ФЕДЕРАЛЬНОЕ АГЕНТСТВО ПО ТЕХНИЧЕСКОМУ РЕГУЛИРОВАНИЮ И МЕТРОЛОГИИ

ПРОДУКТЫ ПИЩЕВЫЕ

Определение афлатоксина В, и общего содержания афлатоксинов B_1f В₂, Gi и G₂ в зерновых культурах, орехах и продуктах их переработки

Метод высокоэффективной жидкостной хроматографии

ISO 16050:2003

Foodstuffs — Determination of aflatoxin В, and the total content of aflatoxin B,, B_2l Gt and G₂ in cereals, nuts and derived products — High-performance liquid chromatographic method (MOD)

Издание официальное

Москва

Стамдартинформ

2009

Предисловие

Цели и принципы стандартизации в Российской Федерации установлены Федеральным законом от 27 декабря 2002 г. № 184-ФЗ «О техническом регулировании», а правила применения национальных стандартов Российской Федерации — ГОСТ Р 1.0-2004 «Стандартизация в Российской Федерации. Основные положения»

Сведения о стандарте

1    ПОДГОТОВЛЕН ОАО «Всероссийский научно-исследовательский институт сертификации» (ОАО «ВНИИС») на основе русской версии стандарта, указанного в пункте 4

2    ВНЕСЕН Техническим комитетом по стандартизации ТК 335 «Методы испытаний агропромышленной продукции на безопасность»

3    УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 18 декабря 2008 г. МвбОО-ст

4    Настоящий стандарт является модифицированным по отношению к международному стандарту ИСО 16050:2003 «Продукты пищевые. Определение афлатоксина В, и общего содержания афлатокси-нов В,. В₂, G, и G₂ в зерновых культурах, орехах и продуктах переработки. Метод высокоэффективной жидкостной хроматографии» (ISO 16050:2003 «Foodstuffs — Determination of aflatoxin В, and the total content of aflatoxin B_v B₂, G, and G₂ in cereals, nuts and derived products — High-performance liquid chromatographic method»). При этом дополнительные положения и требования, включенные в текст национального стандарта, приведены для учета потребностей национальной экономики Российской Федерации и особенностей российской национальной стандартизации и выделены курсивом.

При применении настоящего стандарта рекомендуется использовать вместо ссылочных международных стандартов соответствующие им национальные стандарты Российской Федерации, сведения о которых приведены в дополнительном приложении В

5    ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодно издаваемом информационном указателе «Национальные стандарты», а текст изменений и поправок — в ежемесячно издаваемых информационных указателях «Национальные стандарты». В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ежемесячно издаваемом информационном указателе «Национальные стандарты». Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования — на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет

© Стандартинформ. 2009

Настоящий стандарт не может быть полностью или частично воспроизведен, тиражирован и распространен в качестве официального издания без разрешения Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии

II

ГОСТ Р 53162-2008

Содержание

1    Область применения...................................................1

2    Нормативные ссылки..................................................1

3    Сущность метода....................................................2

4    Реактивы..........................................................2

5    Оборудование.......................................................4

6    Методика испытания..................................................5

7    Обработка результатов................................................6

8    Прецизионность......................................................7

9    Протокол испытаний...................................................8

Приложение А (справочное) Результаты межлабораторного сравнительного испытания.........9

Приложение В (справочное) Сведения о соответствии ссылочных международных стандартов

национальным стандартам Российской Федерации, использованным в настоящем

стандарте в качестве нормативных ссылок...........................10

Библиография........................................................11

III

ГОСТ P 53162—2008 (ИСО 16050:2003)

НАЦИОНАЛЬНЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

ПРОДУКТЫ ПИЩЕВЫЕ

Определение афлатоксина В, и общего содержания афлатоксинов В,, В₂, G, и G₂ в зерновых культурах, орехах и продуктах их переработки

Метод высокоэффективной жидкостной хроматографии

Foodstuffs. Determination of aflatoxin В, and the total content of aflatoxin B,. B₂. G, and G₂ in cereals, nuts and derived products. High-performance liquid chromatographic method

Дата введения — 2010—01—01

1    Область применения

Настоящий стандарт устанавливает метод высокоэффективной жидкостной хроматографии с обращенной фазой, с очисткой на иммуноаффинной колонке и послвкопоночной дериватизаци-ей, для определения афлатоксинов в зерновых культурах, орехах и продуктах переработки.

