ФЕДЕРАЛЬНОЕ АГЕНТСТВО ПО ТЕХНИЧЕСКОМУ РЕГУЛИРОВАНИЮ И МЕТРОЛОГИИ

МОЛОКО

Спектрофотометрический метод определения массовой доли общего фосфора

ИСО 9874:2006

Milk — Determination of total phosphorus content — Method using molecular absorption spectrometry (MOD)

Издание официальное

Предисловие

Цели и принципы стандартизации в Российской Федерации установлены Федеральным законом от 27 декабря 2002 г. № 184-ФЗ «О техническом регулировании», а правила применения национальных стандартов Российской Федерации — ГОСТ Р 1.0-2004 «Стандартизация в Российской Федерации. Основные положения»

Сведения о стандарте

1    РАЗРАБОТАН ОАО «Всероссийский научно-исследовательский институт сертификации» и Государственным учреждением «Всероссийский научно-исследовательский институт молочной промышленности» на основе аутентичного перевода стандарта, указанного в пункте 4

2    ВНЕСЕН Техническим комитетом по стандартизации ТК 335 «Методы испытаний агропромышленной продукции на безопасность»

3    УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 15 декабря 2009 г. № 903-ст

4    Настоящий стандарт является модифицированным по отношению к международному стандарту ИСО 9874:2006 «Молоко. Определение содержания общего фосфора. Метод с использованием молекулярной абсорбционной спектрометрии» (ISO 9874:2006 «Milk — Determination of total phosphorus content — Method using molecular absorption spectrometry»).

При этом уточняющие отдельные слова, фразы, абзацы, показатели и значения показателей в тексте стандарта для учета потребностей национальной экономики Российской Федерации и особенностей российской национальной стандартизации выделены в тексте стандарта курсивом.

Наименование настоящего стандарта изменено относительно наименования указанного международного стандарта для приведения в соответствие с ГОСТ Р 1.5* (пункт 3.5).

При применении настоящего стандарта рекомендуется использовать сведения о соответствии международных стандартов национальным стандартам Российской Федерации, использованным в настоящем стандарте в качестве нормативных ссылок, указанные в приложении А

5    ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

6    ПЕРЕИЗДАНИЕ. Апрель 2011 г.

Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодно издаваемом информационном указателе «Национальные стандарты». а текст изменений и поправок — в ежемесячно издаваемых информационных указателях «Национальные стандарты». В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ежемесячно издаваемом информационном указателе «Национальные стандарты». Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования — на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет

* В части раздела 8 и приложений Ж. И. К действует ГОСТ Р 1.7-2008.

© Стандартинформ, 2010 © СТАНДАРТИНФОРМ, 2011

Настоящий стандарт не может быть полностью или частично воспроизведен, тиражирован и распространен в качестве официального издания без разрешения Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии

ГОСТ Р 53592-2009 (ИСО 9874:2006)

НАЦИОНАЛЬНЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

МОЛОКО

Спектрофотометрический метод определения массовой доли общего фосфора

Milk. Spectrophotometric method (or determination of total phosphorus content

Дата введения — 2011—01—01

1    Область применения

Настоящий стандарт устанавливает спектрофотометрический метод определения массовой доли общего фосфора в молоке.

2    Нормативные ссылки

В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие стандарты:

ГОСТ Р ИСО 5725-2-2002 Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 2. Основной метод определения повторяемости и воспроизводимости стандартного метода измерений

ГОСТ Р 52501-2005 (ИСО 3696:1987) Вода для лабораторного анализа. Технические условия ГОСТ 1770-74 (ИСО 1042—83. ИСО 4788—80) Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия ГОСТ 3118-77 Реактивы. Кислота соляная. Технические условия

ГОСТ 4198-75 Реактивы. Калий фосфорнокислый однозамещенный. Технические условия ГОСТ 4204-77 Реактивы. Кислота серная. Технические условия ГОСТ 10929-76 Реактивы. Водорода пероксид. Технические условия ГОСТ 12026-76 Бумага фильтровальная лабораторная. Технические условия ГОСТ 19908-90 Тигли, чаши, стаканы, колбы, воронки, пробирки и наконечники из прозрачного кварцевого стекла. Общие технические условия

