Купить ГОСТ 33036-2014 — бумажный документ с голограммой и синими печатями. подробнее
Распространяем нормативную документацию с 1999 года. Пробиваем чеки, платим налоги, принимаем к оплате все законные формы платежей без дополнительных процентов. Наши клиенты защищены Законом. ООО "ЦНТИ Нормоконтроль"
Наши цены ниже, чем в других местах, потому что мы работаем напрямую с поставщиками документов.
Устанавливает метод определения острой токсичности химических веществ для дождевых червей.
Идентичен OECD Test No 207:1984
Переиздание. Апрель 2019 г.
1 Область применения
2 Термины и определения
3 Принцип теста
4 Информация о тестируемом веществе
5 Вещество сравнения
6 Достоверность теста
7 Описание теста
8 Данные и отчет о проведении теста
Приложение А (обязательное) Кормление и разведение тестовых организмов
Библиография
Дата введения | 01.08.2015 |
---|---|
Добавлен в базу | 21.05.2015 |
Актуализация | 01.01.2021 |
20.10.2014 | Утвержден | Межгосударственный Совет по стандартизации, метрологии и сертификации | 71-П |
---|---|---|---|
20.11.2014 | Утвержден | Федеральное агентство по техническому регулированию и метрологии | 1695-ст |
Разработан | ФГУП ВНИЦ СМВ | ||
Издан | Стандартинформ | 2015 г. | |
Издан | Стандартинформ | 2019 г. |
Чтобы бесплатно скачать этот документ в формате PDF, поддержите наш сайт и нажмите кнопку:
МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СОВЕТ ПО СТАНДАРТИЗАЦИИ, МЕТРОЛОГИИ И СЕРТИФИКАЦИИ
(МГС)
INTERSTATE COUNCIL FOR STANDARDIZATION, METROLOGY AND CERTIFICATION
ГОСТ
33036-
2014
(ISC)
МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ
СТАНДАРТ
(OECD, Test No 207:1984, IDT)
Издание официальное
Москва
Стандартинформ
2015
Цели, основные принципы и основной порядок проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены ГОСТ 1.0-92 «Межгосударственная система стандартизации. Основные положения» и ГОСТ 1.2—2009 «Межгосударственная система стандартизации. Стандарты
межгосударственные, правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия, применения, обновления и отмены»
1 ПОДГОТОВЛЕН Федеральным государственным унитарным предприятием «Всероссийский научно-исследовательский центр стандартизации, информации и сертификации сырья, материалов и веществ» (ФГУП «ВНИЦСМВ») на основе собственного аутентичного перевода на русский язык руководящего документа, указанного в пункте 5
2 ВНЕСЕН Федеральным агентством по техническому регулированию и метрологии (Росстан-
дарт)
3 ПРИНЯТ Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол от 20 октября 2014 г. № 71-П)
За принятие проголосовали:
Краткое наименование страны по МК (ИСО 3166) 004—97 |
Код страны по МК (ИСО 3166) 004—97 |
Сокращенное наименование национального органа по стандартизации |
Азербайджан |
AZ |
Дзета н да рт |
Армения |
AM |
Минэкономики Республики Армения |
Беларусь |
BY |
Госстандарт Республики Беларусь |
Киргизия |
KG |
Кыргызстандарт |
Молдова |
MD |
Молдова-Стандарт |
Россия |
RU |
Росстандарт |
Таджикистан |
TJ |
Т аджи кстандарт |
4 Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 20 ноября 2014 г. № 1695-ст межгосударственный стандарт ГОСТ 33036-2014 введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 августа 2015 г.
5 Настоящий стандарт идентичен руководящему документу OECD, Test No 207:1984 Earthworm, Acute Toxicity Tests (Определение острой токсичности для дождевых червей).
Наименование настоящего стандарта изменено относительно наименования указанного руководящего документа для приведения в соответствие с ГОСТ 1.5-2001 (подраздел 3.6)
Перевод с английского языка (еп).
Степень соответствия — идентичная (IDT)
6 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ
Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодном информационном указателе «Национальные стандарты», а текст изменений и поправок — в ежемесячном информационном указателе «Национальные стандарты». В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ежемесячном информационном указателе «Национальные стандарты». Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования — на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет
© Стандартинформ, 2015
В Российской Федерации настоящий стандарт не может быть полностью или частично воспроизведен, тиражирован и распространен в качестве официального издания без разрешения Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии
Тest methods for chemicals of environmental hazard. Earthworm acute toxicity tests
Дата введения —2015—08—01
Настоящий стандарт устанавливает метод определения острой токсичности химических веществ для дождевых червей.
