МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СОВЕТ ПО СТАНДАРТИЗАЦИИ, МЕТРОЛОГИИ И СЕРТИФИКАЦИИ

(МГС)

INTERSTATE COUNCIL FOR STANDARDIZATION, METROLOGY AND CERTIFICATION

(ISC)

МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ

СТАНДАРТ

СРЕДСТВА ЛЕКАРСТВЕННЫЕ БИОЛОГИЧЕСКИЕ ДЛЯ ВЕТЕРИНАРНОГО ПРИМЕНЕНИЯ

Методы определения остаточных количеств мертиолята, фенола, формальдегида

Издание официальное

Москва

Стандартинформ

2018

Предисловие

Цели, основные принципы и основной порядок проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены в ГОСТ 1.0-2015 «Межгосударственная система стандартизации. Основные положения» и ГОСТ 1.2-2015 «Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные, правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия, обновления и отмены»

Сведения о стандарте

1    РАЗРАБОТАН Федеральным государственным бюджетным учреждением «Всероссийский государственный Центр качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов» (ФГБУ «ВГНКИ»)

2    ВНЕСЕН Федеральным агентством по техническому регулированию и метрологии

3    ПРИНЯТ Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол от 30 ноября 2017 г. № 52)

За принятие проголосовали:

Краткое наименование страны по МК (ISO 3166) 004-97	Код страны по МК (ISO 3166) 004-97	Сокращенное наименование национального органа по стандартизации
Беларусь	BY	Госстандарт Республики Беларусь
Казахстан	KZ	Госстандарт Республики Казахстан
Киргизия	KG	Кыргызстандарт
Россия	RU	Росстандарт
Таджикистан	TJ	Таджикстандарт
Узбекистан	UZ	Узстандарт
Украина	UA	Минэкономразвития Украины

4 Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 27 марта 2018 г. № 154-ст межгосударственный стандарт ГОСТ 34310-2017 введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 июля 2018 г.

5 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

8.1.1.3 Приготовление стандартного раствора формальдегида с концентрацией 0,025 % Количество формалина Х₃, см³, необходимое для приготовления 100 см³ 0,025 %-ного раствора формальдегида, рассчитывают по формуле

_v 0,025 100

Ао — -

³ А

где А — содержание формальдегида в исходном формалине, %;

0,025 — концентрация стандартного формальдегида, %;

100 — объем исходного раствора формалина, см³.

В мерную колбу вместимостью 100 см³ вносят количество формалина, рассчитанное по формуле (5), доводят до метки дистиллированной водой и перемешивают.

Раствор хранят при температуре от 15 °С до 30 °С не более 3 мес.

8.1.1.4    Построение калибровочного графика

Из стандартного раствора по 8.1.1.3 готовят разведения с содержанием формальдегида 0,0025; 0,005; 0,01; 0,015 и 0,02 % и проводят с ними определения по 8.1.2. Строят градуировочный график: по оси абсцисс откладывают концентрации формальдегида, по оси ординат — оптические плотности при длине волны 540 нм.

8.1.1.5    Подготовка пробы

Пробу объемом 5-10 см³ центрифугируют в течение 10 мин при скорости вращения 7000-10000 мин'¹ и температуре 4 °С. Надосадочную жидкость разводят дистиллированной водой в 2-4 раза в зависимости от предполагаемой концентрации.

8.1.2    Проведение анализа

К 2,5 см³ анализируемой пробы добавляют 0,5 см³ свежеприготовленного 5 %-ного раствора калия железосинеродистого и перемешивают. Затем вносят 2 см³ концентрированной соляной кислоты и после перемешивания — 1 см³ 1,38 %-ного свежеприготовленного раствора солянокислого фенилгидразина. Снова перемешивают и через 15 мин измеряют интенсивность окраски на фотоэлектроколориметре или спектрофотометре, используя кюветы шириной 10 мм при длине волны 540 нм (зеленый светофильтр) против контроля (смесь реактивов без анализируемой пробы).

8.1.3    Обработка результатов

Концентрацию формальдегида в процентах определяют по калибровочной кривой с учетом раз-ведений.