ГОСТ 24104-2001* Весы лабораторные. Общие технические требования ГОСТ 25336-82 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры

ГОСТ 26809-86 Молоко и молочные продукты. Правила приемки, методы отбора и подготовка проб к анализу

ГОСТ 28498-90 Термометры жидкостные стеклянные. Общие технические требования. Методы испытаний

ГОСТ 29169-91 (ИСО 648—77) Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки с одной отметкой ГОСТ 29227-91 (ИСО 835-1—81) Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования

Примечание — При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов в информационной системе общего пользования — на официальном сайге Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет или по ежегодно издаваемому указателю «Национальные стандарты», который опубликован по состоянию на 1 января текущего года, и по соответствующим ежемесячно издаваемым информационным указателям, опубликованным о текущем году. Если ссылочный стандарт заменен (изменен), то при пользовании настоящим стандартом следует руководствоваться заменяющим (измененным) стандартом. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, применяется в части, не затрагивающей эту ссылку.

* На территории Российской Федерации действует ГОСТ Р 53228-2008.

Издание официальное

3    Термины и определения

В настоящем стандарте применен следующий термин с соответствующим определением:

3.1    массовая доля общего фосфора: Массовая доля общего фосфора, определяемая методом, установленным в настоящем стандарте и выраженная в процентах.

4    Сущность метода

Метод основан на полном разрушении органических веществ пробы молока, обработанной серной кислотой и пероксидом водорода (метод мокрого озоления) или под действием высокой температуры (метод сухого озоления). добавлении раствора молибдата натрия в аскорбиновой кислоте, спектрофотометрическом измерении оптической плотности образовавшегося молибденового голубого при длине волны 820 нм и определении массовой доли общего фосфора по градуировочному графику.

5    Реактивы

Используют реактивы только признанного аналитического качества, если не оговорено иначе. Используемая вода должна быть дистиллированной или деионизированной и не должна содержать соединений фосфора.

5.1    Кислота серная концентрированная по ГОСТ 4204, Р2₀= 1,84 г/см³, c(H₂S0₄) = 18моль/дм³.

5.2    Раствор серной кислоты с (H₂S0₄) = 5 моль/ дм³

В колбу к 722 см³ воды добавляют осторожно при постоянном перемешивании 278 см³ концентрированной серной кислоты (по 5.1).

5.3    Кислота соляная разбавленная с (HCI) = 1 моль/дм³ (применяют при сухом озолении)

В мерную колбу вместимостью 1000 см³ осторожно наливают 83 см³ концентрированной соляной кислоты по ГОСТ 3118 (р2о =1.19 г/см³) и разбавляют водой до 1000 см³.

5.4    Раствор пероксида водорода по ГОСТ 10929 с (Н₂0₂) = 9 моль/дм³, не содержащий соединений фосфора.

5.5    Раствор молибдата натрия с (Na₂Mo0₄) = 0,1 моль/дм³

Взвешивают 2,5 г дигидрата молибдата натрия на лабораторных весах по ГОСТ 24104 с записью результатов до второго знака. В мерную колбу по ГОСТ 1770 вместимостью 100 см³ с одной меткой количественно переносят дигидрат молибдата натрия и добавляют разбавленную серную кислоту в количестве, достаточном для его растворения. Доводят раствор до метки разбавленной серной кислотой при постоянном перемешивании.

5.6    Раствор аскорбиновой кислоты с (С₆Н₈0₆) = 0,25 моль/дм³

Взвешивают 5 г аскорбиновой кислоты на лабораторных весах по ГОСТ 24104 с записью результатов до второго знака. В мерную колбу по ГОСТ 1770 вместимостью 100 см³ с одной меткой количественно переносят аскорбиновую кислоту и добавляют достаточный объем воды для ее растворения. Доводят раствор до метки водой при постоянном перемешивании.

