вис»

.4. Кучинский 2016

Извещение № 2 об изменении МВИ.МН 3951-2015

Методика выполнения измерений содержания антибиотиков группы тетрациклинов в продукции животного происхождения с использованием тссг-систсм Ridascrccn®Tetracyclin и П РОДОС КРИН ©Тетрациклин

ид ИЗВЕЩЕНИЕ №2 ОБОЗНАЧЕНИЕ ДОКУМЕНТА МВИ.МИ 3951-2015 Дата выпуска С|хж изменения Диет Листов *? п Г ПРИЧИНА Изменение области применения Кол УКАЗАНИЕ. 0 ЗАДЕЛЕ —----------------------- УКАЗАНИЕ 0 ВНЕДРЕНИИ ПРИМЕНЯЕМОСТЬ — РАЗОСЛАТЬ Всем абонентам ПРИЛОЖЕНИЕ На 2 листах ИЗМ. СОДЕРЖАНИЕ ИЗМЕНЕНИЯ 2 Листы 8, 30 замени гь.

i

Сое гавил			—
i 1роперил				! I.KOinp.
Изменойие иксе

Примечание: в состав тест-системы ПРОДОСКРИЫ®Тетрациклин вместо растворов хромогена и субстрата может быть включен субстраг-'хромоген в виде готового к использованию раствора - 1 шт. * 12 cm^j.

Допускается использовать другие средства измерений, испытательное и вспомогательное оборудование ио метрологическим и техническим характеристикам, а материалы и реактивы (кроме тест-систем) по качеству не хуже указанных.

4    Метод измерений

Используемый метод основан на взаимодействии антигена (антибиотиков группы тетрапиклинов) с антителами. В лунки микротитровальиого планшета, покрытого коныогатом тетрациклина с белком, добавляются градуировочные растворы тетрациклина или растворы проб вместе с антителами к тетрациклину. Свободный и иммобилизованный тетрациклин конкурируют за центры связывания антител (конкурентный ИФА). Несвязанные антитела затем удаляются на стадии промывки и добавляются ферментно маркированные вторичные (антивидовые) антитела, которые связываются с антителами к тетрациклину. После удаления при промывке несвязанных конъюгированных ферментом вторичных антител в лунки добавляется раствор субстрата/хромогена. Связанный конъюгат фермента превращает хромоген в голубой продукт, который при добавлении стоп-реагента меняет свой цвет на желтый. Измеренная при 450 нм оптическая плотность обратно пропорциональна массовой концентрации антибиотиков группы тетрациклинов в растворе. Массовая концентрация антибиотиков группы тетрациклинов в пробе определяется по градуировочной зависимости, построенной по 6 градуировочным растворам.

5    Требования безопасности и требования к квалификации операторов

5.1    Общие требования безопасности

При выполнении работ по определению массовой концентрации антибиотиков группы тетрациклинов обслуживающий персонал должен знать и строго соблюдать на рабочем месте требования:

•    электробезопасноеги но ГОСТ 12.2.003;

•    пожарной безопасности по ГОСТ 12.1.004;

•    техники безопасности при работе в химической лаборатории в соответствии с инструкциями, утвержденными в установленном порядке;

•    техники безопасности, изложенные в инструкции по эксплуатации средств измерений и оборудования, применяемых при проведении измерений.

5.2    Требования безопасности при работе с метанолом

Персонал, работающий с метанолом и его растворами, должен знать и строго соблюдать на рабочем месте требования инструкции по технике безопасности при работе е метанолом, утвержденной в установленном порядке.

Все работы с метанолом и его растворами должны проводиться строго в вытяжном шкафу с использованием средств индивидуальной защиты фартуки, перчатки, очки). Запрещается работать с метанолом при выключенной приточно-вытяжной вентиляции и без применения средств индивидуальной защиты.

1 Зам.

5.3 Требовании к квалификации операторов

К проведению работ по данной методике допускаются лица, имеющие высшее специальное или среднее специальное образование по профилю выполняемых работ, прошедшие обучение приемам работы на оборудовании, освоившие выполнение всех операций, предусмотренных методикой, владеющие техникой постановки иммуноферментного анализа.

6 Условия выполнения измерений

При выполнении измерений в лаборатории должны быть соблюдены следующие условия:

•    температура окружающего воздуха от плюс 20 °С до плюс 25 °С;

•    относительная влажность воздуха не более 80 % при температуре 25 °С.

7    Условия инкубации микротитровальных планшетов в помещении

При отсутствии инкубатора микротитровальные планшеты могут инкубироваться в помещении при выполнении следующих условий:

•    температура окружающего воздуха должна быть от плюс 20 °С до плюс 25 °С;

•    не должно происходить попадание прямых солнечных лучей на планшет;

•    планшет не должен подвергаться воздействию сильных естественных или искусственных потоков воздуха, вызванных, например, принудительной вентиляцией;

•    с целью устранения воздействия холодной поверхности стола, на котором находится планшет, рекомендуется помещать под него теплоизоляционный материал, например, сложенное в несколько слоев бумажное полотенце.

•    при низкой относительной влажности воздуха и наличии воздушных потоков с целью устранения возможности испарения содержимого лунок рекомендуется покрывать планшег пленкой «парафильм» или заклеивать скотчем.

•    в особых случаях, которые оговорены по тексту МВИ, требуется помещать планшет в защищенное от света место, например в ящик стола.

8    Условия хранения тест-систем

Хранение тест-систем осуществляется в холодильнике при температуре от плюс 2 °С до плюс 8 °С в оригинальных флаконах и упаковке. Не допускается замораживание реагентов с целью увеличения их срока хранения и использование тест-систем или их отдельных компонентов по истечении срока хранения, установленного изготовителем.

Хранение неиспользованных стрипов (лунок) осуществляется в холодильнике при температуре от плюс 2 °С до плюс 8 °С в плотно закрытом оригинальном фольгированном пакете вместе с имеющимся там осушителем.

Необходимо исключить прямое попадание солнечных лучей на светочувствительный раствор хромогена.

1 Зам.

9 Подготовка к выполнению измерений

9.1    Отбор образцов

Отбор образцов для анализа проводят по СТБ 1036. Отобранные образцы могут храниться в защищенном от света месте при температуре от плюс 2 °С до плюс 4 °С в течение 2-х дней или в замороженном виде при температуре нс выше минус 20 °С в течение 14 дней. Перед проведением подготовки проб по п. 9.4.5 замороженные образцы должны быть разморожены при температуре от плюс 2 °С до плюс 8 °С.

