МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СОВЕТ ПО СТАНДАРТИЗАЦИИ, МЕТРОЛОГИИ И СЕРТИФИКАЦИИ
(МГС)
INTERSTATE COUNCIL FOR STANDARDIZATION, METROLOGY AND CERTIFICATION
(ISC)
МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ
СТАНДАРТ
СЫВОРОТКА ГЕМОЛИТИЧЕСКАЯ ДЛЯ РЕАКЦИИ СВЯЗЫВАНИЯ КОМПЛЕМЕНТАТехнические условия
|
Москва
Стандартинформ
2014 |
Предисловие
Цели, основные принципы и основной порядок проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены ГОСТ 1.0-92 «Межгосударственная система стандартизации. Основные положения» и ГОСТ 1.2- 2009 «Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные, правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Порядок разработки, принятия, применения, обновления и отмены»
Сведения о стандарте
1 РАЗРАБОТАН Федеральным государственным бюджетным учреждением «Всероссийский государственный Центр качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов» (ФГБУ «ВГНКИ»)
2 ВНЕСЕН Федеральным агентством по техническому регулированию и метрологии Российской Федерации
3 ПРИНЯТ Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол № 54-П от 3 декабря 2012 г. № 54-П)
За принятие проголосовали:
Краткое наименование страны по МК(ИСО 3166) 004-97 |
Код страны по МК (ИС0 3166) 004-97 |
Сокращенное наименование национального органа по стандартизации |
Армения |
AM |
Минэкономики Республики Армения |
Киргизия |
KG |
Кыргызстандарт |
Молдова |
MD |
Молдова-Стандарт |
Россия |
RU |
Росстандарт |
Таджикистан |
TJ |
Таджикстандарт |
Узбекистан |
uz |
Узстандарт |
4 ВЗАМЕН ГОСТ 16445-78
5 Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 28 июня 2013 г. № 316-ст введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 июля 2014 года
Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодно издаваемом информационном указателе «Национальные стандарты», а текст изменений и поправок - в ежемесячно издаваемом информационном указателе «Национальные стандарты». В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ежемесячно издаваемом информационном указателе «Национальные стандарты». Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования - на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет
© Стандартинформ, 2014
В Российской Федерации настоящий стандарт не может быть полностью или частично воспроизведен, тиражирован и распространен в качестве официального издания без разрешения Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии
МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙСЫВОРОТКА ГЕМОЛИТИЧЕСКАЯ ДЛЯ РЕАКЦИИ СВЯЗЫВАНИЯ КОМПЛЕМЕНТАТехнические условия
Serum haemolitic for the complement fixation test. _Specification_
Дата введения - 2014 - 07 - 01
1 Область применения
Настоящий стандарт распространяется на гемолитическую сыворотку для реакции связывания комплемента (далее - сыворотка), представляющую собой консервированную глицерином сыворотку крови кролика, иммунизированного эритроцитами барана.
Сыворотка предназначена для применения в качестве компонента реакции связывания комплемента (далее - РСК) в ветеринарии.
2 Нормативные ссылки
В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие стандарты:
ГОСТ 1770-74 (ИСО 1042—83, ИСО 4788—80) Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия
ГОСТ 6709 —72 Вода дистиллированная. Технические условия
ГОСТ 9142-90 Ящики из гофрированного картона. Общие технические условия
ГОСТ 12301-2006 Коробки из картона, бумаги и комбинированных материалов. Общие технические условия
ГОСТ 12303— 80 Пачки из картона, бумаги и комбинированных материалов. Общие технические условия
ГОСТ 14192-90 Маркировка грузов
ГОСТ 16446-2012 Комплемент сухой для реакции связывания комплемента. Технические условия
ГОСТ 22524-77 Пикнометры стеклянные. Технические условия.
ГОСТ 25336-82 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры
ГОСТ 28085-89 Препараты биологические. Метод бактериологического контроля стерильности
ГОСТ 28498-90 Термометры жидкостные стеклянные. Общие технические требования и методы испытаний.
