ОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ

ПРОДУКТЫ ПЕРЕРАБОТКИ ПЛОДОВ И ОВОЩЕЙ

МЕТОДЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ВИТАМИНА С

Издание официальное

ИНК ИЗДАТЕЛЬСТВО СТАНДАРТОВ Москва

МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ

ПРОДУКТЫ ПЕРЕРАБОТКИ ПЛОДОВ И ОВОЩЕЙ

Методы определения витамина С    ГОСТ

24556-89

Products of fruits and vegetables processing.

Methods for determination of vitamin C

MKC 67.080.01 ОКСТУ 9109

Дата введения 01.01.90

Настоящий стандарт распространяется на продукты переработки плодов и овощей и устанавливает методы определения витамина С: тнтриметрическнй с визуальным титрованием — для определения аскорбиновой кислоты в продуктах, дающих светлоокрашенные экстракты: титриметрический с потенциометрическим титрованием и фотометрический для определения аскорбиновой кислоты в продуктах, дающих темноокрашенные экстракты; титри метрический с цистеином и флуорометрнческий для определения суммы аскорбиновой и дегилроаскорбиновой кислот.

Методики предназначены для определения витамина С в продуктах с массовой долей не менее I • 10“³ %; при использовании флуорометрнческого метода — не менее 2.5 • 10~³ %.

I. МЕТОД ОТБОРА ПРОБ

Отбор и подготовка проб к испытанию — по ГОСТ 26313.

2. ТИТРИМЕТРИЧЕСКИЙ МЕТОД

2.1.    Сущность метода

Метод основан на экстрагировании витамина С раствором кислоты (соляной, метафосфорной или смесью уксусной и метафосфорной) с последующим титрованием визуально или потенциомет-ричсскн раствором 2.6-дихлорфснолиндофенолята натрия до установления светло-розовой окраски.

2.2.    Аппаратура, материалы и реактивы

Весы лабораторные общего назначения по ГОСТ 24104*. 1-го класса точности с наибольшим пределом взвешивания 200 г.

Весы лабораторные общего назначения по ГОСТ 24104 с наибольшим пределом взвешивания 500 г и допускаемой погрешностью ± 0,01 г.

Гомогенизатор.

pH-метр-м идл и вольтметр лабораторный для измерения pH и окислительно-восстановительных потенциалов с диапазонами от минус I до плюс 14 мВ и погрешностью не более ±0.05 при измерении pH и диапазонами от минус 100 до плюс 1400 мВ и погрешностью не более ± 5 мВ при измерении окислительно-восстановительных потенциалов. При измерении окислительно-восстановительных потенциалов используют электроды: измерительный — платиновый, вспомогательный — хлорсереб-ряный.

Мешалка магнитная с плавным регулированием частоты вращения.

Секундомер с погрешностью 0,2 с.

Воронки лабораторные стеклянные по ГОСТ 25336 диаметром от 5 до 10 см.

Колбы мерные лабораторные стеклянные по ГОСТ 1770 вместимостью 100,500, 1000. 2000 см³.

• С I толя 2002 г. введен в действие ГОСТ 24104-2001 (здесь и далее).

Издание официальное    Перепечатка    воспрещена

© Издательство стандартов. 1989 © ИПК Издательство стандартов, 2003

ГОСТ 24556-89 С. 2

Колбы лабораторные стеклянные по ГОСТ 25336 вместимостью 50,100, 250 см³.

Микробюретка по НТД с иеной деления не более 0,01 см³.

Палочки стеклянные.

Пипетки мерные лабораторные стеклянные по НТД исполнений 1.4 и 5 1-го класса точности вместимостью I см³; исполнений 1,4 и 5, I и 2-го классов точности вместимостью 2 см³; исполнений 2,3.6 и 7, I и 2-го классов точности вместимостью 5, 10. 20, 25 см³.

Стаканы лабораторные стеклянные по ГОСТ 25336 вместимостью 50,100,1000 см³.

Ступка и пестик лабораторные фарфоровые по ГОСТ 9147 соответственно с наружным диаметром 70 или 90 мм и высотой 90 мм.

Цилиндры мерные лабораторные стеклянные по ГОСТ 1770 вместимостью 100, 250 см³.

Бумага фильтровальная лабораторная по ГОСТ 12026.

Песок кварцевый очищенный и прокаленный по ГОСТ 28561 п. 2.2.

Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.

Ацетон по ГОСТ 2603.

2,6-дихлорфе нол индофенол яг натрия, раствор массовой концентрации 0,250 г/дм³.

