МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СОВЕТ ПО СТАНДАРТИЗАЦИИ, МЕТРОЛОГИИ И СЕРТИФИКАЦИИ

(МГС)

INTERSTATE COUNCIL FOR STANDARDIZATION, METROLOGY AND CERTIFICATION

(ISC)

МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ

СТАНДАРТ

КОРМА, КОМБИКОРМА, КОМБИКОРМОВОЕ СЫРЬЕ

Метод определения содержания ксенобиотиков с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим детектором

Издание официальное

Предисловие

Цели, основные принципы и основной порядок проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены в ГОСТ 1.0-2015 «Межгосударственная система стандартизации. Основные положения» и ГОСТ 1.2-2015 «Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные, правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия, обновления и отмены»

Сведения о стандарте

1    РАЗРАБОТАН Федеральным государственным бюджетным учреждением «Всероссийский государственный Центр качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов» (ФГБУ «ВГНКИ»)

2    ВНЕСЕН Федеральным агентством по техническому регулированию и метрологии

3    ПРИНЯТ Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол от 19 декабря 2016 г. № 94-П)

За принятие проголосовали:

Краткое наименование страны по МК(ИС0 3166) 004—97 Код страны по MK (ИСО 3166) 004—97 Сокращенное наименование национального органа по стандартизации Армения AM Минэкономики Республики Армения Беларусь BY Госстандарт Республики Беларусь Киргизия KG Кыргызстандарт Россия RU Росстандарт Таджикистан TJ Таджикстандарт

4    Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 21 февраля 2017 г. № 52-ст межгосударственный стандарт ГОСТ 34044-2016 введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 июля 2018 г.

5    ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодном информационном указателе «Национальные стандарты», а текст изменений и поправок — в ежемесячном информационном указателе «Национальные стандарты». В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ежемесячном информационном указателе «Национальные стандарты». Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования — на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет (www.gost.ru)

© Стандартинформ, 2017

В Российской Федерации настоящий стандарт не может быть полностью или частично воспроизведен, тиражирован и распространен в качестве официального издания без разрешения Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии

Рисунок 1 — Подготовка проб

8 Порядок выполнения анализа

8.1    Условия ВЭЖХ-МС/МС измерений

8.1.1    Хромато-масс-спектрометр включают в соответствии с руководством (инструкцией) по эксплуатации и устанавливают параметры рабочих режимов масс-спектрометрического детектирования и хроматографического разделения.

8.1.2    Например, для колонки диаметром 1,0 мм, длиной 100 мм, с обращенно-фазным сорбентом С18 с размером частиц не более 1,7 мкм, соблюдают следующие условия хроматографирования:

-    температура колонки — 30 °С;

-    температура в отсеке устройства ввода проб — 20 °С;

-    скорость потока подвижной фазы — 0,1 см³/мин;

-    объем вводимой пробы — 10 мм³.

Разделение проводят в режиме градиентного элюирования (приготовление подвижных фаз А и Б! по 6.2.1, в качестве подвижной фазы Б₂ используют ацетонитрил) в соответствии с таблицами 4, 5 и 6.

Таблица 4 — Условия градиентного элюирования в положительном режиме ионизации (список 1)

Время, мин Подвижная фаза А,, % Подвижная фаза Б-^% 0,0 100 0 2,0 100 0

Время, мин	Подвижная фаза Аь %	Подвижная фаза Б.,,%
10,0	30	70
15,0	0	100
17,0	0	100
17,1	100	0
25,0	100	0

Таблица 5 —Условия градиентного элюирования в положительном режиме ионизации (список 2)

Время, мин Подвижная фаза А.,, % Подвижная фаза Б.,,% 0,0 50 50 1,0 50 50 6,0 0 0 12,0 0 0 12,1 50 50 20,0 50 50

Таблица 6 — Условия градиентного элюирования в отрицательном режиме ионизации (список 3)

Время, мин Подвижная фаза А.,, % Подвижная фаза В2,% 0,0 50 50 2,0 50 50 5,0 20 80 6,5 0 100 10,0 0 100 11,0 50 50 20,0 50 50

8.1.3 Параметры настройки масс-спектрометрического детектора в режиме «широкодиапазонной диссоциации, индуцируемой соударением» (BBCID) преведены в таблицах 7, 8 и 9.

Таблица 7 — Параметры источника электрораспыления в положительном режиме ионизации (список 1)

Временной интервал (мин) Амплитуда напряжения ВЧ охладителя ионов (Vpp) Время транспортирования (мкс) Время накопления ионов (мкс) Скорость сканирования/ режим сканирования 0,5—16,0 35—60 1/1 35—50 1/1 10 2,5 Гц/ЫэСЮ Энергия соударений 30 эВ Градиент энергий 100/145, временной интервал, %, 60/40

Напряжение в источнике: 400 V; напряжение на капилляре 1000 V; Зарядное напряжение 300 V; давление азота в распылителе 400 кПа; скорость газа осушения 4 дм³/мин; температура газа осушения 200 °С; температура распылителя 350 °С; высокочастотное напряжение на воронке 400 В; амплитуда напряжения ВЧ 400 В; амплитуда напряжения ВЧ ячейки соударений 600 В.

Таблица 8—Параметры источника электрораспыления в положительном режиме ионизации (список2)

Временной интервал (мин) Амплитуда напряжения ВЧ охладителя ионов (Vpp) Время транспортирования (мкс) Время накопления ионов (мкс) Скорость сканирования/ режим сканирования 0,5—6,0 100—150 1/1 50—70 1/1 15 2,5 Гц/ЫэСЮ 6,0—12,0 150—250 1/1 45—50 1/1 18

Энергия соударений 40 эВ Градиент энергий 100/220, временной интервал, %, 50/50

Напряжение в источнике: 400 V; напряжение на капилляре 1000 V; Зарядное напряжение 300 V; давление азота в распылителе 400 кПа; скорость газа осушения 4 дм³/мин; температура газа осушения 200 °С; температура распылителя 350 °С; высокочастотное напряжение на воронке 400 В; амплитуда напряжения ВЧ 400 В; амплитуда напряжения ВЧ ячейки соударений 800 В.

