ill м ок> тля м-дтл in пика И СЛ'Л» ил I ГУ ДОПОЮ КРАСНОЮ MIAMI МИ АКАД1МИХ I Jtl»(KOXO *ЯИ1 ШИММУ НАУК НМ! НМ и И III НИНА • И I» И I* I киГ О I Д I и I It и I
н/чУчно-иссягдоклк 11||Г1.ин niinnivi Bf.TtPMt 1АГИИ ЦОСЮЧИОИ С.ИЬИт ОМСКИИ Г ОСУ Л АГС МКННЫИ
ВтГ’ИНА1Ч1ЫИ ИИ< IMIVt
Наставление
по диагностике
инфекционной
болезни овец,
вызываемой Brucella ovis
(инфекционный эпидидимт баранов)
НОВОСИБИРСК 199?
Наставление по диагностике инфекционной болезни овец, вызываемой Brucella ovis (инфекционный эпидидимит баранов
Утверждены Главным управление ветеринарии Министерства сельского хозяйства СССР 13 ноября 1991
Сибирское 01деление 8ЛСХН1 /I 1932
титаном. Отдельные культуры Br.ovio приобретают s-анти-гекность и вызывают в организме кроликов з-антитела, взаимодействующие со стандартным бруцеллезным антигеном в РА и РСК. Поэтому при первичном выделении и идентфисации бруцвля вида о vie следует иоследовать антигенные свойства не одной, а нескольких выделенных культур. Серологическую идентификацию «окно осуществлять в плаотянчатой РА, используя гомологичную антиввдовую сыворотку или гетерологичную, полученную к R -формам других видов бру-целл.
Применять в пластинчатой РА позитивную овксную сыворотку из диагностического набора для РИСК нецелесообразно, так как она в большинстве случаев дает отрицательную реакцию агглютинации с овисными культурами из-за низкой концентрации в ной специфических антител.
Меры профилактики. Чтобы предупредить занос возбудителя ИЭ в благополучные хозяйства (фермы, отары), необходимо завозить племенных и пользовательних овец только иэ тех хозяйств и стад, в которых отсутствие данной инфекции подтверждается лабораторными методами исследований в течение нескольких лет (не менее 7-3).
Все вновь поступившее поголовье (бараны, овцематки, молодняк) обязательно карантинируют. В период карантина пивотных исследуют комплексно: клиническим, серолотческим (РДСК) и аллергическим .методами.
При клиннчеоком обследовании баранов нужно всегда пальпировать (ощупывать) семенники и придатки. В случае обнаружения в них характерных для болезни патологических изменений (увеличение или атрофия, отсутствие подвижности, плотные тяжи, узлы), изменений в окружающих тканях или положительных серологичеоких реакций даже у отдельных животных, вся группа признается неблагополучной я не допускается в общее стадо.
Вменение эпизоотической ситуации по Ю в хозяйстве следует начинать со взрослых баранов. Диагностические исследования лучше осуществлять в летний период после стрижки и купкн.
Бароны-производители обязательно должны быть проверены за 3-4 меояца Д° начале осеменения для того, чтобы в случав выявления больных успеть удалить из стада всех
II
зараженных животных я получить минимум 2-крегше групповые отрицательные результаты исследования.
При абортах среди овцематок, обнаружении эпндидимитов или орхитов у баранов диагностические исследования нужно начинать немедленно,в любое время года.От предполагаемых больных животных берут кровь я сыворотку направляют в лабораторию.
В случае установления ИЗ следует сразу же провести кем-ллеко ветеринарно-санитарных мероприятий по предупреждению распространения болезни, предусмотренный "Инструкцией о мероприятиях по профилактике и ликвидации бруцеллеза животных" (1982). Необходимы немедленная изоляция и убой больных животных независимо от племенной и производственной ценноотя, а также быстрое исследование всех восприимчивых для определения степени распространения инфекции я выбора наяболее рационального метода ее ликвидации.
В зонах широкого распространения ИЭ целесообразно применять в комплексе охранных и оздоровительных мер специфические средства профилактики, в честности бруцеллезную вакцину из штамма Рэа-I. Прививку проводят в соответствии с "Наставлением" по ее применению.
У баранов, привитых этой вакциной в возраста 4-5 меся-цоз. развивается относительно напряженный ишунитет. У 40% он сохраняется дс 22 меояцев (срок наблюдения), что позволяет в производственных условиях снизить заболеваемость баранов э 2-3 раза.
Поствакцинальные положительные реакции (РА, РСК), устанавливаемые со стандартным бруцеллезным антигеном у привитых баранчиков, угасают через 9-12 месяцев. Следовательно, серологический контроль эа их статусом по бруцеллезу можно осуществлять уже по истечении этого срока. На ИЭ баранов и ярок можно исследовать в любое время после прививки вакцины штамма Рев-1.
Учитывая, что основным сьяэушим звеном в цепи передачи возбудителя являются овцематки, в неблагополучных по ИЭ хозяйствах их следует гфививать с профилактической целью также в молодом возрасте (4-6 месяцев). Эта мора особенно полезна в зонах, где 4-5 лет назад или в настоящее время наряду с ИЭ регистрируется и бруцеллез, так как будут про-филактировагься сразу две инфекция.
