Изменение №1 к ГОСТ Р 55576-2013

ОКС 65.120

Изменение № 1 ГОСТ Р 55576-2013 Корма и кормовые добавки. Метод качественного определения регуляторных последовательностей в геноме сои и кукурузы

Утверждено и вводено в действие Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 17.10.2016 № 1416-ст

Дата введения — 2017—07—01

Раздел 1. Заменить слова: «генетически-модифицированной» на «генетически модифицированной» (2 раза).

Раздел 2. Заменить ссылки:

«ГОСТ Р ИСО 6497-2011 Корма для животных. Отбор проб» на «ГОСТ ISO 6497-2014 Корма. Отбор проб»;

ГОСТ ISO 7218-2011 на ГОСТ ISO 7218-2015; исключить ссылку:

«ГОСТ Р 51652-2000 Спирт этиловый ректификованный из пищевого сырья. Технические условия».

дополнить ссылкой:

«ГОСТ 5962-2013 Спирт этиловый ректификованный из пищевого сырья. Технические условия».

для ГОСТ Р 52173-2003 заменить слова: «генетически-модифицированных» на «генетически модифицированных».

Пункт 5.2 изложить в новой редакции:

«5.2 При проведении испытаний применяют оборудование и материалы по ГОСТ 31719, а также следующие реагенты:

-    комплект реагентов для выделения ДНК*:

буфер для лизирующего реагента, содержащий гуанидин хлорид. 1мМ Трис-HCI. 12мМ ЭДТА; лизирующий реагент: протеиназа К.

раствор для отмывки 1: гуанидин тиоционат, 1мМ Трис-HCI, 12мМ ЭДТА: раствор для отмывки 2: 50 %-ный этиловый спирт;

сорбент универсальный: диоксид кремния с примесями оксидов алюминия, кальция, железа, натрия и калия. HCI;

буфер для элюции ДНК: ТЕ-буфер с pH 8.0 ед.рН;

-    ПЦР-комплект для выявления ДНК генетически модифицированной сои:

ПЦР-смесъ-1: смесь специфичных праймеров и флуоресцентных зондов согласно таблице. 0.4— О.бмМ дНТФ. кратность смеси 2,5х;

ПЦР-буфер: О.ЗМ Трис-HCI (pH 8.3 ед.рН). 30-180мМ AmSO,, 10-25мМ MgS0₄, глицерин; полимераза (TaqF): полимераза (TaqF) химически модифицированная для обеспечения горячего старта;

положительный контрольный образец (ПКО ГМ соя), состоящий из участков последовательности регуляторных конструкций и содержащий места посадки праймеров и флуоресцентных зондов ПЦР-смеси-1. Положительный контроль ПЦР должен давать положительный сигнал по всем используемым каналам флуоресцентной детекции;

отрицательный контрольный образец (ОКО): ТЕ-буфер для элюции ДНК. Отрицательный контроль экстракции не должен давать положительный сигнал по всем используемым каналам флуоресцентной детекции;

-    «ПЦР-комплект» для выявления ДНК генетически модифицированной кукурузы:

ПЦР-смесъ-1: смесь специфичных праймеров и флуоресцентных зондов согласно таблице. 0.4—

О.бмМ дНТФ. кратность смеси 2.5х:

ПЦР-буфер: О.ЗМ Трис-HCI (pH 8,3 ед.рН). 30-180мМ AmSO,., 10-25 мМ MgS0₄, глицерин; полимераза {TaqF): полимераза (TaqF) химически модифицированная для обеспечения горячего старта;

положительный контрольный образец (ПКО ГМ кукуруза), состоящий из участков последовательности регуляторных конструкций и содержащий места посадки праймеров и флуоресцентных зондов ПЦР-смеси-1. Положительный контроль ПЦР должен давать положительный сигнал по всем используемым каналам флуоресцентной детекции;

* Данный комплект реагентов является рекомендуемым и приведен для удобства пользователей настоящего стандарта.

1 (Продолжение Изменения № 1 к ГОСТ Р 55576—2013)

отрицательный контрольный образец (ОКО): ТЕ-буфер для элюции ДНК. Отрицательный контроль экстракции не должен давать положительный сигнал по всем используемым каналам флуоресцентной детекции».

Пункт 7.3. Заменить ссылку: ГОСТ Р 51652 на ГОСТ 5962.

Пункт 7.4. Заменить ссылку: ГОСТ Р ИСО 6497 на ГОСТ ISO 6497.

Пункт 10.1.1 изложить в редакции:

«10.1.1 Постановка ПЦР

Размораживают необходимое количество пробирок с ПЦР-смесью-1 (ГМ соя/ГМ кукуруза). Перемешивают на встряхивателе и сбрасывают капли с помощью кратковременного центрифугирования в течение 1—3 с.

Для проведения одной реакции в пробирку вносят 10 мм³ ПЦР-смеси-1, 5 мм³ ПЦР-буфера и 0.5 мм³ полимеразы (TaqF). Смесь перемешивают на встряхивателе. осаждая кратковременным центрифугированием. затем вносят по 15 мм³ смеси в микропробирки вместимостью 0.2 см³. Используя наконечник с аэрозольным барьером, в подготовленные пробирки добавляют по 10 мм³ ДНК испытуемых образцов, избегая попадания универсального сорбента в реакционную смесь.

Ставят контрольные реакции амплификации:

-    отрицательный контрольный образец (К-) — вместо ДНК-пробы вносят в пробирку 10 мм³ ТЕ-буфера;

-    положительный контрольный образец (К*) — вносят в пробирку 0.01 см³ ПКО ГМ соя/ПКО ГМ кукуруза.

Общий объем реакции — 25 мм³, объем ДНК-пробы — 10 мм³».

(ИУС No 1 2017 г.)

2