Определение содержания фенольных и фурановых соединений в коньячных спиртах, коньяках и коньячной продукции методом высокоэффективной жидкостной

хроматографии Методика выполнения измерений

МВИ.МН 2665-2007

РАЗРАБОТАНО

Отделом испытаний пищевой и cjx продукции

Начальна к отдела

2?7_Г.В. Артеменко

2007

Содержание

X    Область применения....................... 4

2    Приписанные характеристики погрешности измерений..............................4

3    Метод измерений..................................... .6

4    Нормативные ссылки..................... 6

5    Термины и определения...................... 7

6    Метод отбора проб...........................................................................................7

7    Средства измерений, вспомогательное оборудование, материалы,

растворы........................................................ ...7

7.1    Средства измерений.......................................... 7

7.2    Вспомогательное оборудование и материалы....................................._....... 8

8    Условия измерений.................................. 9

9    Требования безопасности и требования к квалификации операторов........9

9.1    Требования безопасности..................................................................................9

9.2    Требования к квалификации операторов.........................................................10

10    Подготовка к выполнению измерений............ 10

10.1    Приготовление элюирующего раствора..........................................................10

10.2    Приготовление 50 % (по объему) раствора этилового спирта....................... 10

10.3    Приготовление градуировочных растворов.....................................................11

10.3.1    Приготовление многокомпонентного основного раствора «А» с массовой

концентрацией анализируемых компонентов приблизительно 100 мг/дм³ для каждого компонента........................................................................................................................................11

10.3.2    Приготовление многокомпонентных градуировочных растворов определяемых

компонентов......................................................................................................................................11

10.4    Подготовка хроматографа к работе............................................................... 12

10.5    Выполнение начальной градуировки............................... 12

10.6    Подготовка проб...................................................................... 12

11    Выполнение измерений.................................................................................13

11.1    Оперативный контроль стабильности градуировки.........................................13

11.2    Контроль чистоты системы.............................................................................13

11.3    Выполнение измерений пробы................................................ 14

11.4    Идентификация индивидуальных соединений..................................... 14

12    Обработка результатов измерений .................. 15

12.1    Расчет массовой концентрации определяемого компонента в пробе...............15

12.2    Односторонняя оценка массовой концентрации определяемого компонента в

продукте................... 16

12.3    Окончательный расчет результата измерений.................................................16

12.4    Проверка приемлемости результатов измерений, полученных в условиях

повторяемости.................. 16

12.5    Условие приемлемости результатов измерений..............................................17

12.6    Действия при невыполнении условия приемлемости    результатов измерений. 18

12.7    Проверка приемлемости результатов измерений, полученных в условиях

воспроизводимости..................................................................................................18

12.7.1    Условие приемлемости результатов измерений................................................................19

12.7.2    Действия при невыполнении условия приемлемости результатов измерений..............19

13    Оформление результатов измерений....................................... 20

13.1    Варианты представления результатов измерений...........................................20

13.1.1    Форма представления результатов измерения с использованием показателя

точности...................... 20

13.1.2    Форма представления результатов измерения с использованием расширенной

неопределенности.............. 20

13.1.3    Форма представления результатов в виде односторонней оценки массовой

концентрации определяемого компонента....................................................................................21

2

Cj - объемная доля этилового спирта, измеренная в соответствии с ГОСТ 3639, %;

С₂ - объемная доля этилового спирта, полученная после разбавления, %.

10.3 Приготовление градуировочных растворов

10.3.1    Приготовление многокомпонентного основного раствора «А» с массовой концентрацией анализируемых компонентов приблизительно 100 мг/дм³ для каждого компонента.

Навеску каждого компонента массой (0,0230 - 0,0270) г, взвешивают непосредственно в мерную колбу вместимостью 250 см³. Результат взвешивания фиксируют с точностью до 0,0001 г. В колбу с навесками добавляют (100- 120) см³ 50 % (по объему) раствора этилового спирта. Раствор хорошо перемешивают до полного растворения и доводят до метки раствором 50 % (по объему) этилового спирта при    t=(20 ± 2) °С. Точную концентрацию каждого

компонента в растворе рассчитывают с учетом содержания основного вещества по формуле

₌ ^А_{х10    (2)}

^А‘ У А

где С_л, - массовая концентрация i -го компонента в растворе А, мг/дм³; mj - масса навески i -го компонента, мг;

Pj - содержание основного вещества i -го компонента, %;

V_A - объем мерной колбы, см³.