8.2 Метод определения формальдегида с ацетилацетоном

Метод основан на взаимодействии формальдегида с ацетилацетоном в среде уксуснокислого аммония с образованием соединения, окрашенного в желтый цвет. Измерение оптической плотности полученного окрашенного раствора проводят на спектрофотометре при длине волны (414 ± 20) нм.

8.2.1    Подготовка к анализу

8.2.1.1    Подготовка проб

Вакцины и сыворотки разводят в 10 раз; бактерийные анатоксины — в 25 раз.

8.2.1.2    Приготовление основного раствора формальдегида с концентрацией 20 мкг/см³

В мерную колбу вместимостью 50 см³ вносят раствор формалина с номинальной массовой концентрацией формальдегида 1 мг/см³ и доводят содержимое колбы до метки дистиллированной водой.

Срок хранения приготовленного раствора в герметично закрытой мерной колбе при температуре от 2 °С до 8 °С — не более 1 мес. Перед использованием раствор выдерживают при температуре от 15 °С до 30 °С не менее 20 мин.

8.2.1.3    Приготовление ацетилацетон-аммиачного реагента

В мерную колбу вместимостью 100 см³ вносят 15 г уксуснокислого аммония и растворяют его в небольшом количестве дистиллированной воды, затем добавляют 0,3 см³ концентрированной уксусной кислоты, 1 см³ ацетилацетона, доводят до метки дистиллированной водой и перемешивают. Срок хранения приготовленного реагента в емкости из темного стекла — не более 1 мес.

8.2.2 Проведение анализа

В пробирки вносят по 1 см³ разведений формальдегида (рабочего раствора), 4 см³ дистиллированной воды, 5 см³ раствора формальдегида по 8.2.1.2 и 5 см³ ацетилацетон-аммиачного реагента по 8.2.1.3. Пробы лекарственного препарата прогревают при температуре 40 °С в течение 40 мин

ГОСТ 34310-2017

и охлаждают до температуры от 15 °С до 30 °С. Измеряют оптические плотности при длине волны (414 ± 20) нм в кювете с толщиной поглощающего слоя 5 мм, используя в качестве раствора сравнения дистиллированную воду.

Строят калибровочный график: по оси абсцисс откладывают концентрации формальдегида, по оси ординат — оптическую плотность. Градуировочный раствор, не содержащий формальдегида (с массовой концентрацией формальдегида, равной нулю), является холостой пробой.

Подготовленные анализируемые пробы и холостую пробу нагревают 40 мин при температуре 40 °С и охлаждают до температуры от 15 °С до 30 °С, после чего измеряют их оптическую плотность при длине волны (414 ± 20) нм относительно дистиллированной воды.

8.2.3 Обработка результатов

По калибровочному графику определяют содержание формальдегида в лекарственном препарате с учетом разведений.

9

УДК 619:615.371:006.354    МКС    11.220

65.020.30

Ключевые слова: средства лекарственные биологические для ветеринарного применения, методы определения, формалин, формальдегид, фенол, мертиолят, дитизон

10

БЗ 5—2018/11

Редактор А.А. Кабанов Технический редактор В.Н. Прусакова Корректор О.В. Лазарева Компьютерная верстка А.Н. Золотаревой

Сдано в набор 28.03.2018. Подписано в печать 29.03.2018. Формат 60x84V₈. Гарнитура Ариал.

Уел. печ. л. 1,86. Уч.-изд. л. 1,68.

Подготовлено на основе электронной версии, предоставленной разработчиком стандарта

Создано в единичном исполнении ФГУП «СТАНДАРТИНФОРМ» для комплектования Федерального информационного

фонда стандартов, 123001 Москва, Гранатный пер., 4. www.gostinfo.ru info@gostinfo.ru

ГОСТ 34310-2017

Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодном информационном указателе «Национальные стандарты», а текст изменений и поправок — в ежемесячном информационном указателе «Национальные стандарты». В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ежемесячном информационном указателе «Национальные стандарты». Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования — на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет (www.gost.ru)

© Стандартинформ, оформление, 2018

Настоящий стандарт не может быть полностью или частично воспроизведен, тиражирован и распространен в качестве официального издания без разрешения Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии

МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ

СРЕДСТВА ЛЕКАРСТВЕННЫЕ БИОЛОГИЧЕСКИЕ ДЛЯ ВЕТЕРИНАРНОГО ПРИМЕНЕНИЯ Методы определения остаточных количеств мертиолята, фенола, формальдегида

Biological medicine remedies for veterinary use.

