Стр. 1
 

27 страниц

456.00 ₽

Купить официальный бумажный документ с голограммой и синими печатями. подробнее

Официально распространяем нормативную документацию с 1999 года. Пробиваем чеки, платим налоги, принимаем к оплате все законные формы платежей без дополнительных процентов. Наши клиенты защищены Законом. ООО "ЦНТИ Нормоконтроль".

Наши цены ниже, чем в других местах, потому что мы работаем напрямую с поставщиками документов.

Способы доставки

  • Срочная курьерская доставка (1-3 дня)
  • Курьерская доставка (7 дней)
  • Самовывоз из московского офиса
  • Почта РФ

Распространяется на ферментные препараты и устанавливает методы определения активности амилолитического комплекса препаратов микробного происхождения

утратил силу на территории РФ в части пищевых продуктов, с 01.01.2013 пользоваться ГОСТ Р 54330-2011

Оглавление

1 Методы отбора проб

2 Определение амилолитической активности (АС)

3 Определение глюкоамилазной активности

4 Определение осахаривающейся активности (ОС)

Показать даты введения Admin

Страница 1

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ СОЮЗА ССР

ПРЕПАРАТЫ ФЕРМЕНТНЫЕ

МЕТОДЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АМИЛОЛИТИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ ГОСТ 20264.4-89

Издание официальное

5 коп. БЗ 3—89/249



ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР ПО СТАНДАРТАМ Москва

Страница 2

УДК J7MJ 001.4 : 006.354    Группа    СО*

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ СОЮЗА ССГ

ПРЕПАРАТЫ ФЕРМЕНТНЫЕ

Методы определения амнлолитичаской активности

Enzyme preparations. Methods for Ihe determination oi amylase activity

ОКСТУ 929 J

ГОСТ

20264.4—89

I


Срои действии с 01.07.W до 01.0T.W

Несоблюдение стандарта преследуете! по закону

Настоящий стандарт распространяется на ферментпые препараты и устанавливает методы определения активности амнлолн-тического комплекса ферментных препаратов микробного происхождения.

1. МЕТОДЫ ОТБОРА ПРОБ

Методы отбора проб — по ГОСТ 20264.0.

2. ОПРЕДЕЛЕНИЕ АМИЛОЛИТИЧЕСКОЯ АКТИВНОСТИ |АС]

2.1.    Метод основан на гидролизе крахмала ферментами ами-лолитического комплекса до декстринов различной молекулярной массы.

Амилолитнческая активность характеризует способность ами-лолнтических ферментов катализировать гидролиз крахмала до декстринов различной молекулярной массы и выражается числом единиц указанных ферментов в 1 г препарата.

За единицу амилолитической активности (АС) принята способность фермента при определенных значениях температуры, pH и времени действия катализировать до декстринов различной молекулярной массы 1 г крахмала, что составляет 30% крахмала. введенного в реакцию.

2.2.    Аппаратура, материалы, реактивы

Перепечатка воспрещена

Издание официальное ★

© Издательство стандартов, 1989

Страница 3

С. 2 ГОСТ 20264.4—Н

Весы лабораторные общего назначения не ниже 2-го класса точности с наибольшим пределом взвешивания 200 г по ГОСТ 24104.

Колориметр фотоэлектрический лабораторный (фотоэлектроколориметр) по ГОСТ 12083, обеспечивающий измерения в интервалах длин волн 434—450 нм и 630—670 нм с погрешностью ±1% абс. (по коэффициенту пропускания) или 0,01 Д (по оптической плотности) нлн спектрофотометр.

Прибор для измерения pH среды в диапазоне 0—14 с погрешностью измерения ±0,1 pH.

Термостат или ультратермостат, обеспечивающий температуру нагрева (30,0±0,2)оС.

Баня водяная.

Мешалка магнитная.

Термометры по ГОСТ 215 с пределами измерения 0—55°С к ценой деления шкалы не более 0,1СС.

Холодильник бытовой.

Стаканчики для взвешивания по ГОСТ 25336.

Стаканы вместимостью от 100 до 2000 см5 по ГОСТ 25336.

Колбы типа Кн вместимостью от 100 до 2000 см3 по ГОСТ 25336.

Колбы мерные наливные 1 или 2-го исполнения вместимостью 100, 200, 250 и 1000 см» по ГОСТ 1770.

Воронки типа В по ГОСТ 25336.

Пипетки 1, 2 и 3-го исполнения вместимостью от 0,5 до 20 см* и 100 см» по ГОСТ 20292.

Пробирки П1—21—200, или П1—16—150, или П2—19—180, нлн П2—16—150(180) по ГОСТ 25336.

Бюретка типа I; 1, 2 или 3-го исполнения по ГОСТ 20292.

Эксикатор по ГОСТ 25336.

Секундомер по ГОСТ 5072.

Бумага фильтровальная лабораторная по ГОСТ 12026.

Крахмал растворимый по ГОСТ 10163.

Ацетатный буферный раствор с pH 4,7, приготовленный по ГОСТ 4919.2.

Натрий фосфорнокислый двузамешенный 12-водный по ГОСТ 4172, раствор молярной концентрацией Vis моль/дм1.

Калий фосфорнокислый однозамещенный по ГОСТ 4198, раствор солярной концентрацией Vis моль/дм*.

Кислота соляная по ГОСТ 3118, раствор молярной концентрацией вещества эквивалента 0,1 моль/дм9, приготовленный по ГОСТ 4919.2.

Йод по ГОСТ 4159.

Калий йодистый по ГОСТ 4232.

Страница 4

ГОСТ ЖШ-W С. 3

Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.

Примечания:

1.    Все реактивы должны быть квалификации ч„ х. ч. или ч. д. л.

2.    Допускается исполмованис нмпортиой посуды и приборов с метрологическими характеристиками и реактивов с квалификацией не ниже отечественных,

2.3. Подготовка к анализу

2.3.1.    Приготовление раствора крахмала с массовой долей /% (субстрата)

(1.00±0,01) г крахмала, взятого с учетом влажности, помещают в мерную колбу вместимостью 100 см3, добавляют 25 см* воды и перемешивают. Затем добавляют в колбу еще 25 см3 во ды* помещают колбу в кипящую водяную баню не менее чем на 10—15 мин, непрерывно перемешивая содержимое до полного растворения крахмала. После этого содержимое ко.тбы охлаждают, добавляют 10 см* ацетатного буферного раствора с pH 4,7 (для препаратов грибного происхождения), фосфатного буферного раствора с pH о,0 (для препаратов бактериального происхождения) или фосфатного буферного раствора с pH 5,6 (для препаратов из дрожжевых микроорганизмов). Объем жидкости доводят до метки дистиллированной водой и содержимое колбы перемешивают. Раствор должен быть прозрачным.

