Товары в корзине: 0 шт Оформить заказ
Стр. 1 

8 страниц

Купить бумажный документ с голограммой и синими печатями. подробнее

Цена на этот документ пока неизвестна. Нажмите кнопку "Купить" и сделайте заказ, и мы пришлем вам цену.

Распространяем нормативную документацию с 1999 года. Пробиваем чеки, платим налоги, принимаем к оплате все законные формы платежей без дополнительных процентов. Наши клиенты защищены Законом. ООО "ЦНТИ Нормоконтроль"

Наши цены ниже, чем в других местах, потому что мы работаем напрямую с поставщиками документов.

Способы доставки

  • Срочная курьерская доставка (1-3 дня)
  • Курьерская доставка (7 дней)
  • Самовывоз из московского офиса
  • Почта РФ

 Скачать PDF

 
Дата введения01.01.1999
Добавлен в базу01.01.2019
Актуализация01.01.2019
ОпубликованИУС 8-1998
Дополняет:ГОСТ 20264.4-89

Организации:

21.11.1997УтвержденМежгосударственный Совет по стандартизации, метрологии и сертификации12
Стр. 1
стр. 1
Стр. 2
стр. 2
Стр. 3
стр. 3
Стр. 4
стр. 4
Стр. 5
стр. 5
Стр. 6
стр. 6
Стр. 7
стр. 7
Стр. 8
стр. 8

С. СЕЛЬСКОЕ И ЛЕСНОЕ ХОЗЯЙСТВО

Группа С09

Изменение № 1 ГОСТ 20264.4-89 Препараты ферментные. Методы определения амилолитической активности

Принято Межгосударственным Советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол № 12 от 21.11.97)

Зарегистрировано Техническим секретариатом МГС № 2737

За принятие изменения проголосовали:

Наименование государства

Наименование национального органа стандартизации

Азербайджанская Республика

Азгосстандарт

Республика Армения

Армгосстандарт

Республика Белоруссия

Госстандарт Белоруссии

Грузия

Грузстандарт

Киргизская Республика

Киргизстандарт

Республика Молдова

Молдовастандарт

Российская Федерация

Госстандарт России

Республика Таджикистан

Т аджикгосстандарт

Туркменистан

Главная государственная инспекция Туркменистана

Республика Узбекистан

Узгосстандарт

Украина

Госстандарт Украины

(Продолжение см. с. 52)

Ч3г*

51

(Продолжение изменения N9 1 к ГОСТ 20264.4-89)

Пункт 2.2. Второй абзац. Заменить слова: «по ГОСТ 12083» на «по НД»;

седьмой абзац. Заменить слова: «по ГОСТ 215 с пределами измерения 0—55 °С» на «по ГОСТ 28498 диапазоном измерения 0—100 °С»;

четырнадцатый абзац изложить в новой редакции: «Пипетки 1 — 1—2—0,5; 1 — 1—2—1; 1-2-2-5; 1-2-2-10; 1-2-2-25 по ГОСТ 29227»;

шестнадцатый абзац изложить в новой редакции: «Бюретка 1—1—2—25 по ГОСТ 29251»;

восемнадцатый абзац. Заменить слова: ГОСТ 5072 на НД.

Раздел 3. Наименование изложить в новой редакции:

«3. Определение глюкоамилазной активности (ГлС) глюкозооксидазным методом (арбитражный метод)».

Стандарт дополнить разделом — За:

«За. Определение глюкоамилазной активности (ГлСп) поляриметрическим методом

За.1. Метод основан на определении глюкозы, образующейся при гидролизе мальтозы ферментом глюкоамилазой.

Глюкоамилазная активность характеризует способность ферментного препарата катализировать гидролиз мальтозы с образованием глюкозы и выражается числом единиц активности в грамме (или см3) препарата.

(Продолжение см. с. 53)

52

(Продолжение изменения № 1 к ГОСТ 20264.4-89)

За единицу активности глюкоамилазы принимается способность фермента катализировать при определенных значениях температуры и pH гидролиз 1 мкмоль мальтозы до глюкозы за 1 мин.

За.2. Аппаратура, материалы, реактивы

Весы лабораторные общего назначения по ГОСТ 24104 с наибольшим пределом взвешивания 200 г, не ниже 2-го класса точности.

Сахариметр универсальный СУ-3, СУ-4, автоматический СП или автоматические поляриметры А1-ЕПО или А1-ЕПЛ.

Прибор для измерения pH среды в диапазоне 0—14 с погрешностью измерения ±0,1 pH.

Термостат или ультратермостат, обеспечивающий температуру нагрева (50+0,2) вС.

Термометры по ГОСТ 28498 диапазоном измерения 0—100 °С и ценой деления шкалы не более 0,1 вС.