Предел количественного определения афлатоксина В, и суммы афлатоксинов В,. G, и G₂ —8 мкг/кг.

Данный метод применим в отношении кукурузы с содержанием 24,5 мкг/кг, арахисового масла с содержанием 8.4 мкг/кг и сырых арахисовых орехов с содержанием 16 мкг/кг общей суммы афлатоксинов. Метод допускается использовать для масличных культур, сушеных фруктов и продуктов их переработки.

Настоящий стандарт допустимо использовать только после уточнения условий измерений в конкретной лаборатории, валидации полученной процедуры измерений применительно к решению поставленной аналитической задачи (к конкретным объектам, конкретным диапазонам измерений и т.п.), разработки документа на методику и ее аттестации в соответствии с ГОСТР 8.563.

2    Нормативные ссылки

В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие стандарты:

ГОСТ Р 8.563—96 Государственная система обеспечения единства измерений. Методики выполнения измерений

ГОСТ Р ИСО 5725-1-2002 Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 1. Основные положения и определения

ГОСТР 52501-2005 (ИСО 3696—1987) Вода для лабораторного анализа. Технические условия ГОСТ 1770-74 (ИСО 1042—83. ИСО 4788—80) Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия ГОСТ 4159—79 Реактивы. Йод. Технические условия ГОСТ 4204-77 Реактивы. Кислота серная. Технические условия ГОСТ 4233-77 Реактивы. Натрий хлористый. Технические условия ГОСТ 5789— 78 Реактивы. Толуол. Технические условия ГОСТ 6995-77 Реактивы. Метанол-яд. Технические условия ГОСТ 22524-77 Пикнометры стеклянные. Технические условия

Издание официальное

Примечание — При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов в информационной системе общего пользования — на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет или по ежегодно издаваемому указателю я Национальные стандарты», который опубликован по состоянию на 1 января текущего года, и по соответствующим ежемесячно издаваемым информационным указателям, опубликованным в текущем году. Если ссылочный стандарт заменен (изменен), то при пользовании настоящим стандартом следует руководствоваться заменяющим (измененным) стандартом. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение. в котором дана ссылка на него, применяется в части, не затрагивающей эту ссылку.

3    Сущность метода

Анализируемый образец экстрагируют смесью метанола и воды. Экстракт образца фильтруют, разбавляют водой и вводят в колонку для аффинной хроматографии, содержащую антитела, специфичные для афлатоксинов В,. В₂, G, и 6₂. Афлатоксины выделяют, очищают и концентрируют на колонке, после чего отделяют от антител при помощи метанола. Афлатоксины определяют количественно при помощи высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) совращенной фазой с определением флуоресценции и послеколоночной дериватизацией.

4    Реактивы

При отсутствии специальных указаний используют реактивы только признанных аналитических марок квалификации х.ч. или ч.д.а.

4.1    Вода, соответствующая не ниже 1-й степени по ГОСТР 52501.

Вода не должна содержать органические примеси.

4.2    Хлорид натрия по ГОСТ 4233.

4.3    Йод кристаллический по ГОСТ4159.

4.4    Афлатоксин. кристаллический или в виде пленочной ампулы.

ПРЕДУПРЕЖДЕНИЕ! Афлатоксины канцерогенны для человека. Следует принимать во внимание заявление, сделанное Международным агентством по исследованиям в области рака (ВОЗ) (см. (1 ]. (2))-

Необходимо надлежащим образом предохранять лабораторию, в которой проводятся анализы, от дневного света. Для этого закрывают окна фольгой, поглощающей ультрафиолетовое излучение. Допускается использовать в комбинации с затемненным освещением (когда отсутствует прямое солнечное освещение) занавески или шторы в комбинации с искусственным освещением.

4.5    Ацетонитрил, степень чистоты для ВЭЖХ

4.6    Метанол. ГОСТ 6995. степень чистоты ВЭЖХ.

4.7    Толуол ГОС Г 5 789.

ПРЕДУПРЕЖДЕНИЕ! Толуол огнеопасен и токсичен. Приготовление стандартов с использованием данного растворителя следует проводить в вытяжном шкафу. Операции за пределами вытяжного шкафа, такие как измерение эталонов методом УФ спектрометрии, следует проводить с использованием эталонов в закрытых контейнерах.