Methods for determination of residues of merthiolate, phenol, formaldehyde

Дата введения — 2018—07—01

1    Область применения

Настоящий стандарт распространяется на средства лекарственные биологические для ветеринарного применения (далее — лекарственные препараты) и устанавливает методы определения остаточных количеств мертиолята, фенола и формальдегида.

2    Нормативные ссылки

В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие стандарты:

ГОСТ 8.423-81 Государственная система обеспечения единства измерений. Секундомеры механические. Методы и средства поверки

ГОСТ 12.0.004-2015 Система стандартов безопасности труда. Организация обучения безопасности труда. Общие положения

ГОСТ 12.1.004-91 Система стандартов безопасности труда. Пожарная безопасность. Общие требования

ГОСТ 12.1.005-88 Система стандартов безопасности труда. Общие санитарно-гигиенические требования к воздуху рабочей зоны

ГОСТ 12.1.007-76 Система стандартов безопасности труда. Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности

ГОСТ 12.1.019-79* Система стандартов безопасности труда. Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты

ГОСТ 12.4.009-83 Система стандартов безопасности труда. Пожарная техника для защиты объектов. Основные виды. Размещение и обслуживание

ГОСТ 61-75 Реактивы. Кислота уксусная. Технические условия ГОСТ 1625-2016 Формалин технический. Технические условия

ГОСТ 1770-74 (ИСО 1042-83, ИСО 4788-80) Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия

ГОСТ 3117-78 Реактивы. Аммоний уксуснокислый. Технические условия ГОСТ 3118-77 Реактивы. Кислота соляная. Технические условия ГОСТ 4160-74 Реактивы. Калий бромистый. Технические условия ГОСТ 4204-77 Реактивы. Кислота серная. Технические условия ГОСТ 4206-75 Реактивы. Калий железосинеродистый. Технические условия ГОСТ 4220-75 Реактивы. Калий двухромовокислый. Технические условия ГОСТ 4232-74 Реактивы. Калий йодистый. Технические условия ГОСТ 4233-77 Реактивы. Натрий хлористый. Технические условия

* В Российской Федерации действует ГОСТ Р 12.1.019-2009.

Издание официальное

ГОСТ 4457-74 Реактивы. Калий бромновато-кислый. Технические условия ГОСТ 4461-77 Реактивы. Кислота азотная. Технические условия

ГОСТ 4517-2016 Реактивы. Методы приготовления вспомогательных реактивов и растворов, применяемых при анализе

ГОСТ 4658-73 Ртуть. Технические условия

ГОСТ 5100-85 Сода кальцинированная техническая. Технические условия ГОСТ 5777-84 Калий марганцовокислый технический. Технические условия ГОСТ 6709-72 Вода дистиллированная. Технические условия ГОСТ 7298-79 Реактивы. Гидроксиламин сернокислый. Технические условия ГОСТ 10163-76 Реактивы. Крахмал растворимый. Технические условия ГОСТ 10259-78 Реактивы. Ацетилацетон. Технические условия ГОСТ 13867-68 Продукты химические. Обозначение чистоты

ГОСТ ИСО/МЭК 17025-2009 Общие требования к компетентности испытательных и калибровочных лабораторий

ГОСТ 20015-88 Хлороформ. Технические условия

ГОСТ 25336-82 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры

ГОСТ 27068-86 Реактивы. Натрий серноватистокислый (натрия тиосульфат) 5-водный. Технические условия

ГОСТ 29227-91 (ИСО 835-1-81) Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования

ГОСТ 29251-91 (ИСО 385-1-84) Посуда лабораторная стеклянная. Бюретки. Часть 1. Общие требования

Примечание — При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов в информационной системе общего пользования — на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет или по ежегодному информационному указателю «Национальные стандарты», который опубликован по состоянию на 1 января текущего года, и по выпускам ежемесячного информационного указателя «Национальные стандарты» за текущий год. Если ссылочный стандарт заменен (изменен), то при пользовании настоящим стандартом следует руководствоваться заменяющим (измененным) стандартом. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, применяется в части, не затрагивающей эту ссылку.