Раствор крахмала готовят в день проведения анализа.

2.3.2.    Приготовление фосфатного буферного раствора с pH 5,5 и pH 6,0

Смешивают растворы фосфорнокислого натрия и фосфорнокислого калия концентрацией '/is моль/дм3 в соотношении 0,5:9,5 (для pH 5,6) и 1 :9 (для pH 6.0).

Величину pH проверяют на приборе. В случае отклонения pH буфера от требуемого, соответствующими растворами доводят его до нормы.

2.3.3.    Приготовление основного раствора йода

0,50 г йода и 5.00 г йодистого калия растворяют в бюксе с притертой крышкой в небольшом количестве воды.

Содержимое перемешивают на магнитной мешалке при плотно закрытой крышке бюксы.

Раствор после полного растворения йода переносят в мерную колбу с притертой крышкой вместимостью 200 см3 и объем доводят дистиллированной водой до метки.

Основной раствор йода хранят в течение 1 мес в склянке из темного стекла с притертой пробкой.

2.3.4.    Приготовление рабочего раствора йода

2 см3 основного раствора йода разводят раствором соляной кислоты концентрацией 0,1 моль/дм1 при анализе препаратов грибного происхождения н концентрацией 0,5 моль/дм3 — препаратов бактериального происхождения с предполагаемой активностью больше 50 ед/см3 в мерной колбе вместимостью 100 см3.

Страница 5

с 4 ГОСТ 293*4.4-*

Перед употреблением рабочего раствора проверяют eh> оптическую плотность в диапазоне длин волн 434—4ЗД нм ■ кюветах с толщиной поглощающего свет слоя 10 мм.

г~ Оптическая плотность рабочего раствора йода должна быть равна 0,220 (±0,01).

В случае отклонения ее от этого значения добавляют в раствор несколько капель соляной кислоты или основного раствора йода.

2.3.5. Приготовление основного раствора очищенных ферментных препаратов

0,1000—1,0000 г исследуемого препарата (в зависимости от предполагаемой активности) растворяют в небольшом количестве воды, при необходимости тщательно растирая стеклянной палочкой, количественно переносят в мерную колбу вместимостью 100 см®, доводят дистиллированной водой до метки и перемешивают. Препараты с нерастворимыми наполнителями фильтруют. Раствор хранят в течение суток при температуре от 2 до 6*С.

:    2.3.0. Приготовление рабочего раствора очищенных фермент

ных препаратов

Рабочий раствор готовят в соответствии с табл. 1 из основного раствора (для навески 0,1000 г), разбавляя его дистиллированной водой так, чтобы в 5 см3 рабочего раствора содержалась масса фермента, обеспечивающая в принятых условиях гидролиз крахмала от 20 до 60%.

Т I бл та I

Ликлолиихмская активность (АС>. etlr. (предсолшешая)

Масс» ар*одр*т» я Ь см* рабочего

pftcrftopt <m,). мг

Объем основного Р»СТК>Р». НСООХОДВ' UU* ш вторично/о ри4ш(М1. си*

Обшд» «Оми р*>0*и«аво>-о раствор*, см*

От 20 до 80 «ключ.

5.0

50.0

50.0

> 80 » 160

»

2.0

20,0

50.0

* 150 » 300

>

1.0

10.0

50,0

> 300 > 700

>

0.5

5.0

50.0

» 700 »1200

*

0,25

10,0

200.0

*1206 *2500

»

0.125

5.0

200.0

> 25СО >6000

»

0.05

2.0

200.0

С». 5000

0.025

1,0

200,0

Примечание. Для анализа берут две параллельные иавеех* препарата а ■з каждой делают одно разведение, которое анализируют ие мевее трех раз

Рабочий раствор ферментного препарата готовят непосредственно перед определением.

2.3.7. Приготовление основного раствора из воэдуимо-сухой культуры гриба

5,00 г исследуемой воздушно-сухой культуры гриба, предварительно растертой в ступке, переносят в коническую колбу вмесп-мостью 250 см», обав.чяют 90 см* дистиллировав»»* веды «

Страница 6

ГОСТ Hliil-n с. 5

10 см* ацетатного буферного раствора с pH 4,7. Смесь выдерживают в течение 1 ч в термостате при температуре (30,0±0,§)°С, периодически перемешивая и затем фильтруют. Фильтрат используют в качестве основного раствора.

Фильтрат хранят в течение суток при температуре от 2 до 6°С.

2.3.8. Приготовление рабочего раствора из воздушно-сухой культуры гриба

Рабочий раствор готовят из основного раствора, разбавляя его дистиллированной водой, в соответствии с табл. 2.

Таблиц» 2

Аишмшнеш и-

ТИВИОГТЬ (ДО культуры граба, еа.1г. (аредоолагаемая)

Масса культуры гриба в 4 см* рабочего раствора

1»|). мг

Объем основного

раствора. необходимы* для вторнч-мого раабавлеияв, см*

Общий объем ра>6авлеииого раствора, см*

От 5 до 15 в ключ.

37,5

15

100

» 15 * 50 »

10,0

4

100

* 50 » 100 в

2.5

1

100

» 100 » 150 »

1.25

I

200

» 150 » 300 *

0.625

0.5

200

2.3.9.    Приготовление основного раствора из культуральной жидкости бактериального происхождения

В мерную колбу вместимостью 100 см* наливают 90 см* дистиллированной воды и вносят 1 см* испытуемой культуральной жидкости. Объем доводят до метки дистиллированной водой.

2.3.10.    Приготовление рабочего раствора из культуральной жидкости

Рабочий раствор готовят из основного раствора, разбавляя его дистиллированной водой в мерной колбе вместимостью 100 см* в соответствии с табл. 3.

Таблица 3

Лкыалктячесыя актив-■ость (АС) кудьгуральной Л1КДКОСТМ. «А‘СИ>. (предполагаемая)

Объем культуральной жадаоств в 6 см1 рабочего растаора. см*

Объем основного раствора, необходимый для вторичного раэбаолеиия, см*

От 10 до 25 включ.

0,01

20,0

* 25 » 50 »

0.005

10,0

в 50 в 75 »

0.003—0.0035

6.0—7.0

» 75 в 100 в

0,0025

5.0

в 100 » 125 в

0,0020

4.0

» 125 в 15Э в

0,0015

3.0

Св 150

0,00125

2.5

Примечание. При анализе культур бактериального происхождения с предполагаемо* активностью 50—150 ед/см* берут разведение фермента, обеспечивающее гидролиз крахмала от 0,02 до 0,04 г.