Кислота аскорбиновая должна соответствовать требованиям Государственной фармакопеи СССР. иэд. X. растворы массовыми концентрациями 1.0 и 0.1 г/дм³.

Кислота азотная по ГОСТ 4461 плотностью 1,41 г/см³, раствор с объемной долей 25 %.

Кислота метафосфорная по ГОСТ 841, растворы с массовой долей 3 и 6 %. Раствор с массовой долей 3 % готовят вдень испытаний разбавлением раствора с массовой долей 6 %. Раствор с массовой долей 6 % хранят в холодильнике в течение 10 дней.

Кислота соляная по ГОСТ 3118 плотностью 1,19 г/см³, раствор с массовой долей 2 %.

Кислота уксусная ледяная по ГОСТ 61 и раствор с массовой долей 3 %.

Кислота хлорная, раствор молярной концентрации 0,1 моль/дм³. Готовят перед обработкой электродов.

Кислота этилсндиаминтетрауксусная или двунатриевая соль кислоты, растворе массовой долей

5%.

Калин йодистый по ГОСТ 4232, раствор с массовой долей I % в растворе уксусной кислоты с массовой долей 3 %. Готовят перед обработкой электродов.

Натрий уксуснокислый плавленый, насыщенный раствор, готовят следующим образом: 200 г соли растворяют в 300 см³ волы.

Формальдегид, раствор с массовой долей 36—40 %.

Допускается применение импортной аппаратуры, лабораторной посуды и реактивов по классу точности и качеству не ниже отечественных.

Для проведения испытания, если нет других указаний, применяют реактивы квалификации «чистый для анализа» (ч.д.а.) и дистиллированную воду или воду эквивалентной чистоты.

2.3. Подготовка к испытанию

2.3.1.    Приготовление экстрагирующего раствора

В качестве экстрагирующего раствор;! используют растворы кислот — соляной с массовой долей 2 %, метафосфорной с массовой долей 3 % или смеси уксусной и метафосфорной кислот, которую готовят следующим образом: 15 г метафосфорной кислоты растворяют в 250 см³ дистиллированной воды, прибавляют 40 см³ ледяной уксусной кислоты, доводят водой до объема 500 см³, перемешивают и фильтруют в склянку с притертой пробкой. Хранят в холодильнике не более 10 дней.

2.3.2.    Приготовление стандартных растворов аскорбиновой кислоты

Для приготовления раствора аскорбиновой кислоты концентрации 1,0 г/дм³ взвешивают 0,1000 г аскорбиновой кислоты с погрешностью не более ± 0,0001 г, растворяют в экстрагирующем растворе в мерной колбе вместимостью 100 см³, доводят до метки тем же раствором и перемешивают.

Для приготовлення раствор;! концентрации 0.1 г/дм³ вносят пипеткой 10 см³ раствора аскорбиновой кислоты концентрации 1.0 г/дм³ в мерную колбу вместимостью 100 см³, доводят до метки экстрагирующим раствором и перемешивают.

Растворы аскорбиновой кислоты неустойчивы, поэтому их готовят перед проведением испытания.

2.3.3.    Приготовление раствора 2,6-днхлорфенолиндофенолята натрия и определение его титра

0,05 г 2.6-днхлорфенолиндофенолята натрия растворяют приблизительно в 150 см³ горячей

воды, предварительно прокипяченной в течение 30 мин или содержащей 0,042 г двууглекислого натрия, охлаждают до комнатной температуры, доводят до объема 200 см³ той же охлажденной водой, перемешивают и фильтруют в темную склянку. Раствор хранят в холодильнике не более 10 дней.

Титр раствор;! 2.6-днхлорфеналнндофсналята натрия устанавливают по стандартному раствору

аскорбиновой кислоты концентрации 1,0 и 0.1 г/дм³ вдень проведении испытания. Для этою в две колбы вместимостью 50 или 100 см³, в которые предварительно прибавлено по 9 см³ волы, вносят пипеткой по I см³ раствора аскорбиновой кислоты и быстро титруют раствором 2,6-дихлорфено-линдофенолята натрия до светло-розовой окраски, не исчезающей в течение 15—20 с.

Одновременно проводят контрольное испытание. Для этого в колбу вместимостью 50 или 100 см³ вносят I см³ экстрагирующего раствора. 9 см³ дистиллированной воды и титруют раствором

2,6-дихлорфенолиндофснолята натрия.