3    Термины, определения

В настоящем стандарте применены термины с соответствующими определениями:

3.1    формалин:    Водный раствор формальдегида (метиленгликоль), стабилизированный

метанолом, применяемый для инактивирования токсинов, вирусов и бактерий.

Примечание — Наиболее распространенной является форма, содержащая до 40 % формальдегида, 8 % метилового спирта и 52 % воды.

3.2    формальдегид: Метиленгликоль (СН₂0).

3.3    фенол: Гидроксибензол (С₆Н₅ОН).

3.4    мертиолят (тиомерсал): Этилртутьтиосалицилатнатрия.

4    Требования безопасности и условия проведения анализов

4.1    Требования безопасности

4.1.1    В лаборатории должно быть организовано обучение персонала безопасности труда в соответствии с ГОСТ 12.0.004.

4.1.2    При работе с химическими реактивами необходимо соблюдать общие требования безопасности обращения с вредными веществами, установленные ГОСТ 12.1.007.

4.1.3    Содержание вредных веществ в воздухе рабочей зоны не должно превышать норм, установленных ГОСТ 12.1.005.

4.1.4    При работе с электроустановками следует соблюдать требования электробезопасности, установленные в ГОСТ 12.1.019. ¹

ГОСТ 34310-2017

4.1.5 Помещение лаборатории должно соответствовать требованиям пожарной безопасности по ГОСТ 12.1.004, должно быть оснащено средствами пожаротушения по ГОСТ 12.4.009.

4.2 Условия проведения анализов

4.2.1    Общие требования к помещениям — по ГОСТ ИСО/МЭК 17025.

4.2.2    Анализы проводят при температуре от 15 °С до 30 °С (комнатная температура).

4.2.3    Требования к персоналу — по ГОСТ ИСО/МЭК 17025. Персонал должен владеть методами проведения анализов и работы с химическими реактивами.

5 Средства измерений, вспомогательное оборудование, посуда и реактивы

5.1 Для определения остаточных количеств мертиолята, фенола, формальдегида применяют:

-    весы лабораторные высокого класса точности сценой деления 0,00001 г и пределом допускаемой погрешности в эксплуатации ± 0,05 мг;

-    фотоэлектроколориметр или спектрофотометр, обеспечивающие измерения при длине волны от 414 до 620 нм, с пределами допускаемой основной абсолютной погрешности измерений коэффициента пропускания не более ± 3 %;

-    секундомер 2-го класса точности с ценой деления 60 секундной шкалы 0,2 с и погрешностью за 10 мин ± 0,6 с по ГОСТ 8.423;

-    таймер любого типа с погрешностью ± 30 с;

-    баню водяную любого типа, обеспечивающую поддержание температуры до (100 ± 1) °С;

-    центрифугу лабораторную с охлаждением со скоростью вращения не менее 7000 мин^-1;

-    центрифугу лабораторную настольную, обеспечивающую скорость вращения не менее 3000 мин^-1;

-    шкаф сушильный с температурой нагревания не ниже 100 °С;

-    колбы мерные 1(2)-50(100,200,500) по ГОСТ 1770;

-    колбы конические Кн-1-100(200,500)-18 ТХС с притертыми пробками по ГОСТ 25336;

-    воронку делительную ВД-1-100ХС по ГОСТ 25336;

-    воронку стеклянную ВФ-1(2)-60-ПОР 500 ТХС по ГОСТ 25336;

-    пипетки по ГОСТ 29227;

-    пипетки автоматические вместимостью от 0,1 до 1,0 см² с наконечниками;

-    пробирки П1-14-120 ХС или П1-16-150ХС по ГОСТ 25336;

-    стаканчики для взвешивания СН-32 и СН-43 по ГОСТ 25336;

-    бюретку вместимостью 50 см² по ГОСТ 29251;

-    стаканы В-1-25(50,100,150,250,600,800,1000) ТС по ГОСТ 25336;

-    цилиндры 1(2,3,4)-50(100) по ГОСТ 1770;

-    аминопиразолон;

-    аммоний уксуснокислый по ГОСТ 3117;

-    ацетилацетон по ГОСТ 10259;

-    воду дистиллированную по ГОСТ 6709;