4.8    Смесь толуол/ацетонитрил

Смешивают 98 объемных частей толуола (4.7) с двумя объемными частями ацетонитрила (4.5) (см. предупреждение в 4.7).

4.9    Растворитель для экстракции

Смешивают семь объемных частей метанола (4.6) с тремя объемными частями воды (4.1).

Другие смеси — растворители для экстракции, которые совместимы с подвижной фазой, могут также использоваться, если покажут себя более эффективными или будут рекомендованы производителем иммуноаффинной колонки.

4.10    Подвижная фаза

Смешивают три объемные части воды (4.1) с одной объемной частью ацетонитрила (4.5) и одной объемной частью метанола (4.6). Перед использованием проводят дегазацию раствора.

4.11    Реагент для послеколоночной дериватизации

Растворяют 100 мг йода (4.3) в 2 см³ метанола (4.6). Добавляют 200 см³ воды (4.1), перемешивают в течение 1 ч. фильтруют через мембранный фильтр с размером пор 0.45 мкм (5.8). Раствор готовят на ¹

ГОСТ P 53162—2008

неделю использования и хранят в темноте или в склянке из коричневого стекла. Перед использованием раствор встряхивают в течение 10 мин.

4.12 Основные стандартные растворы афлатоксинов В,, В₂, G, и G₂

ПРЕДУПРЕЖДЕНИЕ! Предохраняйте растворы, содержащие афлатоксины. от действия света (храните в темноте, используйте алюминиевую фольгу или затемненную стеклянную посуду).

Афлатоксины В,, В₂. G, и G₂ растворяют по отдельности в смеси толуол/ацетонитрил (4.8). для получения индивидуальных растворов с массовой концентрацией вещества 10 мкг/сат².

Для определения точной концентрации афлатоксина в каждом исходном растворе регистрируют спектр поглощения при длинах волн от 330 до 370 нм в кварцевых кюветах толщиной 1 см (5.7), используя спектрометр (5.6). Рассчитывают концентрацию каждого афлатоксина р,, мкг 1см², используя уравнение (1):

где A_uatc — оптическая плотность, определяемая в максимуме спектра поглощения;

М₍ — молекулярная масса каждого афлатоксина. г/моль;

% — коэффициент молярного поглощения каждого афлатоксина в смеси толуол/ацетонитрил.

Примечание — Это значение определено для раствора, который содержит с = 1 моль'дм афлатоксина и находится в кюветах с длиной оптического пути d = 1 см. Коэффициент молярного поглощения (е) применяют без единиц измерения, допускается применять уравнение А= t e d. ему соответствует единица измерений:

дм⁵-моль'¹-см*¹;

d — длина оптического пути кюветы, см.

М, и ^приведены в таблице 1.

Таблица 1 — Молекулярные массы и коэффициенты молярного поглощения афлатоксинов В,. В;. G- и G,.

Афла токсин Mf г/моль 5 В, 312 19300 вг 314 20400 G, 328 16600 G, 330 17900 Примечание — В качестве растворителя используется смесь толуола и ацетонитрила (4.8).

4.13    Основной стандартный раствор смеси афлатоксинов

Готовят исходный раствор, содержащий 500 нг/ см² афлатоксина В,, 125 нг/ см² афлатоксина В₂. 250 нг/ см² афлатоксина G, и 125 нг/ см² афлатоксина G₂ в смеси толуол/ацетонитрил (4.8). При необходимости хранения раствора взвешивают колбу. Колбу плотно оборачивают алюминиевой фольгой и хранят при температуре около 4 °С. Непосредственно перед использованием колбу взвешивают снова и отмечают любые изменения в массе после хранения.

Примечание — Обычное воздействие УФ-излучения во время измерения оптической плотности не приводит к заметной конверсии с образованием продуктов фотолиза.

4.14    Градуировочный раствор смеси афлатоксинов

Каждую порцию основного сандартного раствора смеси афлатоксинов (4.13), как это указано в таблице 2, переносят в четыре мерные колбы вместимостью 2 см² (5.5). Растворы выпаривают до сухого остатка в токе азота при комнатной температуре. В каждую колбу добавляют 1 см² метанола (4.6). Растворяют 8 нем сухой остаток, разбавляют раствор до метки водой (4.1) и перемешивают. Растворы готовят непосредственно в день использования.