Титр раствор;» 2,6-дихлорфенолиндофенолята натрия в граммах аскорбиновой кислоты, эквивалентного одному кубическому сантиметру раствора 2,6-дихлорфенолнндофенолята натрия, вычисляют по формуле

где т — масса аскорбиновой кислоты, содержащаяся в I см³ стандартного раствора, г;

У, — объем раствора 2,6-дихлорфенолнндофенолята натрия, израсходованный на титрование стандартного раствор;! аскорбиновой кислоты, см³;

V₂ — объем раствора 2.6-ди.хлор<|>енолиндофенолята натрия, израсходованный на контрольное испытание, см³.

2.3.4.    Приготовление раствора ацетатного буферного, с pH 4 готовят следующим образом: растворяют 300 г безводного уксуснокислого натрия в 700 см³ дистиллированной воды, добавляют 1000 см³ ледяной уксусной кислоты, перемешивают и с помощью pH-метра устанавливают pH 4, добавляя, при необходимости, снова кислоту.

2.3.5.    Подготовка электродов для потенциометрического титрования

Измерительный платиновый электрод помещают в стакан вместимостью 50 см³ с раствором азотной кислоты, кипятят от 5 до 10 мин, промывают дистиллированной водой и оставляют в воде от 2 до 3 суг. Затем измерительный и вспомогательный электроды опускают в стакан вместимостью 100 см³ с раствором хлорной кислоты и замыкают накоротко (т.е. соединяют клеммы между собой). Через 2 ч электроды вынимают, не размыкая, промывают дистиллированной водой и помещают в стакан вместимостью 50 см³: измерительный — с раствором йодистого калия, вспомогательный — с дистиллированной водой. Через 15 мин электроды размыкают, измерительный электрод промывают дистиллированной водой.

Обработке подвергают электроды, нс бывшие в употреблении, или после перерыв;! в работе более 6 мес. Хранят в стакане с дистиллированной водой.

2.4. Проведение испытания

2.4.1.    Экстрагирование

Для приготовления экстракта навеску пробы массой от 5 до 50 г взвешивают с погрешностью ±0,01 г.

2.4.1.1.    Для экстрагирования вшамина С из сухих продуктов навеску пробы от 5 до 10 г растирают в ступке с небольшими количествами экстрагирующего раствора кислоты или смеси кислот (нс менее I см³ раствора на I г пробы) и песка, переносят в мерную колбу или мерный цилиндр вместимостью 100 см³, смывая ступку и пестик небольшими порциями экстрагирующего раствора до тех пор, пока объем нс достигнет метки. Содержимое выдерживают в течение 10 мин, перемешивают и фильтруют.

2.4.1.2.    Для экстрагирования витамина С из продуктов плотной консистенции навеску пробы от 5 до 50 г гомогенизируют нс более 2 мин с небольшим количеством экстрагирующего раствора (не менее I см³ раствора на I г пробы) и переносят в мерные колбу или цилиндр вместимостью 100 см³, смывая гомогенизатор небольшими порциями экстрагирующего раствора до тех пор, пока объем не достигнет метки. Содержимое выдерживают в течение 10 мин, перемешивают и фильтруют.

2.4.1.3.    Для экстрагирования витамина С из жидких продуктов навеску пробы от 5 до 50 г переносят в мерные колбы или цилиндр вместимостью 100 см³, смывая стенки стакана небольшими порциями экстрагирующего раствора до тех пор, пока объем не достигнет метки. Содержимое выдерживают в течение 10 мин, перемешивают и фильтруют.

2.4.1.4.    При исследовании продуктов, содержащих диоксид серы (SO,), навеску пробы от 5 до 50 г обрабатывают в зависимости от вида продукта, как указано в пп. 2.4.1.1—2.4.1.3, переносят в мерные колбу или цилиндр вместимостью 100 см³, добавляют ацетон в объеме, равном '/₅ части массы навески, перемешивают доводят до метки экстрагирующим раствором. Содержимое выдерживают 10 мин, снов;! перемешивают и фильтруют.

ГОСТ 24556-89 С. 4

2.4.1.5.    При исследовании продуктов, фасованных в металлическую тару, навеску пробы от 5 до 30 г обрабатывают в зависимости от вида продукта, как указано в пп. 2.4.1.1—2.4.1.3, переносят в мерные колбу или цилиндр вместимостью 100 см³ при помощи экстрагирующего раствора, доводят до объема 50 см³ и перемешивают. Через 10 мин прибавляют 10 см³ насыщенного уксуснокислого натрия или 30 см³ ацетатного буферного раствора, прибавляют 10 см³ раствора этилендиамннтетра-уксусной кислоты или ее соли, перемешивают, доводят до метки экстрагирующим раствором, снова перемешивают и фильтруют.