В настоящем стандарте применен следующий термин с соответствующим определением:
2.1 медианное значение летальной концентрации (1_С50): Концентрация химического вещества в пищевом рационе, которая приводит к 50 %-ной гибели тестируемых животных.
Примечание — Для контактного теста концентрацию вещества выражают в миллиграммах на квадратный сантиметр, для теста с искусственной почвой — в миллиграммах на килограмм (сухой массы почвы).
Скриннинговый тест (контактный тест с фильтровальной бумагой) включает воздействие на червей тестируемого вещества, нанесенного на влажную фильтровальную бумагу, и позволяет идентифицировать вещества, потенциально токсичные для дождевых червей.
Тест с искусственной почвой включает экспозицию дождевых червей в специально приготовленной искусственной почве, содержащей тестируемое вещество в определенном диапазоне концентраций. Г ибель дождевых червей оценивается на 7-й и 14-й день после применения тестируемого вещества.
В серии тестируемых концентраций вещества одна концентрация не должна вызывать гибели, а еще одна —должна приводить к гибели всех червей.
Должна быть известна следующая информация о тестируемом веществе:
- растворимость в воде;
- давление паров;
- структурная формула;
- чистота;
- стабильность в воде, почве и на свету;
- коэффициент распределения н-октанол/вода;
- результаты теста на способность к биоразложению.
Издание официальное
Вещество сравнения в тесте для определения 1_С50 должно выбираться по собственному усмотрению и гарантировать, что лабораторные условия, в которых проводят опыты, соответствуют требованиям и не подвержены существенным временным изменениям. Оптимальным веществом сравнения, удовлетворяющим этим условиям, является хлорацетамид.
Тест считается достоверным, если гибель червей в контроле не превышает 10 % к концу испытания.
Обычное лабораторное оборудование и специальные принадлежности:
- культура дождевых червей (см. 7.2);
- фильтровальная бумага среднего качества толщиной примерно 0,2 мм и плотностью от 80 до 85 г/м1;
- искусственный почвенный субстрат, приготовленный следующим образом:
10 % сфагнового сухого и тонко растертого торфа (pH 5,5—6,0; без видимых растительных остатков);
20 % каолиновой глины (с содержанием каолина около 30 %);
70% промышленного песка (предпочтителен мелкий песок с преобладанием частиц размером от 50 до 200 микрон — более 50 %).
pH в искусственном субстрате регулируют в пределах 6,0+ 0,5 карбонатом кальция [1]. Сухие составные части тщательно смешивают в строго установленных пропорциях, каждый раз взвешивая общую массу. Влажность смеси определяют при высушивании небольшого количества образца при температуре 105 °С. Деионизированную воду добавляют к полученной смеси до влажности примерно 35 % сухой массы таким образом, чтобы при сжатии субстрата в руке не выделялась вода. Для некоторых видов торфа приемлемым будет и более высокое содержание влаги.
Сосуды, используемые в тесте, должны быть стеклянными — вместимостью около 1 л и должны быть покрыты стеклянными крышками или перфорированной пленкой.
Освещение лабораторной комнаты или камеры должно контролироваться в пределах от 400 до 800 Люкс, температура — (20 + 2) °С.
Рекомендуемый вид дождевых червей для теста — E/sen/afoef/c/a(Michaelsen).3TOTBHfl не совсем типичен для традиционных типов почв и обычно обитает в почвах, богатых органическим веществом. Он чувствителен кхимическим веществам, имеет короткий жизненный цикл — черви выводятся из коконов за 3—4 недели и достигают половой зрелости за 7—8 недель при температуре окружающей среды 20 °С. Вид очень плодовитый, взрослый червь производит от 2 до 5 коконов в неделю, из которых выводятся другие черви. Коконы можно приобрести или разводить, разделив популяцию на части (см. приложение А).
Eisertia foetida существует в виде двух рас червей, морфологически сходных между собой [2]. Но одна раса — Е. foetida foetida имеет типичные поперечные полоски на сегментах, а другая — Е. foetida andrei не имеет таковых и более красного цвета. В тесте используют Е. foetida foetida, однако возможно использование и другой расы.
Для опытов берут взрослых червей (в возрасте от двух месяцев) и живой массой от 300 до 600 мг.
