ФЕДЕРАЛЬНОЕ АГЕНТСТВО ПО ТЕХНИЧЕСКОМУ РЕГУЛИРОВАНИЮ И МЕТРОЛОГИИ

НАЦИОНАЛЬНЫЙ

СТАНДАРТ

РОССИЙСКОЙ

ФЕДЕРАЦИИ

ВОЗДУХ ЗАМКНУТЫХ ПОМЕЩЕНИЙ

Часть 16

Обнаружение и подсчет плесневых грибков. Отбор проб фильтрованием

ISO 16000-16:2008

Indoor air — Part 16: Detection and enumeration of moulds — Sampling by filtration

(IDT)

Издание официальное

ГОСТ Р ИСО 16000-16-2012

Предисловие

1    ПОДГОТОВЛЕН Автономной некоммерческой организацией «Научно-исследовательский центр контроля и диагностики технических систем» (АНО «НИЦ КД») на основе собственного аутентичного перевода на русский язык международного стандарта, указанного в пункте 4

2    ВНЕСЕН Техническим комитетом по стандартизации ТК 457 «Качество воздуха»

3    УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 8 ноября 2012 г. № 694-ст

4    Настоящий стандарт идентичен международному стандарту ИСО 16000-16:2008 «Воздух замкнутых помещений. Часть 16. Обнаружение и подсчет плесневых грибков. Отбор проб фильтрованием» (ISO 16000-16:2008 «Indoor air — Part 16: Detection and enumeration of moulds — Sampling by filtration».

При применении настоящего стандарта рекомендуется использовать вместо ссылочных международных стандартов соответствующие им национальные стандарты Российской Федерации, сведения о которых приведены в дополнительном приложении ДА

5    ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

Правипа применения настоящего стандарта установлены в ГОСТ Р 1.0-2012 (раздел 8). Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодном (по состоянию на 1 января текущего года) информационном указателе «Национальные стандарты». а официальный текст изменений и поправок — в ежемесячном информационном указателе «Национальные стандарты». В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ближайшем выпуске ежемесячного информационного указателя « Национальные стандарты». Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования — на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет (gost.ru)

© Стандартинформ. 2015

Настоящий стандарт не может быть полностью или частично воспроизведен, тиражирован и распространен в качестве официального издания без разрешения Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии

ГОСТ Р ИСО 16000-16-2012

Содержание

1    Область применения...................................................1

2    Нормативные ссылки...................................................1

3    Термины и определения.................................................1

4    Общие положения....................................................2

5    Оборудование и принадлежности...........................................3

5.1    Устройство отбора проб..............................................3

5.2    Принадлежности...................................................3

6    Методика измерений...................................................3

6.1    Подготовка к отбору проб.............................................3

6.2    Отбор проб......................................................5

6.3    Продолжительность отбора проб........................................5

6.4    Транспортирование и хранение проб......................................5

7    Эффективность отбора проб и ограничения метода...............................6

8    Градуировка оборудования по расходу воздуха и техническое обслуживание системы отбора

проб.............................................................6

8.1    Градуировка оборудования по расходу воздуха...............................6

8.2    Техническое обслуживание............................................6

9    Обеспечение качества..................................................6

10    Протокол отбора проб.................................................6

11    Характеристики эффективности...........................................7

Приложение А (справочное) Извлечение спор при использовании желатиновых фильтров в сочетании с поликарбонатными......................................8

Приложение В (справочное) Техническое описание подходящего устройства для фильтрования. .10

Приложение С (справочное) Протокол отбора проб................................12

Приложение D (справочное) Испытания с целью валидации..........................14

Приложение ДА (справочное) Сведения о соответствии ссылочных международных стандартов

ссылочным национальным стандартам Российской Федерации..............18

Библиография........................................................19

Введение

Плесень — общее название нитевидных грибков, принадлежащих к различным таксономическим группам (Зигомицеты, Аскомицеты [отдел Аскомикота), дейтеромицеты). Они образуют мицелий (гифы) и споры, а именно: конидиоспоры (конидии), спорангиоспоры или аскоспоры. по которым их можно визуально обнаружить с помощью микроскопа. Размер большинства спор составляет от 2 до Юмкм, некоторые имеют диаметр до 30 мкм, и совсем небольшое число достигает диаметра 100 мкм. Споры грибков некоторых видов очень малы и легко попадают в воздух (например, аспергилл, пенициллин), а других — имеют большие размеры и/или покрыты слизью (стахиботрикс, фузариум) и не так подвижны.