Для определения применяют только свежеприготовленный раствор.

5.7    Раствор молибдата в аскорбиновой кислоте

В мерную колбу по ГОСТ 1770 вместимостью 100 см³ с одной меткой добавляют 10 см³ раствора аскорбиновой кислоты и непосредственно перед использованием добавляют 25 см³ раствора дигидрат молибдата натрия и доводят раствор до метки водой при постоянном перемешивании.

Для определения применяют только свежеприготовленный раствор.

5.8    Стандартный раствор А

В эксикаторе высушивают не менее 48 ч около 1 г однозамещенного форфорнокислого калия (КН₂Р0₄) по ГОСТ 4198. Взвешивают 0,4394 г сухого фосфата на лабораторных весах по ГОСТ 24104 с записью результатов до третьего знака и количественно переносят в мерную колбу по ГОСТ 1770 вместимостью 1000 см³ с одной меткой и растворяют в воде. Доводят раствор водой до метки при постоянном перемешивании.

Содержание фосфора в растворе А составляет 100 мг/дм³. ¹

ГОСТ Р 53592-2009

5.9 Стандартный раствор Б

В мерную колбу вместимостью 100 см² с одной меткой приливают пипеткой 10 см² раствора А по 5.8. Доводят раствор водой до метки при постоянном перемешивании.

Содержание фосфора в растворе Б составляет 10 мг/дм².

Срок хранения раствора Б — не более одного месяца.

6    Аппаратура и материалы

Предупреждение — Вся стеклянная посуда должна быть тщательно вымыта моющим средством, не содержащим фосфора, и промыта дистиллированной или деионизированной водой.

6.1    Весы лабораторные с пределом допускаемой абсолютной погрешности однократного взвешивания г 0.1 мг по ГОСТ 24104.

6.2    Баня водяная, которая может поддерживать температуру 100 °С.

6.3    Термостат или сушильный шкаф, позволяющий проводить испытания при температу-реЮО °С.

6.4    Электронагреватель или газовая микрогорелка.

6.5    Колба или пробирки для мокрого озоления (колба Кьельдаля) по ГОСТ 25336 вместимостью 50 см².

6.6    Стеклянные шарики диаметром около 5 мм.

6.7    Тигель, изготовленный из платины или кварца по ГОСТ 19908, диаметром около 55 мм и соответствующее предметное стекло.

6.8    Печь электрическая (муфельная) с циркуляцией воздуха, позволяющая проводить испытания при температуре от 500 ^вС до 550 ^вС.

6.9    Цилиндры мерные по ГОСТ 1770 вместимостью 5 и 25 см².

6.10    Колбы мерные с одной меткой по ГОСТ 1770.2-го класса точности, вместимостью 50.100 и 1000 см².

6.11    Пипетки с одной меткой по ГОСТ 29169,2-го класса точности, вместимостью 1.2,5 и 10 см².

6.12    Спектрофотометр, позволяющий проводить измерения при длине волны 820 нм, оснащенный кюветами с длиной оптического пути 10 мм, или фотометр, позволяющий проводить измерения в области длин волн от 800 до 850 нм.

6.13    Бумага фильтровальная по ГОСТ 12026 со средним размером пор или фильтры обеззолен-ные «белая лента» диаметром 11 см.

6.14    Эксикатор по ГОСТ 25336, содержащий эффективный осушающий агент.

6.15    Термометр лабораторный жидкостный нертутный по ГОСТ 28498, ценой деления 0.5 °С и диапазоном измерений от 0 °С до 150 °С.

7    Отбор проб

Проба не должна быть повреждена или модифицирована при транспортировании или хранении.

Отбор проб не является частью метода, устанавливаемого в настоящем стандарте.

Метод отбора проб — по ГОСТ 26809, для экспортно-импортных операций — по ИСО 707, (1).

