЕ ВИРУСНОГО ЗАГРЯЗНЕНИЯ ОБЪЕКТОВ ОКРУЖАЮЩЕЙ СРЕДЫ

Москва, 1986 год

МЖСТЕГСТБО ЗДРАВООХРАКЗИЯ СССР

Заместитель Министра одравоохранения СССР

Н. Бургас ов

з^дшод десмядадо

ПО КОНТРОЛЮ И ОЦЕНКА ВИРУСНОГО ЗАГРЯЗНЕНИИ ОБЪЕКТОВ СЖРУЕАЩЕЙ

Москва, 1966 год

- 8 -

здянкх объемах. Исходя из этого положения, в основу комплексной схемы сан г тарно-вару оологического контроля и оценки качества объектов окружающей среды положены следуххцие критерии:

-    отсутствие вирусов в определенных объемах исследуемых объектов с учетом чувствительности предлагаемых методов;

-    нормативные допустимые уровни косвенных показателей, обес печнвагщие безопасность объектов в отношении вирусного загрязнения.

Контроль объектов окружающей среды на наличие коляфагов п водится бактерислсгическима лабораториями, обследованию подлежат прзбы, исследуете на коли-индекс.

Материалы, включающие показания к проведению исследований на наличие вирусов или их косвенных показателей, перечень методов выделения и нормативы оценочных показателей, систематизированные з комплексную схему контроля и оценки качества объектов окружающей среды з отношении вирусного загрязнения, представлены з таблице X 4.1.

Комплексная схема контроля и оценки качества объектов окрулпюией среда по

вирусологическим показателям

Таблица 4.1.

Объект Показания к проведению исследований но наличие: Методы выделения Оценочные показа ТОЛИ И корми* ■ тионые ypoivHU вирусов колифогов вирусов калтфюгов I Л л* 3 4 .....5 6 Сточные воды Контроль за эффективностью очистки и обеззараживания, при индексе колтфога >1000 Контроль за :хМок-тииностью ОЧИСТКИ и обеззараживания Осаждение А12(5 04)з; сорбшу! на естественных сорбентах посев 1,0ш! Индекс колифзга для мехэпкдеми* чоского периода ^IOCO Сточные воды, используемые о оборотных системах технического 1)0-доонабженил Контроль за эпидемической безопасностью сточных под,используемых п замкнутых системах ПРИ КОЛИ-ИНДь’К-со > 10о0 И ИНДСКСО колнфп'л > 1000 Контроль за эффективностью очистки и обеззараживания ДООЧ1НЦОННЫХ СТОЧНЫХ вод в замкнутых системах водоснабжения Индекс колифпга <.1000 КОаГ|ОЛЬ 30 ЗИИДСМИ-чсскои безопасностью Сточных вод,исподьзуо-МЫХ н отирнтнх тох-налогмчоских процоо-СЛХ при НрОНЫШУНИИ коли-индиксо и индекса кодифи-а > ICO КОНТРОЛЬ an CV[»JOK-тниноегью обеззл-рнхиваний ДООЧИ-щениых сточных под, используемых и от-крытых техиологи-чооких процессах Индекс коли(*ога <100 Поверхностные 1ЮД00МЫ морские и При неблагоприятной сипитарио-эпидомичоо-кой оитуаиии При выборе источников централизованного водопользови- Сорбция на кокуоствин— НЫХ И 00- посев 10мл или моток п од рощи на-

* -!___	2 ____	3	... 4	0	6
мреепко: UjMHCTliC и с yj'OHIWM химического загшу*. нения с< ЬХ) б)с уровнем хих’.ического ^гря^нения		пня для характеристики завсриюнностк процессов самоочищения	тсствсаных сорбентах	ния	Индекс колких £100 Индс^кс^лифвХ
Золи рекреации DOJUIUX объектов (пресных и морских)	При неблагоприятной солитпрно-апаломичес-Hoil ентуации, ной индексе ЛКП > 1000 II индексе коли|ого?100 в случае использования для купания: при индексе J1K11 > IOOCfl-d случае использоьа-ния для лодочно-парусного спорта	При плановых исследованиях в период ВОДШЮЛЬЗОВОПИЯ но менее I разе в месяц	ттПтт		Индекс колифах 4; 100

х) С - в соответствии с 1ХХМ* 2761-64 "Источники централизованного хозяйственно-питьевого водоснабжения. Гигиенические, технические требования и правила выбора .