Споры грибков широко распространены в окружающей среде, поэтому в различном количестве они встречаются и в замкнутых помещениях. Рост плесени 8 замкнутых помещениях следует рассматривать как проблему, касающуюся здоровья населения, поскольку результаты эпидемиологических исследований подтвердили тесную взаимосвязь между влажностью и/или ростом плесени в домах и ухудшением здоровья их обитателей.

Стандартизованные методы отбора проб, обнаружения и подсчета плесневых грибков, в том числе стандарты, устанавливающие методы отбора проб, необходимы для получения результатов с целью сравнения их с пределами допускаемых значений, установленных для содержания плесневых грибков в замкнутых помещениях. Перед проведением каких-либо измерений необходимо разработать их методику.

Методика, установленная в настоящем стандарте, основана на VDI4252-2 (7). широко используемом для обнаружения и подсчета плесневых грибков в атмосферном воздухе, и адаптированном для воздуха замкнутых помещений.

IV

ГОСТ Р ИСО 16000-16-2012

НАЦИОНАЛЬНЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

ВОЗДУХ ЗАМКНУТЫХ ПОМЕЩЕНИЙ

Часть 16

Обнаружение и подсчет плесневых грибков.

Отбор проб фильтрованием

Indoor air. Part 16. Detection and enumeration of moulds. Sampling by filtration

Дата введения — 2013—12—01

1    Область применения

В настоящем стандарте установлены требования к долговременному (от 0,5 ч до нескольких часов) отбору проб воздуха в замкнутых помещениях для улавливания плесневых грибков методом фильтрования. В соответствии с приведенными требованиями отбирают пробу воздуха для последующего обнаружения в ней плесневых грибков путем их культивирования после суспендирования в соответствии с ИСО 16000-17. являющимся частью полной методики измерений.

Настоящий стандарт не применяют при индивидуальном отборе проб.

ПРЕДУПРЕЖДЕНИЕ — При применении настоящего стандарта может потребоваться использование опасных материалов, действий и оборудования. В настоящем стандарте не рассмотрены требования безопасности. Обязанностью пользователя настоящего стандарта является установление подходящих требований безопасности и гигиены и определение регулирующих ограничений по безопасности перед его использованием.

2    Нормативные ссылки

В настоящем стандарте использованы ссыпки на следующий международный стандарт:

ИСО 16000-17:2008 Воздух замкнутых помещений. Часть 17. Обнаружение и подсчет числа плесневых грибков. Метод культивирования (ISO 16000-172008. Indoor air — Detection and enumeration of moulds — Culture based method)

3    Термины и определения

В настоящем стандарте применены следующие термины с соответствующими определениями:

3.1    аэродинамический диаметр (aerodynamic diameter): Диаметр сферы с относительной плотностью 1, которая в условиях спокойного воздуха под действием силы гравитации имеет такую же конечную скорость осаждения, что и рассматриваемая частица при преобладающих значениях температуры, давления и относительной влажности.

Примечание — Взято из ИСО 7708. пункт 2.2.

3.2    эффективность сохранения биологической активности (biological preservation efficiency): Способность устройства отбора проб поддерживать жизнеспособность взвешенных в воздухе микроорганизмов при их улавливании и сохранять в неповрежденном виде продукты их жизнедеятельности.

(ЕН 13098:2000) [6)

Издание официальное

3.3    нитевидный грибок (filamentous fungus): Грибок, растущий в форме нитевидных клеток, называемых гифами.

Примечания

1    Гифы. соединенные в пучки, называются мииелиями.

2    Термин «нитевидные грибки» необходим для различения грибков с гифальным ростом и дрожжевых грибков.

3.4    фильтрование (filtration): Улавливание частиц, взвешенных в потоке газа или жидкости, при пропускании его через пористый материал.