2.4.1.6.    Полученные экстракты сразу используют для титрования.

2.4.2. Визуальное титрование

2.4.2.1.    В колбу вместимостью 50 или 100 см³ пипеткой вносят от 1 до 10 см³ экстракта, полученного по п. 2.4.1, доводят объем водой до 10 см³ и титруют раствором 2.6-днхлорфенолин-дофенолята натрия до пояатения слабо-розовой окраски, нс исчезающей в течение 15—20 с.

2.4.2.2.    Одновременно проводят контрольное испытание на содержание в продукте редуцирующих веществ. Для этого в колбу помешают такой же объем экстракта, как при определении по п. 2.4.2.1. прибаатяют равный ему объем ацетатного буферного раствора, раствор формальдегида в объеме, равном половине объема буферного раствора, перемешивают и выдерживают в течение 10 мин. закрыв предатрительно колбу пробкой. Затем содержимое титруют раствором 2.6-дихлор-фенолиндофенолята натрия.

2.4.3. Потенциометрическое титрование

2.4.3.1.    В стакан вместимостью 50 см³ вносят пипеткой объем экстракта, полученного по п. 2.4.1, но не более 25 см³, прибаатяют экстрагирующий раствор приблизительно до объема 30 см³ и погружают электроды рН-метра-милливольтметра так. чтобы при перемешивании они нс касались магнитного стержня мешалки. Затем титруют потенциометрически из микробюретки раствором

2.6- дн\лорфснолнндофенолята натрия. Раствор 2.6-дихлорфснолиндофснолята натрия прибаатяют порциями по 0.1—0,2 см³ при постоянном перемешивании. Записывают показания прибор;) в милливольтах. соответствующие каждому прибаатенному объему раствора 2,6-дихлорфснолнндофснолята натрия. При титровании стрелка прибора сначала отклоняется атево. затем ее движение замедляется и после точки эквивалентности стрелка отклоняется вправо. Объем раствора 2,6-дихлорфснолиндофено-лята натрия, соответствующий точке эквивалентности и. следовательно, израсходованныи на титрование объема, устанавливают по максимальной разнице («скачку») двух соседних показаний прибора или по потенциометрической кривой зависимости величины потенциала в милливольтах от объема раствора

2.6- днхлорфснолнндофснодята натрия в кубических сантиметрах.

2.4.3.2.    Одновременно проводят контрольное испытание на содержание в продукте редуцирующих веществ так. как указано в п. 2.4.2.2. Раствор титруют потенциометрически.

2.4.3.3.    За результат титровании принимают среднее арифметическое результатов двух титрований одного экстракта. При повторном титровании в области предполагаемой точки эквивалентности раствор 2.6-дихлорфснолнндофснолята натрия прибавляют по 1—2 капли.

2.5. Обработка результатов

2.5.1.    Массовую долю аскорбиновой кислоты (X) в процентах вычисляют по формуле

^    (Г,-и_;)    Т    Г,-100

V\ m

где У, — объем раствора 2.6-днхлорфснолиндофенолята натрия, израсходованный на титрование экстракта пробы, см³;

У₂ — объем раствор;) 2.6-дихлорфенолиндофенолята натрия, израсходованный на контрольное испытание, см³;

Г—титр раствора 2.6-дихлорфенолнндофенолята натрия, г/см³;

Г₃ — объем экстракта, полученный при экстрагировании витамина С из навески продукта. см³;

V₄ — объем экстракта, используемый для титрования, см³;

/л — масса навески продукта, г.

2.5.2.    За окончательный результат испытания принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений. Вычисления проводят до четырех значащих цифр после запятой, результат округляют до трех значащих цифр и выражают в виде произведения числа на 10“³.

Расхождение между двумя параллельными определениями не должно превышать 3 % от среднего арифметического значения при доверительной вероятности Р = 0.95.

С. 5 ГОСТ 24556-89

3. ФОТОМЕТРИЧЕСКИЙ МЕТОД

3.1.    Сущность метода

Метод основан на экстрагировании витамина С метафосфорной кислотой или смесью уксусной и метафосфорной кислот, восстановлении 2,6-дихлор<]к*нолн1щофснолнта натрия аскорбиновой кислотой с последующей экстракцией органическим растворителем (амилацетатом, бутилацетатом или ксилолом) избытка 2,6-дихлорфснолиндофснолята натрия и фотомстрнровании органического экстракта при длине волны 500 нм.