5. Методу выделения калифагоа из объектов окружающей среды

5.1.    Исследование слабозагрязненных вод

Лля анализа слабозагрязненных вод, индекс колифагов в которых колеблется от единиц до десятков БСЕ/л, используют метод обогащения*) дли метод осаждения салями магния**^ •

5.1.1.    Метод обогащения

Метод заключается з обогащении исследуемой воды бактериями £. ccti и создании оптимальных условий для размнонения колифагов.

В исслед/ецую воду объемами 500 , 200, 100 , 50 , 20 мл вносят суспензию b.ccii з концентрации 10? кл/мл (стандарт гутности 10 ед.) в количествах, соответственно, I мл, 0,5 мл, 0,5 мл,

0,2 мл и 0,2 мл л концентрированный МПБ с десятикратным содержанием солей z пептона в количестве ю% от объема исследуемой пробы и инкубируют при 37°С в течение 16-18 часов. Параллельно 10 мл пробы освобождают от сопутстьущей бактериальной флоры хлороформом, добавляя I мл на 10 мл пробы. Затем пробу интенсивно встряхивают и после осажден/л хлороформа в течение 15-20 минут, надоса-дсчную жидкость исследуют методом агаровых слоев. С этой целью на 4 чахни с подсушенным 1,5? агаром вносят по 2,5 мл пробы и сверху наслаивают 2-3 мл расплавленного и остуженного до 45°С 1,5? агара, содержащего 0,2 мл 4-часовоЙ бульонной культуры £ cofi (штаммы АТСС II330, Jtdnms иля выделенный из исследуемого объекта). После застывания агара чашки инкубируют при 37° в течение 16-13 часов. На следующий день производят подсчет образовавшихся колоний колифага на всех чашках, делают пересчет на I л исследуемой воды, т.е. вычисляют индекс колифага. При отсутствия колоний, из каждого объема, поставленного на обогащение, отливают

х) метод может быть использован в СХ любого уровня хх) метод может быть использован СХ, имещей центрифугу ЦДР

-13-

в пробирки по 5 мд пробы, осзобохдах/г хлороформ»! от бактериальной флоры вышеизложенным способом и исследуют на наличие холифе-га методом агаровых слоев, высевая по I мл из каждого исследуемого объема параллельно на 4 чашки и сверху заливают 2-3 мл расплавленного и остуженного до 45°С 0,9$ агара, содержащего 0,2 мл 4-часовсй бульонной культуры B.Oofi . Метод агаровых слоев ко»-но заменить капельной методикой*

При использовании капельной методики, предварительно залитые 1,5$ агаром чашки Петри делят на 4 сектора. На чашку наносят 2-3 капли 4-часовой бульонной культуры £ && (один из вышеперечисленных штаммов) и растирают шпателем по плоскости агаровой пластины для получения равномерного сплошного газона бактериальной культуры. Через 5-10 минут на подсушенную поверхность агара секторально наносят по I капле исследуемой проб из пробирок. На одной чашке выделяют колифаг из одного исследуемого объема. После того как жидкость впитается в агар, чашки переворачивают вверх дном и инкубируют при 37^ в течение 16-18 чгсоз.

Учет результатов при использовании обоих методов презодят аналогичным образом, качественно оценивая появление на 4 часках или 4 секторах негативных колоний или зон лизиса. Проба считается положительной при обнаружении колифага хотя бы на одной из 4 чашек или на одном из 4 секторов. Содержание колифага в пересчете на I л исследуемой воды получают, пользуясь таблицей и ориентируясь на первый анализируемый объем, из которого выделен келд-фаг (таблица 5.1.I.).