Рекомендуются плоскодонные стеклянные колбы с плоским дном или другие стеклянные сосуды, высотой 8 см и диаметром 3 см с плоским дном, стенки которых покрывают фильтровальной бумагой, нарезанной таким образом, чтобы ее края частично перекрывали друг друга.
Тестируемое вещество известной концентрации растворяют в дистиллированной воде (если растворимость вещества не менее 1000 мг/л) или в наиболее подходящем органическом растворителе
(ацетоне, хлороформе, гексане). 1 мл раствора капают пипеткой в колбу и испаряют растворитель (операция может быть повторена для достижения требуемого количества осадка вещества). Контрольный сосуд должен быть аналогично обработан 1 мл дистиллированной воды или используемого органического растворителя. После высушивания 1 мл дистиллированной воды переносят в другой сосуд для смачивания бумаги, который накрывают стеклянным колпаком или полимерной пленкой с небольшим отверстием.
Концентрация раствора тестируемого вещества
Предварительный тест предшествует более точному скриннинговому тесту. Он может быть следующим:
7 • 10-2 г/мл 7 Ю-2 г/мл 7 Ю-3 г/мл 7 • 10-5 г/мл 7 Ю-6 г/мл
Количество тестируемого вещества на фильтровальной бумаге
1,0 мг/см2 0,1 мг/см2 0,01 мг/см2 0,001 мг/см2 0,0001 мг/см2
Для основного скриннингового теста необходимо использовать пять и более уровней геометрического ряда концентраций. Для каждой концентрации — 10 повторностей, помещая одного червя в сосуд. Более одного червя помещать не рекомендуется, т. к. гибель одного червя может оказать неблагоприятное воздействие на других, находящихся с ним в сосуде. Точность, полученных при тестировании данных, может быть увеличена доведением количества повторностей до 20. Дождевые черви перед использованием их в тесте должны содержаться в течение 3 часов на влажной фильтровальной бумаге, чтобы удалить содержимое их кишечника. Затем их промывают и слегка подсушивают. Во время теста сосуды должны находиться в горизонтальном положении на каком-либо подносе. Температуру во время теста поддерживают в пределах (20 + 2) °С. Первые 48 ч сосуды держат в затемненном месте, а по прошествии 72 ч оценивают гибель червей. Червь считается погибшим, если он не реагирует на легкие механические раздражения, производимые по направлению от головы к хвосту.
Желателен предварительный тест, который определяет диапазон концентраций вещества и включает следующий ряд концентраций: 0,01; 0,1; 1,0; 10; 100; 1000 мг/кг (тестируемого вещества в сухой искусственной почвенной смеси). Для основного теста необходимо использовать пять концентраций геометрического ранжированного ряда.
Тест с искусственной почвой и тестируемым веществом необходимо проводить следующим образом: непосредственно перед тестированием эмульсию или дисперсию химиката в дистиллированной воде смешивают с искусственным субстратом или равномерно разбрызгивают по его поверхности. Если тестируемое вещество нерастворимо в воде, оно может быть растворено в подходящем органическом растворителе (ацетоне, гексане или хлороформе), после чего растворителю дают возможность испариться. Если вещество не растворяется, его дисперсию или эмульсию в количестве, соответствующем 750 г искусственной почвы (влажной массы), смешивают с 10 г мелкого кварцевого песка, после чего полученную смесь прибавляют к 740 г влажного искусственного субстрата. Так готовят смесь для каждого тестируемого сосуда. В качестве растворителей химических веществ могут использоваться только сильно летучие вещества. Перед тестированием растворитель должен испариться. Количество испарившейся воды из искусственной смеси должно быть адекватно восполнено.
В каждый сосуд добавляют 750 г влажной искусственной почвы и тестируемое вещество, после чего на поверхность помещают 10 промытых дождевых червей, которые адаптируются в течение 24 ч в искусственном субстрате (без тестируемого вещества). Сосуды накрывают пластиковой пленкой для предотвращения пересыхания содержимого и выдерживают 14 дней.
Рекомендуются четыре повторности для каждой тестируемой концентрации химического вещества. В каждом тесте используют четыре контрольных сосуда, причем искусственный субстрат обрабатывают растворителем, используемым для тестируемых сосудов. Продолжительность теста 14 дней (определение гибели проводят на 7-й и 14-й дни). Температура проведения теста (20 + 2) °С. Необходимо контролировать червей в тестируемой смеси в течение всего теста. Гибель подопытных червей определяют, высыпая содержимое сосуда на стеклянную плоскую пластину (поднос), затем проводят выборку червей из субстрата и определяют их состояние по реакции на механические раздражения, производимые от головы к хвосту. После оценки гибели в срок 7 дней, черви и смесь искусственной почвы с
химикатом помещают в контейнер. Данные о червях с какими-либо патологиями (в том числе поведенческими) фиксируют и отмечают в отчете. В конце теста необходимо оценить влажность субстрата.
