МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СОВЕТ ПО СТАНДАРТИЗАЦИИ, МЕТРОЛОГИИ И СЕРТИФИКАЦИИ

(МГС)

INTERSTATE COUNCIL FOR STANDARDIZATION, METROLOGY AND CERTIFICATION

(ISC)

МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ

СТАНДАРТ

КАЧЕСТВО ВОДЫ

Подсчет культивируемых микроорганизмов. Подсчет колоний при посеве в питательную агаризованную среду

(ISO 6222:1999, ЮТ)

Предисловие

Цели, основные принципы и общие правила проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены ГОСТ 1.0 «Межгосударственная система стандартизации. Основные положения» и ГОСТ 1.2 «Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные, правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия, обновления и отмены»

Сведения о стандарте

1    ПОДГОТОВЛЕН Научно-производственным республиканским унитарным предприятием «Белорусский государственный институт стандартизации и сертификации» (БелГИСС) на основе собственного перевода на русский язык англоязычной версии стандарта, указанного в пункте 5

2    ВНЕСЕН Государственным комитетом по стандартизации Республики Беларусь

3    ПРИНЯТ Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол от 30 августа 2018 г. Мч 111-П)

За принятие проголосовали.

Краткое наименование страны по МК (ИСО 35 66) ОМ - 97	Код страны по МК (ИСО 3166)004- 97	Сокращенное наименование национального органа по стандартизации
Армения	AM	ЗАО «Национальный орган по стандартизации и метрологии» Республики Армения
Беларусь	BY	Госстандарт Республики Беларусь
Казахстан	KZ	Госстандарт Республики Казахстан
Киргизия	KG	Кыргызстандарт
Молдова	MD	Институт стандартизации Молдовы
Узбекистан	uz	Узстандарт

4    Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 23 сентября 2020 г. Np 672-ст межгосударственный стандарт ГОСТ ISO 6222-2018 введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 января 2021 г.

5    Настоящий стандарт идентичен международному стандарту ISO 6222:1999 «Качество воды. Подсчет культивируемых микроорганизмов. Подсчет колоний при посеве в питательную агаровую среду» («Water quality — Enumeration of culturable micro-organisms — Colony count by inoculation in a nutrient agar culture medium», IDT).

Международный стандарт разработан подкомитетом SC 9 «Микробиология» Технического комитета по стандартизации ISO/TC 34 «Пищевые продукты» Международной организации по стандартизации (ISO).

При применении настоящего стандарта рекомендуется использовать вместо ссылочных мехаду-народных и европейских стандартов соответствующие им межгосударственные стандарты, сведения о которых приведены в дополнительном приложении ДА

6    ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

7    Некоторые элементы настоящего стандарта могут являться объектами патентных прав

Информация о введении в действие (прекращении действия) настоящего стандарта и uat/e-нений к нему на территории указанных выше государств публикуется в указателях национальных стандартов, издаваемых в этих государствах, а также в сети Интернет на сайтах соответствующих национальных органов по стандартизации.

В случае пересмотра, изменения или отмены настоящего стандарта соответствующая информация будет опубликована на официальном интернет-сайте Межгосударственного совета по стандартизации, метрологии и сертификации в каталоге «Межгосударственные стандарты»

© ISO. 1999 — Все права сохраняются © Стандартинформ. оформление. 2020

В Российской Федерации настоящий стандарт не может быть полностью или частично воспроизведен, тиражирован и распространен в качестве официального издания без разрешения Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии

Содержание

1    Область применения.................................................................1

2    Нормативные ссылки.................................................................1

3    Термины и определения .................... 1

4    Сущность метода....................................................................2

5    Оборудование и стеклянная    посуда.....................................................2

6    Отбор проб.........................................................................2

7    Питательные среды и разбавители ..................... 2

8    Методика...........................................................................3

У Выражение результатов ..............................................................3

10 Протокол испытаний ................................................................3

Приложение ДА (справочное) Сведения о соответствии ссылочных международных

и европейских    стандартов межгосударственным стандартам....................4

МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ

КАЧЕСТВО ВОДЫ

Подсчет культивируемых микроорганизмов.

Подсчет колоний при посеве в питательную агаризованную среду

Water quality. Enumeration of cuiturable micro-organisms.

Colony count by inoculation in a nutrient agar culture medium

Дата введения — 2021—01—01

1    Область применения

Настоящий стандарт устанавливает метод подсчета культивируемых микроорганизмов в воде путем подсчета колоний, сформированных в питательной агаризованной среде после аэробной инкубации при температурах 36 ^вС и 22 °С.