9.2    Подготовка лабораторной посуды

Сильнозагрязнениую лабораторную посуду предварительно обрабатывают хромовой смесью. Лабораторную посуду после мойки в растворе специализированного моющего средства промывают водопроводной, ополаскивают дистиллированной водой 2 раза и высушивают.

Запрещается:

•    многократное использование одноразовой лабораторной посуды;

•    использование бытовых моющих средств для мойки лабораторной посуды.

9.3    Приготовление растворов

9.3.1 Приготовление 30 % раствора гидроокиси натрия

Навеску гидроокиси натрия массой 15,0 г, взвешенную с точностью до 0,1 г, помещают в коническую колбу вместимостью 250 cm^j. В колбу приливают 35 см³ дистиллированной воды, отмеренной цилиндром. После растворения гидроокиси натрия раствор охлаждают до комнатной температуры (от плюс 20 °С до плюс 25 °С).

После приготовления раствора его переносят в полиэтиленовую или фторопластовую посуду и хранят при комнатной температуре (от плюс 20 °С ди плюс 25 °С) не более трех месяцев.

9.3.2    Приготовление 20 мМ фосфатпого буфера

Навески натрия фосфата одноосновного моногидрата массой 0,55 г (или натрия фосфорнокислого однозамещенного 2-водного массой 0,62 г), натрия фосфата двуосновного дигидрата массой 2,85 г (или натрия фосфорнокислого двузамещенного 12-водного массой 5,73 г), хлористого натрия массой 9,00 г, взвешенные с точностью до 0,01 г, помещают в мерную колбу вместимостью 1000 см³, добавляют такое количество дистиллированной воды, чтобы колба заполнилась примерно до половины своей вместимости, перемешивают до полного растворения и доводят до метки дистиллированной водой. После приготовления раствора его переносят в стакан вместимостью 1000 см³ и доводят pH раствора до 7,4, добавляя по каплям 30 % раствор гидроокиси натрия, приготовленный по п. 9.3.1. pH раствора проверяют с помощью pi 1-метра. Раствор хранят при комнатной температуре (от плюс 20 °С до плюс 25 °С) нс более одного месяца.

9.3.3    Приготовление раствора метанола (1:9 по объему)

В коническую колбу вместимостью 500 см³ приливают 225 см³ дистиллированной воды, отмеренные цилиндром, затем приливают отмеренные цилиндром 25 см³ метанола и перемешивают. Хранят раствор при комнатной

1 Зам.

температуре (от плюс 20 °С до плюс 25 °С) в плотно закрытой посуде из темного стекла не более одного месяца в соответствии с установленными правилами хранения метанола и его растворов.

9.3.4    Приготовление раствора метанола (2:8 по объему)

В коническую колбу вместимостью 500 см³ приливают 200 см³ дистиллированной воды, отмеренные цилиндром, затем приливают отмеренные цилиндром 50 см³ метанола и перемешивают. Хранят раствор при комнатной температуре (от плюс 20 °С до плюс 25 °С) в плотно закрытой посуде из темного стекла не более одного месяца в соответствии с установленными правилами хранения метанола и его растворов.

9.3.5    Приготовление 50 мМ раствора янтарной кислоты

Навеску янтарной кислоты массой 5,90 г, взвешенную с точностью до 0,01 г, количественно переносят в мерную колбу вместимостью 1000 см³, добавляют такое количество дистиллированной воды, чтобы колба заполнилась примерно до половины своей вместимости, перемешивают до полного растворения и доводят до метки дистиллированной водой. После приготовления раствора его переносят в стакан вместимостью 1000 см³ и доводят pH раствора до 4,0, добавляя по каплям 30 % раствор гидроокиси натрия, приготовленный по п. 9.3.1. pH раствора проверяют с помощью pH-метра. Раствор хранят в холодильнике при температуре от 4 °С до 8 °С в закрытой посуде из химически стойкого стекла в течение одного месяца.

9.4 Подготовка тест-систем

9.4.1 Предварительная подготовка и правила обращения с тест-системами

Тест-систему извлекают из холодильника, не открывая упаковку микротитровалыюго планшета, выдерживают при температуре от плюс 20 °С до плюс 25 °С от 0,5 до 1 ч, доводят температуру остальных реагентов от плюс 20 °С до плюс 25 °С.

Растворы из тест-систсмы следует готовить непосредственно перед проведением НФА. Перед использованием реагенты необходимо аккуратно перемешать круговыми движениями флаконов.

Замена отдельных реагентов на реагенты из тест-систем других партий нс допускается.

Не допускается использование реагентов, имеющих следующие признаки распада:

•    голубая окраска раствора хромогена до внесения его в лунки;

•    оптическая плотность градуировочного раствора № 1 с концентрацией 0,0 мкг/дм³ меньше 0,6.

9.4.2 Подготовка микротитровалыюго планшета

Количество лунок микротитровального планшета, необходимых для проведения измерений N„, рассчитывается по формуле

N,_r = \2 + 2N_SMP,    (1)

где N_SM/, - количество образцов;

1 Зам.

12 - количество лунок для градуировочных растворов.

Микротитровальный планшет со стрипами, предварительно подготовленными в соответствии с п. 9.4.1, вынимают из упаковки. В микротитровальный планшет помещают необходимое количество стрипов, рассчитанное исходя из требуемого для проведения измерений количества лунок N_w . Оставшиеся стрипы сразу же помешают в упаковку, закрывают и хранят в соответствии с разделом 8.

Размечают положения лунок, предназначенные для градуировочных растворов и растворов проб, согласно рисунку 1.

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

А

С-1

С-1

п-з

п-з

П-11

П-11

В

С-2

С-2

11-4

П-4

П-12

П-12

С

С-3

С-3

II-5

11-5

П-13

11-13

D

С-4

С-4

Г1-6

Г1-6

П-14

11-14

Е

С-5

С-5

П-7

П-7

П-15

П-15

F

С-6

С-6

П-8

П-8

П-16

П-16

G

11-1

П-1

П-9

П-9

11-17

П-17

Н

П-2

П-2

П-10

П-10

П-18

П-18

Рисунок 1 - Схема расположения лунок для градуировочных растворов и растворов

проб

где С -1, С -2, ... С -6 - градуировочные растворы,

Я -1, Я -2,... Я -18 - анализируемые пробы,

1,2,3....12 - номера стрипов в планшете,

А, В,... II - обозначения лунок в стрипах.