ГОСТ 29227-91 (ИСО 835-1—81) Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки
градуированные. Часть 1. Общие требования.
Примечание - При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов в информационной системе общего пользования - на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет или по ежегодно издаваемому указателю «Национальные стандарты», который опубликован по состоянию на 1 января текущего года, и по соответствующим ежемесячно издаваемым информационным указателям, опубликованным в текущем году. Если ссылочный стандарт заменен (изменен), то при пользовании настоящим стандартом следует руководствоваться заменяющим (измененным) стандартом. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, применяется в части не затрагивающей эту ссылку.
3 Технические требования
3.1 Сыворотка должна соответствовать требованиям настоящего стандарта и производиться по технологическому регламенту.
3.2 По физико-химическим и биологическим свойствам сыворотка должна соответствовать требованиям и нормам, указанным в таблице 1.
Таблица 1 |
Наименование показателя |
Характеристика и норма |
Внешний вид |
Прозрачная, слегка опалесцирующая жидкость желтого цвета с розовым оттенком без хлопьев, осадка и посторонней примеси |
Массовая доля глицерина, % |
50 ±5 |
Стерильность |
Посевы на питательные среды не должны давать роста бактериальной микрофлоры в течение 10 сут при выдерживании в термостате при температуре (37,5 ± 0,5) °С и грибов при температуре (21 ±1) °С |
Гемолитические свойства |
Не должна вызывать гемолиза эритроцитов барана |
Активность, титр, не менее |
1:1000 |
|
3.3 Упаковывание, маркирование
3.3.1 Сыворотку расфасовывают по 1 см1 в стерильные ампулы из нейтрального стекла и запаивают.
На ампулы наносят маркировку с указанием:
- наименования организации-производителя;
- наименования сыворотки;
- номера серии;
- даты выпуска;
- количества сыворотки в ампуле, см1;
- срока годности;
- надписи: «Для ветеринарного применения».
3.3.2 Ампулы с сывороткой упаковывают в картонные коробки по ГОСТ 12301 или пачки по ГОСТ 12303 с разделительными перегородками (прокладками), обеспечивающими их сохранность при транспортировании и хранении.
3.3.3 На каждую коробку наклеивают этикетку, на которой указывают:
- наименование организации-производителя и ее товарный знак;
- наименование сыворотки;
- количество ампул в коробке;
- количество сыворотки в ампуле, см1;
- количество доз в ампуле;
- номер серии;
- дату выпуска;
- срок годности;
- титр;
- условия хранения;
- надпись: «Для ветеринарного применения»;
- обозначение настоящего стандарта;
- штриховой код;
- информацию о подтверждении соответствия;
- предупредительную надпись: «Разводить без учета содержания глицерина!».
3.3.4 Коробки с сывороткой упаковывают в картонные ящики по ГОСТ 9142 или
аналогичные массой брутто не более 15 кг. Внутрь каждого ящика вкладывают контрольный лист с указанием:
- наименования сыворотки,
- номера серии,
- даты упаковки,
- фамилии или номера упаковщика.
3.3.5 Каждый ящик (транспортная тара) маркируют по ГОСТ 14192 с указанием манипуляционных знаков: «Хрупкое. Осторожно», «Ограничение температуры».
3.3.6 Маркировка, характеризующая упакованную продукцию, должна содержать следующую информацию:
- наименование организации-производителя и ее адрес (в том числе страну);
- наименование сыворотки;
- число коробок в ящике;
2
- номер серии;
- дату выпуска;
- условия хранения и перевозки;
- массу брутто;
- надпись: «Для ветеринарного применения».
4 Правила приемки
4.1 Каждая серия сыворотки должна быть принята (проверена) отделом, отвечающим за контроль качества готовой продукции организации- производителя в соответствии с нормативными документами государства, принявшего стандарт.
4.2 Серией сыворотки считают определенное количество сыворотки, полученное за один технологический цикл, одновременно представленное на контроль и оформленное одним документом о качестве.