Страница 7

С. 6 ГОСТ 20264.4—##

2.4. Проведение анализа

Берут две пробирки, наливают в каждую по 10 см3 раствЬра крахмала (субстрата) и ставят в термостат или водяную баню с температурой (30±0,2)оС на &—10 мин. Затем, не вынимая пробирок из термостата, наливают в первую 5 см3 дистиллированной воды (контрольная пробирка), во вторую — 5 см3 рабочего раствора анализируемого продукта (опытная). Смеси быстро перемешивают и выдерживают в термостате в течение 10 мин, используя секундомер.

Затем из каждой пробирки поочередно отбирают по 0,5 см3 раствора и переносят в колбы с предварительно налитыми 50 см3 рабочего раствора йода. Содержимое колб перемешивают.

Полученные растворы приобретают следующую окраску:

Контрольный раствор — синий цвет, опытный — фиолетовый различной интенсивности в зависимости от количества непрогнд-ролизованного крахмала.

Через 5—10 мин после смешивания определяют оптическую плотность растворов фотоэлектрическим колориметром в диапазоне длин волн 630—670 нм в кюветах с толщиной поглощающего свет слоя 10 мм.

Контрольным раствором при колориметрировании является дистиллированная вода.

2.5. Обр аботка результатов

Масс)' прогидролизоваиного крахмала (т) в граммах вычисляют по формуле

(1)

где 0| — оптическая плотность контрольного раствора;

Dt — оптическая плотность опытного раствора;

0,1 — масса крахмала, взятая для анализа, г.

Если масса прогидролизованпого крахмала меньше 0,02 г или больше 0,06 г, то анализ повторяют, подбирая другое разведение.

Амилолитическую активность (АС) в ед/г для препаратов бактериального происхождения и в ед/см3 для культуральной жидкости вычисляют по-формуле

5.885т 4-0.001671    1М)0

(2)

Амилолитическую активность (ACi) в ед/г для препаратов грибного происхождения вычисляют по формуле

7,264 т—0.03766    jqqq

(3)

т.

где т1 — масса ферментного препарата, содержащаяся в 5 см3

рабочего раствора, мг;

Страница 8

ГОСТ 20264.4—И С. 7

5,885; 0,001671; 7,264; 0,03766 — коэффициенты расчетного уравнения, полученные при математической обработке экспериментальных данных зависимости массы прогид-ролизованного крахмала от массы фермента, взятого для анализа в пересчете на 1 ч действия фермента.

За окончательный результат анализа принимают среднее арифметическое результатов определения активностей, полученных при анализе двух параллельных навесок препарата, относительное допускаемое расхождение между которыми не должно превышать 5%. Результат округляют до первого десятичного знака.

Предел возможных значений относительной погрешности измерений при доверительной вероятности Р^О.Эб составляет 5%.

3. ОПРЕДЕЛЕНИЕ ГЛЮКОАМИЛАЗНОЙ АКТИВНОСТИ

3.1.    Метод основан на определении глюкозы, образующейся при гидролизе растворимого крахмала ферментом глюкоамилазы.

Глюкоамилазная активность (ГлС) характеризует способность ферментного препарата катализировать расщепление растворимого крахмала до глюкозы и выражается числом единиц активности в грамме препарата.

За единицу глюкоамнлазной активности принята способность фермента катализировать гидролиз растворимого крахмала при определенных условиях температуры и pH, высвобождая за 1 мин 1 мкмоль глюкозы.

3.2.    Аппаратура, матеряалы, реактивы

Аппаратура и материалы — по п. 2.2 со следующими дополнениями.

Колориметр фотоэлектрический лабораторный (фотоэлектроколориметр) по ГОСТ 12083, обеспечивающий измерения в интервале длин волн 390—415 нм с погрешностью ±1% абс. (по коэффициенту пропускания) или 0,01 Д (по оптической плотности) или спектрофотометр.

Калий фосфорнокислый однозамещенный по ГОСТ 4198, раствор молярной концентрацией 1 моль/дм».

Калий железистосинеродистый по ГОСТ 4207.

Глюкоза по ГОСТ 6038.

Натрий уксуснокислый по ГОСТ 199.

Кислота уксусная по ГОСТ 61.

Крахмал растворимый по ГОСТ 10163.

Кислота бензойная по ГОСТ 10521.

Калий гидроокись по ГОСТ 24363, раствор молярной концентрацией 1 моль/дм3.

Кальций хлористый.

Спирт этиловый ректификованный по ГОСТ 5962 или спирт этиловый ректификованный технический по ГОСТ 18300.

Страница 9

С. 8 ГОСТ 2М«4.4—М

Глюкозооксидаза с ферментативной активностью 100000 ед/г.

Пероксндаза.

Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.

Примечание. Все реакгиаы должны быть квалификации ч.; х. ч. ялш ч. д. а.

3.3. Подготовка к анализу

3.3.1.    Приготовление раствора крахмала с массовой долей 1% (субстрата) — по п. 2.3.1.

3.3.2.    Приготовление фосфатного буферного раствора с pH 7,5 концентрацией I моль дм3

Смешивают равные объемы растворов фосфорнокислого одно-замешенного калия и гидроокиси калия концентрацией 1 моль/дм*.

Величину pH проверяют на приборе. В случае отклонения pH от требуемого составляющими растворами доводят его до нормы.

3.3.3.    Приготовление раствора железистосинеродистого калия с массовой долей 1% (раствора А)

0,05 г железистосинеродистого калия количественно переносят в мерную колбу вместимостью 50 см3 и объем доводят дистиллированной водой до метки.

Раствор готовят непосредственно перед определением.

3.3.4.    Приготовление раствора глюкозооксидазы (раствора Б)

5.00    (6,00) мг глюкозооксидазы растворяют фосфатным буферным раствором с pH 7,5 в мерной колбе вместимостью 50 см* а затем добавляют 2,0 мг пероксидазы. Объем доводят до метки фосфатным буферным раствором.

Если активность глюкозооксидазы отличается от требуемой (100000 ед/г), то навеску берут с таким расчетом, чтобы в 50 см* раствора содержалось 500—600 ед активности.

3.3.5.    Приготовление рабочего раствора С

Рабочий раствор С готовят смешиванием равных объемов растворов А и Б.

Полученный раствор хранят в темной склянке в холодильнике в течение 2—3 сут.