Основной раствор хранят в холодильнике при температуре от 3 °С до 8 °С в течение 3 месяцев.

10.3.2    Приготовление многокомпонентных градуировочных растворов определяемых компонентов.

Готовят шесть градуировочных растворов путем разбавления основного раствора «А» согласно таблице 3.

И

Таблица 3 - Схема приготовления градуировочных растворов

Номер раствора Объем раствора А по п.10.2.1, см3 Концентрация* градуировочного раствора, мг/дм3 Объем градуировочных растворов, см3 1 0,5 0,5 100 2 1 1 100 3 5 5 100 4 10 10 100 5 20 20 100 6 50 50 о о

Точное значение концентрации основного компонента в градуировочных растворах рассчитывают с учетом точных значений концентраций компонента в основном растворе «А». Для проведения градуировки используют свежеприготовленные растворы.

10.4    Подготовка хроматографа к работе

Жидкостной хроматограф подготавливают к работе в соответствии с инструкциями фирмы-производителя оборудования.

Используют колонку и хроматографические условия в режиме градиентного элюирования, обеспечивающие удовлетворительное разделение многокомпонентной смеси анализируемых компонентов. Условия разделения приведены в Приложении А (рис. А.1). Для обеспечения повторяемости результатов разделение проводят при постоянной температуре колонки (35,0 ± 0,1)°С.

10.5    Выполнение начальной градуировки

Для определения рабочего диапазона концентраций и линейности функции градуировки выполняют начальную градуировку хроматографа. Ее выполняют для галловой кислоты, 5-гидроксиметилфурфурола, фурфурола, эллаговой кислоты по шести рабочим градуировочным растворам, для остальных определяемых компонентов - по пяти рабочим градуировочным растворам (№ 1-№ 5). Каждый раствор хроматографируют не менее двух раз. Градуировочная зависимость должна иметь вид у=Ьх. Параметры градуировочной зависимости рассчитывают путем анализа линейной регрессии скорректированных площадей пиков.

10.6    Подготовка проб

Отобранную и подготовленную по п.6 пробу фильтруют через систему шприц-фильтр в виалу для автосамплера. Подготовленная для измерения проба должна быть прозрачной.

12

11 Выполнение измерений

11.1    Оперативный контроль стабильности градуировки

Ежедневно перед началом измерений выполняют оперативный текущий контроль стабильности градуировочного графика. Для этого анализируют рабочий градуировочный раствор, концентрация которого должна быть не менее 20 % от концентрации максимального градуировочного раствора, хроматографируя его не менее двух раз. Первое измерение выбранного градуировочного раствора проводят перед началом выполнения анализа серии образцов. Если разница между измеренной концентрацией каждого компонента в выбранном градуировочном растворе и его фактической концентрацией по отношению к фактической концентрации, выраженная в процентах, нс превышает норматива стабильности градуировки К_ф, градуировка считается достоверной и можно переходить к анализу серии образцов по п.11.3. Если это требование не выполняется, то проводят повторную градуировку прибора.

Норматив стабильности градуировки составляет:

•    для диапазона концентраций от 0,2С_тах до 0,4С_тах (включительно) - 7 %;

•    для диапазона концентраций свыше 0,4С_тах до С_тах (включительно) -4 %, где С_тах- концентрация максимального градуировочного раствора.

После завершения анализа серии образцов проводят второе измерение выбранного градуировочного раствора, сравнивая результат измерений с нормативом стабильности градуировки так, как это описано выше. В случае невыполнения данного условия проводится повторное измерение выбранного градуировочного раствора. Если при этом полученные значения снова не удовлетворяют вышеприведенным требованиям, выявляют и устраняют причины несоответствия, а затем вновь проводят измерения серии образцов.

При проведении измерений с ручным вводом образцов серия состоит из 6-10 образцов. При проведении измерений с вводом пробы автосамплером серия состоит из 10-15 образцов.