4.3 В документе о качестве указывают:
- наименование организации-производителя;
- наименование сыворотки;
- номер серии;
- дату изготовления (месяц и год);
- объем серии;
- результаты испытания по показателям качества;
- срок годности (месяц и год);
- условия хранения;
- обозначение стандарта;
- номер и дату выдачи документа о качестве;
- заключение и подпись лица, выдавшего документ о качестве.
4.4 Для контроля качества сыворотки от каждой серии отбирают выборку. Из выборки выделяют среднюю пробу в количестве 40 ампул. 20 ампул с сывороткой используют для проведения испытания по показателям качества, указанным в таблице 1, а 20 ампул направляют в архив организации-производителя. Пробы в архиве хранят в течение срока годности.
4.5 Архивные образцы маркируют надписью «Архив», опечатывают и снабжают документом установленной формы с указанием:
- наименования сыворотки;
- номера серии;
- даты выпуска (месяц и год);
- даты отбора проб;
- объема серии;
- числа отобранных образцов;
- должности и подписи лица отобравшего пробы;
- срока годности (месяц и год);
- обозначения настоящего стандарта;
- срока хранения проб в архиве.
4.6 При неудовлетворительных результатах испытаний хотя бы по одному из показателей по нему проводят повторные испытания на удвоенном количестве проб сыворотки, взятой от той же серии и на удвоенном количестве материалов. Результаты повторных испытаний считают окончательными и распространяют на всю серию.
В случае неудовлетворительных результатов повторной проверки серию сыворотки считают не соответствующей требованиям настоящего стандарта, ее бракуют и уничтожают путем раздавливания ампул с последующим разведением содержимого ампул водой в соотношении 1 : 100 и сливом образующегося раствора в промышленную канализацию, о чем составляют соответствующий акт.
4.7 Контроль качества сыворотки, поступающей по рекламации, проводит организация-производитель, а при разногласиях в оценке качества между производителем и потребителем контроль проводит организация, уполномоченная в порядке, действующем на территории государства, принявшего стандарт. 1
5 Методы испытаний
5.1 Для определения внешнего вида, наличия посторонней примеси, хлопьев и осадка ампулы с сывороткой встряхивают и просматривают в проходящем свете.
Содержимое ампул должно представлять собой прозрачную, слегка опалесцирующую жидкость желтого цвета с розовым оттенком без хлопьев, осадка и посторонней примеси.
5.2 Определение массовой доли глицерина5.2.1 Аппаратура, материалы и реактивы
Для проведения испытания применяют:
- пикнометр вместимостью 1—2 см1 по ГОСТ 22524;
- баню водяную или термостат;
- термометр технический стеклянный ртутный со шкалой от 0 °С до 100 °С и ценой деления 1°С по ГОСТ 28498;
- весы лабораторные аналитические;
- эксикатор по ГОСТ 25336;
- пипетки градуированные для отбора жидкости по ГОСТ 29227;
- воду дистиллированную по ГОСТ 6709, кипяченую или бидистиллированную.
5.2.2 Подготовка к испытанию
Пикнометр тщательно очищают хромовой смесью, промывают водой, ополаскивают спиртом, затем эфиром, высушивают продуванием воздуха или в сушильном шкафу и охлаждают в эксикаторе.
5.2.3 Проведение испытания
Пикнометр взвешивают на аналитических весах с погрешностью не более 0,0002 г. Наполняют его дистиллированной водой до метки, выдерживают на водяной бане или в термостате при температуре 20 °С в течение 20— 30 мин и вновь корректируют заполнение водой до метки.
Затем пикнометр обтирают и взвешивают на аналитических весах. Освобождают пикнометр от воды, сушат, как указано выше, и заполняют испытуемой гемолитической сывороткой. Дальнейшие процедуры проводят так же, как при определении массы воды.
5.2.4 Обработка результатов
Плотность гемолитической сыворотки d, содержащей глицерин, г/см1, вычисляют по формуле
ш
d = —, (1)
т1
где m — масса пробы сыворотки в объеме пикнометра, г; т1 — масса пробы воды в объеме пикнометра, г.