-    воду бидистиллированную по ГОСТ 4517;

-    глицин;

-    дитизон (1,5-дифенилтиокарбазон);

-    хлороформ по ГОСТ 20015;

-    натрия хлорида изотонического 0,9 %-ный раствор;

-    гидроксиламин сернокислый по ГОСТ 7298, 20 %-ный раствор;

-    кислоту уксусную по ГОСТ 61;

-    кислоту соляную концентрированную по ГОСТ 3118;

-    кислоту серную концентрированную по ГОСТ 4204;

-    кислоту азотную по ГОСТ 4461;

-    кислоту трихпоруксусную по ГОСТ 4517, 20 %-ный раствор;

-    калий йодистый по ГОСТ 4232;

-    калий бромновато-кислый по ГОСТ 4457;

-    калий бромистый по ГОСТ 4160;

-    калий двухромовокислый по ГОСТ 4220;

-    калия перманганат по ГОСТ 5777, 5 %-ный раствор;

-    калий железосинеродистый по ГОСТ 4206;

-    крахмал растворимый по ГОСТ 10163, 1 %-ный раствор;

-    натрия лаурилсульфат;

-    натрия тиосульфат по ГОСТ 27068;

-    натрия карбонат по ГОСТ 5100;

-    натрий хлористый по ГОСТ 4233;

-    ртуть металлическую по ГОСТ 4658;

-    трис(гидроксиметил)аминометан;

-    формалин по ГОСТ 1625;

-    фенилгидразин солянокислый с содержанием основного вещества не менее 96 %, 1,38 %-ный раствор;

-    вату прокипяченную и высушенную.

Примечание — Все реактивы должны относиться к подгруппе чистоты 2 (х. ч.) или 3 (ч. д. а.) по ГОСТ 13867.

5.2 Допускается применение других средств измерений и посуды, не уступающих вышеуказанным по метрологическим и техническим характеристикам и обеспечивающим необходимую точность измерения, а также вспомогательного оборудования, реактивов и материалов по качеству не ниже указанных в 5.1.

6 Метод определения остаточного количества мертиолята

6.1    Сущность метода

Метод основан на выделении ртути в виде свободных ионов и обработке их раствором дитизона в хлороформе. Образовавшийся дитизонат ртути определяют колориметрически.

6.2    Подготовка к анализу

6.2.1    Приготовление раствора серной кислоты

Серную кислоту концентрированную разводят бидистиллированной водой в соотношении 1:1 по объему (кислоту наливают в воду).

6.2.2    Приготовление раствора дитизона в хлороформе

Основной 0,01 %-ный раствор готовят растворением в хлороформе навески 10 мг дитизона в мерной колбе вместимостью 100 см³. Раствор годен к употреблению при хранении от 2 °С до 8 °С в темном месте в течение 1 мес.

0,001 %-ный раствор дитизона готовят перед употреблением путем разведения основного 0,01 %-ного раствора дитизона в хлороформе.

6.2.3    Приготовление основного стандартного раствора ртути концентрацией 1 мг/см³

Для приготовления основного стандартного раствора ртути 0,5 г металлической ртути (точная навеска) растворяют в 15 см³ концентрированной азотной кислоты в мерной колбе вместимостью 500 см³, доводят бидистиллированной водой до метки и перемешивают.

Раствор хранят при температуре от 15 °С до 30 °С в течение 3 мес в вытяжном шкафу в специально отведенном месте.

Допускается использование государственного стандартного образца (ГСО) раствора ионов ртути (II).

6.2.4    Приготовление рабочего стандартного раствора ртути концентрацией 10 мкг/см³

В мерную колбу вместимостью 100 см³ помещают 1 см³ основного стандартного раствора ртути, доводят объем раствора бидистиллированной водой до метки и перемешивают.

6.2.5    Приготовление раствора уксусной кислоты концентрацией 6 моль/дм³

Взвешивают 360 г ледяной уксусной кислоты и разводят дистиллированной водой до 1 дм³.

Раствор хранят при температуре от 15 °С до 30 °С в течение 1 мес.