Например: при исследовании объе!.:св 20, 50, ICO мл подсхл-тельней на на’:/фаг оказалась проба в 50 и ICC мл, следе Бетель но концентрация кслифага составляет 20 ЕСЗ/л; при исследовании осъемез в 100, 2С0, SCG мл положительным иа колпфгг были пробы в 2С0 и

"стэдпческие рекомендации разработаны Ордена Трудового Краткого Знамен.*! научно-исследовательским институте: общеИ г. ксмму}*&..]ьноГ1 гигиены ки. А.Н.Сысина АМН СССР (F.A. Дммтрие-—, Т.З.доснмна, Л.А.Кктляева, А.Е.Кедечин) ври участим ••уйСьсеевского ]ий гигиены l£3 FC2CP (С.М.Шарлот).

Методические рекомендации предназначены д;:я республиканских, краевых, областных, городских и районных СоС и научно-исследовательских институтов.

Методические рекомендации рассмотрены Лабораторным Советом при Минздраве СССР х рекомендованы к утверждению.

Настояздае методические рекомендации разрешается размножить в необходимом количестве.

МЕТСДЖСКЖ РЕКШЕНДА1Щ !Ю КОНТРОЛЮ И СЦЕНКЕ ВИРУСНОГО ЗАГРЯЗНЕНИЯ ОБЪЕКТОВ (КРУЖАЩЕЙ срад

Введение,

В системе гигиенических и противоэпидемических мероприятий по ограничению циркуляции возбудителей вирусной природы и снижению заболеваемости важная роль принадлежит контролю и оценке качества объектов окружающей среды в отношении вирусного загрязнения.

Контроль качества объектов окружающей среды должен основываться на эффективных современных методах индикации максимально широкого спектра возбудителей вирусной природы, в передаче которых человеку ведущая роль отводится объектам окружающей среды. Однако, существующие методы индикации вирусов в объектах окружающей среды трудоемки, дороги, длительны по срокам выполнения и позволяют получать только ретроспективные данные, что снижает их эпидемическую значимость.

В связи с вышеизложенным, на современном этапе текущий санитарный контроль за вирусным загрязнением объектов окружающей среды должен осуществляться по косвенным показателям - индикаторам вирусного загрязнения; по эпидпоказаниям - проводится непосредственное выделение возбудителей вирусной этиологии из объек-

— 2 —

тез окружающей среди с регистрацией их уровней.

Методические рекомендации разработаны с целью дальнейшего совершенство ва кия мер не специфической профилактики вирусных заболевания, принципов нормирования вирусного загрязнения объектов окружающей среды и включают: обоснование выбора косвенных показателей вирусного загрязнения, методы их индикации и лимпти-рущке уровни, комплексную схеьу санитарно-вирусологического исследования, поэтапные схемы выделения вирусов с учетом особенностей каждого объекта округающей среды.

Настоящие методические рекомендации предназначены для ис-

1И районных

пользования в республиканских, краевых, областных, городскихУ СЭС, осуществляющих контроль за санитарно-гигиеническим состоянием объектов окружающей среды и в научно-исследовательских учреждениях гигиенического профиля.

I. Сокращения, используемые в тексте.

Кслифэг - бактериофаг кишечной палочки !£iA - мясо-пептонный агар !&Б - мясо-пептонный бульон E3L - наиболее вероятное число ИПС1 - индекс гемолитической кокковой микрофлоры С - сумма отношений концентраций химических веществ с одним лимитирующим показателем вредности к их предельно допустимой концентрации БCS/л - бляшкообраэущке единицы в литре СЭС - санитарно-эпидемиологическая станция ГДД - тканевая иитолатогенная доза СИ - фильтры Петрянова

- 3 -

2.Аппаратура, материалы, реактивы, питательные среды Для проведения исследований используют: аппарат для встряхивай;л жидкостей в колба/, и пробирках универсальный АЬУ-ЮП или АВУ-6П; весы равноплечие, ручные ВР-100 ГОСТ 395-54; весы лабораторные ГОСТ 19491-74; воронки стеклянные ГОСТ 66-13-64;