За окончательный результат испытания принимают среднеарифметическое результатов трех параллельных определений, допускаемые расхождения между которыми не должны превышать 0,0008 г/см1.
Плотность гемолитической сыворотки d должна составлять 1,115—1,145 г/см1, что соответствует 45 % — 55 % массовой доли глицерина в сыворотке.
5.3 Определение стерильности
Стерильность сыворотки определяют по ГОСТ 28085.
Сыворотка должна быть стерильной.
5.4 Определение активности (титра) и гемолитических свойств
Активность гемолитической сыворотки определяют по показателю 100 %-ного гемолиза эритроцитов барана в гемолитической системе. Титрование гемолитической сыворотки производится комплементом для реакции связывания комплемента ГОСТ 16446 с титром 0,08 — 0,14 в гемолитической системе.
Титром гемолитической сыворотки следует считать наибольшее ее разведение (наименьшее количество), при котором в течение 10 мин при температуре 37 °С - 38 °С наступает полный (100 %-ный) гемолиз 0,2 см1 2,5 %-ной взвеси эритроцитов барана в присутствии 0,2 см1 комплемента в разведении 1:20 в общем объеме жидкости 1,0 см1.
Сыворотка должна характеризоваться полным отсутствием гемолиза эритроцитов барана в пробирке без комплемента.
5.4.1 Оборудование и реактивы
Для проведения испытания применяют:
- штативы;
- пробирки стеклянные по ГОСТ 25336;
- стаканы лабораторные, колбы по ГОСТ 25336;
- колбы мерные вместимостью 100, 500 и 1000 см1 по ГОСТ 1770;
- пипетки вместимостью до 10 см1 с ценой деления 0,1 см1 по ГОСТ 29227;
- пипетки вместимостью 1 см3 с ценой деления 0,01 см 3 по ГОСТ 29227 или дозаторы пипеточные;
- баню водяную;
- маркеры по стеклу;
- физиологический раствор pH 6,8—7,2.
5.4.2 Подготовка к испытанию
5.4.2.1 Подготовка разведений гемолитической сыворотки
Готовят исходное разведение гемолитической сыворотки 1:100 (0,1 см3 гемолитической
сыворотки и 9,9 см3 физиологического раствора), из которого готовят разведения от 1:500 до 1:2000 (см. таблицу 2).
Таблица 2 |
Объем исходного разведения, см3 |
Объем физиологического раствора, см3 |
Общий объем, см3 |
Получаемое
разведение |
0,2 |
0,8 |
1,0 |
1:500 |
0,2 |
1.3 |
1,5 |
1:750 |
0,2 |
1.8 |
2,0 |
1:1000 |
0,2 |
2,3 |
2,5 |
1:1250 |
0,2 |
2,8 |
3,0 |
1:1500 |
0,2 |
3,3 |
3,5 |
1:1750 |
0,2 |
3,8 |
4,0 |
1:2000 |
|
Разведения сыворотки приготовлены с учетом массовой доли в ней глицерина (50 %), поэтому при расчете количества сыворотки для постановки РСК следует исходить из ее титра, не учитывая содержание глицерина, то есть при титре сыворотки 1:1000 ее удвоенный титр будет 1:500, для приготовления которого следует взять 0,1 см3 сыворотки и 49,9 см3 физиологического раствора; при титре 1:1500 удвоенный титр 1:750 (0,1 см3 сыворотки и 74,9 см3 физиологического раствора) и т. д.
5.4.2.2 Подготовка 2,5 %-ной взвеси эритроцитов барана
Кровь у барана берут с утра до кормления из яремной вены во флакон со стеклянными (керамическими) бусами и интенсивно перемешивают круговыми движениями флакона в процессе взятия и в течение 7 мин после. Затем фильтруют через марлю и отмывают физиологическим раствором путем центрифугирования при 2500 — 3000 об/мин по 15 - 10 мин до полного обесцвечивания промывной жидкости, но не более четырех раз. Из осадка эритроцитов готовят 2,5 %-ную взвесь на физиологическом растворе.