При необходимости одновременно использовать более 6-ти стрипов рекомендуется выполнять анализ в несколько этапов.

9.4.3    Приготовлепне градуировочных растворов тетрациклина

Градуировочные растворы тетрациклина готовят непосредственно перед выполнением ИФА путем разбавления их концентратов, подготовленных по и. 9.4.1.

В шесть стеклянных пробирок вместимостью 5 см³, промаркированных номерами приготавливаемых градуировочных растворов (от 1 до 6), дозатором приливают 450 мм³ буфера №1 для разбавления градуировочных растворов и растворов проб. При анализе проб молока, мороженого, молочной сыворотки, восстановленной сухой молочной сыворотки, кисломолочных продуктов, творога и творожных продуктов вместо буфера №1 используют буфер №2.

Отбирают дозатором по 50 мм³ каждого концентрата градуировочного раствора и переносят в соответствующую пробирку. Тщательно перемешивают содержимое пробирок на вортексе. Для каждого раствора использую! новый наконечник дозатора. После отбора аликвот флаконы с концентратами градуировочных растворов убирают в холодильник и хранят в соответствии с п. 8.

9.4.4    Приготовление моющего буфера

При использовании тест-систем Ridascreen ® Tetracyglifl в зависимости от планируемого срока использования моющий буфер готовят двумя приведенными ниже

1 Зам.

способами.

•    Способ    1.    Содержимое    пакета    для    приготовления    моющего    буфера

количественно переносят в мерную колбу вместимостью 1000 см³. Добавляют 50-100 см³ количество дистиллированной воды, содержимое колбы перемешивают до полнот растворения осадка, после чего доводят до метки дистиллированной водой. Полученный раствор хранят при температуре от плюс 2 °С до плюс 8 ^иС не более 6-ти недель в стеклянной или полиэтиленовой посуде.

•    Способ    2.    Содержимое    пакета    для    приготовления    моющего    буфера

количественно переносят в мерную колбу вместимостью 100 см³. Добавляют 50 - 60 см³ дистиллированной воды, перемешивают до полного растворения осадка и доводят до метки дистиллированной водой. Полученный концентрированный раствор (10-кратное концентрирование) храпят при температуре от плюс 20°С до плюс 25 ^СС нс более 12 недель. Для приготовления готового раствора моющего буфера 10 см³ концентрата переносят в мерную колбу вместимостью 100 см³ и доводят до метки дистиллированной водой.

При использовании тест-систем ПРОДОСКРИНШ’еграниклин моющий буфер

готовят следующим образом. Содержимое флакона с концентратом моющего буфера интенсивно встряхивают в течение (10-20) с, в случае образования кристаллов -подогревают на водяной бане при температуре 50 °С. Отмеренный мерным цилиндром необходимый объем концентрата наливают в стакан вместимостью 10U0 см³, после чего в стакан наливают в 9 раз больший объем дистиллированной воды и перемешивают. Полученный раствор хранят при температуре от плюс 2 °С до плюс 8 °С пе более месяца в стеклянной или полиэтиленовой посуле.

9.4.5 Приготовление раствора субстрата/хромогена (только при использовании тест-систем ПРОДОСКРИН®Тетраииклии)

Раствор субстрата/хромогена ттовят непосредственно перед выполнением ИФА из растворов субстрата и хромогена, подготовленных по и. 9.4.1. Посуда, используемая при приготовлении раствора субстрата/хромогена, моется без применения синтетических моющих средств.

В чистый флакон из темной пластмассы вместимостью 20 см³ приливают необходимое количество субстрата, отмеренного дозатором и добавляют в 20 раз меньшее по объему количество раствора хромогена, интенсивно перемешивают в течение (30-40) с. Прититивленный раствор необходимо предохранять от воздействия света. Приготовленный раствор хранению не подлежит.

Объем используемой аликвоты V, см³, раствора хромогена рассчитывается на осиозанни количества используемых в анализе лунок микротитровального планшета N_w, по формуле

0,1 -/у,, +г;

21

т ле V — объем раствора субстрата/хромогена, приготавливаемого в запас, с.м³ (не менее 0,1 cm^j).

9.5 Подготовка проб

9.5.1 Подготовка проб сырого, стерилизованного, пастеризованного и

I Зам.

восстановленного сухого молока, мороженого

9.5.1.1 Восстановление сухого молока, сухих молочных смесей для детского питания

Для подготовки проб используют образец, отобранный в соответствии с п. 9.1. Доводят температуру образца от плюс 20 °С до плюс 25 °С, выдерживая его при комнатной температуре.

В стаканы вместимостью 100 см³ или 150 см³ помещают 2 параллельные навески образца сухого молока, взвешенные с точностью до 0,1 г. Массы навесок в зависимости от содержания жира составляют:

•    9,0    г сухого обезжиренного молока;

•    12,0    г сухого молока с содержанием жира 20 %;

•    12,5    г сухого молока с содержанием жира 25 %;

•    10.0    г сухого молока с содержанием жира, отличным от перечисленного

выше.

Затем в стаканы с навесками порциями по 5-10 см³ приливают дистиллированную воду, перемешивая содержимое стеклянной палочкой до полного растворения образца. После растворения сухого молока растворы из стаканов количественно переносят в мерные колбы вместимостью 100 см³, выдерживают в течение 15 мин, доводят до метки дистиллированной водой и тщательно перемешивают.

Восстановление проб сухих смесей для детского питания производят по приведенной выше схеме, используя отношение массы смеси к объему воды, указанное в инструкции производителя.

Далее пробы подвергают процедуре обезжиривания, описанной в п. 9.5.1.2, пробы сухого обезжиренного молока обезжириванию не подлежат.

9.5.1.2 Получение проб обезжиренного сырого, стерилизованного,

пастеризованного, восстановленного сухого молока, восстановленных сухих молочных смесей для детского питания и мороженого

Для подготовки проб используют образец сырого, стерилизованного, пастеризованного молока или мороженого отобранный в соответствии с п. 9.1. От образца мороженого предварительно отделяют твердые немолочные компоненты и отбрасывают. Температуру образца доводят от плюс 20 °С до плюс 25 °С, выдерживая его при комнатной температуре. Перед взятием аликвоты образен перемешивают путем встряхивания и переворачивания упаковки. Затем его переносят в коническую колбу вместимостью 100 см³ в таком количестве, чтобы колба заполнилась примерно до половины своей вместимости, и тщательно перемешивают па вортексе.