3.3.6.    Приготовление насыщенной бензойной кислоты

2,70 г бензойной кислоты количественно переносят в мерную колбу вместимостью 1000 см3 и доводят до метки дистиллированной водой.

3.3.7.    Приготовление стандартных растворов глюкозы

Для приготовления стандартных растворов глюкозы пользуются перекрнсталлизованной из спирта безводной глюкозой, которую хранят в эксикаторе над хлористым кальцием.

100.00    мг глюкозы растворяют в 100 см* насыщенного раствора бензойной кислоты. Из этого раствора отбирают поочередно 5. 10 и 15 см5 в мерной колбе вместимостью 100 см3 и доводят объем до метки бензойной кислотой. Полученные растворы соответствуют содержанию 50, 100 н 150 мкг глюкозы в 1 см*.

Страница 10

ГОСТ Ж1и-Й с. 9

Этими раствораии пользуются для построения градуировочного графика.

3.3.8.    Приготовление основного и рабочего растворов очищенных ферментных препаратов

Основной раствор очищенных ферментных препаратов готовят по п. 2.3.5.

Рабочий раствор готовят нз основного раствора, разбавляя его дистиллированной водой в зависимости от предполагаемой активности препарата.

3.3.9.    Приготовление основного и рабочего растворов из воз-душно-сухой культуры гриба

1<©0—5,00 г исследуемой воздушно-сухой культуры гриба (в^ зависимости от активности) предварительно растертой в ступке*, переносят в коническую колбу вместимостью 250 см», добавляюг 100 см3 дистиллированной воды, смесь выдерживают при комнатной температуре в течение 1 ч, периодически перемешивая, а затем фильтруют.

Основной раствор хранят в течение суток при температуре ог 2 до 6°С.

Рабочий раствор готовят из основного, разбавляя его дистиллированной водой в зависимости от предполагаемой активности.

3.3.10.    Приготовление рабочего раствора из культуральной-жидкости

Отфильтрованную культуральную жидкость разбавляют дис* тиллированной водой в 1000 и более раз в зависимости от предпо* лагаемой активности.

3.3.11.    Построение градуировочного графика

В пробирки приливают no 1 см» стандартных растворов глюкозы, добавляют по 3 см3 рабочего раствора С. В контрольную пробу (контроль на реактив С) вместо раствора глюкозы приливают 1 см3 дистиллированной воды. Оставляют пробирки на 45 миа> при комнатной температуре для развития окраски. Затем измеряют интенсивность окраски раствора глюкозы в диапазоне дли» волн 390—415 нм в кюветах с толщиной поглощающего свет слоя 10 мм против контрольной пробы на реактив С.

По полученным значениям строится градуировочный график,, имеющий линейную зависимость.

Рабочая зона градуировочного графика лежит в области 50— 150 мкг.

Оптическая плотность раствора должна быть близка к значениям 0,1 ±0,01; 0,2±0,01; 0,3±0,01.

Если оптическая плотность отличается от этих значений, т» навеску глюкоэооюсидазы увеличивают,

3.4. Проведение анализа

Страница 11

С. 10 ГОСТ 20264.4—W

Берут две параллельные навески анализируемого продукта и из каждой делают не менее двух разведений. Каждое разведение исследуемого раствора анализируют не менее двух раз.

В пробирку наливают 10 см3 раствора крахмала (субстрата) и ставят в термостат или водяную баню с температурой (30,0±' ±0,2)°С на 5—10 мин. Затем приливают к содержимому пробнр-ин 5 см5 раствора анализируемого продукта н инкубируют смесь в течение 10 мин при той же температуре.

Затем 1 см» смеси переносят в другую пробирку, помещенную в кипящую водяную баню, выдерживают в течение 2 мин (для инактивации фермента) и охлаждают холодной водой. Затем к смеси добавляют 3 см3 раствора С, перемешивают и оставляют на 45 мин при комнатной температуре.

Одновременно готовят контрольную пробу. Для этого 5 см3 раствора анализируемого продукта выдерживают в кипящей водяной бане в течение 10 мин (для инактивации фермента). Затем раствор охлаждают и добавляют 10 см* раствора крахмала.

Все последующие операции с контрольными, пробами проводят так же, как к с опытными.

Кроме указанной контрольной пробы на инактивированный фермент ставят контрольную пробу на рабочий раствор С. Для этого к 3 см1 этого раствора приливают 1 см3 дистиллированной воды.

Интенсивность окраски определяют на фотоэлектроколориметре в диапазоне длин волн 390—415 нм в кюветах с толщиной поглощающего свет слоя 10 мм.

Если контрольные пробы на инактивированный фермент имеют заметную окраску, то необходимо исследуемый раствор про-колоркметрировать, взяв в качестве раствора сравнения рабочий раствор.

Значение оптической плотности должно лежать в пределах, соответствующих массе глюкозы от 50 до 150 мкг.

3.5. Обра ботка результатов

Глюкоамилаэную активность (ГлС) в eAfr вычисляют по формуле

где т — масса глюкозы, образовавшейся в I см3 гидролизата за счет действия фермента, найденная по калибровочному графику, мкг; т 1 — масса фермента, содержащегося в 1 см3 гидролизата, взятая на определение, г;

10— время гидролиза, мин;

180— молекулярная масса глюкозы, г/мкмоль.

Примечание. Глгокоамилаамаи активность в ед/см* вычисляют по формуле 4, только вместо массы фермента берется объем (V).

Страница 12

ГОСТ 20264.4—И С. 11

За окончательный результат анализа принимают среднее арифметическое результатов определения активностей, полученных при анализе двух параллельных павесок препарата, относительное допускаемое расхождение между которыми не должно превышать 5%. Результат округляют до первого десятичного знака.

Предел возможных значений относительной погрешности измерений глкжоамнлазной активности при доверительной вероятности Р»0,95 составляет 5%.

4. ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОСАХАРИВАЮЩЕЯ АКТИВНОСТИ (ОС|

4.J. Метод основан на гидролизе растворимого крахмала в пределах 25% глюкозидных связей исследуемым ферментом с последующим йодометрическим определением количества образовавшихся сахаров.

Осахаривающая активность характеризует способность ами-лолитических ферментов катализировать осахариванне крахмала до мальтозы или мальтозы в смеси с глюкозой.

За единицу осахариваюшей активности принята способность •фермента катализировать за 1 мин при определенных значениях температуры и pH расщепление 1 мкмоля гликозидных связей до восстанавливающих сахаров. Активность выражается в ед/г препарата.

4.2. Аппаратура, материалы, реактивы

Аппаратура и материалы — по п. 2.2.