6.2.6    Приготовление 0,9 %-ного изотонического раствора хлорида натрия

Взвешивают 9 г хлористого натрия и растворяют его в 1 дм³ дистиллированной воды. Раствор разливают по 100 и 250 см³ в стеклянные флаконы и колбы соответствующей вместимости, фильтруют и стерилизуют при температуре 110 °С-120 °С в течение 15-20 мин или текучим паром при температуре 100 °С в течение 30 мин. Раствор хранят при температуре от 2 °С до 8 °С в течение 6 мес.

ГОСТ 34310-2017

6.2.7    Приготовление 5 %-ного раствора калия перманганата

50 г калия перманганата растворяют в 700 см³ горячей бидистиллированной воды в конической колбе, охлаждают и переносят в мерную колбу вместимостью 1 дм³, доводят объем раствора бидистиллированной водой до метки и перемешивают. Раствор хранят при температуре от 2 °С до 8 °С в течение 1 мес.

6.2.8    Построение калибровочного графика

Точные объемы рабочего стандартного раствора ртути — 0,4; 0,6; 0,8; 1; 1,2 см³, соответствующие по содержанию ртути примерно 4, 6, 8, 10, 12 мкг, помещают в колбы с притертыми пробками вместимостью 100 см³. Затем добавляют по 1,2 см³ серной кислоты по 6.2.1, 5 см³ уксусной кислоты молярной концентрации 6 моль/дм³, 30 см³ бидистиллированной воды, 5 см³ 0,9 %-ного изотонического раствора хлорида натрия. Содержимое каждой колбы перемешивают и добавляют из бюретки по 10 см³ 0,001 %-ного раствора дитизона в хлороформе по 6.2.2. Смеси сильно взбалтывают в течение 30 с, переносят в делительную воронку, собирают хлороформный слой и отфильтровывают через бумажный фильтр. Допускается центрифугирование смеси с последующим отбором хлороформного слоя с помощью пипетки, дозатора или груши и фильтрованием. Отфильтрованный хлороформный слой фотоколориметрируют против контрольного раствора, содержащего те же компоненты, но без стандартного раствора ртути, при длине волны 570 нм (оранжевый светофильтр) или при длине волны 620 нм (красный светофильтр), или используют спектрофотометр при длине волны 597 нм.

Строят калибровочный график, откладывая по оси абсцисс содержание ртути в мкг, а по оси ординат — соответствующие величины оптической плотности.

Калибровочный график строят при каждом определении мертиолята.

6.3    Проведение анализа

0,2 см³ лекарственного препарата вносят в колбу с притертой пробкой вместимостью 100 см³, добавляют 1,2 см³ раствора серной кислоты по 6.2.1 (при наличии в препарате гидроокиси алюминия, смесь осторожно нагревают на водяной бане до полного ее растворения), 5 см³ 5 %-ного раствора перманганата калия, хорошо перемешивают и оставляют на 1 ч. Для удаления избытка перманганата калия добавляют 1,5 см³ 20 %-ного раствора сернокислого гидроксиламина, добавляют 30 см³ бидистиллированной воды, 5 см³ раствора уксусной кислоты молярной концентрации 6 моль/дм³ и перемешивают. К полученному раствору из бюретки (дозатора) добавляют 10 см³ 0,001 %-ного раствора дитизона в хлороформе и взбалтывают в течение 30 с.

Содержимое колбы переносят в делительную воронку и после разделения слоев нижний хлороформный слой фильтруют через бумажный фильтр в кювету с толщиной поглощающего свет слоя 10 мм. Определяют оптическую плотность на спектрофотометре при длине волны 597 нм против контрольного раствора (смесь реактивов без лекарственного препарата) или на фотоэлектроколориметре при длине волны 570 или 620 нм — как при построении калибровочной кривой, в кювете с толщиной слоя 10 мм.

По калибровочному графику находят содержание ртути в анализируемом растворе.

6.4    Обработка результатов

Содержание мертиолята в лекарственном препарате X_v %, рассчитывают по формуле

¹    0,2-49,55 ’    (1)

где С — содержание ртути, найденное по калибровочному графику, мкг;

0,2 — объем анализируемого лекарственного препарата, см³;

49,55 — содержание ртути в 100 частях мертиолята.

7 Методы определения остаточного содержания фенола

7.1    Метод определения фенола бромным титрованием

Метод основан на определении продуктов бромирования фенола (три-бромфенола) в безбелковом экстракте методом йодометрического титрования.