Таблица 9 — Параметры источника электрораспыления в отрицательном режиме ионизации (список 3)

Временной интервал (мин) Амплитуда напряжения ВЧ охладителя ионов (Vpp) Время транспортирования (мкс) Время накопления ионов (мкс) Скорость сканирования/ режим сканирования 0,0—6,5 50—100 1/1 38—45 1/1 11 2,5 Гц/ЬЬСГО 6,5—10,0 150—200 1/1 45—50 1/1 13,5

Энергия соударений 20 эВ Градиент энергий 100/225(230), временной интервал, %, 50/50

Напряжение в источнике: 400 V; напряжение на капилляре 1000 V; Зарядное напряжение 300 V; давление азота в распылителе 400 кПа; скорость газа осушения 4 дм³/мин; температура газа осушения 200 °С; температура распылителя 350 °С; высокочастотное напряжение на воронке 400 В; амплитуда напряжения ВЧ 400 В; амплитуда напряжения ВЧ ячейки соударений 700 В.

Примечание — Приведенные параметры хроматографического разделения и масс-спекгрометрического детектирования могут отличаться в зависимости от используемого оборудования.

8.1.4 Параметры воздействия на ионы в режиме ВВСЮ и соответствие между анализируемыми ксенобиотиками и внутренними стандартами приведены в таблицах 10,11 и 12.

Таблицею — Параметры воздействия на ионы в режиме ВВСЮ с регистрацией положительных ионов (список 1)

Аналит Ион-предшественник, m/z Ион-продукт, m/z Время удерживания, мин Внутренний стандарт Гидрокситиабендазол 218,038 191,027 5,74 Тетрамизол-Д5 Альбендазол-амино-сульфон 240,080 198,033 5,95 Тетрамизол 205,079 178,068 5,79 Тиабендазол 202,043 175,032 6,03 Триметоприм 291,145 230,116 6,19 Тримегоприм-Д9 Арприноцид 278,060 143,005 7,41 Ронидазол-ДЗ Клопидол 191,997 101,014 5,87 Этопабат 238,107 136,039 8,29 Галофугинон 414,021 100,076 8,02 Ронидазол 201,061 140,044 5,61 Тернидазол 186,087 128,045 5,81 Тинидазол 248,069 121,034 6,23 Диметридазол 142,061 95,06 5,41 Диметридазол-ДЗ 2-гид роксиметил-1-метил-5-нитро-1 имидазол 158,056 111,055 5,11 Ипронидазол 170,092 123,092 7,41 Ипронидазол-ДЗ Гидроксиипронидазол 186,087 121,075 6,75 Гидрокси- ипронидазол-ДЗ Метронидазол 172,071 128,044 6,75 Метронидазол-ДЗ Гидроксиметронидазол 188,066 126,028 5,38 Кетопрофен 255,101 209,096 4,09 Кетопрофен-ДЗ Ампицилин 350,116 192,047 6,42 Отсутствует Ципрофлоксацин 332,140 288,150 6,52 Ципрофлоксацин-Д8 Данофлоксацин 358,156 314,130 6,70

ГОСТ 34044-2016

Окончание таблицы Ю

Аналит Ион-предшественник, m/z Ион-продукт, m/z Время удерживания, мин Внутренний стандарт Дифлокса цин 400,146 356,157 7,03 Дифлокса цин-ДЗ Энрофлоксацин 360,171 245,108 6,75 Энрофлоксацин-Д5 Флюмеквин 262,087 202,030 9,21 Ломефлоксацин 352,146 265,115 6,67 Марбофлоксацин 363,146 320,141 6,22 Налидиксовая кислота 233,092 215,081 8,93 Налидиксовая кислота-Д5 Норфлоксацин 320,140 302,130 6,44 Норфлоксацин-Д5 Офлоксацин 362,151 318,162 6,40 Оксалиновая кислота 262,070 244,060 8,04 Оксалиновая кислота-Д5 Пипемидовая кислота 304,140 217,109 5,94 Сарафлоксацин 386,131 299,099 7,08 Сарафп оксаци н-Д8 Сульфахлорпиридазин 285,02 156,011 7,12 Сульфадиазин-Д4 Сульфадиазин 251,059 156,011 5,65 Сул ьфад и метокси н 311,080 156,077 7,31 Сульфадоксин 311,081 156,011 8,16 Сульфаэтоксипиридазин 295,085 156,011 7,60 Сульфагуанидин 215,059 156,012 1,72 Отсутствует Сульфамеразин 265,077 184,086 6,10 Сульфаметазин-Д4 Сульфаметазин 279,091 186,034 6,51 Сульфаметизол 271,031 156,011 6,64 Сульфаметоксазол 254,059 108,045 7,32 Сульфаметоксипиридазин 281,070 156,011 6,71 Сульфаметокса- зол-Д4 Сульфамонометоксин 281,070 156,012 7,11 Сульфамоксол 268,075 113,072 6,44 Сульфатиазол-Д4 Сульфапиридин 250,064 184,086 5,97 Сульфахиноксалин 301,075 156,010 8,25 Сульфасоксазол 268,075 156,011 7,56 Сульфатиазол 256,02 108,044 5,91 Хлортетрацикпин 479,121 444,085 7,56 Демекпоцикпин Доксицикпин 465,105 428,135 7,08 Окситетрацикпин 445,160 426,119 7,98 Тетрациклин 461,155 410,124 6,48 Тиамулин 494,329 192,105 6,64 Отсутствует

Таблица 11 — Параметры воздействия на ионы в режиме BBCID с регистрацией положительных ионов (список 2)

Аналит Ион- предшественник, m/z Ион-продукт, m/z Время удерживания, мин Внутренний стандарт Гидроксимебендазол 298,118 266,094 2,50 Гидроксимебендазол-ДЗ Альбендазол 266,095 234,069 3,55 Апьбендазол-ДЗ Альбендазол сульфон 298,085 224,011 2,75 Альбендазол сульфон-ДЗ Альбендазол сульфоксид 282,090 240,043 2,44 Альбендазол сульфоксид-ДЗ