От образца сырого, стерилизованного, пастеризованного молока, подготовленного как описано выше, или восстановленного сухого молока, восстановленных сухих молочных смесей для детского питания, приготовленных по п. 9.5.1.1, с помощью дозатора отбирают две параллельные пробы объемом Ю см³ и помещают в пробирки для центрифугирования вместимостью 15 см . От образца мороженого отбирают параллельные навески массой 10,0 г и и помещают в пробирки для центрифугирования вместимостью 15 см³. Центрифугируют пробы в следующем режиме: 10 °С, 3000 g, 10 мин.

При отсутствии центрифуги с охлаждением пробы перед центрифугированием

1 Зам.

выдерживают в морозильной камере холодильника в течение 10-15 мин, охлаждая их до температуры от плюс 2 °С до плюс 4 °С, контролируя температуру термометром.

Шпателем или пипеткой Пастера удаляют верхний жировой слой, образовавшийся на поверхности после центрифугирования.

Отбирают по 2 см³ обезжиренной пробы из каждой пробирки и переносят в чистые пробирки (перед тем как вылить молоко в пробирку, наконечник пипет-дозатора вытирают фильтровальной бумагой для удаления следов жира). При необходимости пробы хранят в соответствии с п. 9.1.

Для обезжиренного молока описанную выше процедуру по удалению жира нс производят.

9.5.1.3 Получение растворов проб молока, мороженого, молочных смесей

В стеклянные пробирки вместимостью 5 см³ вносят отобранные дозатором 450 мм³ буфера №2 для разбавления градуировочных растворов и растворов проб. Из каждой пробы, подготовленной по пп. 9.5.1.1 или 9.5.1.2, отбирают дозатором по 50 мм' и переносят в пробирки с буфером, предварительно очистив наконечник дозатора фильтровальной бумагой от следов жира. Содержимое пробирок перемешивают на вортексе.

Полученные растворы проб используются для проведения ИФА. Допускается хранение подготовленных растворов проб при температуре от плюс 20 °С до плюс 25 °С в течение часа.

9.5.2 Подготовка проб молочной сыворотки, восстановленной сухой молочной сыворотки

9.5.2.1 Восстановление сухой молочной сыворотки

Для подготовки проб используют образец, отобранный в соответствии с п. 9.1. Доводят температуру образца от плюс 20 °С до плюс 25 °С, выдерживая его при комнатной температуре.

В стаканы вместимостью 100 см³ или 150cm^j помещают 2 параллельные навески образца массой 12,5 г, взвешенные с точностью до 0,1 г.

Затем приливают небольшими порциями по 10 - 20 см³ дистиллированную воду, нагретую до температуры (40 ± 2) °С, перемешивая содержимое стеклянной палочкой до полного растворения образца. После растворения навески растворы из стаканов количественно переносят в мерные колбы вместимостью 100 см³, доводят до метки дистиллированной водой и тщательно перемешивают.

9.5.22 Получение растворов проб молочной сыворотки и восстановленной сухой молочной сыворотки

Для получения растворов проб используют образец молочной сыворотки, отобранный в соответствии с п. 9.1, температуру которого доводят от плюс 20 °С до плюс 25 °С, выдерживая при комнатной температуре.

В стаканы вместимостью 150 см³ наливают по 70 - 90 см³ проб молочной сыворотки, подготовленных как описано выше, или проб восстановленной сухой молочной сыворотки, приготовленных по п. 9.5.2.1, и доводят их pH до 7,0, добавляя по каплям 30 % раствор гидроокиси натрия, приготовленный по п. 9.3,1.

1 Зам.

Дозатором отбирают 950 мм³ буфера №2 для разбавления градуировочных растворов и растворов проб и переносят в стеклянные пробирки вместимостью 5 см³. В пробирки с буфером переносят из стаканов с помошыо дозатора по 50 мм³ каждой пробы с доведенным pH. Содержимое пробирок перемешивают на вортексе.

Полученные растворы проб используются для проведения ИФА. Допускается хранение подготовленных растворов проб при температуре от плюс 20 °С до плюс 25 °С в течение часа.

9.5.3 Подготовка проб меда

Для подготовки проб используют образец, отобранный в соответствии с п. 9.1. Доводят температуру образца от плюс 20 °С до плюс 25 °С, выдерживая его при комнатной температуре. От образца меда отбирают две параллельные навески массой

1,00 г, взвешенные с точностью до 0,01г. Навески помещают в пробирки с завинчивающимися крышками из стекла или полистирола вместимостью 80 см³. В каждую пробирку добавляют, отмеренные цилиндром, 49,0 см³ 20 мМ фосфатного буфера, приготовленного по п. 9.3.2. Содержимое пробирок растворяют путем интенсивного встряхивания, после чего дополнительно перемешивают па вортексе 2 мин.

Допускается использовать для растворения меда конические колбы вместимостью 100 см³.

Полученные растворы проб используются для проведения ИФА. Допускается хранение подготовленных растворов проб при температуре от плюс 20 °С до плюс 25 °С в течение одного часа.

Перед отбором аликвот для проведения ИФА растворы перемешивают путем переворачивания пробирок несколько раз.

9.5.4 Подготовка проб мяса, рыбы, продуктов из рыбы

9.5.4.1    Получение экстрактов проб мяса, рыбы, продуктов из рыбы

Доводят температуру образца, отобранного в соответствии с п. 9.1, от плюс 20 °С до плюс 25 ^СС, выдерживая его при комнатной температуре, после чего гомогенизируют с помошыо гомогенизатора или блендера.

От гомогенизированного образца отбирают две параллельные навески массой

1,00 г, взвешенные с точностью до 0,01г. Навески помещают в пробирки для центрифугирования вместимостью 15 см³ и в каждую пробирку добавляют отмеренные дозатором 9 см³ 20 мМ фосфатного буфера, приготовленного по п. 9.3.2. Перемешивают содержимое пробирок, после чего интенсивно (200 - 300 об/мин) встряхивают на шейкере или ротаторе в течение 10 мин. Центрифугируют пробирки при температуре от плюс 20 °С до плюс 25 °С, 4000 g, в течение 10 мин.

9.5.4.2    Получение растворов проб мяса, рыбы, продуктов из рыбы

После центрифугирования переносят по 1 см³ надосадочной жидкости в новые пробирки для центрифугирования вместимостью 15 см³.