Крахмал растворимый по ГОСТ 10163.

Натрий уксуснокислый 3-водный по ГОСТ 199, раствор молярной концентрацией вещества эквивалента 1 моль/дм5.

Натрий фосфорнокислый двузамсщенный 12-водный по ГОСТ 4172, раствор молярной концентрацией '/is моль/дм3.

Калий фосфорнокислый однозамешенный по ГОСТ 4198, раствор молярной концентрацией */»» моль/дм5.

Калий двухромовокислый по ГОСТ 4220.

Кислота соляная по ГОСТ 3118, раствор молярной концентрацией 1 моль/дм*.

Кислота уксусная по ГОСТ 61, раствор молярной концентрацией вещества эквивалента 1 моль/дм*.

Калнй йодистый по ГОСТ 4232.

Калия гидроокись по ГОСТ 24363 или натрия гидроокись по ГОСТ 4328, раствор молярной концентрацией вещества эквивалента 0,1 моль/дм*.

Натрий серноватистокислый (натрия тиосульфат) по ГОСТ 270(38 или фиксанал.

Кислота серная по ГОСТ 4204 (плотность р= 1,850 г/сма).

йод по ГОСТ 4159.

Страница 13

С. 12 ГОСТ МН4.4-М

Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.

Примечание. Все реактивы должны быть марки ч.; х. ч. или ч. я а.

4.3.    Подготовка к анализу

4.3.1.    Приготовление раствора крахмала с массовой долей 1& (субстрата) — по п. 2.3.1.

4.3.2.    Приготовление раствора йода концентрацией 0,1 моль/дм»

25.00    г йодистого калия растворяют в мерной колбе вместимостью 1000 см3 в минимальном количестве дистиллированной воды и туда же вносят 12,70 г йода. После полного растворения йода объем раствора доводят дистиллированной водой до метки. Раствор хранят в склянке из темного стекла с притертой пробкой. Титр не устанавливают, но проверяют по раствору гипосульфита. Концентрация приготовленного раствора йода должна быть не ниже 0,95—1,05 моль/дм*.

4.3.3.    Приготовление раствора серноватистокислого ' натрия (гипосульфита) концентрацией 0,1 моль/дм3

25.00    г гипосульфита растворяют в мерной колбе вместимостью 1000 см* в небольшом количестве дистиллированной воды, не содержащей углекислоту. Содержимое перемешивают и объем жидкости доводят до метки дистиллированной водой.

Приготовленный раствор хранят в склянке из темного стекла с сифоном и бюреткой с хлоркальциевой трубкой, заполненной нат-ронной известью.

Титр устанавливают по двухромовокислому калию после выдерживания раствора гипосульфита в течение 15 сут.

4.3.4.    Приготовление раствора серной кислоты 1:4

К четырем объемам дистиллированной воды приливают один объем серной кислоты.

4.3.5.    Приготовление основного раствора очищенных ферментных препаратов — по п. 2.3.5.

4.3.6.    Приготовление основного раствора из воздушно-сухой: культуры гриба

5.00    г исследуемой воздушно-сухой культуры гриба, предварительно растертой в ступке, переносят в коническую колбу вместимостью 250 см*, приливают 100 см3 дистиллированной воды »• настаивают 1 ч при комнатной температуре, периодически перемешивая.

Через 1 ч раствор фильтруют и фильтрат используют для анализа.

Фильтрат хранят в течение суток при температуре от 2 до 6°С.

4.4. Проведение анализа

4.4.1. Берут две параллельные навески исследуемого продукт» и из каждой делают не менее двух разведений. Каждое разведение анализируют не менее двух раз.

Страница 14

ГОСТ JUU1-II с. 13

4.4.2.    Определение осахариеающей активности в очищенных препаратах и культуре гриба, полученных из Asp. or у гае

В коническую колбу вместимостью 50 см3 наливают 20 см* субстрата (раствора крахмала, приготовленного на буферном растворе с pH 4,7), колбу закрывают часовым стеклом и помещают в термостат или водяную баню с температурой (30.0±0,2)°С. Через 10 мин добавляют от 1 до 10 см* ферментного раствора (в зависимости от предполагаемой активности) н содержимое тщательно перемешивают. Общий объем реакционной смеси должен быть 30 см3. Если на определение берут меньше 10 см3 ферментного раствора, то недостающий объем дополняют дистиллированной водой непосредственно перед добавлением ферментного раствора.

Через 10 мин после добавления ферментного раствора действие фермента приостанавливают добавлением 2 см3 раствора соляной кислоты. Затем содержимое колбы количественно переносят, смывая дистиллированной водой, в коническую колбу вместимостью 500 см3 приливают 20 см* раствора йода и сразу же по каплям, при тщательном перемешивании, добавляют 60 см3 раствора гидроокиси натрия или калия.

Колбу закрывают и оставляют на 15 мин в защищенном от света месте. Через 15 мин в раствор добавляют 2 см3 серной кислоты и титруют выделившийся йод раствором гипосульфита в присутствии (в качестве индикатора) растворимого крахмала до исчезновения синего окрашивания. Раствор становится бесцветным.

Одновременно ставят контрольный опыт с темн же количествами всех реагентов, только ферментный раствор вводят после добавления 2 см* раствора соляной кислоты (без выдержки в термостате).

Разность между результатами титрования контрольного и опытного растворов должна составлять 0,5—6 см3 раствора гипосульфита. Если разность меньше 0,5 см* или больше 6 см*, то анализ повторяют с большим или меньшим количеством ферментного раствора.

4.4.3.    Определение осахариеающей активности в очищенных препаратах и в культуре гриба, полученный из Asp. awamori

Все операции по определению осахариеающей активности проводят по п. 4.4.2 со следующим дополнением:

для прекращения ферментативной реакции добавляют 5 см* раствора соляной кислоты. При тщательном перемешивании сначала добавляют 3 см*, затем 60 см* раствора гидроокиси натрия (калия).

4.4.4.    Определение осахариеающей активности в очищенных препаратах и в культуре из Вас. subtills

Страница 15

С. 14 ГОСТ 20244.4—И

Все операции по определению осахариваюшей активности проводят по п. 4.4.2 со следующими дополнениями:

в качестве субстрата берут раствор крахмала, приготовленного на буферном растворе с pH 6,0;

после введения 20 см* раствора йода добавляют 52,5 см3 раствора гидроокиси натрия или халия;

при пересчете найденных значений скорости реакции ка начальную скорость (в пределах 4—25% гидролиза гликозидных связей крахмала) следует пользоваться градуировочным графиком, построенном на основании экспериментальных данных.