3.2.    Аппаратура, материалы и реактивы

Аппаратура, материалы и реактивы — по и. 2.2 со следующим дополнением.

Центрифуга лабораторная, обеспечивающая частоту вращения 2000 мин^-1, с центрифужными пробирками с притертыми пробками вместимостью 25 см³.

Колориметр фотоэлектрический лабораторный или спектрофотометр, обеспечивающие измерение оптической плотности при длине волны Х_тал = (500 ± 10) им.

Воронки делительные стеклянные но ГОСТ 25336 вместимостью 50 см³.

Прибор для перегонки на шлифах.

Эфир уксусной кислоты амиловый (амилацетат).

Эфир уксусной кислоты бутиловый (бугнлаиетат) по ГОСТ 22300.

Гидрохинон, полунасыщсниый раствор в ацетоне.

Ксилол.

3.3.    Подготовка к испытанию

3.3.1.    Приготовление растворов по п. 2.3 со следующим дополнением

3.3.1.1.    Приготовление полунасыщснного раствора гидрохинона.

Сначала готовят насыщенный раствор гидрохинона в ацетоне. Для этого I г гидрохинона растворяют в 10 см³ ацетона и фильтруют. Полунасышенный раствор гидрохинона готовят смешиванием одного объема насыщенного раствора с таким же объемом ацетона.

3.3.1.2.    Органический растворитель не должен содержать окисляющих веществ. Проверку его чистоты осуществляют следующим образом: к I см³ раствора 2.6-дихлорфенолиндофенолята натрия сначала прибавляют раствор аскорбиновой кислоты до обесцвечивания, затем добавляют 10 см³ растворителя, взбалтывают и оставляют на 10 мин. Если органический слой будет окрашен, то его следует очистить перегонкой, собирая фракцию, перегоняющуюся соответственно при температурах: амилацетат — при 149 ’С, бутилаиетат — при 126 *С, ксилол — при 137—141 'С.

Использованный после испытания органический растворитель очищают перегонкой, как указано выше.

Все работы с органическим растворителем следует проводить в вытяжном шкафу.

3.3.2.    Построение градуировочного графика

Дтя построения градуировочного графика готовят пять растворов. Для этого в центрифужные пробирки или делительные воронки вносят: в первую — 5,0 см³ экстрагирующего раствора кислот, в остальные последовательно по 0.2: 0.4; 0.6; 0.8 см³ раствора 2.6-дихлорфенолнндофенолята натрия и доба&ляют экстрагирующий раствор до объема 5,0 см³. Во все пробирки шли делительные воронки прибавляют по 5 см³ ацетатного буферного раствора, иеремешиатют и затем прибааляют по 10 см³ органического растворителя.

Пробирки или делтельные воронки закрыатют пробками и содержимое перемешивают в течение 10 с. Пробирки центрифугируют, а воронки остааляют в покое до разделения слоев. Органический слой переносят в кювету с расстоянием между рабочими гранями 10 мм и измеряют его оптическую плотность при длине волны 500 нм. В качестве контрольного раствор;! сравнения используют чистый растворитель.

По полученным данным строят график зависимости оптической плотности органического экстракта 2,6-дихлорфснолиндофснолята натрия от объема раствора 2,6-днхлорфснолиндофснолята натрия в кубических сантиметрах.

Построение градуировочного графика проводят для каждого свежеприготовленного раствора

2,6-дихлорфснолиндофснолята натрия.

3.4.    Проведение испытания

3.4.1.    Экстрагирование

Экстрагирование витамина С из продукта проводят по п. 2.4.1.

3.4.2.    В центрифужную пробирку или делительную воронку вносят пипеткой от I до 5 см³ экстракта испытуемой пробы, добавляют экстрагирующего раствора до объема 5 см³, такой же объем

ГОСТ 24556-89 С. 6

ацетатного буферного раствора и раствор 2,6-дихлорфенолиндофенолята натрия в объеме не более 2 см³. Перемешивают и прибавляют 10 см³ органического растворителя. Далее испытание проводят

по п. 3.3.2.

При получении мутного органического экстракта перед измерением оптической плотности экстракт фильтруют через фильтровальную бумагу.

3.4.3.    Одновременно проводят контрольное испытание на содержание в продукте редуцирующих веществ. Дтя этого в центрифужную пробирку или делительную воронку вносят такие же объемы экстракта и ацетатного буферного раствора, как при испытании исследуемой пробы по п. 3.4.2. прибавляют раствор формальдегида в объеме, равном половине объема буферного раствора, перемешивают и выдерживаю! в течение 10 мин. После этого прибавляют раствор 2,6-дихлорфено-линдофенолята натрия, снова перемешивают и прибавляют 10 см³ органического растворителя. Затем продолжают испытание по п. 3.3.2.