11

Окончание таблицы 11

Аналит Ион- предшественник, m/z Ион-продукт, m/z Время удерживания, мин Внутренний стандарт Аминофлюбендазол 256,088 123,023 2,59 Г идроксимебендазол-ДЗ Аминомебендазол 238,097 105,033 2,5 Камбендазол 303,091 261,044 2,62 Фенбендазол-ДЗ Фебантел 447,133 383,081 6,42 Фенбендазол 300,080 268,054 4,60 Фенбендазол сульфон 332,07 300,043 3,24 Фенбендазол сульфон-ДЗ Флюбендазол 314,093 282,067 3,83 Флюбендазол-ДЗ Мебендазол 296,103 264,076 3,53 Мебендазол-ДЗ Морантел 221,110 164,053 2,39 Нетобимин 421,084 389,058 3,32 Нокодазол 302,059 270,033 3,16 Оксфендазол 316,075 191,068 2,80 Оксфендазол-ДЗ Оксибендазол амин 192,113 150,066 2,54 Отсутствует Оксибендазол 250,118 218,092 2,74 Оксибендазол-Д7 Парбендазол 248,139 216,113 3,49 Празиквантел 313,191 203,118 5,15 Пирантел 207,095 150,036 2,28 Декоквинат 418,258 372,217 9,34 Декоквинат-Д5 Лайдламицин 777,439 777,439 10,89 Отсутствует Ласалацид 613,371 377,228 10,98 Отсутствует Мадурамицин 939,528 629,404 11,32 Отсутствует Монензин 693,418 675,408 10,75 Отсутствует Салиномицин 773,481 531,328 9,58 Отсутствует Семдурамицин 895,502 393,262 10,18 Отсутствует Рифампицин 823,412 791,386 5,85 Рокситромицин Рифаксимин 786,359 754,334 6,09 Тилозин 916,526 772,443 3,47

Таблица 12 — Параметры воздействия на ионы в режиме BBCID с регистрацией отрицательных ионов (список 1)

Аналит Ион-предшественник, m/z Ион-продукт, m/z Время удерживания, мин Внутренний стандарт Нифлумовая кислота 281,053 237,066 3,26 Отсутствует Нитроксинил 288,910 162,010 2,05 Нитроксинил- 13С6 Ди н итрока рба н ил ид 301,056 137,037 2,54 Динитрокарбанилид-Д8 Зеараленон 317,138 273,148 3,80 Отсутствует Зеараленол 319,154 275,164 3,30 Отсутствует Хлорамфеникол 321,004 194,048 1,15 Хлорамфеникол-Д5 Флорфеникол 355,992 185,027 1,13 Кетотриклабендазол 326,948 181,988 2,34 Триклабендазол-ДЗ Триклабендазол 356,942 341,919 4,12

Аналит	Ион-предшественник, m/z	Ион-продукт, m/z	Время удерживания, мин	Внутренний стандарт
Триклабендазол сульфоксид	372,936	357,914	2,59	Триклабендазол-ДЗ
Триклабендазол сульфон	388,931	309,947	3,65
Никлозамид	324,977	289,002	4,68	Толтразурил-ДЗ
Оксиклозанид	399,867	201,949	4,40
Диклазурил	404,970	334,970	3,59
Толтразурил	424,057	424,057	4,.38
Толтразурил сульфон	456,047	456,047	2,76
Рафоксанид	623,812	623,812	8,33	Рафоксанид-13С6
Салантел	635,812	635,812	8,11
Клозантел	660,843	660,843	7,80	Клозантел- 13С6

8.1.5 Контроль чувствительности метода осуществляют введением 10 мм³ матричного градуировочного раствора G₁ (см. 6.2.6) в инжектор хроматографа. Полученное соотношение сигнал/шум для каждого ксенобиотика должно быть не менее 50.

8.2 Построение градуировочной характеристики и проведение измерений

Построение и расчет градуировочной характеристики проводят методом внутреннего стандарта в каждой серии анализов, сформированной из «положительных» проб, с помощью программного обеспечения хромато-масс-спектрометра.

8.2.1    Проводят измерения не менее трех градуировочных растворов, приготовленных по 6.3.5, в порядке возрастания их концентраций.

8.2.2    В целях контроля стабильности градуировочной характеристики вместе с градуировочными растворами проводят дополительное измерение чистой пробы с добавкой ксенобиотиков на градуировочном уровне G₂

8.2.3    Вычисление площади пика проводят для молекулярных ионов ксенобиотиков и их внутренних стандартов, полученных в режиме высокого разрешения. Подтверждением наличия ксенобиотиков в анализируемом образце является присутствие иона-фрагмента.

8.2.4    При построении градуировочной характеристики используют линейную регрессию вида у = а + Ьх (где у является отношением площади пика аналита к площади пика внутреннего стандарта, х — отношением концентраций аналита и внутреннего стандарта), при этом коэффициент корреляции должен быть не менее 0,98.

8.2.5    Построение линейного градуировочного графика и расчет концентрации ксенобиотиков в анализируемых пробах выполняется системой обработки данных в автоматическом режиме.

8.2.6    Анализ выполняют в виде серии измерений, включающей следующие образцы:

-    чистую пробу;

-    градуировочные растворы (см. 6.3.5);

-    экстракты анализируемых проб, приготовленных по 7.2.

8.2.7    В инжектор хроматографа вводят 10 мм³ пробы, подготовленной в соответствии с разделом 7, и проводят измерения в условиях, успользуемых при установлении градуировочной зависимости.

9 Метрологические характеристики

Установленный в настоящем стандарте метод обеспечивает выполнение измерений содержания ксенобиотиков с относительной расширенной неопределенностью результатов аналитических измерений при коэффициенте охвата к = 2 и доверительной вероятности Р = 0,95, указанной в таблице 13.

13

Таблица 13 — Показатели правильности и прецизионности метода при проведении измерений содержания ксенобиотиков

Ксенобиотик Диапазон измерений содержания, мкг/кг Значение относительной расширенной неопределенности, ± Un % при коэффициенте охвата к = 2 Показатель повторяемости (относительное среднеквадратическое отклонение повторяемости), <ТГ, % Показатель воспроизводимости (относительное стандартное отклонение воспроизводимости), Or, % Предел повторяемости г, % (при Р = 0,95, к=2) Тиамулин От 500 до 2000 включ. 44 24 9 21 Св. 2000 до 10000 включ. 20 17 6 9 Тилозин; Рифаксимин Рифампицин От 500 до 2000 включ. 26 10 4 8 Св. 2000 до 10000 включ. 9 5 2 5 Диметридазол Гидрокси ипронидазол Метронидазол 2-гид роксиметил-1-метил-5-нитро-1 имидазол Гидроксиметрони-дазол Ипронидазол От 500 до 2000 включ. 30 19 7 9 Св. 2000 до 10000 включ. 17 11 4 8 Триметоприм От 500 до 2000 включ. 26 17 6 12 Св. 2000 до 10000 включ. 14 14 5 7 Кетопрофен Нифлумовая кислота От 500 до 2000 включ. 44 17 6 21 Св. 2000 до 10000 включ. 20 23 8 9 Ампициллин От 500 до 2000 включ. 24 23 8 9 Св. 2000 до 10000 включ. 11 8 3 11 Доксициклин Тетрациклин Окситетрациклин Хлортетрациклин От 500 до 2000 включ. 34 25 7 9 Св. 2000 до 10000 включ. 15 19 5 7 Хлорамфеникол Флорфеникол От 500 до 2000 включ. 28 14 5 12 Св. 2000 до 10000 включ. 22 11 4 10 Зеараленон Зеараленол От 500 до 2000 включ. 36 25 9 17 Св. 2000 до 10000 включ. 18 14 5 9