7.1.1    Подготовка к анализу

7.1.1.1    Приготовление раствора бромид-бромата молярной концентрации 0,1 моль/дм³

5

Поскольку раствор брома, вследствие своей летучести, непостоянен, готовится смесь бромноватокислого и бромистого калия (бромид-бромат).

Точную навеску бромновато-кислого калия 2,7837 г, высушенного в сушильном шкафу при температуре от 105°С до 110 °С, и около 10 г бромистого калия (не менее 9,92 г) растворяют примерно в 300 см³ дистиллированной воды в мерной колбе вместимостью 0,5 дм³, доводят водой до метки и перемешивают. Раствор хранят во флаконах из темного стекла с притертыми пробками в течение одного месяца.

7.1.1.2    Приготовление раствора тиосульфата натрия молярной концентрации 0,1 моль/дм³

26 г тиосульфата натрия и 0,1 г карбоната натрия растворяют в свежепрокипяченной и охлажденной дистиллированной воде в мерной колбе вместимостью 1 дм³, доводят водой до метки и перемешивают. Раствор выдерживают 10 суток в темном месте. При наличии осадка жидкость сифонируют. Хранят во флаконах из темного стекла с притертыми пробками в течение месяца.

7.1.1.3    Приготовление 20 %-ного раствора йодистого калия

20 г йодистого калия растворяют в мерной колбе вместимостью 200 см³ в 30-50 см³ дистиллированной воды и доводят объем раствора до 100 см³. Раствор хранят во флаконах из темного стекла в течение месяца.

7.1.1.4    Установка титра тиосульфата натрия молярной концентрации 0,1 моль/дм³ (поправочный коэффициент К₀)

0,15 г (точная навеска) мелкорастертого калия двухромовокислого (К₂Сг₂0₇), перекристаллизо-ванного и высушенного при температуре от 130 °С до 150 °С до постоянной массы, растворяют в 50 см³ дистиллированной воды в колбе с притертой пробкой вместимостью 200 см³. Добавляют 2 г йодистого калия, растворенного в 10 см³ воды, 5 см³ соляной кислоты, закрывают пробкой, смоченной раствором йодистого калия, и оставляют в темном месте в течение 10 мин. Добавляют 200 см³ дистиллированной воды, обмывая пробку водой, и титруют приготовленным раствором тиосульфата натрия до зеленовато-желтого окрашивания. Затем приливают 2-3 см³ 1 %-ного раствора крахмала и продолжают титровать до перехода синей окраски в светло-зеленую. Поправочный коэффициент (K_Q) вычисляют по формуле

где а — навеска калия двухромовокислого, г;

Т — количество тиосульфата натрия, содержащегося в 1 см³ раствора молярной концентрации 0,1 моль/дм³, равное 0,004904 г;

V—объем раствора тиосульфата натрия, израсходованный на титрование, см³.

7.1.1.5 Установка титра раствора бромид-бромата калия молярной концентрации 0,1 моль/дм³ (поправочный коэффициент К)

Точно отмеряют из бюретки 30 см³ раствора бромид-бромата калия в колбу с притертой пробкой, добавляют 120 см³ дистиллированной воды и 5 см³ концентрированной соляной кислоты. Закрывают пробкой и взбалтывают, затем добавляют 2 г йодистого калия, растворенного в 10 см³ дистиллированной воды, снова закрывают пробкой, взбалтывают. Смесь оставляют на 5 мин в темном местей выделившийся йод титруют раствором тиосульфата натрия молярной концентрации 0,1 моль/дм³ до обесцвечивания (индикатор — 1 %-ный раствор крахмала). Поправочный коэффициент (К) вычисляют по формуле

где V₀ — объем раствора тиосульфата натрия молярной концентрации 0,1 моль/дм³, израсходованный на титрование, см³;

V—объем раствора бромата калия, взятый на определение, см³;

К₀ — поправочный коэффициент 0,1 моль/дм³ раствора тиосульфата натрия.