4.5. Обр а ботка результатов

4.5.1. Осахариваюшую активность (OCi), ед/г в культуре гриба и в очищенных препаратах из Asp. oryzae вычисляют по формуле

ОС--^т-.    <*>

где е — эквивалентная масса вещества, мнмоль, найденная по табл. 3;

т2— масса препарата, введенная в реакционную смесь, г; t — время гидролиза, впгтг.

Эквивалентную массу вещества, в зависимости от разности титрования контрольного и опытного растворов (К—О), определяют по табл. 3.

Таблица 3

<к-о>.

СИ1

1,

мкмоль

<к-о».

СМ»

/,

ыхчоль

(К-О).

см*

/.

мкмоль

0.1

Б.0

2.1

II 8.9

4.1

273.8

0.2

Ю.О

2,2

125,5

4,2

283,2

0,3

15,0

132.1

4.3

292.8

0.4

20.2

2,4

138.9

4.4

302,7

0.5

25.6

2.5

145.8

4.5

312,8

0.6

30.8

2.6

152.8

4.6

323.1

0.7

36,2

2,7

159.9

4,7

333.6

0,8

41.6

2.8

167,1

4.8

344.4

0.9

47,0

2.9

174,5

4.9

355.5

1.0

52.6

3.0

181,9

5.0

366,9

1.1

58.2

3.1

189.5

5,1

378.6

1.2

63.9

3.2

197.2

5.2

390,6

U

69.7

3.3

205,1

ьа

402,9

1.4

75,5

3.4

213.1

5.4

415.6

1.5

81,5

3,5

221Л

5.5

428.8

1.6

87.6

3.6

229,6

5.6

442,3

1.7

93.6

3.7

238.1

5.7

456,2

1.8

99,8

3.8

246,8

5,8

470.6

1.9

106.1

3.9

255,6

5.9

485.0

2.0

112.5

4.0

264,6

6,0

501,2

Страница 16

ГОСТ 29264.4—I* С. 15

4.5.2. Осахариваюшую активность (ОС3), ед/г, в культуре гриба и в очищенных препаратах из Asp. awamori вычисляют по формуле

(/С-О)-50 т-1

ОС?-

(6)

где (К— О) — разность титрования контрольного и опытного растворов, си*;

50— коэффициент пересчета на мкмоль гликозидных связей;

т2 — масса ферментного препарата, введенная в реакционную смесь, г; t — время гидролиза, мин.

4.5.3. Осахаривающую активность (ОСг), ед/r, в культуре и в очищенных препаратах из Вас. subtilis вычисляют по формуле

ОС,= ~ .    (7)

ntft

эквивалентная масса вещества, мкмоль, найденная по табл. 4;

mt— масса ферментного препарата, введенная в реакционную смесь, г; t— время гидролиза, мин.

Эквивалентную массу вещества в зависимости от разности титрования контрольного и опытного растворов (К—О) определяют по табл. 4.

где /■

Т аблицз 4

см*

1.

мкмол»

<К-0).

СМ«

1.

VKNT.lt.

0.9

45,0

2,6

169.7

J.0

62.1

2.7

180,9

1.1

58,7

2.8

192,3

1.2

63.3

2.9

209.9

U

67.8

3.0

226.1

1.4

74,7

3.1

250.6

• 1.6

81.4

зл

278,2

1.6

85.9

3.3

312.1

1.7

92,7

3.4

360,2

1.8

99.6

3.5

452,3

1.9

108.5

3.6

517,9

2.0

113.1

3.7

585.7

2.1

119,9

3.8

662,7

2.2

128,8

3.9

740.3

2,3

138,0

4,0

811,9

2.4

150,3

4.1

891.6

2.5

158,3

4,2

968.1

Страница 17

С. 16 ГОСТ 20264.4-19

4.5.4. За окончательный результат анализа принимают среднее арифметическое результатов определения активностей, полученных при анализе двух параллельных навесок препарата, относительное допускаемое расхождение между которыми не должно превышать 5%.

Результат округляют до первого десятичного знака.

Предел возможных значений относительной погрешности измерений при доверительной вероятности Р—0,95 составляет 5%.

Страница 18

ГОСТ 28164.4-19 С. 17

ИНФОРМАЦИОННЫЕ ДАННЫЕ

1. РАЗРАКОТАН И ВНЕСЕН Министерством медицинской и микробиологической промышленности СССР

ИСПОЛНИТЕЛИ

А. И. Опрми. д-р биог. неук, А. В. Гербузо§, канд. биол. наук, В. М. Ла»ру-

2. УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Постановлением Государственного комитета СССР по стандартам от 24.03.89 № 677

2. Срок первой проверки — 1994 г.

Периодичность проверки — 5 лет

4.    ВЗАМЕН ГОСТ 20264.4-74

5.    ССЫЛОЧНЫЕ НОРМАТИВНО-ТЕХНИЧЕСКИЕ ДОКУМЕНТЫ

Овозк*ц«ки* НТД, ка который дана ссылка

Покер раздела, пункта

ГОСТ

гост

ГОСТ

ГОСТ

ГОСТ

ГОСТ

ГОСТ

гост

гост

ГОСТ

гост

гост

гост

гост

гост

гост

гост

гост

гост

гост

гост

гост

гост

гост

гост

гост

гост

гост


61-75 199—78 1770-74 3118—77 4159-79 4172-76 4198-75 4204—77 4207-75 4220-75 4232-74 4328-77 4919.2—77 5072-79 5962—67 6038-79 6709 -72 10163-76 10521-78 12026-76 12083-18300-87 20264 0-74 20292-74 24104—88 24363—80 25336-82 27068-86


3.2.    4 2

3.2.    4 2 2.2

2.2.    4 2

2.2.    4.2

2.2.    4.2

2.2.    3.2. 4.2

4.2

3.2

4.2

2.2.    4.2

4.2

2.2 2.2

3.2

3.2

2.2.    3.2, 4.2

2.2.    3.2. 4.2

3.2 22

2 2. 3.2 32 1

2.2 2.2

3.2.    4.2 2.2

4.2



Страница 19

С. СЕЛЬСКОЕ И ЛЕСНОЕ ХОЗЯЙСТВО

Группа С09

Изменение № 1 ГОСТ 20264.4-89 Препараты ферментные. Методы определения амило.жтнческой активности

Принято Межгосударственным Советом по станаар-пмашш, метрологни и сертификации (протокол N? 12 от 21.11.97)