Таблица 2 — Приготовление стандартных растворов

Стандартный раствор Объем отобранный ю исходного раствора, мкл Концентрация афлатоксина. нг/см3 в, в2 G, <Ь 1 60 15,0 3.75 7,50 3.75 2 40 10,0 2.50 5.00 2.50 3 20 5,00 1.25 2.50 1.25 4 10 2,50 0.625 1.25 0.625

Примечали е — Указанные значения приведены в качестве ориентиров. Точные значения массовой концентрации растворов вычисляют исходя из значений, рассчитанных по формупо (1) — см. 4.12.

4.15 Серная кислота по ГОСТ4204, раствор c(H₂S0₄) = 2моль/дл^.

5 Оборудование

Лабораторную стеклянную посуду, которая контактирует с водными растворами афлатоксинов в серной кислоте (4.15), погружают в воду на несколько часов, затем тщательно промывают (например три раза) водой, чтобы удалить все следы кислоты. Отсутствие кислоты проверяют с помощью индикаторной бумаги.

Примечание — Данная обработка является необходимой, так как использование стеклянной посуды, промытой не кислотой, может привести к потере афлатоксинов. На практике данная обработка необходима для крушодоиных колб, мерных колб, мерных цилиндров, склянок или пробирок, используемых для градуировочных растворов и конечных экстрактов (особенно автоматических пипеток), а также пастеровских пипеток, если они используются для переноса градуировочных растворов или экстрактов.

Обычное лабораторное оборудование и, в частности, то. которое приводится ниже.

5.1    Иммуноаффинная (IA) колонка

IА колонка содержит антитела. предназначенные для афлатоксинов В,, В_2> G, и G₂. Колонка должна иметь минимальную емкость не менее 100 нг афлатоксина В, и должна давать выход не менее 80 % для афлатоксинов В,, В₂ и G, и не менее 60 % для афлатоксина G₂ при внесении в колонку 15 см³ градуировочного раствора, содержащего 5 нг каждого афлатоксина в смеси метанол/вода (одна часть метанола (4.6) и три-четыре части воды (4.1) по объему]. Колонка должна быть оборудована подходящей емкостью для растворителя (например шприцем с переходной насадкой).

5.2    Блендер, с баком смесителя на 500 мл и крышкой.

Рекомендуется использование высокоскоростного блендера.

5.3    Рифленая фильтровальная бумага, например, диаметром 24 см.

5.4    Фильтровальная бумага из стеклянного микроволокна, например, диаметром 11 см.

5.5    Мерные колбы по ГОСТ 1770. вместимостью 2 см³ или пикнометры по ГОСТ 22524.

Примечание — При использовании пикнометров рекомендуется измерять фактическое значение вместимости и использовать его при обработке результатов измерений в качестве величины V₅ [см. формулу (3)].

5.6    Спектрофотометр, предназначенный для измерения оптической плотности в диапазоне длин волн от 200 до 400 нм.

5.7    Кюветы из кварцевого стекла толщиной 1 см. не имеющие существенного поглощения в диапазоне длин волн от 300 до 370 нм.

5.8    Мембранный фильтр для водных растворов, изготовленный из политетрафторэтилена, диаметром 4 мм и размером пор 0.45 мкм.

5.9    Оборудование для ВЭЖХ

5.9.1    Насос ВЭЖХ, способный производить скорость потока 1 см³1 мин.

5.9.2    Система ввода (инжектор), со шприцевой загрузкой и петлей 50 мкл или эквивалентным.

5.9.3    Аналитическая разделяющая колонка с обращенной фазой, например С₁₈, которая обеспечивает разрешение пиков афлатоксинов В,, В₂, G, и G₂ до базовой линии от всех остальных пиков и которая имеет следующие характеристики:

-длина: 250 мм:

- внутренний диаметр: 4.6 мм;

4

ГОСТ P 53162—2008

- размер сферических частиц: 5 мкм.

Допускается использование колонки меньшей длины.