11.2    Контроль чистоты системы

Для контроля степени чистоты реактивов и правильности работы хроматографа, а также для предотвращения появления ложноположительных пиков необходимо проводить измерение «холостой» пробы. Измерение «холостой» пробы

13

проводят после измерения градуировочного раствора при проверке стабильности градуировки, а также после выполнения анализа серии образцов. В качестве «холостой» пробы используют 50 % (по объему) раствор этилового спирта, прошедшего процедуру пробоподготовки. Если в «холостой» пробе обнаруживают любое из анализируемых компонентов, выявляют причины и устраняют любые источники загрязнения.

11.3    Выполнение измерений пробы

Проводят измерение подготовленной по п. 10.6 пробы.

Проба хроматографируется не менее 2-х раз. Пики компонентов в пробе должны быть правильно проинтегрированы, при необходимости результаты интегрирования площади пика корректируют. Если рассчитанная массовая концентрация компонента в испытуемой пробе превышает верхнюю границу диапазона градуировки, пробу разбавляют раствором этилового спирта, приготовленного по п. 10.2 и повторяют измерение.

11.4    Идентификация индивидуальных соединений

При отсутствии пика определяемого компонента на характеристическом времени удерживания делают вывод, что данный компонент в пробе отсутствует.

Если время удерживания определяемого компонента на хроматограмме анализируемой пробы совпадает с временем удерживания определяемого компонента градуировочного раствора, то предполагают, что данный компонент в пробе присутствует.

Для дополнительной идентификации определяемого компонента результат подтверждают сравнением спектра поглощения определяемого компонента в анализируемой пробе с данными спектральных библиотек для определяемого компонента. Рекомендуемые параметры создания спектральных библиотек приведены в Приложении А (рис. А.2).

Одновременно необходимо оценить возможность присутствия загрязняющих примесей в определяемом компоненте по чистоте пика с помощью статистического анализа, выполняемого программным обеспечением ChemStation путем автоматического сопоставления спектрограмм.

Значения Match factor в диапазоне 900-990 свидетельствуют о некотором

спектральном сродстве идентифицируемых компонентов. Все значения ниже 900

означают, что рассматриваются две спектрограммы различных веществ. Условия

14

проведения спектрометрического анализа пика на чистоту компонента приведены в Приложении А (рис. А.З-А.7).

Заключение о присутствии искомого компонента в пробе можно сделать только в случае, если величина показателя качества совпадения спектров (Match factor) по результатам анализа спектрограмм находится в интервале 990-1000.

Примечание: для проведения идентификации индивидуальных соединений необходимо изучить раздел «Освоение методов спектрального анализа» инструкции ChemStalion жидкостного хроматографа.

12 Обработка результатов измерений

12.1 Расчет массовой концентрации определяемого компонента в пробе

Массовую концентрацию г-го компонента в пробе, выраженную в мг/дм³, рассчитывают по формуле

С<=С_Х,*К,    (3)

где C_xi - концентрация /-го компонента, полученная по градуировочной кривой, мг/дм³;

К - коэффициент разбавления, рассчитываемый по формуле

где V_a - объем исходного раствора пробы, см³;

Ур - объем разбавленного раствора пробы, см³.

Программное обеспечение ChemStation для расчета концентрации компонентов в испытуемой пробе использует модель невзвешенной линейной регрессии вида Yj=bj*C_xi.

Массовая концентрация /-го компонента рассчитывается программным обеспечением по формуле

Cxi~.    (5)

щ

где yi - площадь /-го пика, mAU xS;

bj - коэффициент линейной регрессии для /-го пика, mAU xS х дм³/мг.

15

Расчет массовой концентрации /-го компонента производится до третьего десятичного знака.

12.2    Односторонняя оценка массовой концентрации определяемого компонента в продукте

Если величина С, оказывается меньше предела измерения методики C_!0Q, то

вычисления по п.12.1 не производятся, а дается односторонняя оценка массовой концентрации / -го компонента в пробе, мг/дм³, в виде:

Cf ^< C[_OQ 5

где C_IOQ - нижний предел измерения методики.

