ИЗМЕНЕНИЯ, УТВЕРЖДЕННЫЕ К НАЦИОНАЛЬНЫМ СТАНДАРТАМ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ
65 СЕЛЬСКОЕ ХОЗЯЙСТВО ОКС 65.120
Изменение № 1 ГОСТ Р 55576-2013 Корма и кормовые добавки. Метод качественного определения регуляторных последовательностей в геноме сои и кукурузы
Утверждено и введено в действие Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 17.10.2016 № 1416-ст
Дата введения — 2017—07—01
Раздел 1. Заменить слова: «генетически-модифицированной» на «генетически модифицированной» (2 раза).
Раздел 2. Заменить ссылки:
«ГОСТ Р ИСО 6497-2011 Корма для животных. Отбор проб» на «ГОСТ ISO 6497-2014 Корма. Отбор проб»;
ГОСТ ISO 7216-2011 на ГОСТ ISO 7218-2015; исключить ссылку:
«ГОСТ Р 51652-2000 Спирт этиловый ректификованный из пищевого сырья. Технические условия»;
дополнить ссылкой:
«ГОСТ 5962-2013 Спирт этиловый ректификованный из пищевого сырья Технические условия»;
для ГОСТ Р 52173-2003 заменить слова: агенетически-модифицированных» на «генетически модифицированных».
Пункт 5.2 изложить в новой редакции:
«5.2 При проведении испытаний применяют оборудование и материалы по ГОСТ 31719, а также следующие реагенты:
- комплект реагентов для выделения ДНК’:
буфер для лизирующего реагента, содержащий гуанидин хлорид, 1мМ Трис-HCI, 12мМ ЭДТА; лизирующий реагент: протеиназа К;
раствор для отмывки 1: гуанидин тиоционат. 1мМ Трис-HCI, 12мМ ЭДТА; раствор для отмывки 2: 50 %-ный этиловый спирт;
сорбент универсальный: диоксид кремния с примесями оксидов алюминия, кальция, железа, натрия и калия, HCI;
буфер для элюции ДНК: ТЕ-буфер с pH 8.0 ед.рН;
- ПЦР-комплект для выявления ДНК генетически модифицированной сои:
ПЦР-смесь-1: смесь специфичных праймеров и флуоресцентных зондов согласно таблице. 0.4—О.бмМ дНТФ. кратность смеси 2.5х;
ПЦР-буфер: 0,ЗМ Трис-HCI (pH 8.3 ед.рН), 30-180мМ AmS04,10-25мМ MgS04. глицерин; полимераза (TaqF): полимераза (TaqF) химически модифицированная для обеспечения горячего старта;
положительный контрольный образец (ПКО ГМ соя), состоящий из участков последовательности регуляторных конструкций и содержащий места посадки праймеров и флуоресцентных зондов ПЦР-смеси-1. Положительный контроль ПЦР должен давать положительный сигнал по всем используемым каналам флуоресцентной детекции;
отрицательный контрольный образец (ОКО): ТЕ-буфер для элюции ДНК. Отрицательный контроль экстракции не должен давать положительный сигнал по всем используемым каналам флуоресцентной детекции;
- «ПЦР-комплект» для выявления ДНК генетически модифицированной кукурузы:
ПЦР-смесь-1: смесь специфичных праймеров и флуоресцентных зондов согласно таблице. 0,4—0,6мМ дНТФ, кратность смеси 2,5х;
ПЦР-буфер: 0,ЗМ Трис-HCI (pH 8.3 ед.рН), 30-180мМ AmS04,10-25 мМ MgS04, глицерин;
* Данный комплект реагентов является рекомендуемым и приведен для удобства пользователей настоящего стандарта
35 (Продолжение Изменения № 1 к ГОСТ Р 5557&—2013)
полимераза (TaqF): полимераза (TaqF) химически модифицированная для обеспечения горячего старта;
положительный контрольный образец (ПКО ГМ кукуруза), состоящий из участков последовательности регуляторных конструкций и содержащий места посадки праймеров и флуоресцентных зондов ПЦР-смеси-1. Положительный контроль ПЦР должен давать положительный сигнал по всем используемым каналам флуоресцентной детекции;
отрицательный контрольный образец (ОКО): ТЕ-буфер для элюции ДНК. Отрицательный контроль экстракции не должен давать положительный сигнал по всем используемым каналам флуоресцентной детекции».
Пункт 7.3. Заменить ссылку: ГОСТ Р 51652 на ГОСТ 5962.
Пункт 7.4. Заменить ссылку: ГОСТ Р ИСО 6497 на ГОСТ ISO 6497.
Пункт 10.1.1 изложить в новой редакции:
«10.1.1 Постановка ПЦР
Размораживают необходимое количество пробирок с ПЦР-смесью-1 (ГМ соя/ГМ кукуруза). Перемешивают на встряхивателе и сбрасывают капли с помощью кратковременного центрифугирования в течение 1—3 с.
Для проведения одной реакции в пробирку вносят 10 мм3 ПЦР-смеси-1, 5 мм3 ПЦР-буфера и 0.5 мм3 полимеразы (TaqF). Смесь перемешивают на встряхивателе. осахщая кратковременным центрифугированием. затем вносят по 15 мм3 смеси в микропробирки вместимостью 0.2 см3. Используя наконечник с аэрозольным барьером, в подготовленные пробирки добавляют по 10 мм3 ДНК испытуемых образцов, избегая попадания универсального сорбента в реакционную смесь.
Ставят контрольные реакции амплификации:
- отрицательный контрольный образец (К-) — вместо ДНК-пробы вносят в пробирку 10 мм3 ТЕ-буфера;
- положительный контрольный образец (К+) — вносят в пробирку 0,01 см3 ПКО ГМ соя/ПКО ГМ кукуруза.
Общий обьем реакции — 25 мм3, обьем ДНК-пробы — 10 мм3».
(ИУС №1 2017 г.)
36