5.9.4 Система лослеколоночной дериватизации, состоящая из безпульсационного насоса и тройника, имеющего очень малый мертвый объем, системы труб из политетрафторэтилена или нержавеющей стали длиной от 3000 до 5000 мм и внутренним диаметром 0,5 мм, а также водяной бани или лослеколоночного реактора для реакции с участием йода.

5.10 Флуоресцентный детектор, пригодный для работы при длине волны возбуждения 365 нм и излучении при длине волны эмиссии 435 нм (для фильтровых приборов длина волны регистрации излучения > 400 нм), с пределом детектирования не более 0,05 нг афлатоксина В, в объеме ввода (в данном случае он равен 50 мкл).

6 Методика испытания

6.1    Общие замечания

Растворы проб и стандартные растворы для определения с помощью ВЭЖХ должны содержать одинаковый растворитель или смесь растворителей.

6.2    Экстракция

Взвешивают 25 г гомогенизированной пробы, с точностью 0.1 г в сосуде блендера (см. 5.2). Добавляют 5 г хлорида натрия (см. 4.2) и 125 см³ растворителя для экстракции (см. 4.10) и гомогенизируют с помощью перемешивающего устройства в течение 2 мин при высокой скорости. Контролируют, чтобы время и скорость перемешивания не оказывали негативного влияния на эффективность экстракции. Смесь фильтруют через рифленую фильтровальную бумагу (см. 5.3) (V,).

Отбирают пипеткой 15 см³ (V₂) фильтрата в коническую колбу подходящего размера со стеклянной пробкой. Добавляют 30 см³ воды, закрывают колбу пробкой и перемешивают. Перед проведением аффинной колоночной хроматографии разбавленный экстракт фильтруют через фильтровальную бумагу из стеклянного микроволокна (5.4). Фильтрат (У₃) должен быть прозрачным. Если это не так. проводят повторную фильтрацию. Незамедлительно следуют процедурам в соответствии с 6.3.

Для получения прозрачного раствора можно также использовать центрифугу.

6.3    Очистка

Готовят IA колонку (см. 5.1) и осуществляют процедуру очистки в соответствии с инструкциями производителя. Отбирают пипеткой 15 см³ (У₄) второго фильтрата (У₃) в емкость для растворителя ^колонки. Пропускают его через разделяющую колонку, затем промывают колонку, как это описано в инструкциях производителя, и удаляют элюаты. Начинают проводить элюирование афлатоксинов. Собирают этанольный или ацетонитрильный элюат (в зависимости от продукта или инструкций производителя) в мерной колбе вместимостью 2 см³ (см. 5.5) (или другого объема, установленного производителем). Разбавляют до метки водой (У₅). Перемешивают и действуют в соответствии с 6.4.

Методы ввода в IA колонки, промывания и элюирования немного отличаются, в зависимости от производителя колонки, и необходимо четко следовать конкретным инструкциям, прилагаемым кколонкам.

Примечание — 8 целом, процедуры включают экстракцию образца смесью метанола и воды, фильтрацию или центрифугирование, возможное разбавление образца раствором фосфатного буфера или водой, загрузку под давлением в предварительно промытую колонку, промывку колонки дистиллированной водой и элюирование афлатоксинов метанолом или ацетонитрилом (в зависимости от продукта и инструкций производителя).

Допускается использовать традиционные колонки с силикагелем или колонки твердофазной экстракции. В этих случаях также необходимо четко следовать инструкциям производителя. Если растворитель, применяемый для элюирования афлатоксинов, не совместим с подвижной фазой, то элюат необходимо выпарить до сухого остатка в токе азота при температуре ниже 40 °С. Остаток необходимо растворить в подвижной фазе и разбавить до 2 см³ или до того объема, который установлен производителем.

Необходимо предусмотреть, чтобы максимальная емкость колонки не была превышена.

6.4    Условия работы при выполнении ВЭЖХ

Выход разделительной колонки подсоединяют к одному ответвлению тройника системы послеко-лоночной дериватизации (5.9.4) с помощью короткого фрагмента системы труб с внутренним диаметром. например, 0,25 мм. Ко второму ответвлению тройника подсоединяют выход насоса, который поставляет реагент для лослеколоночной дериватизации. Один конец витка труб из политетрафторэтилена или нержавеющей стали (см. 5.9.4) присоединяют к третьему ответвлению тройника и другой конец присоединяют к детектору (см. 5.10). Используя термостат или водяную баню, поддерживают температуру реакционного змеевика на уровне 70 °С.