Предел измерения методики составляет:

•    С_10в =0,1 мг/дм³ для всех определяемых компонентов за исключением эллаговой кислоты;

•    Cloq =0=2 мг/дм³ для эллаговой кислоты.

12.3    Окончательный расчет результата измерений

За окончательный результат измерений принимают среднее арифметическое значение результатов двух параллельных измерений при выполнении условия повторяемости по п.12.4.

_ С +С

(6)

где С_п>С_:1 - результаты параллельных определений массовой концентрации /-го компонента, в пробе, мг/дм³.

Окончательный результат округляют до второго десятичного знака.

12.4    Проверка приемлемости результатов измерений, полученных в условиях повторяемости

Проверку приемлемости результатов измерений, полученных в условиях повторяемости, проводят в соответствии с требованиями ГОСТ ИСО 5725-6-2002.

При выполнении измерений по п. И .3 получают два параллельных результата единичных наблюдений анализируемой пробы в условиях повторяемости. За результат измерений принимают среднее арифметическое значение двух результатов единичных наблюдений, расхождение между которыми не превышает установленного предела повторяемости.

16

Проверку приемлемости проводят следующим образом.

Рассчитывают абсолютное расхождение между резз'льтатами единичных наблюдений |С,-С_г|, значение которого сравнивают с абсолютным значением предела повторяемости г_абс. Абсолютное значение предела повторяемости , мг/дм³, рассчитывают по формуле

^=0,01 -г_пти.С,    (7)

где 0,01 - коэффициент для пересчета процентов;

С - среднее арифметическое значение двух результатов единичных наблюдений, мг/дм³;

г_тт - относительное значение предела повторяемости, %, указанное в таблице 4.

Таблица 4 - Относительные значения пределов повторяемости

Диапазон измерений, мг/дм3 Интервал значений массовой концентрации, мг/дм3 Предел повторяемости г, % (для двух результатов единичных наблюдений) Галловая кислота От 0,10 до 10,00 включительно 6 Св. 10,00 до 50,00 включительно 4 5-гидроксиметил- От 0,10 до 35,00 включительно 5 фурфурол Св. 35,00 до 250,00 включительно 3 Фурфурол От 0,10 до 10,00 включительно 6 Св. 10,00 до 50,00 включительно 4 4-гидроксибенз- альдегид Ванилиновая кислота 5-метил фурфурол Сиреневая кислота Ванилин От 0,10 до 4,00 включительно 8 Сиреневый альдегид n-кумаровая кислота Синаповая кислота Конифериловый альдегид Синаповый альдегид Св. 4,00 до 20,00 включительно 4 Элаговая кислота От 0,20 до 10,00 включительно 9 Св. 10,00 до 50,00 включительно 6

12.5 Условие приемлемости результатов измерений

Если для значения абсолютного расхождения между двумя результатами единичных наблюдений выполняется условие

|С, С₂| < г_дбс,

1/

то оба результата считают приемлемыми и в качестве результата измерений указывают среднее арифметическое значение С, рассчитанное по формуле (6).

12.6 Действия при невыполнении условия приемлемости результатов измерений

При невыполнении условия п. 12.5 проводятся повторные измерения согласно разделу И.

12.7 Проверка приемлемости результатов измерений, полученных в условиях воспроизводимости

Проверку приемлемости результатов измерений, полученных в условиях воспроизводимости, проводят в соответствии с требованиями ГОСТ ИСО 5725-6 следующим образом.

Каждая из двух лабораторий проводит измерения в соответствии с разделом L1 и получает результат измерений, обеспечивая контроль повторяемости по п. 12.4.

Рассчитывают среднее арифметическое значение С, мг/дм³, результатов измерений двух лабораторий С\ и С₂ соответственно

2

Рассчитывают абсолютное расхождение между результатами измерений |Ci —Сг|, полученными в двух лабораториях, значение которого сравнивают с абсолютным значением предела повторяемости R_a6c, Абсолютное значение предела повторяемости R_в6с, мг/дм³ рассчитывают по формуле

^'0.01-^,-С,    (10)

где 0,01 - коэффициент для пересчета процентов;

С - среднее арифметическое значение результатов измерений двух лабораторий, мг/дм'*;

R_om - относительное значение предела воспроизводимости, %, указанное в таблице 5.