Данные зависимости гибели от концентрации тестируемого вещества отражают в виде графика, по которому определяют медиану летальной концентрации (LC50) и ее доверительные интервалы [3]. Приемлемы также другие методы пробит-анализа. Если при двух последовательных концентрациях тестируемого вещества гибель составляет 0 % и 100 % гибели, эти два значения концентрации являются достаточными, чтобы определить диапазон, в котором находится LC50.
Отчет о тесте должен включать в себя следующую информацию:
- тестируемое вещество: химическая формула, способ применения;
- тестируемые черви: возраст, условия содержания и кормления, источник приобретения;
- условия теста: описание, детали отклонения от рекомендуемых условий и материалов;
- информация о растворителе, примененном в тесте.
Результаты теста:
- средняя живая масса — число живых червей до начала и в конце теста;
- описание явных физических или поведенческих патологических изменений у тестируемых
животных;
- метод определения 1_С50 с ссылкой на все использованные и полученные данные теста;
- графическое отражение зависимости эффекта от концентрации;
- гибель червей в контроле;
- гибель для вещества сравнения и тестируемого вещества;
- влажность и pH искусственной почвы перед началом и в конце теста;
- наивысшая концентрация, не вызвавшая гибели;
- самая низкая концентрация, вызвавшая 100 % гибель. 3
Кормление и разведение тестовых организмов
Eisenia foetida может выращиваться с использованием различных видов отходов животного происхождения. Рекомендуется выращивать их в смеси конского или коровьего навоза и торфа, смешанных в пропорции 50 : 50; возможно также использование навоза других животных. Водный экстракт смеси должен иметь pH около 7,0, обладать низкой электропроводностью (менее 6,0 миллисименс) и не быть чрезмерно загрязненным аммиаком или мочой. Для крупномасштабного содержания червей идеальны деревянные ящики размером 50 х 50 х 15 см с плотно подогнанными крышками, в которых возможно получение более чем 1000 червей за шесть недель. Для производства достаточного количества червей на 20 кг навоза вносят 1 кг червей. В таких условиях черви достигают живой массы более 1 гкаждый. Применяютчервей выровненных по возрасту и массе, лучше произведенных из коконов, которые выбирают из емкости с половозрел ы ми червями в течение 3—4 недель. После выведения из коконов черви созревают 7—8 недель при температуре 20 °С и могут использоваться в опыте.
Библиография
[1] М. В. Bouche, Lombriciens de France, Ecologie et Svstematique. Publ. Institut National de la Recherche Agronomique (1972)
[2] C. A. Edwards and J. R. Lofty, Biology of Earthworms. 2nd Edition, Chapman and Hall, London (1977)
[3] J. T. Litchfield and F. Wilcoxon, Journal of Pharmacol. Exper. Ther. 96. 99—113 (1949)
[4] С. E. Stephan, in Aquatic Toxicology and Hazard Evaluation (edited by F. L. Mayer and J. L. Hamelink) pp. 66-84, ASTM STR634, American Society for Testing and materials (1977)
[5] C. A. Edwards, Development of a Standardized Laboratory Method for Assessing the Toxicity of Chemical Substances to Earthworms, Report EUR 8714EN, Commission of the European Communities (1983)
[6] The Analysis of Agricultural Materials, Ministry of Agriculture, Fisheries and Food, Reference Book 427, HMSO, London (1981)
5
УДК 658.382.3:006.354 МКС 71.040.50 Т58 ЮТ
Ключевые слова: химическая продукция, окружающая среда, оценка острой токсичности, дождевые черви
Редактор К.С. Савинова Технический редактор Е.В. Беспрозванная Корректор М.М. Малахова Компьютерная верстка АН. Золотаревой
Сдано в набор 05.02.2015. Подписано в печать 20.02.2015. Формат 60x84^. Гарнитура Ариал. Уел. печ. л. 0,93. Уч.-изд. л. 0,65. Тираж 31 экз. Зак. 929.
Издано и отпечатано во ФГУП «СТАНДАРТИНФОРМ», 123995 Москва, Гранатный пер., 4. www.gostinfo.ru info@gostinfo.ru
1
2
3