Ксенобиотик Диапазон измерений содержания, мкг/кг Значение относительной расширенной неопределенности, ± Un % при коэффициенте охвата к = 2 Показатель повторяемости (относительное среднеквадратическое отклонение повторяемости), о>, % Показатель воспроизводимости (относительное стандартное отклонение воспроизводимости), Or, % Предел повторяемости г, % (при Р= 0,95, к= 2) Тернидазол Клопидол Ронидазол Этопабат Тинидазол Арприноцид Динитрокарбанилид Диклазурил Галофугинон Декоквинат Толтразурил Толтразурил сульфон Ласалоцид Монензин Салиномицин Лайдламицин Семдурамицин Мадурамицин От 500 до 2000 включ. 34 19 7 11 От 2000 до 10000 включ. 17 11 4 6 Налидиксовая кислота Оксалиновая кислота Флюмеквин Пипемидовая кислота Норфлоксацин Ципрофлоксацин Ломефлоксацин Данофлоксацин Энрофлоксацин Офлоксацин Марбофлоксацин Сарафлоксацин Дифлоксацин От 500 до 2000 включ. 30 25 9 14 Св. 2000 до 10000 включ. 14 14 5 7 Сульфагуанидин Сульфапиридин Сульфадиазин Сул ьфа м ето ксазол Сульфатиазол Сульфамеразин Сульфамоксол Сульфасоксазол Сульфаметизол Сульфаметазин Сульфаметокси- пиридазин Сульфамонометоксин Сульфахлорпиридазин Сульфаетоксипи- ридазин Сул ьфахи ноксал и н Сульфадиметоксин Сульфадоксин От 500 до 2000 включ. 32 22 8 11 Св. 2000 до 10000 включ. 14 11 4 6

15

10    Обработка результатов измерений

10.1    В соответствии сданными, полученными при анализе градуировочных растворов, проводят количественную обработку хроматограмм с использованием программного обеспечения, получая значения содержания ксенобиотиков в анализируемой пробе.

10.2    За результат измерений принимают среднеарифметическое значение результатов двух параллельных определений пробы, если выполняется условие приемлемости по пункту 5.2.2 ГОСТ ИСО 5725-6.

11    Оформление результатов измерений

Содержание /-го ксенобиотика, мкг/кг, представляют

Х,±0,0ЩХ„ при Р= 0,95,    (2)

где X/— среднеарифметическое значение вычислений двух параллельных измерений содержания /-го ксенобиотика в анализируемой пробе (см. 10.2), мкг/кг;

Uj— значение относительной расширенной неопределенности содержания /-го ксенобиотика для соответствующего диапазона измерений, % (в соответствии с таблицей 13);

0,01 Uj X, — значение расширенной неопределенности в абсолютных единицах, мкг/кг.

За окончательный результат измерений содержания ксенобиотиков принимают среднеарифметическое значение результатов двух параллельных определений, выполненных в условиях повторяемости, округленное до первого десятичного знака и выраженное в микрограммах на килограмм (мкг/кг).

12    Контроль стабильности результатов измерений

Контроль стабильности результатов измерений в пределах лаборатории осуществляют по ГОСТ ИСО 5725-6 с использованием контрольных карт Шухарта.

16

ГОСТ 34044-2016

Содержание

1    Область применения.............................................................................................................................. 1

2    Нормативные ссылки............................................................................................................................. 1

3    Сущность метода ................................................................................................................................... 2

4    Требования безопасности и условия выполнения измерений............................................................ 2

5    Средства измерений, аппаратура, материалы, посуда и реактивы .................................................. 2

6    Подготовка к проведению измерений .................................................................................................. 4

6.1    Подготовка лабораторной посуды и реактивов............................................................................ 4

6.2    Приготовление растворов .............................................................................................................. 4

6.3    Приготовление градуировочных растворов.................................................................................. 5

7    Отбор и подготовка проб....................................................................................................................... 7

7.1    Отбор проб ...................................................................................................................................... 7

7.2    Подготовка проб ............................................................................................................................. 7

8    Порядок выполнения анализа .............................................................................................................. 8

8.1    Условия ВЭЖХ-МС/МС измерений ............................................................................................... 8

8.2    Построение градуировочной характеристики и проведение измерений ................................... 13

9    Метрологические характеристики ........................................................................................................ 13

10    Обработка результатов измерений .................................................................................................... 16

11    Оформление результатов измерений ................................................................................................ 16

12    Контроль стабильности результатов измерений ............................................................................... 16

Приложение А (обязательное).................................................................................................................. 17

III

МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ

КОРМА, КОМБИКОРМА, КОМБИКОРМОВОЕ СЫРЬЕ

Метод определения содержания ксенобиотиков с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим детектором

Feeds, compound feeds, feed raw materials. Method for determination of xenobiotics content by high performance liquid chromatography with mass spectrometry detector

Дата введения — 2018—07—01

1    Область применения

Настоящий стандарт распространяется на корма, комбикорма, комбикормовое сырье и устанавливает метод высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим детектированием (далее — ВЭЖХ-МС/МС) для определения содержания ксенобиотиков в диапазоне измерений от 500 до 10000 мкг/кг.

Примечание — Ксенобиотики —условная категория обозначения чужеродных для живых организмов химических веществ, естественно не входящих в биотический круговорот. В настоящем стандарте под этим термином следует понимать лекарственные средства для ветеринарного применения природного, биотехнологического или синтетического происхождения.