18

Таблица 5 -Относительные значения пределов воспроизводимости

Диапазон измерений, мг/дм3 Интервал значений массовой концентрации, мг/дм3 Предел воспроизводимости R ,% (для двух результатов измерений) Галловая кислота От 0Д0 до 10,00 включительно 18 Св. 10,00 до 50,00 включительно 11 5-гидроксиметил- фурфурол От 0,10 до 35,00 включительно 14 Св. 35,00 до 250,00 включительно 8 Фурфурол От 0,10 до 10,00 включительно 18 Св. 10,00 до 50,00 включительно И 4- гидроксибенз-альдегид Ванилиновая кислота 5- метилфурфурол Сиреневая кислота Ванилин Сиреневый альдегид п-кумаровая кислота Синаповая кислота Конифериловый альдегид Синаповый альдегид От 0,10 до 4,00 включительно Св. 4,00 до 20,00 включительно 20 13 Элаговая кислота От 0,20 до 10,00 включительно 22 Св. 10,00 до 50,00 включительно 16

12.7.1    Условие приемлемости результатов измерений

Если для значения абсолютного расхождения между двумя результатами двух лабораторий выполняется условие

|Ct-C₂| S R_fl6c,    (11)

то оба конечных результата, полученные двумя лабораториями считаются

приемлемыми и общее среднее значение С, рассчитанное по формуле (9), может быть использовано в качестве заявляемого результата.

12.7.2    Действия при невыполнении условия приемлемости результатов измерений При превышении предела воспроизводимости для разрешения различий между

результатами, полученными двумя лабораториями, целесообразно использовать процедуры, указанные в разделе 5 ГОСТ ИСО 5725-6-2002.

19

13 Оформление результатов измерений

13.1    Варианты представления результатов измерений

13.1.1    Форма представления результатов измерения с использованием показателя точности

Результат измерений представляется в следующем виде

(с ± д), мг/дм¹ (при доверительной вероятности Р = 0,95), где С - результат измерений, мг/дм¹, полученный в соответствии с настоящей методикой и рассчитанный согласно разделу 12;

±Л -■ абсолютное значение показателя точности настоящей методики, мг/дм¹. Абсолютное значение показателя точности Д, мг/дм¹, рассчитывают, используя относительное значение показателя точности настоящей методики 5, %, указанное в таблице 2 по формуле

Д = 0,01-<5-С,    (12)

где 0,01 - коэффициент для пересчета процентов;

С - среднее арифметическое значение двух результатов единичных наблюдений, мг/дм¹.

13.1.2    Форма представления результатов измерения с использованием расширенной неопределенности

Результат измерений, выдаваемый лабораторией, может быть представлен в

виде

(С ± 47(C)), мг/дм¹

(при доверительной вероятности Р = 0,95), где С - результат измерений, мг/дм¹, полученный в соответствии с настоящей методикой и рассчитанный согласно разделу 12;

47(C) - расширенная неопределенность результата измерений С, мг/дм¹. Расширенную неопределенность результата измерений 47(C), мг/дм¹, рассчитывают по формуле

ЩС) = К-и_е(0,    03)

где К - коэффициент охвата, равный 2 при доверительной вероятности Р = 0,95;

20

14 Контроль качества результатов измерений................................................21

14.1    Проведение оперативного контроля качества с использованием метода

добавок.....................................................................................................................21

14.1.1    Проведение контрольной процедуры..................................................................................21

14.1.2    Расчет результата контрольной процедуры    К_к.................................................................22

14.1.3    Расчет норматива контроля К............................................................................................23

14.1.4    Реализация решающего правила контроля и принятие решений по результатам

контроля........................ 24

Приложение А (обязательное) Хроматографические условии и параметры настройки детектора..............................................................................................25 ¹

и_е(С) - суммарная стандартная неопределенность результата измерений С,

мг/дм¹

13.1.3 Форма представления результатов в виде односторонней оценки массовой концентрации определяемого компонента

Если величина массовой концентрации определяемого компонента С оказывается меньше предела измерения методики С_Шб, то дается односторонняя оценка массовой концентрации определяемого компонента по п. 12.2, мг/дм¹, в виде

С < С loo >

где C_i0Q ~ нижний предел измерения методики.