Бата медицинская гигроскопическая ГОСТ 5556-66; гомогенизатор или размельчит ель тканей PT-I или РТ-2; дергатель фильтров размером 30 , 70, 140 мм;

Инструменты за.чимные медицинские с кремальерой ГОСТ 21133-77 изотермические сутлки;

колбы стеклянные лабораторные ГОСТ 10394-72;

колбы стеклянные с градуированной горловиной ГОСТ 12738-77

лейкопластырь ГОСТ 97709-81;

магнитный смеситель с магнитом цилиндрическим .\С/3-94-5245; микроскоп 1Ш1-1 ГОСТ 8284-67 или серии ШЛАМ типа Р (рабочие), отечественные;

марля медицинская ГОСТ 9412-67;

насос водоструйный ГОСТ 10696-75;

насос вакуумный портативный ГОСТ 2I7IC-76;

потенциометр постоянного тока измерительный ГСС. 9245-с г;

прибор для бактериологического анализа зозд-'И^, модель 6«о;

прибор для отбора проб воздуха ПОЗ-1;

прибор для отбора аэрозолей ПАЗ-1;

перчатки хирургические резиновые А7 ГОС Г

полиэтиленовая пленка ГОСТ 7852-75;

пробки резиновые конусные ГОСТ 7552-56;

пинцеты медилднские ГССТ 21241-77;

приборы медицинские- стеклянные ГОСТ 20292-74; бюретки;

посуда мерная лабораторная;

пипетки вместимостью 2,0-5,0-10,0 с ценой деления на 0,1, на полное выливание; пастеровские пипетки;

флаконы стеклянные вместимостью 50,0 я 100,0 ул; пробирки стеклянные ГОСТ 10516-75; разновесы ГОСТ 7328-65; склянки с тубусом ГОСТ 10238-74; скальпель и ноки медицинские ГОСТ 21240-77; стекла предметные ГОСТ 9284-59; стекла покровные ГОСТ 6672-59; сосуды стеклянные лабораторные ГОСТ 10565-75; стаканы и колба стеклянные лабораторные ГОСТ 10973-75; термостат электрическая для вырациьтяяя бактерий с азтом-атичес-kzm терморегулятором до температуры 50°С с ценой деления 0,2°С ткани фильтровальные ГОСТ 10146-74 (стекловата); ткань фильтровальная 4Q (ПетряноЕа) хзрК’Л С^Ш-З/ЗС-З; ОЛП-70-15-1,5;

ультразвуковой диспергатор УЗ.ЕК-1 (отечественный);

фольга алткккевгя для упаковки г.о ГХТ 745-73;

холодильник бытовой электрический с температурой в кгмере 4~б°с

центрифуга лабораторная рефрижераторная ЦЛР-Ц.? ТУ 42-2145-67;

цилиндры измерительные емкостью 500, С ил ГССТ I77C-74;

чахкк Петри ГССТ 11232-65;

агар микробиологический ГОСТ XI2C6-7I;

алядешиГ; сернокислый ГОСТ 3758-75;

вода дистиллированная ГОСТ 67С9-72;

~ 5 ~

калий фосфорнокислая однозакеценный ГОСТ 4198-75;

калий фосфорнокислый дзузамещекный ГОСТ 3204-66;

калий гидрат окиси ГОСТ 4203-65;

кислота уксусная ГОСТ 61-75;

кислота серная ГОСТ 4204-66;

х&гней хлористый кристаллический ГОСТ 4209-67;

чагний сернокислый ГССТ 4523-77;

натрий лимоннокислый трехзамегценный ГОСТ 22280-76;

иатрий гидрат окиси ГОС! 4328-66;

натрий фосфорнокислый однозвиещекный ГОСТ 245-66;

натрий фосфорнокислый двузамещенкый безводный по ГОСТ 11773-66;

натрий хлористый ГОСТ 4233-66;

натрий двууглекислый ГОСТ 4201-66;

нейтральный красный

Полиэтиленгликоль с ы.в. 6000, 4С0С;

спирт этиловый ректификованный ГОСТ 5962-67;