5.5 Проведение испытания
5.5.1 По 0,2 см3 каждого разведения сыворотки переносят в серологические пробирки с указанием разведений, начиная с наибольшего разведения (1:2000). Во все пробирки вносят по 0,2 см3 комплемента в разведении 1:20, по 0,4 см3 физиологического раствора и по 0,2 см3 2,5 %-ной взвеси эритроцитов барана.
Одновременно в этот же штатив ставят три пробирки для контроля.
В пробирки вносят:
в первую:
- 0,2 см3 гемолитической сыворотки в разведении 1:100;
- 0,6 см3 физиологического раствора;
- 0,2 см3 2,5 %-ной взвеси эритроцитов барана;
во вторую:
- 0,2 см3 комплемента в разведении 1:20;
- 0,6 см3 физиологического раствора;
- 0,2 см3 2,5 %-ной взвеси эритроцитов барана;
в третью:
- 0,2 см3 2,5 %-ной взвеси эритроцитов барана;
- 0,8 см3 физиологического раствора.
В первой контрольной пробирке определяют гемолитические свойства сыворотки, во второй -гемолитические свойства комплемента, в третьей - резистентность эритроцитов барана (таблица 3). 2
Таблица 3 |
Компоненты |
Дозы компонентов при разведении гемолитической сыворотки,
см3 |
Номера
контрольных
пробирок |
1:100 |
1:500 |
1:750 |
1:1000 |
1:1250 |
1:1500 |
1:1750 |
1:2000 |
1 |
2 |
3 |
Гемолизин |
0,2 |
0,2 |
0,2 |
0,2 |
0,2 |
0,2 |
0,2 |
0,2 |
0,2 |
- |
- |
Комплемент 1 : 20 |
0,2 |
0,2 |
0,2 |
0,2 |
0,2 |
0,2 |
0,2 |
0,2 |
— |
0,2 |
— |
Физиологический
раствор |
0,4 |
0,4 |
0,4 |
0,4 |
0,4 |
0,4 |
0,4 |
0,4 |
0,6 |
0,6 |
0,8 |
Эритроциты барана (2,5 %-ная взвесь) |
0,2 |
0,2 |
0,2 |
0,2 |
0,2 |
0,2 |
0,2 |
0,2 |
0,2 |
0,2 |
0,2 |
Водяная баня 37 °С-38°С-10 мин |
Примерный
результат |
ПГ |
ПГ |
ПГ |
ПГ |
ПГ |
ПГ |
ЧГ |
ЧГ |
ОГ |
ОГ |
ОГ |
Примечание - ПГ-полный гемолиз; ЧГ-частичный гемолиз; ОГ- отсутствие гемолиза. |
|
Штатив встряхивают и переносят в водяную баню на 10 мин при температуре 37°С - 38 °С. Штатив с пробирками извлекают из бани и немедленно проводят учет результатов реакций в проходящем свете.
5.5.2 Учет результатов
Сыворотку считают активной при титре не менее 1:1000 и при отсутствии гемолиза эритроцитов в контрольных пробирках.
6 Транспортирование и хранение
6.1 Гемолитическую сыворотку транспортируют всеми видами крытого транспорта. Допускается транспортирование гемолитической сыворотки при температуре не выше 20 °С,
при этом срок транспортирования не должен превышать более 5 сут.
6.2 Гемолитическую сыворотку хранят в чистом, сухом, темном помещении при температуре от 2 °С до 8 °С.
6.3 Срок годности гемолитической сыворотки - три года с даты изготовления. Датой изготовления считают дату расфасовки. Датой выпуска гемолитической сыворотки считают дату подписания документа о качестве. 3
ГОСТ 16445-2012
Подписано в печать 01.04.2014. Формат 60x84V8.
Уел. печ. л. 1,40. Тираж 31 экз. Зак. 762
Подготовлено на основе электронной версии, предоставленной разработчиком стандарта
1
2
3
ФГУП «СТАНДАРТИНФОРМ»
123995 Москва, Гранатный пер., 4. www.gostinfo.ru info@gostinfo.ru