3.4.4.    При содержании в продукте растворимых в органическом растворителе красящих веществ их влияние определяют следующим образом: после проведения испытания по п. 3.4.2 в кювету с органическим экстрактом прибавляют две капли полунасыщеиного раствора гидрохинона, перемешивают палочкой, выдерживают 30 с и снова измеряют оптическую плотность. Полученное значение оптической плотности вычитают из начального значения оптической плотности органического экстракта.

3.5. Обработка результатов

3.5.1. Массовую долю аскорбиновой кислоты < А”,) в процентах вычисляют по формуле

_ (И, - К,- VQ Т У₄- 100

где Г, — объем раствора 2,6-дихлорфенолнндофенолята натрия, израсходованный на проведение испытания, см³;

У₂ — объем избытка раствора 2,6-дихлорфенолиндофенолята натрия, найденный по градуировочному графику, см³;

У₃ — объем раствора 2,6-дихлорфенолиндофенолята натрия, израсходованный на контрольное испытание, см³;

Г—тигр раствора 2,6-дихлорфенолиндофенолята натрия, г/см³;

У₄ — объем экстракта, полученный при экстрагировании витамина С из навески продукта,

см³;

Уу — объем экстракта, используемый для испытания, см³;

m — масса навески продукта, г.

3.5.2. За окончательный результат испытания принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений. Вычисления проводят до четырех значащих цифр после запятой, результат округляют до трех значащих цифр и выражают в виде произведения числа на 10^-3.

Расхождение между двумя пархисльными определениями не должно превышать 3 % от среднего арифметического значения при доверительной вероятности Р ■ 0,95.

4. ТИТРИМ ЕТРИЧЕСКИЙ МЕТОД С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ЦИСТЕИНА

4.1.    Сущность метода

Метод основан на экстрагировании витамина С из продукта раствором метафосфорной кислоты, восстановлении дегидроаскорбиновой кислоты в аскорбиновую цистеином солянокислым при pH 7,0—7,5, устранении влияния редуцирующих веществ в присутствии формальдегида при pH, близком к нулю, и титровании раствором 2,6-дихлорфенолиндофенолята натрия. Метод применяется при возникновении разногласий в оценке качества.

4.2.    Аппаратура, материалы и реактивы

Для проведения испытания применяют аппаратуру, материалы и реактивы по и. 2.2 со следующим дополнением.

Термостат электрический с водяной рубашкой или суховоздушный, обеспечивающие измерение температуры (37 ± 1)*С.

Колбы мерные лабораторные стеклянные по ГОСТ 1770 вместимостью 50 см³.

Калий фосфорнокислый двузамещенный по ГОСТ 2493, раствор с массовой долей 45 %.

Кислота серная по ГОСТ 4204, раствор с объемной долей 50 %.

/.-цистеин солянокислый.

4.3.    Подготовка к испытанию

4.3.1.    Приготовление растворов по п. 2.3.1 со следующим дополнением.

Свежеприготовленный раствор цистеина в растворе соляной кислоты; готовят следующим

образом: 50 мг цистеина растворяют в 4 см-' дистиллированной волы, прибавляют I см³ раствора соляной кислоты плотностью 1,19 г/см³ и перемешивают.

4.4.    Проведение испытания

4.4.1.    Экстрагирование

Экстрагирование витамина С из продуктов проводят no п. 2.4.1.

4.4.2.    От 10 до 20 см³ экстракта пипеткой приливают в мерную колбу вместимостью 50 см³. Одновременно в стакан вместимостью 50 см³ вносят такой же объем экстракта и приливают порциями раствор фосфорнокислого калия двузамешенного до установления pH 7.0—7,5, измеряя его с помощью pH-метра. Отмечают объем раствора фосфориокистого калия. После этого в колбу с экстрактом вносят 50 мг цистерна или его раствор, перемешивают до растворения и прибавляют установленный объем фосфорнокислого калия. Колбу закрывают пробкой и выдерживают в термостате при 37 *С в течение 30 мим. После этого раствор в колбе охлаждают, подкисляют раствором серной кислоты до pH. близкого к нулю, и снова охлаждают. Необходимый для подкисления объем серной кнеюты также устанавливают предварительно, пользуясь pH-метром, используя для этого стакан с экстрактом после прибавления в него фосфорнокислого калия. Раствор в колбе доводят до метки экстрагирующим раствором и перемешивают.