2    Нормативные ссылки

В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие межгосударственные стандарты:

ГОСТ 12.1.005-88 Система стандартов безопасности труда. Общие санитарно-гигиенические требования к воздуху рабочей зоны

ГОСТ 12.1.007-76 Система стандартов безопасности труда. Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности

ГОСТ 12.1.019-2009 Система стандартов безопасности труда. Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты

ГОСТ OIML R 76-1—2011 Государственная система обеспечения единства измерений. Весы неавтоматического действия. Часть 1. Метрологические и технические требования. Испытания

ГОСТ 1770-74 (ИСО 1042—83, ИСО 4788—80) Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия ГОСТ 2603-79 Реактивы. Ацетон. Технические условия ГОСТ 4328-77 Реактивы. Натрия гидроокись. Технические условия

ГОСТ ИСО 5725-6-2003 Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 6. Использование значений точности на практике*

ГОСТ 5848-73 Реактивы. Кислота муравьиная. Технические условия ГОСТ ISO 6497-2014 Корма. Отбор проб ГОСТ 6709-72 Вода дистиллированная. Технические условия ГОСТ 6995-77 Реактивы. Метанол-яд. Технические условия ГОСТ 13496.0-2016 Комбикорма, комбикормовое сырье. Методы отбора проб ГОСТ 22300-76 Реактивы. Эфиры этиловый и бутиловый уксусной кислоты. Технические условия ГОСТ 25336-82 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры

* В Российской Федерации действует ГОСТ Р ИСО 5725-6-2002.

Издание официальное

Примечание — При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов в информационной системе общего пользования — на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет или ежегодному информационному указателю «Национальные стандарты», который опубликован по состоянию на 1 января текущего года, и по выпускам ежемесячного информационного указателя «Национальные стандарты» за текущий год. Если ссылочный стандарт заменен (изменен), то при пользовании настоящим стандартом следует руководствоваться заменяющим (измененным) стандартом. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, применяется в части, не затрагивающей эту ссылку.

3    Сущность метода

Метод основан на извлечении ксенобиотиков из анализируемой пробы с последующим разбавлением и количественном определении методом ВЭЖХ-МС/МС в режиме «широкодиапазонной диссоциации, индуцируемой соударением» (BBCID). Количественное определение ксенобиотиков проводят методом внутреннего стандарта.

4    Требования безопасности и условия выполнения измерений

4.1    Применяемые в работе реактивы относятся к веществам 1-го и 2-го классов опасности по ГОСТ 12.1.007, при работе с ними необходимо соблюдать требования безопасности, установленные для работ с токсичными, едкими и легковоспламеняющимися веществами по ГОСТ 12.1.005.

4.2    Помещения, в которых проводят анализ и подготовку проб, должны быть оборудованы приточно-вытяжной вентиляцией.

4.3    Приготовление градуировочных растворов проводят в вытяжном шкафу.

4.4    При выполнении измерений с использованием жидкостного хроматографа соблюдают правила по электробезопасности по ГОСТ 12.1.019.

4.5    К выполнению измерений методом ВЭЖХ-МС/МС допускаются лица, владеющие техникой ВЭЖХ-МС/МС и изучившие инструкции по эксплуатации применяемой аппаратуры.

4.6    При выполнении измерений соблюдают следующие условия:

-    температура окружающего воздуха............................... от    10    °С    до 30 °С;

-    атмосферное давление............................... от    84    до    106 кПа;

-    напряжение в питающей электросети............................... от    200    до    240    В;

-    частота переменного тока............................... от    49    до    51 Гц;

-    относительная влажность воздуха............................... от    35    %    до 85 %.

5 Средства измерений, аппаратура, материалы, посуда и реактивы

5.1 Для определения содержания ксенобиотиков применяют следующие средства измерений, аппаратуру, материалы, посуду и реактивы:

-    весы неавтоматического действия высокого класса точности по ГОСТ OIML R 76-1 с максимальной нагрузкой не более 150 г и пределами допускаемой погрешности не более ± 0,001 г;

-    весы высокого (II) класса точности с пределами допускаемой абсолютной погрешности не более ± 0,02 мг;

-    масс-спектрометр с гибридным квадрупольным анализатором с диапазоном измерений от 50 до 3000 атомных единиц массы (а. е. м.), массовым разрешением не менее 10000 а. е. м. на полувысоте пика, с погрешностью измерений массы ± 0,05 а. е. м., с режимом получения и анализа фрагментных ионов;

-    систему высокоэффективную жидкостную хроматографическую, состоящую из бинарного насоса со смесителем, системы фильтрования и дегазации подвижных фаз, термостата хроматографической колонки, обеспечивающего температуру нагрева до (50 ± 1) °С;

-    баню ультразвуковую с рабочей частотой не менее 20 Гц и объемом не менее 1 дм³;

-    встряхиватель (шейкер) вортексного типа с вставкой для одной пробирки и диапазоном скорости от 150 до 2500 об/мин;

-    встряхиватель (шейкер) переворачивающий вертикального вращения с диапазоном скорости от 20 до 100 об/мин;

2

ГОСТ 34044-2016

-    генератор азота с объемной долей азота не менее 90 % и производительностью 200 дм^{1 2}/мин;

-    холодильник бытовой с морозильной камерой, цифровым контроллером температуры и рабочим диапазоном температур от 2 °С до 8 °С;

-    колонку хроматографическую, заполненную обращенно-фазовым сорбентом С18 размером частиц не более 1,7 мм, длиной 100 мм и внутренним диаметром 1 мм;

-    компьютер с установленным программным обеспечением для управления масс-спектрометром и обработки результатов измерений, аттестованным в установленном порядке;

-    мельницу лабораторную для кормов;

-    систему получения деионизированной воды высокой чистоты с удельным сопротивлением 18 МОм см;

-    систему упаривания растворителей, обеспечивающую поддержание температуры не менее 50 °С;

-    камеру лабораторную морозильную с цифровым контроллером температуры и рабочим диапазоном температур от минус 15 °С до минус 25 °С;

-    центрифугу лабораторную рефрижераторную со скоростью вращения не менее 4000 об/мин и диапазоном температур от 4 °С до 25 °С, с адаптерами для пробирок вместимостью 15 см²;

-    шкаф сушильный с максимальной температурой нагрева не менее 110 °С и погрешностью поддержания заданной температуры ± 5 °С;

-    пробы, не содержащие ксенобиотиков, проанализированные ранее в соответствии с требованиями разделов 7 и 8 («чистые» пробы)^1J;

-    фильтры шприцевые мембранные с размером диаметра пор не более 0,2 мкм;

-    флаконы для автоматического устройства ввода проб вместимостью 2 см² с завинчивающимися крышками и тефлоновыми прокладками;

-    колбы 2—10—1 с пришлифованными пробками по ГОСТ 1770;

-    колбы 1—100(1000)—2 по ГОСТ 1770;

-    колбы конические Кн—1—100—29/32 ТС по ГОСТ 25336;

-    пипетки одноканальные переменной вместимости 5 — 25, 20 — 100 и 200 — 1000 мм² с пределом допускаемого относительного отклонения среднеарифметического значения фактического объема дозы от номинального не более ± 1,5 %;

-    пробирки полипропиленовые вместимостью 15 см² с завинчивающимися крышками;

-    шприцы одноразовые вместимостью 2 см²;

-    цилиндры 1—50(500, 1000)—1 по ГОСТ 1770.