8    Подготовка пробы для испытаний

Лабораторную пробу молока нагревают до температуры (20 ± 2) °С и тщательно перемешивают. В случае, если не образуется гомогенное распределение жира, пробу медленно нагревают до температуры 40 °С, осторожно перемешивают и охлаждают до температуры (20 г 2) °С. перед тем как отобрать анализируемую пробу для испытаний.

9    Проведение испытаний

9.1    Метод мокрого озоления

9.1.1    Взвешивают 1,5 г молока на лабораторных весах по ГОСТ 24104 с записью результатов до третьего знака. В колбу для мокрого озоления количественно переносят навеску пробы молока, подго-

товленного в соответствии с разделом 8. Добавляют три стеклянных шарика и 4 см³ концентрированной серной кислоты.

9.1.2    Устанавливают колбу в наклонном положении в хорошо вентилируемом вытяжном шкафу и нагревают при помощи электронагревателя или газовой микрогорелки.

Нагрев контролируют таким образом, чтобы ограничить образование пены в колбе.

В колбе поддерживают слабое кипение. Не допускаются местные перегревы колбы и нагрев колбы выше уровня жидкости.

9.1.3    Как только в колбе прекратится пенообразование. ее охлаждают до комнатной температуры. Осторожно добавляют 2 см³ пероксида водорода (5.4) и снова нагревают. Повторяют данную процедуру до тех пор. пока содержимое не станет прозрачным и бесцветным. В процессе нагрева содержимое колбы периодически перемешивают осторожными круговыми движениями, не допуская местных перегревов.

9.1.4    Смесь охлаждают до комнатной температуры и промывают горло колбы водой около 2 см³. Смесь нагревают вновь до тех пор, пока вода не испарится. Смесь кипятят в течение 30 мин до полного разложения пероксида водорода, не допуская местных перегревов.

9.1.5    Смесь охлаждают до комнатной температуры. Количественно переносят смесь в мерную колбу вместимостью 100 см³ с одной меткой и доводят до метки водой при тщательном перемешивании,

9.1.6    Отбирают пипеткой 2 см³ смеси в мерную колбу вместимостью 50 см³ с одной меткой и добавляют около 25 см³ воды. Затем в колбу добавляют 2.0 см³ раствора молибдата в аскорбиновой кислоте, тщательно перемешивают и доводят объем раствора в колбе до метки водой.

9.1.7    Содержимое колбы кипятят 15 мин на водяной бане.

9.1.8    Охлаждают колбу со смесью до комнатной температуры в холодной воде. Далее проводят измерение оптической плотности по 9.5. Смесь пригодна для измерения в течение 1 ч.

9.2 Метод сухого озоления

9.2.1    Взвешивают 10 г молока на лабораторных весах по ГОСТ 24104 с записью результатов до третьего знака. В тигель из платины или кварцевую чашку количественно переносят навеску анализируемой пробы молока, подготовленного в соответствии с разделом 8.

9.2.2    Выпаривают навеску до сухого остатка в термостате при температуре 100 "С или на водяной бане.

9.2.3    После завершения выпаривания анализируемую пробу молока прокаливают в муфельной печи при температуре от 500 °С до 550 ^вС до тех пор. пока не образуется белая (или почти белая) зола.

Предпочтительно прежде, чем установить тигель в муфельную печь, нагреть его на газовой или электрической плитке, чтобы сжечь легко воспламеняющиеся компоненты.

9.2.4    Тигель с содержимым охлаждают в электрической печи и затем накрывают предметным стеклом. Золу растворяют в растворе соляной кислоты объемом от 2 до 3 см³ и добавляют около 3 см³ воды.

9.2.5    Количественно переносят раствор золы в мерную колбу вместимостью 100 см³ с одной меткой, промывают предметное стекло и тигель водой и переносят промывочную воду в колбу. Доводят объем раствора до метки водой и тщательно перемешивают. Раствор фильтруют через фильтровальную бумагу.

9.2.6    Наливают пипеткой 10 см³ фильтрата в мерную колбу вместимостью 100 см³ с одной меткой. Доводят объем раствора до метки водой и тщательно перемешивают.