Зарегистрировано Техническим секретариатом МГС № 2737

За принятие изменения проголосовали:

Наименование национального

Наименование государства

органа стандартизации

Азербайджанская Республика Республика Армения Республика Белоруссия Грузия

Киргизская Республика Республика Молдова Российская Федерация Республика Таджикистан Туркменистан

Республика Узбекистан Украина

Азгосстандарт Армгосстандарт Госстандарт Белоруссии Грузстандарт Киргизстаидарт Молловастандарт Госстандарт России Тляжикгосстандарт

Главная государственная инспекция Туркменистана Узгос стандарт Госстандарт Украины


(Продолжение см. с. 52)

Страница 20

(Продолжение изменения № 1 к ГОСТ 20264.4-89)

Пункт 2.2. Второй абзац. Заменить слова: «по ГОСТ 12083* на «по НД*; седьмой абзац. Заменить слова: «по ГОСТ 215 с пределами измерения

0—55    *С* на «но ГОСТ 28498 диапазоном измерения 0—100 *С»; четырнадцатый абзац изложить в новой редакции: «Пипетки

1-1-2    -0.5; 1—1—2—1; 1—2—2—5; 1-2-2-10; 1-2-2-25 по ГОСТ 29227*;

шестнадцатый абзац изложить в новой редакции: «Бюретка 1 — 1—2—25 по ГОСТ 29251*;

восемнадцатый абзац. Заменить слова: ГОСТ 5072 на НД.

Раздел 3. Наименование изложить в новой редакции «3. Определение глюкоамилазиой активности (ГлС) глюкозоокекдазиым метолом (арбитражный метод)*.

Стандарт дополнить разделом — За:

«За. Определение глюкожмилазноя активности (ГлСп) поляриметрическим методом

За. 1. Метод основан на определении глюкозы, образующейся при гидролизе мальтозы ферментом глюкоамилазой.

Глюкоамилазная активность характеризует способность ферментного препарата катализировать гидролиз мальтозы с образованием глюкозы и выражается числом единиц активности в грамме (или см’) препарата.

(Продмжение см. с 53)

52

Страница 21

(Продолжение изменения N} 1 к ГОСТ 20264.4-89)

За единицу активности глюкоамилазы принимается способность фермента катализировать при определенных значениях температуры и pH гидролиз I мкмоль мальтозы до глюкозы за I мин.

За.2. А п п а р а т у р а, материалы, реактивы

Весы лабораторные общего назначения по ГОСТ 24104 с наибольшим пределом взвешивания 200 г, не ниже 2-го класса точности.

Сахариметр универсальный СУ-3, СУ-4, автоматический СП или автоматические поляриметры А1-ЕПО или А1-ЕПЛ.

Прибор для измерения pH среды в диапазоне 0—14 с погрешностью измерения ±0.1 pH.

Термостат или улмратсрмостат, обеспечивающий температуру нагрева (50±0,2) 'С.

Термометры по ГОСТ 28498 диапазоном измерения 0—100 *С и ценой деления шкалы не более 0,1 *С.

Баня водяная.

Стаканчики для взвешивания по ГОСТ 25336.

Колбы типа Кн вместимостью от 100 до 1000 см} по ГОСТ 25336.

Колбы мерные наливные 1-го или 2-го исполнения вместимостью 100, 200. 250 и 1000 см* по ГОСТ 1770.

Воронки типа В по ГОСТ 25336.

Пипетки типа 2. 1-го и 2-го исполнения вместимостью от 1 до 25 см1 по ГОСТ 29227 или ГОСТ 29169.

Пробирки ПI—21—200, или ПI —16— 150, или Г12—19—180, или П2-16-150 по ГОСТ 25336.

Секундомер по НД.

Бумага фильтровальная лабораторная по ГОСТ 12026.

Мальтоза псрекристаллизовлнная для бактериологических целей по НД.

Раствор буферный ацетатный с pH 4,7, приготовленный по ГОСТ 4919.2.

Кислота соляная по ГОСТ 3118, раствор молярной концентрации 5 моль/дм5.

Цинк сернокислый 7-водный по ГОСТ 4174.

Калий железистосинеродистый 3-водный по ГОСТ 4207.

Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.

Примечания:

1.    Все реактивы должны быть квалификации ч., х. ч. или ч. д. а.

2.    Допускается использование импортной посуды и приборов с метрологическими характеристиками и реактивов с квалификацией не ниже отечественных.

За.З. Подготовка к анализу

За.3.1. Приготовление раствора мальтозы массовой долей 2 % (субстрат)

(Продолжение см. с. 54)

53

Страница 22

(Продолжение изменеиия № 1 к ГОСТ 20264.4-89)

20,00 г перехристаллизованной мальтозы, взятой с учетом влаги, растворяют в мерной колбе вместимостью 1000 см’ в небольшом количестве воды, добавляют 100 см3 ацетатного буферного раствора, доводят до метки дистиллированной водой и фильтруют. Раствор мальтозы готовят не менее чем за сутки до его использования, чтобы в нем прошла мутарота-ция.

Хранят раствор при температуре 4—6 *С в течение 30 дней. Если при хранении раствор мальтозы помутнеет, пользоваться нм не следует.

3а.3.2. Приготовление раствора железистосинеродистого калия массовой долей 15 %

17,65 г калия железистосинеродистого количественно переносят в мерную колбу вместимостью 100 см1, перемешивают до полного растворения соли (в случае необходихюсти раствор подогревают) и доводят до метки дистиллированной водой.

За.З.З. Приготовление раствора сернокислого цинка массовой долей 30 %

42,85 г сернокислого иинка количественно переносят в мср1гую колбу вместимостью 100 см\ перемешиваюг до полного растворения соли (в случае необходимости раствор подогревают) и доводят ло метки дистиллированной водой.

3а.3.4. Приготовление раствора соляной кислоты концентрации 5 моль/дм3

430 см' соляной кислоты помешают в мерную колбу вместимостью 1000 см\ растворяют и доводят объем до метки дистиллированной водой.

За.3.5. Приготовление растворов ферментных препаратов

За.З.5.1. Приготовление основного и рабочего растворов очищенных ферментных препаратов

Основной раствор из очищенных ферментных препаратов готовят в соответствии с 2.3.5.

Рабочий раствор готовят из основного, разбавляя его дистиллированной водой в зависимости от предполагаемой активности.

За.3.5.2. Приготов.яение основного и рабочего растворов из воздушно-сухой культуры гриба

Основной раствор из воздушно-сухой культуры гриба готовят в соответствии с 2.3.7.