5.2    При определении содержания ксенобиотиков применяют следующие реактивы:

-    ацетон по ГОСТ 2603;

-    ацетонитрил для ВЭЖХ-МС с массовой долей основного вещества не менее 99,9 %;

-    диметилсульфоксид с массовой долей основного вещества не менее 99,9 %;

-    воду деионизированную для ВЭЖХ, полученную с использованием системы производства ультра-чистой воды из дистиллированной воды по ГОСТ 6709;

-    кислоту муравьиную по ГОСТ 5848, ч. д. а.;

-    метанол по ГОСТ 6995, х. ч.;

-    натрия гидроокись по ГОСТ 4328, х. ч.;

-    этилацетат по ГОСТ 22300, ч. д. а.

5.3    При определении содержания ксенобиотиков в качестве образцов сравнения применяют следующие соединения:

5.3.1 Для приготовления исходных растворов с массовой долей основного вещества не менее 95 %:

Список 1: Гидрокситиабендазол; альбендазол аминосульфон; тетрамизол; тиабендазол; тримето-прим; диметридазол; 2-гидроксиметил-1-метил-5-нитро-1 имидазол; ипронидазол; гидроксиипронидазол; метронидазол; гидроксиметронидазол; ампициллин; тиамулин; арприноцид; клопидол; этопабат; галофу-гинон; ронидазол; тернидазол; тинидазол; ципрофлоксацин; данофлоксацин; дифлоксацин; энрофлок-сацин; ломефлоксацин; марбофлоксацин; норфлоксацин; офлоксацин; сарафлоксацин; налидиксовая кислота; оксалиновая кислота; пипемидовая кислота; флюмеквин; сульфахпорпиридазин; сульфадиазин; сульфадиметоксин; сульфадоксин; сульфаэтоксипиридазин; сульфагуанидин; сульфамеразин; сульфа-метазин; сульфаметизол; сульфаметоксазол; сульфаметоксипиридазин; сульфамонометоксин; сульфа-моксол; сульфапиридин; сульфахиноксалин; сульфасоксазол; сульфатиазол; хпортетрациклин; доксици-клин; окситетрациклин; тетрациклин; кетопрофен.

Список 2: Гидроксимебендазол; альбендазол; альбендазол сульфон; альбендазол сульфоксид; аминофлюбендазол; аминомебендазол; камбендазол; фебантел; фенбендазол; фенбендазол сульфон; флюбендазол; мебендазол; морантел; нетобимин; нокодазол; оксфендазол; оксибендазол амин; оксибендазол; парбендазол; празиквантел; пирантел; декоквинат; лайдламицин; ласалацид; мадура-мицин; монензин; салиномицин; семдурамицин; рифампицин; рифаксимин; тилозин.

Список 3: Нитроксинил; хпорамфеникол; флорфеникол; кетотриклабендазол; триклабендазол; трикпабендазол сульфоксид; триклабендазол сульфон; никлозамид; оксиклозанид; рафоксанид; са-лантел; клозантел; динитрокарбанилид; диклазурил; толтразурил; толтразурил сульфон; нифлумовая кислота; зеараленон; зеараленол.

5.3.2 Для приготовления исходных растворов внутренних стандартов с массовой долей основного веществ не менее 95%:

Тетрамизол-Д5; триметоприм-Д9; ронидазол-ДЗ; диметридазол-ДЗ; ипронидазол-ДЗ; гидрокси-ипронидазол-ДЗ; метронидазол-ДЗ; кетопрофен-ДЗ; ципрофлоксацин-Д8; дифлоксацин-ДЗ; энрофлок-сацин-Д5; налидиксовая кислота-Д5; норфлоксацин-Д5; оксалиновая кислота-Д5; сарафлоксацин-Д8; сульфадиазин-Д4; сульфаметазин-Д4; сульфаметоксазол-Д4; сульфатиазол-Д4; демеклоциклин; гидроксимебендазол-ДЗ; альбендазол-ДЗ; альбендазол сульфон-ДЗ; альбендазол сульфоксид-ДЗ; гидроксимебендазол-ДЗ; фенбендазол-ДЗ; фенбендазол сульфон-ДЗ; флюбендазол-ДЗ; мебенда-зол-ДЗ; оксфендазол-ДЗ; оксибендазол-Д7; декоквинат-Д5; рокситромицин; нитроксинил-¹³С6; дини-трокарбанилид-Д8; хпорамфеникол-Д5; триклабендазол-ДЗ; толтразурил-ДЗ; рафоксанид-¹³С6; кло-зантел-¹³С6.

5.4 Допускается применение других средств измерений и посуды, не уступающих вышеуказанным по метрологическим и техническим характеристикам и обеспечивающим необходимую точность измерения, а также аппаратуры, реактивов и материалов по качеству не хуже вышеуказанных.

6 Подготовка к проведению измерений

6.1    Подготовка лабораторной посуды и реактивов

6.1.1    Мойку и сушку посуды проводят в отдельном помещении, оборудованном приточновытяжной вентиляцией. Для сушки лабораторной посуды и подготовки реактивов необходимо использовать отдельные сушильные шкафы.

6.1.2    Стеклянную посуду подвергают стандартной процедуре очистки лабораторной посуды.

6.1.3    Процедуру промывки органическими растворителями следует проводить в вытяжном шкафу. Рекомендуется на стадиях промывки использовать ультразвуковую баню. Окончательную сушку посуды проводят в сушильном шкафу, установленном в вытяжном шкафу, при температуре от 105 °С до 110 °С.

6.1.4    Каждую новую партию реактивов проверяют на отсутствие контаминации анализируемыми соединениями путем проведения холостого опыта в соответствии с процедурой анализа.