9.2.7    Наливают пипеткой 2 см³ фильтрата в мерную колбу вместимостью 50 см³ с одной меткой и добавляют около 25 см³ воды. Затем добавляют 2,0 см³ раствора молибдата в аскорбиновой кислоте и доводят объем раствора до метки водой при тщательном перемешивании.

9.2.8    Содержимое колбы кипятят на водяной бане в течение 15 мин.

9.2.9    Охлаждают колбу со смесью до комнатной температуры в холодной воде. Измерения проводят по 9.5. Смесь пригодна для спектрометрического измерения в течение 1 ч.

9.3    Контрольное измерение (холостой опыт)

Одновременно с измерением анализируемой пробы проводят контрольное измерение (холостой опыт) по той же методике, что применялась для анализируемой пробы молока, но используя соответственно 1.5 или 10 см³ воды, не содержащей фосфора, вместо анализируемой пробы.

9.4    Построение градуировочного графика

9.4.1 Наливают пипеткой в пять мерных колб вместимостью 50 см³ с одной меткой соответственно 0. 1. 2. 3 и 5 см³ стандартного раствора Б. Затем приливают в каждую колбу по 25 см³ воды. ³

Приложение А (справочное)

Сведения о соответствии ссылочных международных стандартов национальным стандартам Российской Федерации, использованным в настоящем стандарте в качестве нормативных

ссылок ⁴

Обозначение ссылочного национального стандарта Российской Федерации	Обозначение и наименование ссылочного международного стандарта и условное обозначение степени его соответствия ссылочному национальному стандарту
ГОСТ Р ИСО 5725-2-2002	ИСО 5725-2—2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 2. Основной метод определения повторяемости и воспроизводимости стандартного метода измерений» (IDT)
ГОСТ Р 52501-2005	ИСО 3696:1987 «Вода для лабораторного анализа. Требования и методы
(ИСО 3696:1987)	испытаний» (MOD)
ГОСТ 450-77	—
ГОСТ 1770-74	ИСО 1042—98 «Посуда лабораторная стеклянная. Мерные колбы с одной
(ИСО 1042—83. ИСО 4788—80)	меткой» (MOD). ИСО 4788—2005 «Посуда лабораторная стеклянная. Градуированные мерные цилиндры» (MOD)
ГОСТ 3118-77	—
ГОСТ 4166-76	—
ГОСТ 5556-81	—
ГОСТ 12026-76	—
ГОСТ 13979.0-86	—
ГОСТ 13979.1-68	—
ГОСТ 22551-77	—
ГОСТ 24104-2001	—
ГОСТ 25336-82	—
ГОСТ 29227-91 (ИСО 835-1:1981)	ИСО 835:2007 «Посуда лабораторная стеклянная. Мерные градуированные пипетки» (IDT)
ГОСТ 29169-91 (ИСО 648:1977)	ИСО 648:2008 «Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки с одной меткой» (IDT)
Примечание — В настоящей таблице использованы следующие условные обозначения степени соответствия стандартов:
. ЮТ — идентичные стандарты.
- MOD — модифицированные стандарты.

ГОСТ Р 53592-2009

[1J ИСО 707—97* [2] Р 50.1.060—2006 Библиография Молоко и молочные продукты. Методы отбора проб Рекомендации по стандартизации «Государствонная система обеспечения един• ства измерений. Статистические методы. Руководство по использованию оценок повторяемости, воспроизводимости и правильности при оценке неопределенности измерений». Приняты Ростехрегулированиом. 2006 г.

Действует ИСО 707-2008.

7

УДК 637.11.001:006.354    ОКС    67.100.10    Н19    ОКСТУ    9209

Ключевые слова: молоко, спектрофотометрический метод, определение содержания фосфора, молибдат в аскорбиновой кислоте, мокрое озоление, сухое озоление. градуировочный график, повторяемость. воспроизводимость

8

1

2

3

4