При анализе проб рыбы с высоким содержанием жира или проб мяса проводят дополнительное обезжиривание проб. Для этого в пробирки добавляют отобранные дозатором 2 см³ гексана и перемешивают их содержимое на вортексе в течение 10 с*

1 Зам.

Центрифугируют пробирки при температуре от плюс 20 °С до плюс 25 °С, 4000 g, в течение 10 мин. Осторожно удаляют верхний гексановый слой с помощью пипетки Пастера или дозатором.

Полученные водные растворы проб используются для проведения ИФЛ. Допускается хранение подготовленных растворов проб при температуре от плюс 20 °С ло плюс 25 °С в течение одного часа.

9.5.5 Подготовка проб готовых мясных продуктов, консервов мясных и мясорастительных, жиров животных, шпика, субпродуктов

9.5.5.1    Получение экстрактов проб готовых мясных продуктов, консервов мясных и мясораститсльных, жиров животных, шпика, субпродуктов

Доводят температуру образцов, отобранных в соответствии с п. 9.1. от плюс 20 °С до плюс 25 °С, выдерживая их при комнатной температуре, после чего г омогенизируют с помощью гомогенизатора или блендера.

От гомогенизированного образца отбирают две параллельные навески массой

3,00 г, взвешенные с точностью до 0,01 г. Навески помещают в стаканы вместимостью 150 см³ или в контейнеры, входящие в комплект миксера. К навескам добавляют отмеренные дозатором 30 см³ 20 мМ фосфатного буфера, приготовленного по п. 9.3.2. Стаканы с пробами жиров животных, шпика нагревают до температуры (40 ± 5) °С при помешивании. Смесь гомогенизируют с помощью лабораторного миксера, не допуская ее разбрызгивания. Гомогенизация также может быть проведена с использованием гомогенизатора в соответствии с его эксплуатационными документами.

Гомогенизированную смесь переносят в пробирки для центрифугирования вместимостью 50 см³ и центрифугируют в следующем режиме: 10 °С, 4000 g, 10 мин.

9.5.5.2    Получение обезжиренных проб готовых мясных продуктов, консервов мясных и мясорастительных, жиров животных, шпика, субпродуктов

При анализе проб с высоким содержанием жира проводят их обезжиривание гексаном. Для этого переносят по 1 см³ надосадочной жидкости, полученной по п. 9.5.5.1 в новые пробирки для центрифугирования вместимостью 15 см³. В пробирки добавляют отобранные дозатором 2 см³ гексана и перемешивают их содержимое на вортсксс в течение 10 с. Центрифугируют пробирки при температуре от плюс 20 °С до плюс 25 °С, 4000 g, в течение 10 мин. Осторожно удаляют верхний гексановый слой с помощью пипетки Пастера или дозатором.

9.5.5.3    Получение растворов проб готовых мясных продуктов, консервов мясных и мясорастительных, жиров животных, шпика, субпродуктов

Переносят по 200 мм³ надосадочной жидкости, полученной по п. 9.5.5.1 или п. 9.5.5.2, в пробирки для центрифугирования вместимостью 1,5 см³ или 2 см³. В каждую пробирку добавляют отобранные дозатором 200 мм³ буфера №1 для разбавления градуировочных растворов и растворов проб и перемешивают содержимое пробирок на вортсксе в течение 10 с.

Полученные водные растворы проб используются для проведения ИФА. Допускается хранение подготовленных растворов проб при температуре от плюс 20 °С до плюс 25 °С в течение одного часа.

I Зам.

СОДЕРЖАНИЕ

1    Область применения.......................................................................................3

2    Точность измерений........................................................................................3

3    Средства измерений, испытательное и вспомогательное оборудование,

материалы, реактивы...............................................................................................7

3.1    Средства измерений, испытательное и вспомогательное оборудование,

материалы..................................................................................................................7

3.2    Реактивы...........................................................................................................8

4    Метод измерении...........................................................................................10

5    Требования безопасности и требовании    к квалификации операторов......10

5.1    Общие требования безопасности.....................................................................10

5.2    Требования безопасности при работе с метанолом.........................................К)

5.3    Требования к квалификации операторов.........................................................11

6    Условия выполнения измерений..................................................................11

7    Условии инкубации микротнтровальных планшетов    в    помещении..........11

8    Условия хранения тест-систем.....................................................................11

9    Подготовка к выполнению измерений.........................................................12

9.1    Отбор образцов...............................................................................................12

9.2    Подготовка лабораторной посуды...................................................................12

9.3    Приготовление растворов...............................................................................12

9.4    Подготовка тест-систем..................................................................................13

9.5    Подготовка проб.............................................................................................15

10    Выполнение измерений.................................................................................23

11    Обработка результатов измерения...............................................................24

11.1    Проверка приемлемости результатов измерений, полученных в условиях

повторяемые ги..........................................................................................................26

12    Оформление результатов измерений...........................................................26

12.1    Форма представления результатов измерения с использованием расширенной

неопределенности.....................................................................................................26

12.2    Форма представления результатов в виде односторонней оценки массовой

концентрации антибиотиков группы тетрациклинов с использованием предела измерения.................................................................................................................27

12.3    Форма представления результатов в виде односторонней оценки массовой

концентрации антибиотиков группы тетрациклинов с использованием значения верхней границы диапазона измерений....................................................................27

13    Контроль точности результатов измерений................................................27

13.1    Оперативный контроль результатов, полученных    в    условиях    повторяемости.27

13.2    Проверка приемлемости результатов измерений, полученных в условиях

промежуточной прецизионности..............................................................................28

13.3    Проверка приемлемости результатов измерений, полученных в условиях

воспроизводимости..................................................................................................28

13.4    Контроль правильности..................................................................................30

13.5    Контроль стабильности результатов измерений с    применением контрольных

карт Шухарга (КК)...................................................................................................3 1

14    Нормативные ссылки....................................................................................33

Библиография.........................................................................................................35

1 Зам.

9.5.6.1    Получение экстрактов проб сыра

Доводят температуру образца сыра, отобранного в соответствии с п. 9.1, от плюс 20 °С до плюс 25 °С, выдерживая его при комнатной температуре. Отделяют тесте от корки, полимерно-парафинового или воскового сплава, измельчают тесто с помощью терки и перемешивают.

От измельченного образца сыра отбирают две параллельные навески массой

15,0 г, взвешенные с точностью до 0,1 г. Навески помещают в стаканы вместимостью 150 см³ или в контейнеры, входящие в комплект миксера. К навескам сыра добавляют отмеренные пипеткой 30 см³ раствора метанола (1:9 по объему), приготовленного по п. 9.3.3. Смесь гомогенизируют с помощью лабораторного миксера, не допуская ее разбрызгивания.