В случае использования колонки, указанной в 5.9.3, подходящими являются следующие параметры:

-    скорость потока подвижной фазы (колонка): 1,0 см³1 мин;

-    скорость потока послеколоночного реагента: 0.3 са^/мин;

-    впрыскиваемый объем: 50 мкл.

Дают всей системе функционировать 10 — 20 мин для ее стабилизации. Если используется интегратор, настраивают регулировку чувствительности флуоресцентного детектора или интегратора, чтобы получить соответствующий сигнал: шум 5:1 для 0,125 нг афлатоксина G₂ в 50 мкл. Если используется регистрирующий прибор с ленточной диаграммой, настраивают регулировку флуоресцентного детектора таким образом, чтобы получить для 0,125 нг афлатоксина G₂ в 50 мкл от 30 % до 40 % шкалы регистрирующего прибора.

6.5    Идентификация

Проводят идентификацию каждого пика афлатоксина на хроматограмме образца путем сравнения значений времени удерживания со значениями соответствующих стандартов.

Афлатоксины можно идентифицировать одновременным вводом раствора испытуемой пробы и градуировочных растворов. Кроме того, при идентификации помогает исчезновение пиков афлатокси-нов В, и G, в случае, когда не проводится добавка реагента для дериватизации.

6.6    Построение градуировочной зависимости

Для каждого афлатоксина строят градуировочную зависимость путем ввода 50 мкл стандартных растворов 1,2.3 и 4 (см. таблицу 2). Проверяют линейность зависимости (см. (3]).

6.7    Определение

Количественное определение проводится методом внешнего стандарта с интегрированием площади пика или измерением высоты пика, которые далее соотносятся с соответствующими значениями для стандарта.

В петлю инжектора вводят 50 мкл стандартного раствора в соответствии с инструкциями производителя инжектора. Афлатоксины элюируют в порядке G₂. G,. В₂ и В, с временем удерживания приблизительно 6. 8. 9 и 11 мин соответственно. Пики должны быть разделены до базовой линии. При необходимости регулируют значения времени удерживания путем изменения концентрации метанола подвижной фазы (4.11).

Вводят 50 мкл (У₆) очищенного экстракта образца (см. 6.3) в инжекторную петлю.

7 Обработка результатов

Рассчитывают массу т,, г, анализируемой пробы, присутствующей во фракции второго фильтрата, взятого для IA колонки (У₄), по формуле

V₂V< Ц Ц’

где т₀ — масса пробы образца (см. 6.2), г (т₀ = 25 г);

V, — общий объем первого фильтрата (см. 6.2). смР(У/_л = 125 саг³);*

V₂ — объем фракции первого фильтрата (см. 6.2). взятый для разбавления. cm³(V₂ = 15 саг³);

V₃ — общий объем второго фильтрата (см. 6.2), см³ (V₃ = 45 см³);

V₄ — объем фракции второго фильтрата (см. 6.3), см³(У_л = 15 см³).

Рассчитывают массовую долю каждого афлатоксина w_f, в микрограммах на килограмм пробы, вычисляют по формуле (метод внешнего стандарта)

w_l = ^^m\    (3)

V_e т,

где V₅ — объем элюата (6.3), мкл (У₅ = 2000 мкл);

V_e — объем очищенного и введенного экстракта образца (6.7), мкл (V₆ = 50 мкл): гп_/— масса данного афлатоксина, присутствующего в введенном объеме, соответствующая измеренной площади пика или высоте пика, определяемая по градуировочной характеристике, в нанограммах;

т, — масса анализируемой пробы, г. соответствующей фракции второго фильтрата, взятого для IA колонки (V₄) [см. формулу (2)).

Для получения массовой доли суммы афлатоксинов суммируют массовые доли четырех афлаток-синов.

* Принимая во внимание данные по точности метода. может рассматриваться как эквивалент объема растворителя экстракции.

6

ГОСТ P 53162—2008

8 Прецизионность

8.1    Межлабораторное сравнительное испытание

Детали межлабораторного сравнительного испытания прецизионности данного метода приведены в приложении А. Значения, полученные в результате межлабораторного сравнительного испытания, могут быть неприменимы к диапазонам концентраций и матрицам, отличным от тех. которые приведены в приложении А.