7.1.1.6 Подготовка пробы лекарственного препарата

В пробирку вместимостью 10 см³ вносят 5 см³ анализируемого лекарственного препарата, добавляют равный объем 20 %-ного раствора трихпоруксусной кислоты. Пробирку тщательно встряхивают и оставляют на 5-6 мин при температуре от 15 °С до 30 °С. Коагулированные белки удаляют фильтрованием через бумажный фильтр или центрифугированием при скорости вращения 3000 мин^-1, и в фильтрате (центрифугате) определяют свободный фенол.

6

ГОСТ 34310-2017

7.1.2    Проведение анализа

2 см³ фильтрата (центрифугата) вносят в колбу с притертой пробкой, добавляют 25 см³ раствора бромид-бромата калия и 2 см³ соляной кислоты (при этом могут образоваться кристаллы трибромфенола, которые не влияют на результаты анализа). Оставляют на 15 мин при температуре от 15 °С до 30 °С. Добавляют 4 см³ 20 %-ного раствора йодистого калия. Выделившийся йод титруют раствором тиосульфата натрия молярной концентрации 0,1 моль/дм³ в присутствии 1 %-ного раствора крахмала в качестве индикатора до обесцвечивания.

7.1.3    Обработка результатов

Содержание фенола Х₂ , %, в образце рассчитывают по формуле

Х₂= (25 ■ К— А ■ /С₀) 0,001567 ■ 100,    (4)

где 25 — объем раствора бромид-бромата, взятый на титрование, см³;

К— поправка к титру раствора бромид-бромата калия молярной концентрации 0,1 моль/дм³;

К₀ — поправка к титру раствора натрия тиосульфата молярной концентрации 0,1 моль/дм³;

А — объем раствора натрия тиосульфата, пошедшего на титрование, см³;

0,001567 — количество фенола, соответствующее 1 см³ раствора бромид-бромата калия, г;

100 — пересчет в проценты.

7.2 Метод определения фенола с феррицианидом калия

Метод основан на окислении фенола в щелочных условиях в присутствии калия феррицианида (III) с образованием тиохрома.

7.2.1    Подготовка к анализу

7.2.1.1    Приготовление буферного раствора

15,4 гтрис(гидроксиметил)аминометана, 72,1 г глицина, 5 г лаурилсульфата натрия растворяют в дистиллированной воде в мерной колбе, доводя объем раствора до 500 см³. pH буферного раствора

9,0 ед. pH. Перед использованием буферный раствор разводят дистиллированной водой в соотношении 1:10. Раствор хранят при температуре от 15 °С до 30 °С в течение одного месяца.

7.2.1.2    Приготовление раствора аминопиразалона

0,5 г аминопиразалона растворяют в 0,5 дм³ буферного раствора. Раствор используют свежеприготовленным.

7.2.1.3    Приготовление раствора железосинеродистого калия

5 г железосинеродистого калия растворяют в 95 см³ дистиллированной воды. Хранят при комнатной температуре в течение одного месяца.

7.2.1.4    Приготовление стандартных растворов фенола для калибровочного графика

Готовят серию стандартных растворов фенола с содержанием 5, 10, 15, 20 и 30 мкг/см³.

7.2.2    Проведение анализа

К 5 см³ анализируемого лекарственного препарата и каждого стандартного раствора по

7.2.1.4 прибавляют 5 см³ буферного раствора по 7.2.1.1, 5 см³ раствора аминопиразолона и 5 см³ раствора железо си не род и сто го калия. Выдерживают 10 мин и измеряют оптическую плотность на спектрофотометре при длине волны 546 нм.

7.2.3    Обработка результатов

Строят калибровочный график по 6.2.8, откладывая по оси абсцисс содержание фенола, а по оси ординат соответствующие значения величин оптической плотности. По нему рассчитывают содержание фенола в пробе.

8 Методы определения остаточного количества формальдегида

8.1    Метод определения с фенилгидразином

Метод основан на цветной реакции формальдегида с солянокислым фенилгидразином и железосинеродистым калием в присутствии соляной кислоты.

8.1.1    Подготовка к анализу

8.1.1.1    Приготовление 5 %-ного раствора железосинеродистого калия по 7.2.1.3.

8.1.1.2    Приготовление 1,38 %-ного раствора фенилгидразина солянокислого 1,38 гфенилгидразина солянокислого растворяют в 98,62 см³ дистиллированной воды. Разливают в склянки из темного стекла и используют свежеприготовленным.

7

1

2