14 Контроль качества результатов измерений

Контроль качества результатов измерений при использовании методики в лаборатории предусматривает выполнение оперативного контроля путем оценки соответствия погрешности результатов измерений установленным нормативам при реализации конкретных процедур.

14.1 Проведение оперативного контроля качества с использованием метода добавок

Оперативный контроль процедуры измерений по методике предусматривает:

•    проведение контрольной процедуры с использованием метода добавок;

•    расчет результата контрольной процедуры К_к;

•    расчет (установление) норматива контроля К;

•    реализацию решающего правила контроля (сопоставление результата контрольной процедуры с нормативом контроля);

•    принятие решений по результатам контроля.

При проведении оперативного контроля процедуры измерений с применением метода добавок средствами контроля являются стабильные рабочие пробы и эти же пробы с известной добавкой определяемого компонента.

14.1.1Проведение контрольной процедуры

Оперативный контроль процедуры измерений выполняется в порядке и с периодичностью, установленными системой менеджмента качества лаборатории.

21

Область применения

Настоящий документ устанавливает методику измерения массовой концентрации фенольных и фурановых соединений методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с использованием для регистрации диодно-матричного детектора.

Перечень компонентов, определяемых в соответствии с данной методикой: галловая кислота, 5-гидроксиметилфурфурол, фурфурол, 4-гидроксибензальдегид, ванилиновая кислота, 5-метилфурфурол, сиреневая кислота, ванилин, сиреневый альдегид, п-кумаровая кислота, синаповая кислота, конифериловый альдегид, синаповый альдегид, эллаговая кислота.

Область действия методики распространяется на коньячный спирт, коньяк и коньячную продукцию.

Диапазоны измерений методики для каждого компонента приведены в таблице 1.

Таблица 1 - Диапазоны измерений методики

Определяемое соединение Диапазон измерений, мг/дм3 4-гидроксибензальдегид, ванилиновая кислота, 5-метилфурфурол, сиреневая кислота, ванилин, сиреневый альдегид, п-кумаровая кислота, синаповая кислота, конифериловый альдегид, синаповый альдегид 0,10-20,00 галловая кислота, фурфурол о о о" ^г> 1 о о 5-гидроксиметилфурфурол 0,10-250,00 эллаговая кислота 0,20-50,00

Предел измерений методики (LOQ) составляет 0,10мг/дм³ для всех анализируемых соединений, для эллаговой кислоты - 0,20 мг/дм³.

2 Приписанные характеристики погрешности измерений

Настоящая методика обеспечивает измерение массовой концентрации фенольных и фурановых соединений в указанном выше диапазоне с приписанными характеристиками погрешности, указанными в таблице 2.

4

Таблица 2 - Относительные значения показателей повторяемости, воспроизводимости, правильности и точности

Диапазон измерений, Интервал значений массовой Показатель Показатель Показатель Показатель мг/дм3 концентрации, мг/дм3 повторяемости (среднее воспроизводи-мости (среднее правильности (границы, в которых точности (границы, в квадратическое квадратическое находится которых отклонение отклонение неисключенная находится повторяемости) воспроизводи- систематическая погрешность о-г,% мости) <тр,% погрешность методики) ± бс,% методики) ± 6,% Галловая кислота От 0,10 до 10,00 включительно 2 6 6 14 Св. 10,00 до 50,00 включительно 1 4 4 9 5-гидроксиметил- От 0,10 до 35,00 включительно 2 5 5 11 фурфурол Св. 35,00 до 250,00 включительно 1 3 3 б Фурфурол От 0,10 до 10,00 включительно 2 6 6 14 Св. 10,00 до 50,00 включительно 1 4 4 9 4- гидроксибенз-альдегид Ванилиновая кислота 5- метилфурфурол Сиреневая кислота Ванилин От 0,10 до 4,00 включительно 3 7 7 16 Сиреневый альдегид п-кумаровая кислота Синаповая кислота Конифериловыи альдегид Синаповый альдегид Св. 4,00 до 20,00 включительно 2 5 5 11 Элаговая кислота От 0,20 до 10,00 включительно 3 8 7 17 Св. 10,00 до 50,00 включительно 2 б 5 13

5

Если содержание определяемого компонента в пробе выходит за верхнюю границу диапазона измерений, допускается разбавление подготовленного к измерению образца, при этом метрологические характеристики следует брать для массовой концентрации компонента, полученной в разбавленной пробе.