8.2    Повторяемость

Абсолютная разница между двумя независимыми отдельными результатами испытаний, полученными при использовании одного и того же метода, идентичных материалов для испытаний в одной и той же лаборатории, одним и тем жеоператором с использованием того же оборудования в течение короткого интервала времени, будет превышать предел повторяемости г. значения которого приведены ниже, не более чем в 5 % случаев.

a)    Значения для кукурузы:

-    афлатоксин В,: х = 14,9 мкг/кг, г= 2,4 мкг/кг,

- афлатоксин В₂: х = 1,4 мкг/кг, г = 1,0 мкг/кг,

-    афлатоксин G,:x = 7.2 мкг/кг. г= 1.9 мкг/кг.

-    афлатоксин G₂: х = 1.0 мкг/кг. г = 0.6 мкг/кг,

-    общее содержание афлатоксинов: х = 24,5 мкг/кг.

b)    Значения для арахисового масла:

- афлатоксин В,: х = 5,3 мкг/кг, г = 2,2 мкг/кг,

- афлатоксин В₂: х = 0.6 мкг/кг, г = 0,3 мкг/кг,

-    афлатоксин G,:x= 2.3 мкг/кг. г = 1.5 мкг/кг.

-    афлатоксин G₂: х = 0.2 мкг/кг, г = 0.5 мкг/кг,

-    общее содержание афлатоксинов: х = 8.4 мкг/кг.

c)    Значения для арахиса:

-    афлатоксин В,:х = 9,7 мкг/кг, г* 1,5 мкг/кг,

-    афлатоксин В₂: х = 1,1 мкг/кг, г = 0,7 мкг/кг,

-    афлатоксин G,: х = 4,5 мкг/кг, г = 0,8 мкг/кг,

-    афлатоксин G₂: х = 0,6 мкг/кг, г - 0,8 мкг/кг,

-    общее содержание афлатоксинов: х = 16 мкг/кг.

Основываясь на полученных результатах, содержание афлатоксинов в арахисовом масле можно только оценить. В случае кукурузы и арахисовых орехов афлатоксины В, и G, могут быть определены, а афлатоксины В₂ и G_? могут быть только обнаружены, и их содержание может быть оценено качественно.

8.3    Воспроизводимость

Абсолютная разница между двумя отдельными результатами испытаний, полученными при использовании одинакового метода, идентичных материалов для испытаний, в различных лабораториях. различными операторами и с использованием различного оборудования, будет превышать предел воспроизводимости R, значения которого приводятся ниже, не более чем в 5 % случаев.

a)    Значения для кукурузы:

-    афлатоксин В,: х = 14,9 мкг/кг, R = 4.2 мкг/кг,

-    афлатоксин В_?: х = 1.4 мкг/кг. R = 1.2 мкг/кг,

-    афлатоксин G,:х = 7,2 мкг/кг, R = 1,9 мкг/кг,

-    афлатоксин G₂:x = 1,0 мкг/кг, R = 1.5 мкг/кг,

-    общее содержание афлатоксинов: х = 24,5 мкг/кг.

b)    Значения для арахисового масла:

-    афлатоксин В,: х = 5,3 мкг/кг, R = 4.4 мкг/кг,

-    афлатоксин В₂: х = 0.6 мкг/кг, R = 0,6 мкг/кг,

-    афлатоксин G,:х = 2.3 мкг/кг, R = 2.0 мкг/кг,

-    афлатоксин G₂:x = 0.2 мкг/кг, R = 0.7 мкг/кг,

-    общее содержание афлатоксинов: х = 8,4 мкг/кг.

c)    Значения для арахиса:

-    афлатоксин В,: х = 9,7 мкг/кг, R = 4.5 мкг/кг,

-    афлатоксин В₂: х = 1,1 мкг/кг, R = 1,2 мкг/кг,

-    афлатоксин G,: х = 4,5 мкг/кг, R = 1.8 мкг/кг,

-    афлатоксин G₂: х = 0.6 мкг/кг, R = 1.4 мкг/кг,

-    общее содержание афлатоксинов: х = 16 мкг/кг.

7

1

2