Переносят гомогенизированную смесь в пробирку для центрифугирования вместимостью 50 см³ и выдерживают пробирку на водяной бане при температуре (40 ± 5) °С в течение 10 мин. За это время смесь перемешивают три раза, энергично встряхивая пробирку.

I (ентрифугируют пробирку при 4 °С, 3000 g, в течение 15 мин.

Переносят дозатором 1 см³ среднего водного слоя в пробирку для центрифугирования вместимостью 2 см . Пробирку центрифугируют при температуре от плюс 20 °С до плюс 25 °С, 20000 g, в течение 5 мин.

При отсутствии центрифуги, обеспечивающей режим центрифугирования 20000 g, удаляют верхний слой жира пластиковым шпателем, после чего фильтруют оставшийся водный слой через складчатый фильтр.

9.5.6.2    Получение растворов проб сыра

Отбирают дозатором 50 мм³ надосадочпого слоя или фильтрата по п. 9.5.6.1 и переносят в стеклянную пробирку вместимостью 5 см³. Затем в пробирку дозатором добавляют 450 мм³ буфера №1 для разбавления градуировочных растворов и растворов проб, и тщательно перемешивают содержимое пробирок на вортексе.

Полученные растворы проб используются для проведения ИФА. Допускается хранение подготовленных растворов проб при температуре от плюс 20 °С до плюс 25 °С в течение одного часа.

9.5.7 Подготовка проб масла

9.5.7.1 Получение экстрактов проб масла

Образец масла, отобранный в соответствии с п. 9.1, охлалсденный до температуры не выше минус 10 °С, измельчают с помощью терки и перемешивают. Доводят температуру образца масла от плюс 20 °С до плюс 25 °С, выдерживая его при комнатной температуре.

От образца масла отбирают две параллельные навески массой 1,00 г, взвешенные с точностью до 0,01 г и помещают их в пробирки для центрифугирования вместимостью 15 см³. Выдерживают пробирки на водяной бане при температуре (40 ± 5) °С до полного расплавления навески масла.

Сразу же после расплавления масла в пробирки с пробами добавляют 1 см³ гексана, отмеренного дозатором, и интенсивно перемешивают на вортексе в течение

I Зам.

Область применения

Настоящая методика распространяется на сырое, пастеризованное, стерилизованное, сухое восстановленное и сгущенное молоко, восстановленные сухие молочные смеси для детского питания, молочную сыворотку, восстановленную сухую молочную сыворотку, творог и творожные продукты, кисломолочные продукты (йогурт, сметана, кефир, пахта и т.п), мороженое на молочной основе, сыр (мягкий, полутвердый, твердый, сверхтвердый), масло сливочное, мясо, готовые мясные продукты, консервы мясные и мясорастительные, жиры животные, шпик, субпродукты, рыбу и продукты из рыбы, яйца, порошок яичный¹, мед и устанавливает метод конкурентного иммуноферментного анализа (ИФА) с использованием тест-систем Ridascreen ® Tetracyclin производства R-Biopharm AG, Германия, или тест-систем ПРОДОСКРИН^Тетрациклин, производства Института биоорганической химии НАН Беларуси.

Массовая концентрация антибиотиков ipyiuibi тщрациклинов в соответствии с данной методикой определяется как сумма массовых концентраций следующих антибиотиков в пересчете на тетрациклин с учетом перекрестной чувствительности, специфицируемой производителем тест-систем:

•    тетрациклина, хлортетрациклина, ролитетрациклина, демеклоциклина, окситетрациклииа при использовании тест-систем Ridascreen ® Tetracyclin;

•    тетрациклина, хлортетрациклина, окситетрациклииа, доксициклина при использовании тест-систем ПРОДОСКРИН®Тетрациклин.

Диапазон измерений методики приведен в разделе 2, таблицы 1, 2. Предел измерения для данной методики приведен в разделе 2, таблица 1, 2, как нижняя граница диапазона измерений.

Настоящая методика разработана в соответствии с требованиями ГОСТ 8.010.

2 Точность измерений

Настоящая методика обеспечивает измерение массовой концентрации антибиотиков группы тетрациклинов в указанном выше диапазоне с показателями прецизионности, приведенными в таблицах 1,2. ^{2 3}

Таблица 1 - Относительные значения показателей повторяемости и воспроизводимости при использовании тест-систем Ridascreen ® Tctracyclin

Виды продукции Диапазон измерений, мкг/кг Относительное стандартное отклонение повторяемости <7, , % Относительное стандартное отклонение воспроизводимое i и | а1{, % Сырое, пастеризованное, стерилизованное, восстановленное сухое молоко, мороженое на молочной основе, восстановленные сухие молочные смеси для детского питания от 1,0 до 18,0 включ. 4,8 7,1 Молочная сыворотка, восстановленная сухая молочная сыворотка от 3,0 до 36,0 включ. Кисломолочные продукты от 2,0 до 18,0 включ. Сыр от 4,0 до 43,2 включ. 7,4 и Масло сливочное от 2,9 до 45,0 включ. Творог, творожные продукты от 2,0 до 18,0 включ. 3,4 8,9 Сгущенное молоко от 4,0 до 72,0 включ. Яйца, порошок яичный от 6,0 до 108,0 включ. Мясо, рыба, продукты из рыбы от 2,0 до 18,0 включ. 4,4 7,8 Готовые мясные продукты, консервы мясные и мясо-растительные, жиры животные, шпик, субпродукты от 5,0 до 36,0 включ. Мед от 4,0 до 90,0 включ.

Таблица 2 - Относительные значения показателей повторяемости и промежуточной прецизионности при использовании тест-систем ПРОДОСКРИН®Тетрациклин

Виды продукции Диапазон измерений, мкг/кг Относительное стандартное отклонение повторяемости о-, , % Относительное стандартное отклонение промежуточной : прецизионности ст/гш>> ^ > Сырое, пастеризованное, стерилизованное, восстановленное сухое молоко, мороженое на молочной основе, восстановленные сухие молочные смеси для детского питания от 0,5 до 18,0 включ. 5,3 5,9 Мясо, рыба, продукты из рыбы от 2,0 до 18,0 включ. Готовые мясные продукты, консервы мясные и мясорастительные, жиры животные, шпик, субпродукты от 5,0 до 36,0 включ. Масло сливочпое от 3,0 до 45,0 включ. Молочная сыворотка, восстановленная сухая молочная сыворотка от 3,0 до 36,0 включ. 4,7 5,7 Кисломолочные продукты от 2,0 до 18,0 включ. Сыр от 4,0 до 43,2 включ. Творог, творожные продукты от 2,0 до 18,0 включ. Сгущенное молоко от 4,0 до 72,0 включ. Яйца, порошок яичный от 6,0 до 108,0 включ. Мед от 4,0 до 90,0 включ.