3 Метод измерений

Смесь фенольных и фурановых соединений разделяется на хроматографической колонке с использованием градиентной системы элюирования. Идентификация и количественное определение компонентов осуществляется с помощью диодно-матричного детектора по величине сигнала абсорбции, интегрированного по времени. Дополнительная идентификация компонентов проводится спектральным методом.

4 Нормативные ссылки

Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия

Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки с одной отметкой

Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные.

Часть 1. Общие требования

Вода дистиллированная. Технические условия

Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы,

основные параметры и размеры

Весы лабораторные. Общие технические требования

Реактивы. Кислота уксусная. Технические условия Система стандартов безопасности труда. Пожарная безопасность. Общие требования

Система стандартов безопасности труда. Оборудование производственное. Общие требования безопасности Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений.

Часть 6 Использование значений точности на практике Спирт этиловый ректификованный из пищевого сырья. Технические условия

Растворы водно - спиртовые. Методы определения концентрации этилового спирта

Продукты винодельческой промышленности. Правила приемки и методы отбора проб ²

5 Термины и определения

В настоящей методике применяют следующие термины с соответствующими определениями:

Предел измерения - наименьшее значение массовой концентрации определяемого компонента, которое может быть измерено с установленной точностью в соответствии с данной методикой.

Диапазон измерений - область значений массовой концентрации компонента в пробе, определяемая по данной методике.

6    Метод отбора проб

Количество пробы, необходимое для определения фенольных и фурановых соединений в коньячных спиртах, коньяках и коньячной продукции, регламентируется СТБ 1384.

7    Средства измерений,    вспомогательное оборудование, материалы,

растворы

7.1    Средства измерений

Высокоэффективный жидкостной хроматограф Hewlett Packard PIP 1100, который включает:

-    бинарный насос с вакуумным дегазатором; термостат колонок;

-    диодно-матричный детектор (диапазон длин волн 190-950 нм); автосамплер;

система управления и обработки данных HP ChemStation;

аналитическая хроматографическая колонка LichroCART 250-4 Superspher 100

RP-18.

Весы лабораторные электронные Mettler Toledo АХ204, диапазон взвешивания (0,0100 - 220,0000) г, погрешность взвешивания 0,0003 г.

Иономер универсальный ЭВ-74, диапазон измерений от -1 pH до 19 pH, погрешность 0,05рН в комплекте с электродами.

Пипетки с одной меткой 2-2-5, 2-2-10,2-2-20, 2-2-50 по ГОСТ 29169. Пипетки градуированные 1-2-1 по ГОСТ 29227.

7

Колбы мерные 2-100-2, 2-250-2, 2-1000-2 по ГОСТ 1770.

Примечание:    допускается    использование других аналитических хроматографических

колонок, позволяющих получить удовлетворительное разделение фенольных и фурановых соединений коньячной продукции.

7.2 Вспомогательное оборудование и материалы

Баня ультразвуковая Sonorex super RK 510 Н.

Фильтры мембранные из регенерированной целлюлозы d=47 мм, d_nop=0,45 мкм.

Фильтры мембранные из регенерированной целлюлозы d^25 мм, d_nop=0,25 мкм.

Шприц медицинский, вместимостью 5 см³.

Виалы для автосамплера объемом 2 см³.

7.3. Реактивы

Галловая кислота, производитель Sigma-Aldrich, содержание основного вещества не менее 96,0 %.

5-гидроксиметилфурфурол, производитель Sigma-Aldrich, содержание основного вещества не менее 96,0 %.

Фурфурол, производитель Sigma-Aldrich, содержание основного вещества не менее 96,0 %.

4- гидроксибензальдегид, производитель Sigma-Aldrich, содержание основного вещества не менее 96,0 %.