[ЕН 13098:2000](6)

Примечание — В настоящем стандарте под фильтрованием следует понимать отделение микроорганизмов или плесневых грибков от воздуха определенного объема с помощью фильтров.

3.5    колониеобразующая единица; КОЕ (colony forming unit; cfu): Единица, с помощью которой выражают число микроорганизмов, способных к образованию культур.

[ЕН 13098:2000] [6]

Примечания

1    Одна колониеобразующая единица может происходить от одного отдельного микроорганизма, агрегатов нескольких микроор1анизмов, а также от одного или нескольких микроорганизмов, присоединившихся к частице.

2    Число колоний может зависеть от условий культивирования.

З.б¹* культивирование (cultivation): Выращивание микроорганизмов на питательной среде.

3.7    холостая проба для условий применения (field blank): Проба, отбираемая таким же образом. что и реальная проба за исключением просасывания воздуха через устройство отбора проб.

Примечание — Результат анализа такой холостой пробы представляет собой число КОЕ. попадающих в пробу при обращении с фильтром при отборе проб. Результаты анализа холостых проб для условий применения используют не для корректировки результатов измерений, а для обнаружения погрешностей отбора проб (см. ИСО 16000-17).

3.8    микроорганизм (microorganism): Любая микробиологическая форма, клеточная или неклеточная. способная к размножению или переносу генетического материала, или формы, утратившие эту способность.

[ЕН 13098:2000] [6]

3.9    плесневый грибок (mould): Нитевидные грибки, принадлежащие нескольким таксономическим группам, а именно: Зигомицеты, Аскомицеты (Аскомикота) и Дейтеромицеты (несовершенные грибы).

Примечание — Плесневые грибки образуют споры различного вида в зависимости от того, к какой таксономической группе они принадлежат, а именно: коиидиоспоры (конидии), слорангиоспоры и аскоспоры.

3.10    физическая эффективность отбора проб (physical sampling efficiency): Способность пробоотборника улавливать взвешенные в воздухе частицы определенных размеров.

[ЕН 13098:2000] [6]

3.11    общая эффективность отбора проб (total sampling efficiency): Произведение физической эффективности отбора проб на эффективность сохранения биологической активности.

[ЕН 13098:2000] [6]

4 Общие положения

При фильтровании определенное количество воздуха просасывается через фильтр, в котором или на котором происходит отделение взвешенных в воздухе частиц.

Взвешенные в воздухе плесневые грибки улавливают на желатиновые фильтры, обладающие высокой общей эффективностью отбора проб (см. приложение А). Под желатиновые фильтры подкладывают поликарбонатные фильтры для повышения устойчивости (см. приложение А). Вместо желатиновых могут быть применены другие фильтры, если относительная степень извлечения для них составляет не менее 90 % по массе по отношению к массе материала, извлеченного с желатинового фильтра.

’ Термины 3.6; 3.7; 3.9 установлены для целей настоящего стандарта, т. е. для оценки качества воздуха замкнутых помещений. ¹

ГОСТ Р ИСО 16000-16-2012

Устройство отбора проб предназначено для обнаружения частиц размером, близким к размеру спор плесневых грибков (от более 1 до приблизительно 30 мкм). При отборе проб линейная скорость потока воздуха через фильтр должна быть в диапазоне от 100 до 250 мм/с.

Примечания

1    Если используют фильтр диаметром 80 мм. то указанная объемная скорость потока воздуха достигается при обьемной скорости потока воздуха от 1,5 до 3,3 м²/ч (от 25 до 55 л/мин).

2    Методика, приведенная в настоящем стандарте, была аттестована для линейной скорости потока воздуха 217 мм/с. Физическая эффект ивностьо тбора проб при друг их значениях скорости потока воздуха может быть ниже.

3    Частицы размером более 30 мкм также улавливаются фильтрами. Если держатель фильтра находится о подвешенном состоянии (например, при измерениях на открытом воздухе при сильном ветре и дожде), то возможно. что более крупные частицы MOiyT не достигнуть фильтра из-за их большой инерции.