В результате оценки показателя правильности для данной методики была установлена незначимость смещения для всех видов продукции во всем диапазоне измерений, за исключением мяса, рыбы, продуктов из рыбы, масла сливочного при использовании тест-систем ПРОДОСКРИН®Тетрациклин. Статис тическая значимость смешения учтена при оценивании неопределенности для результатов измерений, получаемых для вышеуказанных видов продукции при использовании тест-систем ПРОДОСКРИН®Тетрациклин.

Значения оценок относительной суммарной стандартной неопределенности и относительной расширенной неопределенности приведены в таблицах 3, 4.

Указанные в таблицах 1 -4 метрологические характеристики получены на основании данных эксперимента, проведенного в соответствии с:

•    показатели прецизионности - СТБ ИСО 5725-2;

•    показатели правильности - СТБ ИСО 5725-4, [ 1 ].

•    оценки неопределенности - [ 1 ], [ 2 ].

1 Зам.

Таблица 3 - Оценки неопределенности результатов измерений, выполняемых в соответствии с МВИ при использовании тест-систем Ridascreen ® Tetracyclin

Виды продукции Относительная суммарная стандартная неопределенность Относительная расширенная неопределенность U, %, К = 2, Р = 95 % Сырое, пастеризованное, стерилизованное, восстановленное сухое молоко, мороженое на молочной основе, сухие восстановленные молочные смеси для детского питания 8 i 1 16 Молочная сыворотка, восстановленная сухая молочная сыворотка ! Кисломолочные продукты Сыр 12 24 Масло сливочное Творог, творожные продукты Сгущенное молоко И 22 Яйца, порошок яичный Мясо, рыба, продукты из рыбы Готовые мясные продукты, консервы мясные и мясорастительные, жиры животные, шпик, субпродукты 9 18 Мед

Таблица 4 - Оценки неопределенности результатов измерений, выполняемых в соответствии с МВИ при использовании тест-систем ПРОДОСКРИНФТетрациклин

Виды продукции Относительная суммарная стандартная неопределенность ис, % Относительная расширенная неопределенность и, %, К = 2, Р-95 % Сырое, пастеризованное, стерилизованное, восстановленное сухое молоко, мороженое на молочной основе, сухие восстановленные молочные смеси для детского питания 9 18 Готовые мясные продукты, консервы мясные и мясорастительные, жиры животные, шпик, субпродукты Мясо, рыба, продукты из рыбы Масло сливочное Молочная сыворотка, восстановленная сухая молочная сыворотка 8 16 Кисломолочные продукты Сыр Творог, творожные продукты Сгущенное молоко Яйца, порошок яичный Мед

1 Зам. 6

3 Средства измерений, испытательное и вспомогательное оборудование, материалы, реактивы

3.1 Средства измерений, испытательное и вспомогательное оборудование, материалы

Весы лабораторные общего назначения по ГОСТ 24104 высокого класса точности с наибольшим пределом взвешивания до 500 г, ценой деления не более 0,01 г.

Автоматический микронланшетный фотометр с фильтром па 450 нм (допускаемая погрешность измерения ошической плотности не более ± 5 %).

Программное обеспечение RIDA ® SOFT, разработчик R-Biopharm AG, Германия.

Термометр лабораторный частичного погружения класса точпости I с ценой деления 1 °С по ГОСТ 28498.

pH-метр с диапазоном измерений от 0 pH до 14 pH и погрешностью ±0,1 pH в комплекте с электродами.

Дозаторы пипеточные с комплектом одноразовых наконечников:

•    с диапазоном объемов дозирования от 20 мм³ до 200 мм³ и относительным отклонением фактического объема дозы от номинального ±3,0 %;

•    с диапазоном объемов дозирования от 100 мм³ до 1000 мм³ и относительным отклонением фактического объема лозы от номинального ±1,5 %;

•    с диапазоном объемов дозирования от 1 см³ до 5 см³ и относительным отклонением фактического объема дозы от номинального ± 1,5 %;

•    с диапазоном объемов дозирования от 2 см³ до 10 см³ и относительным отклонением фактического объема дозы от поминального ±1,0 %;

•    многоканальный с диапазоном объемов дозирования от 50 мм³ до 350 mm^j и относительным отклонением фактического объема дозы от номинального не более ± 4,6 %.

Центрифуга лабораторная, обеспечивающая относительное центробежное ускорение не менее 4000 g (пробирки вместимостью 15 см³, 50 см³) и не менее 20000 g (пробирки вместимостью 2 см³), а также охлаждение до плюс 4 °С.

Баня водяная, обеспечивающая поддержание температуры 40 °С ± 5 °С.

Холодильник бытовой, позволяющий поддерживать температуру от плюс 2 °С до плюс 8 °С в холодильной камере и не выше минус 20 °С в морозильной камере.

Лабораторный вортекс, обеспечивающий скорость вращения нс менее 1800 об'мин.

Лабораторный шейкер, обеспечивающий скорость до 300 об/мин.

Лабораторный ротатор, обеспечивающий скорость вращения до 60 об/мин.

Лабораторный миксер, обеспечивающий скорость от 100 об/мин до 200 об/мин, или гомогенизатор (диспергатор) типа «Ultra turrax». Допускается использовать бытовой погружной блендер с плавной регулировкой скорости или миксер со скоростью насадки до 200 об/мин.

Гомогенизатор лабораторный или бытовой блендер.

Пленка «парафильм» или скотч.

Бумага фильтровальная ФБ-111 по ГОСТ 12026.

Шпатели пластиковые.

Штатив для пробирок.

1 Зам.

Пинетки Пастера.

Флаконы из темной пластмассы вместимостью 20 см³.

Пробирки для центрифугирования с крышкой (типа Эппендорф) из полипропилена вместимостью 2 см³ или 1,5 см³.

Пробирки полипропиленовые для центрифугирования вместимостью 15 см³, 50 см³.