Баня водяная.

Стаканчики для взвешивания по ГОСТ 25336.

Колбы типа Кн вместимостью от 100 до 1000 см3 по ГОСТ 25336.

Колбы мерные наливные 1-го или 2-го исполнения вместимостью 100, 200, 250 и 1000 см3 по ГОСТ 1770.

Воронки типа В по ГОСТ 25336.

Пипетки типа 2; 1-го и 2-го исполнения вместимостью от 1 до 25 см3 по ГОСТ 29227 или ГОСТ 29169.

Пробирки П1—21—200, или П1—16—150, или П2—19—180, или П2-16-150 по ГОСТ 25336.

Секундомер по НД.

Бумага фильтровальная лабораторная по ГОСТ 12026.

Мальтоза перекристаллизованная для бактериологических целей по НД.

Раствор буферный ацетатный с pH 4,7, приготовленный по ГОСТ 4919.2.

Кислота соляная по ГОСТ 3118, раствор молярной концентрации 5 моль/дм3.

Цинк сернокислый 7-водный по ГОСТ 4174.

Калий железистосинеродистый 3-водный по ГОСТ 4207.

Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.

Примечания:

1.    Все реактивы должны быть квалификации ч., х. ч. или ч. д. а.

2.    Допускается использование импортной посуды и приборов с метрологическими характеристиками и реактивов с квалификацией не ниже отечественных.

За.З. Подготовка к анализу

За.3.1. Приготовление раствора мальтозы массовой долей 2 % (субстрат)

(Продолжение см. с. 54)

(Продолжение изменения № 1 к ГОСТ 20264.4-89)

20,00 г перекристаллизованной мальтозы, взятой с учетом влаги, растворяют в мерной колбе вместимостью 1000 см3 в небольшом количестве воды, добавляют 100 см3 ацетатного буферного раствора, доводят до метки дистиллированной водой и фильтруют. Раствор мальтозы готовят не менее чем за сутки до его использования, чтобы в нем прошла мутарота-ция.

Хранят раствор при температуре 4—6 °С в течение 30 дней. Если при хранении раствор мальтозы помутнеет, пользоваться им не следует.

3а.3.2. Приготовление раствора железистосинеродистого калия массовой долей 15 %

17,65 г калия железистосинеродистого количественно переносят в мерную колбу вместимостью 100 см3, перемешивают до полного растворения соли (в случае необходимости раствор подогревают) и доводят до метки дистиллированной водой.

За.3.3. Приготовление раствора сернокислого цинка массовой долей 30 %

42,85 г сернокислого цинка количественно переносят в мерную колбу вместимостью 100 см3, перемешивают до полного растворения соли (в случае необходимости раствор подогревают) и доводят до метки дистиллированной водой.

3а.3.4. Приготовление раствора соляной кислоты концентрации 5 моль/дмг

430 см3 соляной кислоты помещают в мерную колбу вместимостью 1000 см3, растворяют и доводят объем до метки дистиллированной водой.

За.3.5. Приготовление растворов ферментных препаратов

За.З.5.1. Приготовление основного и рабочего растворов очищенных фер-ментных препаратов

Основной раствор из очищенных ферментных препаратов готовят в соответствии с 2.3.5.

Рабочий раствор готовят из основного, разбавляя его дистиллированной водой в зависимости от предполагаемой активности.

За.3.5.2. Приготовление основного и рабочего растворов из воздушно-сухой культуры гриба

Основной раствор из воздушно-сухой культуры гриба готовят в соответствии с 2.3.7.

Рабочий раствор готовят из основного, разбавляя его дистиллированной водой в зависимости от предполагаемой активности.

За.3.5.3. Приготовление раствора из культуральной жидкости

Культуральную жидкость фильтруют через бумажный фильтр (или двойной полотняный мешок), возвращая первые порции обратно, добиваясь получения прозрачного раствора.

От 5 до 20 см3 прозрачного раствора культуральной жидкости помеща-

(Продолжение см. с. 55)

54

(Продолжение изменения N9 1 к ГОСТ 20264,4—89)

ют в мерную колбу вместимостью 100 см3 и доводят до метки дистиллированной водой.

За.3.5.4. Приготовление раствора из ультраконцентрата

5 см3 прозрачного ультраконцентрата (после отбора пипетку снаружи отбирают фильтровальной бумагой) количественно переносят в мерную колбу вместимостью 250 или 500 см3, частично заполненную водой. Объем доводят до метки дистиллированной водой и перемешивают.

Все исследуемые растворы глюкоамилазы, приготовленные по 3а.3.5, должны обеспечивать разность угла вращения плоскости поляризации (rij-Ilj) в пределах от 0,5 ° до 2,5 ° нормальной сахарной шкалы.