После отбора проб спор плесневых грибков, культивируют их и подсчитывают. Соответствующая методика культивирования приведена в ИСО 16000-17.

5    Оборудование и принадлежности

5.1    Устройство отбора проб

Необходимы следующие компоненты.

5.1.1    Стойка для размещения пробоотборной насадки на требуемой высоте.

5.1.2    Пробоотборная насадка для размещения фильтродержателя с вставленными фильтрами при необходимости в подвешенном состоянии.

Для подсоединения пробоотборной насадки к устройству отбора проб может быть использована коленчатая трубка или гибкий шланг. Внутренний диаметр трубки или шланга должен бытьот 8 до 10 мм.

5.1.3    Фильтродержатель стерильный (одноразовый или стерилизуемый).

5.1.4    Фильтры желатиновые¹*, стерильные, номинальной тонкостью фильтрации 3 мкм, и фильтры из поликарбоната, стерильные, номинальной тонкостью фильтрации 0.8 мкм (см. приложение А).

5.1.5    Вакуумный насос, обеспечивающий постоянный расход воздуха при непрерывной работе.

Объемная скорость потока воздуха должна быть отрегулирована так, чтобы линейная скорость

потока через фильтр была в пределах от 100 до 250 мм/с (см. раздел 4).

5.1.6    Газовый счетчик для определения объема воздуха, в кубических метрах, просасываемого через пробоотборную насадку.

5.1.7    Таймер для предварительной установки времени и продолжительности отбора проб.

5.1.8    Экран для защиты устройства отбора проб от неблагоприятных погодных условий (необязательно, в основном только при использовании на открытом воздухе).

Расстояние между верхним краем защитного экрана и нижним краем пробоотборной насадки должно составлять не менее 400 мм.

5.2 Принадлежности

5.2.1    Стерильные контейнеры для транспортирования фильтров, например чашки Петри.

5.2.2    Герметичные контейнеры для транспортирования проб.

5.2.3    Защитные перчатки, предпочтительно одноразовые стерильные или продезинфицированные.

5.2.4    Дезинфицирующее средство, например изопропанол или этанол (с объемной долей основного вещества не менее 70 %).

5.2.5    Стерильный пинцет для обращения с фильтрами.

6    Методика измерений

6.1 Подготовка к отбору проб

Собирают установку для отбора проб в соответствии с рисунком 1.

Подходящее устройство отбора проб подробно описано в приложении В.

’'Sartorius Stedim Biotech. Gottingen является примером подходящего серийного изготовителя таких фильтров. Информация приведена для удобства пользователей настоящего стандарта и не является рекламой поставщика.

Для определения объема пробы герметично подсоединяют газовый счетчик между насосом и пробоотборной насадкой. Объем отбираемого воздуха отражается на дисплее в кубических метрах с погрешностью 0.01 м³. Температуру и давление в объемном газовом счетчике, а также температуру окружающего воздуха и атмосферное давление непрерывно регистрируют.

Объем отбираемого воздуха, приведенный к реальным условиям У_в, м³. вычисляется в объемном газовом счетчике автоматически по формуле

Vk-VbS*.    0>

где V_G — объем отобранного воздуха, измеренный объемным газовым счетчиком;

Г_А — температура воздуха;

p_G — давление воздуха в объемном газовом счетчике;

Т₀ — температура воздуха в объемном газовом счетчике;

Р_А — давление воздуха.

Подготавливают необходимое число устройств отбора проб в соответствии с целью и методикой измерений. Расход воздуха в устройстве отбора проб не должен превышать 10 % кратности воздухообмена в исследуемом помещении. Если кратность воздухообмена в помещении неизвестна, то объем воздуха, отбираемого за час. не должен превышать 10 % объема помещения.

^а При использовании пластинчатого насоса поток воздуха, поступающий на фильтр, должен быть горизонтальным.

1 — пробоотборная насадка для подвешивания (с филыродержагелем) при необходимости; 2 — газовый счетчик (напримор, измерительная диафратма. термический измеритель массовою расхода). 3 — блок электроники для пересчета показаний в кубические метры. 4 — дисплей для отображения обьсма воздуха в кубических метрах; 5 — вакуумный насос. 6 — таймер.