фреон ИЗ (1,1,2-трихлортрифл1Х)рэтан);

эфир этиловый или бутилевый уксусной кислоты ГОСТ 22300-76;

Глясо-пептон.чый бульон ГОСТ 20730-75;

раствор Зрла - Юкратный;

раствор Версена;

раствор Хенкса, pH 7,4;

раствор трипсина 0,25£;

раствор Зрла, pH 7,6;

среда с 0,5£ гидролизата лактальбумина на растворе Хенхсэ с PH 7,0;

среда с С,5£ гидролизата лакталъбутлинэ на paersepe Зрла с pH 7,6; среда IS9 на растворе Хенкса pH 7,2;

Среда 199 кв растворе Зрла;

- 6 -

среда Игла pH 7,2;

среда Игла КБМ для культуры клеток pH 7,2; поллглякин;

сыворотка крупного рогатого скота без консерванта; хлороформ;

бензилпеяицидлина натриевая соль; хлоркальциеэый комплекс стрептомицина; нистатин;

смола А В-17-8, АВ-17-ИК;

Бактерии 8 cdi В, штаммы А7СС II330, JlcLcms (Государственный контрольный институт бактериальных препаратов им. Л.А .Тарасовича, ШЛ общей и коммунальной гигиены им. А.Н.Сысина А1,21 СССР).

3. Обоснование косвенных показателей вирусного загрязнения объектов окружающей среды#

В действующа нормативах и законодательных документах оценка эпидемической безопасности объектов окружающей среды осуществляется с использованием косвенных бактериальных показателей. Однако, существующие показатели не всегда адекватны в отношения вирусного загрязнения.

В настоящее время для оценки вирусного загрязнения водных объектов и почвы предлагается использовать колифаг. Колифэг-зирус бактериальной клетки, способный лизировать кишечную палочку ( £.    ) и давать негативные колонии через 18-24 часа при 37^0

на 1₉Ь% bulk* Колифаги в полной мере отвечают требованиям, предъявляемым к индикаторным микроорганизмам: игле ют единый с вирусами источник поступления в объекты окружащей среды, по размерам, строению, свойствам приближается к человеческим вирусам, обнаруживается во всех объектах, где могут встретиться энтеровирусы, его концентрации значительно превышают концентрации вирусов, он

7

безвреден для человека, более устойчив, чем бактерия группы кишечной палочки к естественным факторам окружа одеЯ среды к обезвреживающим средствам; по срокам выживаемости в объектах скруиаю-щей среды приближаются к вирусам. Методы выделения ксдифагсв не требуют сложного оборудования, чувствительны, надежны, эффективны, просты. Количественный учет, проводимый либо по блязкообрз-зущкм единицам, либо по КЕЯ сопоставим с современными методами количественного учета энтеровирусов.

Для воздуха закрытых помещений и, з первую очередь, для больничных палат адекватный показателем санитарно-гигиенического состоял ;ih является индекс гемолитической кокковой микрофлоры (КПСС)» ИГКМ—количество микробных клеток гемолитической кокковой микрофлоры в I м³ воздуха, приходящиеся на ICCC микробных клеток общей микрофлоры. Увеличение количества гемолитических стафилококков и стрептококков на поверхности слизистой верхних дыхательных путей наблюдается у больных и ослабленных людей, При этом происходит массивное их выделение в воздух. Гемолитическая микрофлора (гемолитические стрептококки и стафилококки) - отвечают требованиям, предъявляемым к индикаторным микроорганизмам и пирско используются для оценки санитарного состояния воздуднсй среды помещений. В то же время ИГКИ отражает не только санитарное, но и эпидемическое состояние воздушной среды закрытых псуедений в отношении различных аэрогенных инфекций.

4. Комплексная схема контроля к сценки качества объектов окружающей среды по вирусологическим показателям

На современном уровне развития гкгюенгчгсхой науки критериями эпидемической безопасности объектов окружхэей среды з отнесении вирусного загрязнения является отсутствие в них опасных для человека возбудителей вирусной и бактериальной природы в спреде-