В колбу вместимостью 50 или 100 см³ — для визуального титрования или стакан вместимостью 50 см³ — для потенциометрического титрования вносят пипеткой от 10 до 20 см³ полученного раствора, прибавляют 2—3 см' раствора формальдегида, закрывают крышкой и выдерживают 8 мин, приливают раствор метафосфорной кислоты до объема 30 см³. Затем титруют раствором 2.6-дихлор-фенолиндофенолята натрия: светлоокрашенные растворы — визуальным титрованием, темноокра-шенные — потенциометрическим титрованием, как указано в пп. 2.4.2, 2.4.3.

За результат титрования принимают среднее арифметическое результатов двух титрований одного раствора.

4.5 Обработка результатов

4.5.1. Массовую долю витамина С (Я,) в процентах вычисляют по формуле

К, ■ Г К, К, 100

где У, — объем раствора 2,6-днхлорфенолиндофенолята натрия, израсходованный на титрование,

см³;

Т — титр раствора 2,6-днхлорфенолиндофенолята натрия, г/см³;

V₂ — объем экстракта, полученный при экстрагировании витамина С из навески продукта.

см³;

У_у — объем раствора, полученный после восстановления, см³;

У₄ — объем экстракта, используемый ятя восстаноатсння, см';

Уу — объем раствора, используемый для титрования, см³;

m — масса навески продукта, г.

4.5.2. За окончательный результат испытания принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений. Вычисления проводят до четырех значащих цифр после запятой, результат округляют до трех значащих цифр и выражают в виде произведения числа на 10~³.

Расхождение между двумя параллельными определениями не должно превышать 3 % от среднего арифметического значения при доверительной вероятности Р = 0,95.

5. флуоромктрич некий метод

5.1. Сущность метода

Метод основан на экстрагировании витамина С из продукта раствором метафосфорной кислоты или смесью уксусной и метафосфорной кислот, окислении аскорбиновой кислоты активированным углем в дегидроаскорбиновую кислоту, взаимодействии ее с о-фенилендиамнном с образованием флуоресцирующего соединения и измерении интенсивности флуоресценции при алии ах волн 350 нм возбуждающего и 430 нм излучаемого света. Фоновую флуоресценцию измеряют

ГОСТ 24556-89 С. 8

после образования нефлуоресцирующего соединения дегнороаскорбиновой кислоты с борной кислотой.

5.2.    Аппаратура, материалы и реактивы

Для проведении испытания применяют аппаратуру, материалы и реактивы по п. 2.2 со следующим дополнением.

Флуориметр лабораторный, обеспечивающий измерение светового потока с длиной волны (350 ± 30) им возбуждающего и (430 ± 10) нм излучаемого света, с погрешностью не более 2.5 %.

Шкаф сушильный, обеспечивающий поддержание температуры нагрев;) 115 ‘С, с погрешностью не более 5 ’С.

Насос вакуумный пластинчато-роторный и золотниковый.

Воронки лабораторные стеклянные с фильтрами из спекшегося стеклянного порошка по ГОСТ 25336. класс фильтра ПОР 16.

Воронка лабораторная фарфоровая Бюхнера по ГОСТ 9147 с наружным диаметром от 80 до 130 мм.

Колба лабораторная стеклянная с тубусом для фильтрования в вакууме по ГОСТ 25336 вместимостью не менее 1000 см³.

Колба мерная лабораторная стеклянная по ГОСТ 1770 вместимостью 25 см³.

Пробирки стеклянные с взаимозаменяемым конусом по ГОСТ 25336 вместимостью 10, 25 см³.

Чашка лабораторная фарфоровая выпарительная по ГОСТ 9147 вместимостью не менее 150 см³.

Натрий уксуснокислый 3-водный по ГОСТ 199. раствор с массовой концентрацией 500 г/дм³.

Кислота аскорбиновая, раствор с массовой концентрацией 0.06 г/дм³. Готовят перед проведением испытания.

Кислота борная по ГОСТ 9656, раствор с массовой долей 3 % в растворе уксуснокислого натрия. Готовят непосредственно перед проведением испытания.

Кислота соляная по ГОСТ 3118 плотностью 1,19 г/см³, раствор с объемной долей 10 %.

о-фенилендиамнн солянокислый, раствор массовой концентрацией 0.2 г/дм³. Готовят перед проведением испытания.

Уголь активированный.