7— фильтр для абразивных вещоств^а); 8 — корпус для защиты от неблагоприятных условий окружающей среды (необязательно); Рд — атмосферное давление. p_G — давление отбираемого газа; Т_А — температура атмосферною воздуха; T_G — температура отбираемого таза, V_B — обьемотбираемою таза

Рисунок 1 — Принципиальная схема установки для отбора проб

Примечание — В небольших помещениях, например детских комнатах, мотут быть отобраны пробы малого обьема. Отбор проб большого обьема можно проводить в замкнутых помещениях с очень большой площадью. если шум. производимый устройством отбора проб, не оказывает неблагоприятного воздействия на обитателей помещения, при соблюдении установленных условий по скорости отбора проб или отбираемого объема воздуха.

4

ГОСТ Р ИСО 16000-16-2012

Во время отбора проб отклонение скорости потока воздуха от заданного должно быть в пределах г2 %. Так же по мере увеличения загрузки фильтра расход отбираемого воздуха не должен понижаться более, чем на 10%.

Примечание — Существуют самонастраивающиеся системы отбора проб, в которых эти недостатки устранены.

Рекомендуется проверять комплектность и функционирование оборудования в соответствии с контрольным перечнем.

Проверяют градуировку устройства отбора проб. При необходимости проводят очередную градуировку перед проведением измерений (см. раздел 8).

При проведении измерений используют стерильные фильтры и стерильные фильтродержатели. Обеспечивают, чтобы фильтр оставался стерильным вплоть до начала отбора проб. При транспортировании защищают фильтры от попадания пыли, перегрева и сильных вибраций.

6.2    Отбор проб

Отбор проб обычно проводят на высотеот 0.75 до 1.5 м от пола. В особых случаях допустимо проводить отбор проб на другой высоте. Следят за тем. чтобы пыль, осевшая на пол в доме, не попала в устройство отбора проб при его размещении на небольшой высоте от пола.

Примечание — При размещении филыродержателя в замкнутом помещении с не интенсивным движением воздуха ею ориентация имеет второстепенное значение. Подвешивание пробоо!борной насадки необходимо только в том случае, если наблюдается интенсивное движение воздуха (например, при проведении сравнительных измерений на открытом воздухе).

Устанавливают стерильные фильтродержатели со стерильными фильтрами в устройство отбора проб, не внося никаких загрязнений (предпочтительно используя при этом стерильные одноразовые перчатки). Осматривают фильтры в фильтродержателях визуально на предмет отсутствия повреждений и точной и герметичной установки.

Включают устройство отбора проб в соответствии с инструкциями изготовителя.

В протоколе отбора проб указывают цель измерения и место его проведения (пример формы протокола отбора проб приведен в приложении С), а также подробное описание расположения устройства отбора проб, его тип. дату и время отбора каждой отдельной пробы, продолжительность отбора проб, значения объемной скорости потока воздуха, а при работе с атмосферным воздухом, направление и скорость ветра. Также регистрируют другие параметры (например, температуру воздуха, относительную влажность) и любые другие особые обстоятельства, аномалии или мешающие влияния, информация о которых может быть полезна при анализе проблем с плесневыми грибками (например, при наличии жалоб на запахи, при определении типа и местоположения возможных дополнительных источников выделения).

По завершении отбора проб вынимают фильтродержатели с фильтрами из устройства отбора проб, используя при этом стерильные или продезинфицированные перчатки, и проверяют их на предмет отсутствия повреждений. Помещают фильтры в герметичные контейнеры для предотвращения любого вторичного загрязнения.

Рекомендуется проводить несколько измерений при различной продолжительности отбора проб. Это особенно важно 8 тех случаях, когда ожидаемый уровень содержания плесневых грибков неизвестен.

Отбирают как минимум одну холостую пробу для каждого объекта измерений предпочтительно в середине серии измерений. С этой целью помещают стерильный фильтродержатель с фильтром в пробоотборную насадку при выключенном насосе, а затем вынимают, запаковывают и обрабатывают фильтр в ходе анализа таким же образом, как и загруженные фильтры. Предотвращают длительное воздействие окружающего воздуха на фильтр.