Настоящий стандарт применяется при оценке эффективности водоочистных процессов и для контроля воды всех типов. Он. в частности, применяется при исследовании воды, предназначенной для потребления человеком, в том числе упакованной, и природных минеральных вод.

2    Нормативные ссылки

В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие стандарты. Для датированных ссылок применяют только указанное издание ссылочного стандарта, для недатированных — последнее издание (включая все изменения).

EN ISO 3696. Water for analytical laboratory use — Specification and test methods (ISO 3696:1987) (Вода для лабораторного анализа. Технические требования и методы испытаний)

EN ISO 5667-3, Water quality — Sampling — Part 3: Preservation and handling of water samples (ISO 5667-3:1994) (Качество воды. Отбор проб. Часть 3. Консервация и обработка проб воды)

EN 25667-2’). Water quality — Sampling — Part 2: Guidance on sampling techniques (ISO 5667-2:1991) (Качество воды. Отбор проб. Часть 2. Руководство по составлению методик выборочного контроля)

ISO 6887²>, Microbiology — General guidance for the preparation of dilutions for microbiological examinations (Микробиология. Общее руководство no приготовлению разбавлений для микробиологического исследования)

ISO 8199. Water quality — General guide to the enumeration of micro-organisms by culture (Качество воды. Общее руководство по подсчету микроорганизмов, выращенных методом посева на питательной среде)

3    Термины и определения

В настоящем стандарте применен следующий термин с соответствующим определением:

3.1 культивируемые микроорганизмы (cuiturable micro-organisms): Все аэробные бактерии, дрожжи и плесневые грибы, способные формировать колонии в среде, указанной в условиях испытания. описанных в настоящем стандарте.

¹¹ Заменен на EN ISO 5667-1:2006. ²> Действует ISO 6887-1:2017.

Издание официальное

4    Сущность метода

Проведение глубинного посева определенного количества образца или его разведения в указанную питательную среду на чашках Петри. Инкубация одного комплекта чашек при температуре 36 °С в течение 44 ч и другого комплекта при температуре 22 °С в течение 68 ч.

Подсчет количества колониеобразующих единиц (КОЕ) на миллилитр (мл) образца, исходя из числа колоний, сформированных в питательной среде.

5    Оборудование и стеклянная посуда

Применяют стандартное лабораторное оборудование для микробиологических исследований, а также следующее:

5.1    Оборудование для стерилизации паром (автоклав).

5.2    Инкубатор, обеспечивающий поддержание температуры (36 ± 2) “С.

5.3    Инкубатор, обеспечивающий поддержание температуры (22 ± 2) 'С.

5.4    Стеклянные или пластмассовые чашки Петри с диаметром 90 или 100 мм.

5.5    Водяная баня, обеспечивающая поддержание температуры (45 ± 1) °С.

5.6    Оборудование для подсчета колоний методом подсвечивания на темном фоне.

6    Отбор проб

Отбор пробы воды проводят в соответствии с требованиями к отбору проб, обработке и сохранению. установленными в EN 25667-2 и EN ISO 5667-3. Исследуемую воду, включая природную минеральную воду, доставленную в закрытой упаковке, допустимо хранить не более 12 ч после розлива при температуре хранения (5 ± 3) °С в течение всего периода.

7    Питательные среды и разбавители

7.1    Основные материалы

Для подготовки сред используют ингредиенты стабильного качества, в том числе химические реактивы аналитической степени чистоты. Допустимо использовать эквивалентную готовую сухую среду в соответствии с инструкциями изготовителя. При приготовлении сред используют дистиллированную в стеклянном сосуде или деионизированную воду степени чистоты 3. подготовленную в соответствии с EN ISO 3696. не содержащую веществ, которые могут ингибировать рост микроорганизмов в условиях испытания.

Примечание — Использование химических реактивов других степеней чистоты допустимо при условии получения таких же результатов испытания.

7.2    Разбавитель

Для разбавлений применяют пептонный разбавитель, соответствующий требованиям, установленным в ISO 8199.

7.3 Агар с дрожжевым экстрактом

Триптон (пептон из казеина панкреатический), г 6.0 Сухой дрожжевой экстракт, г 3.0 Агар в виде порошка или гранул (в зависимости от необходимой прочности геля), г От 10 до 20 Вода, мл 1000

Ингредиенты или готовую сухую среду растворяют в воде при нагревании. При необходимости pH корректируют таким образом, чтобы он был равен после стерилизации (7,2 ± 0.2) pH при температуре 25 °С.

Разливают полученную среду в пробирки объемом от 15 до 20 мл. бутылки или другие емкости. Для хранения больших объемов применяют емкости объемом до 500 мл. Стерилизуют в автоклаве (см. 5.1) при температуре (121 ± 3) °С в течение (15 ± 1) мин.