Пробирки с завинчивающимися крышками из стекла или полистирола вместимостью 80 см³.

Пробирки стеклянные вместимостью 5 см³ или 10 см³ по ГОСТ 1770.

Колбы мерные вместимостью 100 см³, 1000 см³ типа 2-100-2, 2-1000-2 по ГОСТ 1770.

Колбы конические вместимостью 100 см³, 250 см³, 500 см³ типа Кп-Г 100-29/32 ТС, Кн-1-250-29/32 ТС, Кн-1-500-29/32 ТС по ГОСТ 25336.

Воропки типа В-56-80 ХС, В-75-110 ХС по ГОСТ 25336.

Стаканы II-1 - 100 или Н-1 - 150, Н-2-1000 по ГОСТ 25336.

Пипетки 1-2-5, 1-2-10, 1-2-20, 1-2-25 по ГОСТ 29169.

Цилиндры мерные вместимостью 25 см³, 50 см³, 250 см³ типа 3-25-2, 3-50-2,

3 250 2 по ГОСТ 1770.

Шприц-фильтр или шприц и фильтрующая насадка на шприц диаметром 15 мм и диаметром пор 0,45 мкм на основе целлюлозы.

Использование следующего оборудования ие является обязательным, но рекомендуется для увеличения производительности и повышения точности измерений:

•    инкубатор для микротитровальных планшетов, обеспечивающий поддержание температуры от плюс 20 °С до плюс 25 °С с точностью не более ± 1 °С;

•    устройство отмывки иммунологических планшетов автоматическое с диапазоном объемов моющего раствора, заливаемого в каждую микроюовсту от 100 мм³ до 350 мм³.

3.2 Реактивы

Метанол ч.д.а по ГОСТ 6995.

н-Гсксан ч. по [ 5 ].

Натрия фосфат двуосновной дигидрат (Na₂HP0₄-2H₂O), каталожный номер Fluka 71645 или натрий фосфорнокислый двузамещенный, 12-водный (Na₂HP0₄- 12Н₂0) ч.д.а по ГОСТ 4172.

Натрия фосфат одноосновной моногидрат (NaH₂P0₄-H₂O), каталожный номер Sigma-Aldrich 71504 или натрий фосфорнокислый однозамещенный, 2-водный (NaH₂P0₄-2H₂O) ч.д.а по ГОСТ 245.

Натрий хлористый ч.д.а. по ГОСТ 4233.

Натрия гидроокись х.ч. по ГОСТ 4328.

Кислота янтарная ч.д.а. по ГОСТ 6341.

Вода дистиллировать по ГОСТ 6709.

Лабораторный детергент, например Triton Х-100.

Набор (компоненты) для приготовления раствора для внесения добавок тетрациклина (spike-paствор), поставляемый производителем тест-систем и обеспечивающий соответствие требованиям п. 13.4.1.

Тест-система    Ridascreen ® Tetracyclin (артикул №R35Q5) производства

R-Biopharm AG,    Германия в составе    (таблица    5) или    тест-система

ПРОДОСКРИН^Тстрациклин по [3], производства Института биоорганической химии НАН Беларуси, каталожный № 149 - набор реактивов и микротитровальный планшет,

8

необходимые для выполнения измерений по определению концентрации антибиотиков группы тетрациклинов методом иммуноферментного анализа в составе (таблица 6). Таблица 5 - Состав тест-системы Ridascreen ® Tetracyclin для определения антибиотиков группы тетрациклинов

Компонент тест-системы | Количество в комплекте Микротитрональный планшет (12 стрипов по 8 лунок, покрыт ых конъюгатом тетрациклина с белком) 1 шт Концентраты для приготовления градуировочных растворов: водные растворы тетрациклина с концентрацией 0,0 мкг/дм3, 0,5 мкг/дм3, 1,5 мкг/дм3, 3,0 мкг/дм3, 6,0 мкг/дм3, 18,0 мкг/'дм3 6 шт. х 1,3 см" Конъюгат вторичных антител с пероксидазой (раствор, готовый к применению) 1 шт. х 10 см-’ Антитела к тетрациклину (раствор, готовый к применению) 1 шт. х 6 см3 Субстрат-/хромоген, раствор, окрашенный в красный цвет, содержит теграмстилбензидин 1 шт. х 10 см° Стоп-рсагент, содержит 1 н серную кислоту 1 ШТ. X 14 см3 Буфер №1, готовый к применению, используется для разбавления градуировочных растворов и растворов проб 1 ШТ. X 60 см3 Буфер №2, готовый к применению, используется для разбавления градуировочных растворов и растворов проб при анализе молочных продуктов 1 ШТ. X 60 см3 Моющий буфер, соль для приготовления 10 мМ фосфатного буфера (pH 7,4), содержит 0,05 % твина-20 1 уп.

Таблица 6 - Состав тест-системы ПРОДОСКРИН®Тетрациклин для определения антибиотиков группы тетрациклинов

Компонент тест-системы Количество в комплекте Микротитровальный планшет (12 стрипов по 8 лупок, покрытых конъюгатом тетрациклина с белком) 1 шт Концентраты для приготовления градуировочных растворов: водные растворы тетрациклина с концентрацией 0,0 мкг/дм3, 0,5 мкг/дм3, 1,5 мкг/дм3,3,0 мкг/дм3, 6,0 мкг/дм3, 18,0 мкг/дм3 6 шт. х 1,3 см3 Конъюгат анаши до в ых антител с пероксидазой (раствор, готовый к применению) 1 шт. х 10 см3 | Антитела к тетрациклину (раствор, готовый к применению) 1 ШТ. X 6 СМ3 Субстрат 1 шт. х 14 см3 ! Хромоген, раствор 3,3\5,5’-тетрамегилбензидина (ТМБ) 1 шт. х 0,7 см3 Стоп-реагент, содержит 1 н серную кислоту *2 о X Буфер №1. готовый к применению, используется для разбавления градуировочных растворов и растворов проб 1 ШТ. X 60 см3 Буфер №2, готовый к применению, используется для разбавления градуировочных растворов и растворов проб при анализе молочных 1 ШТ. X 60 см3 продуктов Моющий буфер, 10-кратный концентрат 1 ШТ. X 100 CMJ

1 Зам. 9

1

Зам.

2

'Результат измерений массопой концентрации антибиотиков группы тетрациклинов в яичном порошке относится к восстановленному согласно ГОСТ 30364.0 продукту

3

Зам.