Для проведения испытания, если нет других указаний, применяют реактивы квалификации «чистый для анализа» (ч.д.а.) или «химически чистый» (х.ч.) и дистиллированную воду или воду эквивалентной чистоты.

5.3.    Подготовка к испытанию

5.3.1.    Приготовление растворов по n. 2.3.1 со следующим дополнением.

5.3.1.1.    Стандартный раствор аскорбиновой кислоты концентрации 0,06 г/дм³

Для приготовления раствора концентрации 0,06 г/дм³ в мерную колбу вместимостью НЮ см³ вносят 6.0 см³ раствора аскорбиновой кислоты концентрации 1.0 г/дм³, полученного по п. 2.3.2, доводят экстрагирующим раствором до метки и перемешивают.

5.3.1.2.    Обработка активированного угля

200 г угля помешают в колбу вместимостью 2000 см³, прибавляют I дм³ раствор;) соляной кислоты, доводят до кипения и фильтруют через воронку Бюхнера в вакууме. Уголь переносят в стакан вместимостью 1000 см³, прибавляют I дм³ дистиллированной воды, перемешивают и снова фильтруют через воронку Бюхнера, еще раз смешивают уголь с I дм³ воды и фильтруют. Обработку водой повторяют. Отфильтрованный уголь помешают в фарфоровую чашку и высушивают при температуре 115 *С в течение 12—14 ч в сушильном шкафу. Хранят в склянке с притертой пробкой.

5.4.    Проведение испытания

5.4.1.    Экстрагирование

Экстрагирование В1гтамнна С из продукта проводят раствором метафосфорной кислоты или смесью уксусной и метафосфорной кислот по п. 2.4.1.

5.4.2.    Берут две колбы вместимостью 250 см³. В одну из них вносят 50 или 100 см³ испытуемого экстракта, в другую —такой же объем стандартного раствора аскорбиновой кислоты концентрации 0.06 или 0,1 г/дм³. Затем в обе колбы прибавляют соответственно по I или 2 г активированного угля, тщательно перемешивают и фильтруют через воронку с фильтрами из пористой пластинки или фильтровальной бумаги, отбрасывая первые порции фильтрата.

5.4.3.    Анализируемые растворы. В две мерные колбы вместимостью 25 см³ помешают по 5 см³ раствора уксуснокислого натрия, затем в одну прибавляют 5 см³ фильтрата анализируемой пробы, в другую — 5 см³ фильтрата стандартного раствора, полученных по п. 5.4.2. Содержимое колб доливают до метки дистиллированной водой и перемешиваю).

5.4.4.    Контрольные растворы. Для установлении влиянии фоновой флуоресценции в две мерные колбы вместимостью по 25 см³ каждая помешают по 5 см³ раствора борной кислоты и по 5 см³ фильтрата, полученного по п. 5.4.2: в одну — испытуемую пробу, в другую — стандартный раствор. Растворы в колбах выдерживают в течение 15 мин. периодически встряхивая; затем доливают до метки дистиллированной водой и перемешивают.

5.4.5.    Каждый раствор, полученный по пп. 5.4.3 и 5.4.4. вносят по 2 см³ пипеткой в две пробирки. Всего восемь пробирок. Затем во все пробирки прибавляют по 5 см³ раствора о-фени-ленднамнна. тщательно перемешивают и выдерживают в темноте 35 мин.

5.4.6.    Измеряют интенсивность флуоресценции растворов, полученных по п. 5.4.5, при длинах волн 350 нм возбуждающего и 430 нм излучаемого света.

5.5. Обработка результатов

5.5.1.    Массовую долю витамина С (Х_у) в процентах вычисляют по формуле

_v {Л-B) c-v т

⁼    (£-    D) т

где А — среднее значение интенсивности флуоресценции раствора анализируемой пробы;

В — среднее значение интенсивности флуоресценции контрольного раствора анализируемой пробы;

£ —среднее значение интенсивности флуоресценции стандартного раствора:

D — среднее значение интенсивности флуоресценции контрольного стандартного раствора: с — массовая концентрация стандартного раствора аскорбиновой кислоты, г/дм³;

Г—общий объем экстракта, полученный при экстрагировании витамина С из навески продукта, см³; т — масса навески продукта, г.

5.5.2.    За окончательный результат испытания принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений. Вычисления проводят до четырех значащих цифр после запятой, результат округляют до трех значащих цифр и выражают в виде произведения числа на К)^-3.

Расхождение между двумя параллельными определениями нс должно превышать 3 % от среднего арифметического значения при доверительной вероятности Р ■ 0.95.