Ванилиновая кислота, производитель Sigma-Aldrich, содержание основного вещества не менее 96,0 %.

5- метилфурфурол, производитель Sigma-Aldrich, содержание основного вещества не менее 96,0 %.

Сиреневая кислота, производитель Sigma-Aldrich, содержание основного вещества не менее 96,0 %.

Ванилин, производитель Sigma-Aldrich, содержание основного вещества не менее 96,0 %.

Сиреневый альдегид, производитель Sigma-Aldrich, содержание основного вещества не менее 96,0 %.

п-Кумаровая кислота, производитель Sigma-Aldrich, содержание основного вещества не менее 96,0 %.

Синаповая кислота, производитель Sigma-Aldrich, содержание основного вещества не менее 96,0 %,

8

Конифериловый альдегид, производитель Sigma-Aldrich, содержание основного вещества не менее 96,0 %.

Синаповый альдегид, производитель Sigma-Aldrich, содержание основного вещества не менее 96,0 %.

Эллаговая кислота, производитель Sigma-Aldrich, содержание основного вещества не менее 96,0 %.

Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.

Метанол т.м. «MERCK» для ВЭЖХ.

Кислота уксусная ледяная, хл. по ГОСТ 61.

Спирт этиловый ректификованный из пищевого сырья высшей очистки по СТБ 1334.

Примечание: допускается использование других средств измерений, вспомогательного оборудования, материалов и реактивов с техническими и метрологическими характеристиками не хуже указанных.

8    Условия измерений

При выполнении измерений в лаборатории должны быть соблюдены следующие условия:

•    температура окружающего воздуха 18 °С - 25 °С;

•    относительная влажность воздуха 50 % - 75 %.

Помещения для проведения измерений должны быть оснащены приточновытяжной вентиляцией и подводкой воды.

9    Требования безопасности и требования к квалификации операторов

9,1 Требования безопасности

При выполнении работ персонал должен знать и строго соблюдать на рабочем месте требования:

•    электробезопасности по ГОСТ 12.2.003;

•    пожарной безопасности по ГОСТ 12.1.004;

•    техники безопасности при работе в химической лаборатории;

•    техники безопасности, изложенные в эксплуатационных документах на средства измерений и оборудование, применяемые при проведении измерений. ³

9.2 Требования к квалификации операторов

К выполнению измерений и обработке результатов хроматографического анализа могут быть допущены лица, имеющие высшее специальное образование, опыт работы в области жидкостной хроматографии, изучившие руководство по эксплуатации жидкостного хроматографа, инструкцию по использованию системы обработки хроматографических данных и раздел «Освоение методов спектрального анализа» инструкции ChemStation жидкостного хроматографа.

10 Подготовка к выполнению измерений

Перед началом измерений необходимо выполнить следующие операции: приготовить элюирующий и градуировочные растворы, подготовить хроматограф к работе, выполнить начальную градуировку прибора, приготовить пробу для измерения.

10.1    Приготовление элюирующего раствора

Элюирующий раствор В (0.5 % водный раствор уксусной кислоты"»

Пипеткой отбирают 5 см³ ледяной уксусной кислоты (плотность 1,055 г/см³), переносят в мерную колбу вместимостью 1 дм³, содержащую 400 см³-500 см³ дистиллированной воды, хорошо перемешивают и доводят до метки дистиллированной водой. pH приготовленного элюирующего раствора В должен находится в диапазоне 2,95-3,05.

Элюирующий раствор А

В качестве элюирующего раствора А используется метанол. Перед применением все растворы фильтруют через фильтр из регенерированной целлюлозы с диаметром 47 мм, диаметром пор 0,45 мкм.

10.2    Приготовление 50 % (по объему) раствора этилового спирта

1 дм³ 50 % (по объему) раствора этилового спирта готовят путем разбавления спирта этилового ректификованного из пищевого сырья высшей очистки по СТБ 1334. Объем этилового спирта, необходимый для разбавления, рассчитывают по формуле

где V₂ - исходный объем этилового спирта, взятый для разбавления, см³;

V! - объем приготавливаемого 50 % (по объему) этилового спирта, см³;

10

1

2

3