Перед применением среду расплавляют, охлаждают до температуры (45 ± 1) °С и поддерживают ее посредством водяной бани (см. 5.5). Среду рекомендуется хранить не более 4 ч при температуре 45 °С. после чего ее утилизируют.

8    Методика

8.1    Подготовка и посев

Пробу готовят, разводят и инокулируют в соответствии с требованиями ISO 8199, EN ISO 5667-3 и ISO 6887.

Применяют метод глубинного посева (см. ISO 8199). Из каждой пробы (или ее разведения) делают посев не более 2 мл в чашку Петри, добавляют 15—20 мл расплавленной среды (см. 7.3) и тщательно перемешивают путем плавного вращения. Дают среде застыть. Промежуток времени между внесением испытуемой пробы (или ее разведением) и моментом добавления расплавленной среды не должен превышать 15 мин. Посев проводят по меньшей мере в одну чашку для инкубации при каждом температурном режиме.

8.2    Инкубация и исследование

Переворачивают чашки и инкубируют один комплект при температуре (36 ± 2) °С в течение (44 ± 4) ч. другой комплект — при температуре (22 ± 2) °С в течение (68 ± 4) ч. Исследуют чашки, как только они будут извлечены из инкубаторов. Если это невозможно, их хранят при температуре (5 ± 3) ⁹С и проводят исследование в течение 48 ч. В чашках со сплошным ростом микроорганизмов подсчет не производят.

8.3    Подсчет колоний

Для каждого температурного режима инкубации и в соответствии с процедурами, описанными в ISO 8199, подсчитывают колонии, присутствующие на каждой чашке, и вычисляют предполагаемое количество колониеобразующих единиц, присутствующих в 1 мл образца.

9    Выражение результатов

Результаты испытаний выражаются в виде количества колониеобразующих единиц (КОЕ/мл) в миллилитре образца для каждого температурного режима инкубации. Если в чашках, инокулирован-ных испытательными объемами неразбавленного образца, колонии отсутствуют, то записывают результат как «не обнаружено в одном миллилитре». Если в чашках, инокулированных самым большим разведением. насчитывают более 300 колоний, результат записывают как «более 300» или как приближенное количество.

10    Протокол испытаний

Протокол должен содержать ссылку на настоящий стандарт и предоставлять всю соответствующую информацию, включая.

a)    все необходимые для полной идентификации пробы сведения;

b)    технику посева (глубинный посев), используемые оборудование и питательную среду;

c)    время и температуру инкубации:

d)    результаты подсчета, выраженные в соответствии с разделом 9;

e)    все особенности, не указанные в настоящем стандарте или рассматриваемые как дополнительные, а также сведения о любых нарушениях, которые могли повлиять на результаты испытаний.

Приложение ДА (справочное)

Сведения о соответствии ссылочных международных и европейских стандартов

межгосударственным стандартам

Таблица ДА.1

Обозначение ссылочного международного (европейского) стандарта	Степень соответствия	Обозначение и наименование соответствующего межгосударственною стандарта
EN ISO 3696	—	•.1»
EN ISO 5667-3	—	•
EN 25667-2	—	•
ISO 6887	—	•
ISO 8199	—	•
' Соответствующий межгосударственный стандарт отсутствует. До его принятия рекомендуется использовать перевод на русский язык данного международного (европейского) стандарта.

На территории Российской Федерации действует ГОСТ Р 52501-2005 «Вода для лабораторного анализа. Технические условия», идентичный ISO 3696:1987.

УДК 543.3:543.95    МКС    07.100.20    ЮТ

Ключевые слова: вода, качество, инокуляция, подсчет колоний, питательная агаризованная среда

БЗ 11—2020/90

Редактор В.Н. Шмепькое Технические редакторы В.Н. Прусакова. И.Е. Черепкова Корректор Е.Р. Ароян Компьютерная верстка Л.В. Софейчук

Сдано в набор 24.09.2020. Подписано в печать 23 10.2020.    Формат 60 * 84 V_a.    Гарнитура Ариал.

Уел. печ. л 0,93. Уч.-иэд. л. 0.70.

Подготовлено на основе электронной версии, предоставленной разработчиком стандарта

ИД «Юриспруденция», 115419. Москва, ул. Орджоникидзе. 11 www.juris12aal.ru y-booK@mail.ru

Создано а единичном исполнении во ФГУП «СТАМДАРТИМФОРМ» для комплектования Федеральною информационного фонда стандартов. 117418 Москва. Нахимовский пр-т. д. 31. к 2 www.gostinfo.ru info@go3tinfo.ru