Рабочий раствор готовят из основного, разбавляя его дистиллированной водой в зависимости от предполагаемой активности.

3а.3.5.3. Приготовление раствора из культурыьной жидкости

Культуральную жидкость фильтруют через бумажный фильтр (или двойной полотняный мешок), возвращая первые порции обратно, добиваясь получения прозрачного раствора.

От 5 до 20 см’ прозрачного раствора культуральной жидкости помеша-

(Продолжение см. с. 55)

54

Страница 23

(Продолжение изменения № 1 к ГОСТ 20264.4-89)

ют в мерную колбу вместимостью 100 см’ и доводят до метки дистиллированной водой.

За.З.5.4. Приготовление раствора из улыпраконцентрата

5 см’ прозрачного ультраконцентрата (после отбора пипетку снаружи отбирают фильтровальной бумагой) количественно переносят в мерную колбу вместимостью 250 или 500 см3, частично заполненную водой. Объем доводят до метки дистиллированной водой и перемешивают.

Все исследуемые растворы глюкоамилазы, приготовленные по 3а.3.5, должны обеспечивать разность утла вращения плоскости поляризации (П,-П,) в пределах от 0,5 * до 2,5 * нормальной сахарной шкалы.

Если эта разность ниже 0.5 ’ или выше 2,5 \ то основной раствор разбавляют в ту или другую сторону.

За.4. Проведение анализа

Берут две параллельные навески анализируемого продукта и из каждой делают не менее двух разведений. Каждое разведение исследуемого раствора анализируют не менее двух раз.

В лве пробирки наливают по 25 см4 раствора мальтозы и ставят в термостат или ультратермостат, или водяную баню температурой (50±0,2) 'С на 5—10 мин. Затем к содержимому пробирок приливают по 5 см1 раствора исследуемого ферментного препарата, быстро перемешивают и инкубируют смесь в течение 15 мин при этой же температуре. По истечении указанного времени в пробирки добавляют по 1 см* раствора соляной кислоты (для прерывания ферментативной реакции) и охлаждают растворы до 20 X.

Одновременно готовят контрольную пробу. Для этого к 25 см5 раствора мальтозы приливают сначала 1 см* раствора соляной кислоты, затем 5 см1 исследуемого раствора ферментного препарата.

Если опытные и контрольные растворы получились мутными, их осветляют Для этого приливают по 1 см’ осветлителей — раствора сернокислого цинка и жслезистосинеродистого калия.

Содержимое пробирок перемешивают и фильтруют. На сахариметре или автоматическом поляриметре измеряют угол вращения плоскости поляризации опытного и контрольного растворов, используя поляриметрическую тр>бку (кювету) длиной 200 мм. При использовании автоматического поляриметра показания прибора умножают на коэффициент перевода круговых градусов в градусы нормальной сахарной шкалы, равный 2.8885. Величина ДП при измерении на сахариметре должна находиться в пределах от 0,2 до 2,5 *S; при измерении на автоматическом поляриметре — от 0,6 до 7 *S.

За.5. Обработка результатов

Глюкоамилазную активность ГлСп, ед/г (или ед/см’). вычисляют по формуле

(Продолжение см. с. 56)

55

Страница 24

(Продолжение изменения № I к ГОСТ 20264.4-89)

(Л, -Л2 ) 0,00243 -31 Ю6 ГлСп 1 -т ТТ~2 i80-'    (43)

где /7, — угол вращения плоскости поляризации опытного раствора. ‘S,

ni — угол вращения плоскости поляризашж конгрольмого раствора,

*5;

0.00243 — массовая концентрация глюкозы, соответствующая 1*5, г/см’;

31 — объем инкубационной смеси, см*;

10* — коэффициент перевода г в мкг;

т — масса (объем) препарата в рабочем растворе, г (см5);

15 — время гидролиза, мин,

2 - коэффициент, учитывающий образование из мальтозы двух молекул глюкозы;

180 — молярная масса глюкозы, мкг/мкмоль,

В случае применения осветления конечный результат, вычисленный по формуле (4а). умножают на коэффициент, учитывающий изменение объема инкубационной смеси на 2 см* за счет осветления, равный 1,06.

За окончательный результат анализа принимают среднее арифметическое результатов определения активностей, полученных при анализе двух параллельных навесок. Результат округляют до второго дескгичного знака. Расхождение между каждым измерением и средним арифметическим значением не должно превышать 5 % среднего значения при доверительной вероятности Р = 0.95.

Перевод единиц активности, полученных поляриметрическим методом, в единицы стандартного глюкозооксидазного метола осуществляется в соответствии с приложением А.

Стандарт дополнить приложением — А:

56

1

При,южение А (справочное)

Перевод единиц активности в единицы глюкозооксидазного метода

Для перевода единиц активности, полученных поляриметрическим методом, в единицы глюкозооксидазного метода используется переводной коэффициент К, полученный экспериментальным путем

1. Для препаратов, полученных при культивировании гриба Asp. awamori. выращенного глубинным способом. К = 1,76 ±0,11; выращенного поверхностным способом — К - 1,51 ±0,11.

При изменении условий культивирования продуцента глюкоамилаэы

(Продолжение см. с. 57)

Страница 25

(Предложение изменения № 1 к ГОСТ 20264.4-89)

значение коэффициента следует уточнять. Для контрольных заводских условий уточнение коэффициента проводят путем сравнительного определения активности глюкоамилазы глюкозооксидазным и поляриметрическим методами.

Работу проводят на пяти пробах, полученных при разных ферментациях.

Переводной коэффициент К вычисляют по формуле

(Продолжение см. с. 58)

Страница 26

(Продолжение изменения № 1 к ГОСТ 20264.4-89)

“л£-    "

где ГлС — глюкоамклаэная активность, определенная глюкоэооксидаэным методом, ед/г;

ГлСп — глюкоамилазная активность, определенная поляриметрическим методом, ед/г*.

(ИУС № 8 1998 г.)

Страница 27

Редактор Т. И. Василенко Технический редактор Л. А. Никитина Корректор М. М. Герасимснко

Сдано » наб. I9.C4.99 Поди, » печ. 08 06.Й9 I.2S уел. п. л. I.» уед. кр -«тт. US уч.-аая. я.

Тар. 8000 Цена S к.

Ордена «Знак Почет»» И»а*гельст*о стандартов. IS3S67. Моема. ГСП. НоаоараеневсхнИ пер . д. Э.

Вильнюсская тнвографая И»дат»лкст»а стандартов, уд. Даряус а Гарено. 3». Зак. W.

Заменяет ГОСТ 20264.4-74