6.3    Продолжительность отбора проб

Продолжительность отбора проб определяется целью измерений и ожидаемым содержанием плесневых грибков. Обычно продолжительностьотбора проб составляет от 30 мин до нескольких часов.

6.4    Транспортирование и хранение проб

Защищают фильтр от неблагоприятных воздействий (солнечного света, влажности или пересушивания. перегрева, пыли и т. д.) и транспортируют его в лабораторию сразу после отбора проб, размещая рабочей поверхностью вверх в герметично закрытых контейнерах (см. 5.2). Температура окружающей среды при транспортировании не должна превышать температуру культивирования, т. е. должна быть в пределах (25 = 3) *С. При необходимости при транспортировании охлаждают пробы, но следят за тем.

чтобы их не заморозить. Регистрируют условия транспортирования (температуру окружающей среды, влажность и продолжительность). Анализируют пробы по возможности сразу же. но не позднее, чем через 48 ч после отбора проб. Пробы хранят в лаборатории при температуре, не превышающей температуру культивирования.

7    Эффективность отбора проб и ограничения метода

Ограничения метода определяются физической и биологической эффективностью отбора проб.

Физическая эффективность желатиновых и лоликарбонатных фильтров составляет более 95 % для плесневых грибков с аэродинамическим диаметром более 1 мкм при линейной скорости потока воздуха через фильтру = 217 мм/с (см. приложение А).

Влияние пересушивания на эффективность сохранения биологической активности неоднозначно, но оно зависит от температуры и относительной влажности воздуха во время отбора проб, его продолжительности. а также типа плесневых грибков. Однако большинство спор плесневых грибков относительно нечувствительны к пересушиванию, поэтому обычно фильтрование может успешно применяться. Испытания при валидации методики выявили пониженную степень извлечения для Cladosporium spp. при очень жаркой и солнечной погоде (см. D.2).

8    Градуировка оборудования по расходу воздуха и техническое обслуживание системы отбора проб

8.1    Градуировка оборудования по расходу воздуха

Проводят градуировку устройства отбора проб с помощью газового счетчика утвержденного типа, имеющего погрешность измерения объема воздуха в кубических метрах, приведенного к реальным условиям, в пределах г2 %. Подсоединяют газовый счетчик к входному отверстию устройства отбора проб. Убеждаются в том. что входное отверстие газового счетчика открыто. После настройки расхода воздуха проверяют точность выведения данных на экран устройства отбора проб по газовому счетчику. Объем воздуха, просасываемого через устройство отбора проб в течение 60 мин, должен отображаться с погрешностью в пределах :1 % по отношению к показанию газового счетчика утвержденного типа. Время установления постоянной скорости потока не должно превышать 5 с.

Периодичность проверки расхода воздуха (оперативный контроль) зависит от стабильности работы устройства. Полную градуировку системы отбора проб выполняют перед началом новой серии измерений или после значительных изменений, например, если было установлено новое или отремонтированное оборудование, или после технического обслуживания насоса. Если расход воздуха, определенный с помощью эталона сравнения, отклоняется более чем на 2 % значения, требуемого для корректной работы входного отверстия, регулируют объемную скорость потока в соответствии с инструкциями изготовителя.

8.2    Техническое обслуживание

Проводят техническое обслуживание механических частей системы отбора проб (входного отверстия и подсоединяемых трубок), в том числе проверку утечек в соответствии с инструкциями изготовителя.

Всю методику измерений проверяют с помощью холостых проб для условий применения (см. также 6.2).

9    Обеспечение качества

Важно, чтобы установился прецизионный режим работы устройства отбора проб (в отсутствии натекания при определении объема пробы). Кроме того, особенно внимательно следят за работой насоса и пробоотборной насадки с фильтрами.

Лаборатория должна иметь документированное руководство по качеству, находящееся в свободном доступе для сотрудников (см. ИСО/МЭК17025 (5)).

10    Протокол отбора проб

Маркируют пробы для их однозначной идентификации.

Заполняют протокол отбора проб для каждой пробы перед ее отбором (или сразу после отбора).

6

1

2