6.2 Приготовление растворов

6.2.1    Приготовление подвижных фаз А и Б₁

6.2.1.1    Подвижная фаза А

Для приготовления подвижной фазы А в мерную колбу вместимостью 1000 см³ приливают 999 см³ деионизированной воды и добавляют 1 см³ муравьиной кислоты.

Срок хранения подвижной фазы А при комнатной температуре — не более 1 мес.

6.2.1.2    Подвижная фаза Б^

Для приготовления подвижной фазы Б! в мерную колбу вместимостью 1000 см³ приливают 500 см³ ацетонитрила, 500 см³ метанола и добавляют 1 см³ муравьиной кислоты.

Срок хранения подвижной фазы Б! при комнатной температуре — не более 6 мес.

6.2.2    Приготовление 0,1%-ного раствора диметилсульфоксида в ацетонитриле

В мерную колбу вместимостью 100 см³ вносят 0,1 см³ диметилсульфоксида и доводят до метки ацетонитрилом, перемешивают.

Срок хранения раствора при комнатной температуре — не более 1 мес.

6.2.3    Приготовление раствора ацетонитрил — метанол — деионизированная вода в объемном соотношении 5:5:10

В колбу вместимостью 100 см³ вносят 25 см³ ацетонитрила, 25 см³ метанола и 50 см³ деионизированной воды.

Срок хранения раствора при комнатной температуре — не более 1 мес.

ГОСТ 34044-2016

6.2.4    Приготовление раствора диметилсульфоксида в метаноле в объемном соотношении 1 :1

В колбу вместимостью 100 см³ вносят 50 см³ метанола и 50 см³ диметилсульфоксида.

Срок хранения раствора при комнатной температуре — не более 1 мес.

6.2.5    Приготовление раствора гидроокиси натрия молярной концентрации 1 моль/дм³

В мерную колбу вместимостью 100 см³ вносят 4,0 г гидроокиси натрия, приливают 80 см³ деионизированной воды. Содержимое перемешивают до полного растворения и доводят до метки деионизированной водой.

Срок хранения раствора при комнатной температуре — не более 1 мес.

6.2.6    Приготовление раствора метанола

В мерную колбу вместимостью 100 см³ вносят 0,5 см³ раствора гидроокиси натрия (см.6.2.5) и доводят до метки метанолом, перемешивают.

Срок хранения раствора при комнатной температуре — не более 1 мес.

6.3 Приготовление градуировочных растворов

6.3.1 Приготовление исходных стандартных растворов ксенобиотиков с массовыми концентрациями 1000 мкг/см³ (растворы С₀) и исходных стандартных растворов сульфахлорпи-ридазина, сульфадиазина, сульфадиметоксина, сульфадоксина, сульфаэтоксипиридазина, сульфагуанидина, сульфамеразина, сульфаметазина, сульфаметизола, сульфаметоксазола, сульфаметоксипиридазина, сульфамонометоксина, сульфамоксола, сульфапиридина, суль-фахиноксалина, сульфасоксазола, сульфатиазола, диметридазола, ипронидазола, гидрокеи-ипронидазола, метронидазола, гидроксиметронидазола, тернидазола, тинидазола, хпорте-трациклина, доксицикпина, окситетрацикпина, тетрациклина с массовыми концентрациями 2000 мкг/см³ (растворы С₀')

Для приготовления растворов ксенобиотиков С₀ и С₀' рассчитывают навеску, эквивалентную 10,0 или 20,0 мг основного вещества, для каждого определяемого аналита, исходя из массовой доли в исходном веществе по формуле

где т₀ — масса основного вещества, г (т₀=10; 20 мг);

М₀ — молярная масса соли ксенобиотика (для анализируемых соединений, растворы которых готовят из солей), г/моль;

М— молярная масса ксенобиотика, г/моль;

с— массовая доля ксенобиотика (или его соли) в исходном веществе, %.

В мерные колбы вместимостью 10 см³ вносят по отдельности рассчитанные массы исходных веществ, доводят до метки растворителем в соответствии с таблицей 1, закрывают пробкой, перемешивают и помещают в ультразвуковую баню на 10 мин при температуре (22+2) °С. В случае недостаточного растворения, процедуру повторяют при температуре (30±5) °С.

Таблица! — Соответствие растворителей ксенобиотикам

Ксенобиотик Растворитель Сульфахлорпиридазин; сульфадиазин; сульфадиметоксин; сульфадоксин; сульфаэтоксипиридазин; сульфагуанидин; сульфамеразин; сульфаметазин; сульфаметизол; сульфаметоксазол; сульфаметоксипиридазин; сульфамонометоксин; сульфамоксол; сульфапиридин; сульфахиноксапин; сульфасоксазол; сульфатиазол Гидрокситиабендазол; альбендазол аминосульфон; тетрамизол; тиабендазол; арприноцид; клопидол; этопабат; галофугинон; ронидазол; гидроксимебендазол; альбендазол; альбендазол сульфон; альбендазол сульфоксид; аминофлюбендазол; аминомебендазол; камбендазол; фебантел; фенбендазол; фенбендазол сульфон; флюбендазол; мебендазол; морантел; нетобимин; нокодазол; оксфендазол; оксибендазол амин; оксибендазол; парбендазол; празиквантел; пирантел; декоквинат; лайдламицин; ласалацид; мадурамицин; монензин; салиномицин; семдурамицин. Раствор диметилсульфоксид-метанол (см. 6.2.4)

5

Окончание таблицы 1

Ксенобиотик Растворитель Триметоприм; диметридазол; 2-гидроксиметил-1-метил-5-нитро-1 имидазол; ипронидазол; гидроксиипронидазол; метронидазол; гидроксиметронидазол; тиамулин; тернидазол; тинидазол; кетопрофен; хлортетрацикпин; доксициклин; окситетрацикпин; тетрациклин; тилозин; хлорамфеникол; флорфеникол; нифлумовая кислота; зеараленон; зеараленол; рифампицин; рифаксимин. Метанол Нитроксинил; кетотрикпабендазол; трикпабендазол; трикпабендазол сульфоксид; трикпабендазол сульфон; никпозамид; оксикпозанид; рафоксанид; салантел; кпозантел; динитрокарбанилид; дикпазурил; толтразурил; толтразурил сульфон. Диметилсульфоксид Ампициллин Деионизированная вода Энрофлоксацин; сарафлоксацин; ципрофлоксацин; данофлоксацин; дифлоксацин; ломефлоксацин; марбофлоксацин; норфлоксацин; офлоксацин; налидиксовая кислота; оксалиновая кислота; пипемидовая кислота; флюмеквин Раствор метанола (см. 6.2.6)

Срок хранения растворов при температуре от минус 15 °С до минус 25 °С — не более одного года.