Если эта разность ниже 0,5 в или выше 2,5 *, то основной раствор разбавляют в ту или другую сторону.

За.4. Проведение анализа

Берут две параллельные навески анализируемого продукта и из каждой делают не менее двух разведений. Каждое разведение исследуемого раствора анализируют не менее двух раз.

В две пробирки наливают по 25 см3 раствора мальтозы и ставят в термостат или ультратермостат, или водяную баню температурой (50±0,2) °С на 5—10 мин. Затем к содержимому пробирок приливают по 5 см3 раствора исследуемого ферментного препарата, быстро перемешивают и инкубируют смесь в течение 15 мин при этой же температуре. По истечении указанного времени в пробирки добавляют по 1 см3 раствора соляной кислоты (для прерывания ферментативной реакции) и охлаждают растворы до 20 °С.

Одновременно готовят контрольную пробу. Для этого к 25 см3 раствора мальтозы приливают сначала 1 см3 раствора соляной кислоты, затем 5 смисследуемого раствора ферментного препарата.

Если опытные и контрольные растворы получились мутными, их осветляют. Для этого приливают по 1 см3 осветлителей — раствора сернокислого цинка и железистосинеродистого калия.

Содержимое пробирок перемешивают и фильтруют. На сахариметре или автоматическом поляриметре измеряют угол вращения плоскости поляризации опытного и контрольного растворов, используя поляриметрическую трубку (кювету) длиной 200 мм. При использовании автоматического поляриметра показания прибора умножают на коэффициент перевода круговых градусов в градусы нормальной сахарной шкалы, равный 2,8885. Величина ДП при измерении на сахариметре должна находиться в пределах от 0,2 до 2,5 °S; при измерении на автоматическом поляриметре — от 0,6 до 7 °S.

За.5. Обработка результатов

Глюкоамилазную активность ГлСп, ед/г (или ед/см3), вычисляют по формуле

(Продолжение см. с. 56)

(Продолжение изменения № 1 к ГОСТ 20264.4-89)

(Я] - Я2 )■ 0,00243- 31 106 т ■ 15 • 2■180


(4а)


ГлСп =


где — угол вращения плоскости поляризации опытного раствора, °S\

П2 — угол вращения плоскости поляризации контрольного раствора,

0,00243 — массовая концентрация глюкозы, соответствующая VS, г/см3;

31 — объем инкубационной смеси, см3;

106 — коэффициент перевода г в мкг;

т — масса (объем) препарата в рабочем растворе, г (см3);

15 — время гидролиза, мин;

2 — коэффициент, учитывающий образование из мальтозы двух молекул глюкозы;

180 — молярная масса глюкозы, мкг/мкмоль.

В случае применения осветления конечный результат, вычисленный по формуле (4а), умножают на коэффициент, учитывающий изменение объема инкубационной смеси на 2 см3 за счет осветления, равный 1,06.

За окончательный результат анализа принимают среднее арифметическое результатов определения активностей, полученных при анализе двух параллельных навесок. Результат округляют до второго десятичного знака. Расхождение между каждым измерением и средним арифметическим значением не должно превышать 5 % среднего значения при доверительной вероятности Р = 0,95.

Перевод единиц активности, полученных поляриметрическим методом, в единицы стандартного глюкозооксидазного метода осуществляется в соответствии с приложением А.

Стандарт дополнить приложением — А:

«Приложение А (справочное)

Перевод единиц активности в единицы глюкозооксидазного метода

Для перевода единиц активности, полученных поляриметрическим методом, в единицы глюкозооксидазного метода используется переводной коэффициент К, полученный экспериментальным путем.

1. Для препаратов, полученных при культивировании гриба Asp. awamori, выращенного глубинным способом, К= 1,76 ±0,11; выращенного поверхностным способом -К- 1,51 ± 0,11.

При изменении условий культивирования продуцента глюкоамилазы

(Продолжение см. с. 57)

56

(Продолжение изменения № 1 к ГОСТ20264.4^89)

значение коэффициента следует уточнять. Для контрольных заводских условий уточнение коэффициента проводят путем сравнительного определения активности глюкоамилазы глюкозооксидазным и поляриметрическим методами.

Работу проводят на пяти пробах, полученных при разных ферментациях.

Переводной коэффициент К вычисляют по формуле

(Продолжение см. с. 58)

(Продолжение изменения № 1 к ГОСТ 20264.4-89)

(А.1)

ГлС ГлСп 9

где ГлС— глюкоамилазная активность, определенная глюкозооксидазным методом, ед/г;

ГлСп — глюкоамилазная активность, определенная поляриметрическим методом, ед/г».

(ИУС No 8 1998 г.)