Перед применением растворы выдерживают при комнатной температуре в темном месте не менее 20 мин.

6.3.2    Приготовление рабочего стандартного раствора ксенобиотиков массовыми концентрациями 10 мкг/см³ (раствор С.,)

Для приготовления рабочего стандартного раствора С_Л с массовой концентрацией каждого ксенобиотика 10 мкг/см³ в мерную колбу вместимостью 10 см³ помещают по 0,1 см³ исходных стандартных растворов С₀ и по 0,05 см³ исходных стандартных растворов С₀'. Содержимое колбы доводят до метки ацетонитрилом, закрывают пробкой, перемешивают и помещают в ультразвуковую баню на 1 мин.

Срок хранения раствора С₁ при температуре от минус 15 °С до минус 25 °С — не более одного

года.

Перед применением раствор С₁ выдерживают при комнатной температуре в темном месте не менее 20 мин.

6.3.3    Приготовление исходных растворов внутренних стандартов ксенобиотиков массовой концентрации 500 мкг/см³ (раствор D₀)

В мерные колбы вместимостью 10 см³ вносят по отдельности, рассчитанные по формуле (1) массы дейтерированных аналогов ксенобиотиков, эквивалентные 5 мг основного вещества, взвешенные с регистрацией результатов в миллиграммах до первого десятичного знака. Доводят до метки растворителем, в соответствии с таблицей 2, закрывают пробкой, перемешивают и помещают в ультразвуковую баню на 10 мин при температуре (22 ± 2) °С. В случае недостаточного растворения процедуру повторяют при температуре (30 ± 5) °С.

Таблица 2 — Соответствие растворителей внутренним стандартам ксенобиотиков

Внутренний стандарт ксенобиотиков Растворитель Сульфадиазин-Д4; сульфаметазин-Д4; сульфаметоксазол-Д4; сульфатиазол-Д4; тетрамизол-Д5; ронидазол-ДЗ, гидроксимебендазол-ДЗ; альбендазол-ДЗ; альбендазол сульфон-ДЗ; альбендазол сульфоксид-ДЗ; гидроксимебендазол-ДЗ; фенбендазол-ДЗ; фенбендазол сульфон-ДЗ; флюбендазол-ДЗ; мебендазол-ДЗ; оксфендазол-ДЗ; оксибендазол-Д7; декоквинат-Д5 Раствор диметилсульфоксид-метанол (см. 6.2.4) Триметоприм-Д9; ронидазол-ДЗ; диметридазол-ДЗ; ипронидазол-ДЗ; метронидазол-ДЗ; гидроксиипронидазол-ДЗ; кетопрофен-ДЗ; демеклоцикпин; рокситромицин; хлорамфеникол-Д5 Метанол Нитроксинил-13С6; Динитрокарбанилид-Д8; Триклабендазол-ДЗ; Толтразурил-ДЗ; Рафоксанид-13С6; Клозантел-13С6 Диметилсульфоксид

ГОСТ 34044-2016

Окончание таблицы 2

Внутренний стандарт ксенобиотиков Растворитель Энрофлоксацин-Д5; сарафлоксацин-Д8; ципрофлоксацин-Д8; дифлоксацин-ДЗ; энрофлоксацин-Д5; налидиксовая кислота-Д5; норфлоксацин-Д5; оксалиновая кислота-Д5; Раствор метанола (см. 6.2.6)

Срок хранения растворов D₀ при температуре от минус 15 °С до минус 25 °С — не более одного

года.

Перед применением растворы выдерживают при комнатной температуре в темном месте не менее 20 мин.

Внутренние стандарты для ксенобиотиков выбирают в соответствии с таблицами 10—12.

6.3.4    Приготовление рабочего раствора внутреннего стандарта ксенобиотиков массовой концентрацией 10 мкг/см³ (раствор D.,)

Для приготовления рабочего раствора D₁ в мерную колбу вместимостью 10 см³ переносят по 0,2 см³ исходных растворов D₀ (6.3.3), доводят до метки ацетонитрилом, закрывают пробкой, перемешивают и помещают в ультразвуковую баню на 1 мин.

Срок хранения раствора D₁ при температуре от минус 15 °С до минус 25 °С — не более одного

года.

Перед применением раствор выдерживают при комнатной температуре в темном месте не менее 20 мин.

6.3.5    Приготовление матричных градуировочных растворов ксенобиотиков (растворы ®i — ^Gs)

Матричные градуировочные растворы G₁ — G₅ готовят в полипропиленовых пробирках вместимостью 15 см³ из «чистых» проб массой 1,00 г, в которые вносят раствор внутренних стандартов D_Л и рабочий раствор определяемых аналитов С₁ в соответствии с таблицей 3 и упаривают содержимое в токе азота при 30 °С.

Таблица 3 — Приготовление матричных градуировочных растворов G-, — G5

Обозначение и массовая концентрация приготовляемого матричного градуировочного раствора Вносимый объем рабочего раствора, см3 Ci Di G5 (10000 нг/см3) 1,00 0,2 G4 (5000 нг/ см3) 0,50 0,2 G3 (2000 нг/см3) 0,20 0,2 G2 (1000 нг/см3) 0,10 0,2 G-\ (500 нг/см3) 0,05 0,2

Пробирки встряхивают в шейкере 1 мин и проводят дальнейшую обработку пробы согласно разделу 7, при этом дополнительное внесение внутреннего стандарта не требуется.

Растворы G₁ — G₅ используют свежеприготовленными.

7 Отбор и подготовка проб

7.1    Отбор проб

Отбор проб по ГОСТ ISO 6497, ГОСТ 13496.0.

Пробы, отобранные по 7.1, при отсутствии возможности проведения анализа в день отбора, хранят в герметично укупоренной таре при температуре от 2 °С до 8 °С до проведения испытания, но не более срока хранения продукции.

7.2    Подготовка проб

Пробу измельчают на мельнице и проводят ее обработку в соответствии с рисунком 1.

7

1

^ Срок хранения «чистых» проб при температуре от минус 15 °С до минус 25 °С — не более шести мес.

2