диагностика и пражштикл
ИНОЕКЦИОННОГО ОПИДИДИМИТА БАРАНОВ Рекомендации
Вздактор Б. В. Стрибук Художественный редактор В.Е.Сафронов Технический редактор Н.И.Анищенко Корректор T.U. Немцева
Подписано к печати 0?.12.6£>. 101 02360». Формат 84x108 1/32 Уел.печ.л. 0,63 , уч.-изд.л. 0,7. Тираж 500 экз.Заказ J&566.
Цена 10 к.
Редшщио1шо--лолд1рафическое объединение СО ВАСХНИЛ,ротапринт 633128, Новосибирская область
Инфекционный эпидвдимит (ИЗ) бараков - недавно открытая разновидность бруцеллеза овец, вызывазмого особым видом бруцелд - (Brucella ovio ). Наиболее чувствительны к возбудителю бараны, у которое поражается главным образом придаток оеме»шико - эпидидимис.
Хах)актористика возбудителя. Возбудитель ИЭ по морфало-пы"~и многим свойствам сходен с другими видами бруцелл.
Это очень мелкие бактерии, имеющие длину 0,5-1,5 мкм и ширину 0,34),? ш. Спор не образуют, жгутиков не имеют, неподвижны, грамотрицателыш. По методу Козловского окра-tv. хя в красный цвет (непостоянно). Кулыурц, ллптель-•» • _г»«_ »чеся на питательных, средах, проявляют широкую ...шиботь морфологии, окраски, антигенных, огглюти-иаоельних я других свойств.
Сущос^вуот мнение, что это сильно изменявшийся варл-aj(T (к -форма) возбудителя обычного бруцеллеза овец,утративший п процессе эволюции характерный для типичных ( :н!м>м) бруцелл поверхностный лавопочисахуридн.чй (ЛИС) amv.roH и б значительной стопины вирулентное тъ.
Исто’яIаки возбудителя и пути распространена. Осн о t лшм истом;ikkom Hj .ovIb являются больные бараны.
Наиболее частый путь заноса возбудителя в ранее ньлучиые хозяйства (формы, отары) - ввоз шн]ю1ировон1!их льготных, чаще всего молодых племенных баранов, лрисб)>е~ тынных в неблагополучном хозяйство.
Наибольшую опасность в распрострононми ИО представ* .jt инфицированная спорма, полученная от больных бароног на племирсдирннтиях (станциях искусственного осеменения).
Iuiomi. спермы возбудитель ИЭ монет отдаляться m организмы с >?пчой, калом и другими экскрементами и инфицировать помпу, корм и воду, о т/mo предметы уходе за г.нвот-и|ям, кормушкь, подстилку и друзме ооъоиты ишшней среда. Зедшоики 1Д01ЮПНХ овец происходит но только половым, по и a r>iMQjiriPHfw нуг^м. >■ также через слизистые оболочки гчаз, ПО.: Г Вий милости к кожным покров
Наибольшее раопросгранение инфекции среди баранов наблюдается в период естественного осеменения, когда бараны используются для так называемого докрытая.
Привэдсм два наиболее типичных примера.
В колхозе им. Ленина Кыринского района бараны (производители я пробники) перед случкой были исследованы .дважды - в шоно и сентябре 1976 г. Оба раза серологические реакции были отрицательными. При исследовании после осеменения в ноябре 1976 г. выделен один баран-производитель с положительной РДСК* в феврале 1977 г. - уже 5 баронов.
В колхозе им. Лазо Приаргунского района бараны перед случкой также имели отрицательные реакции, После осеменена в январе 1977 г. обнаружены по одной положительной и сомнительной реакции в РДСК, а в марта 1977 г. положительные реакции были уже у 35 животных.
Из этих примеров видно, что существенную роль в распространении возбудителя играют овцематки, которые являются связующим свеном в передаче Br.ovic от больных баранов здоровым. При этом они заражают не только барановг но и молодняк.
Патогенез, симптомы и течение инфекции. Опыты пс заражению баранов разными дозами и различными по вирулентности ку»р.тучами br.ovis показали что возбудитель* попав в оргилизм. первоначально локализуется в лимфатических узлах, расположенных возле ворот инфекции (первичная регионарная стадия инфекции), затем лимфой и кровью разносится в отдаленчче лимфатические узлы и паренхиматозные органы (генерализованная стадия). После х^енераоизации наступает вторичная регионарная стадия инфекционного процесса.В этот-период вогбудитель обнаруживается, как правило, только в половых органах - в придатках л теле семенников и продета-еотельных железах.
При активно протекающем инфекционном процессе у живот ных через 7-Х? дней после заражения появляются в крови специфические антитела и через 30-45 дней начинает развиваться аллергическое состояние. Сроки развития и последовательность проявления серологических и аллергических реакций могут сильно варьировать. У части инфицированных животных (10-20#) и более иамунореакции могут временно или постоянно отсутствовать.
4
Обследование 2000 баранов из хозяйотв, неблагополучных по ИЗ, показало у них клинические признаки, свойственные хроническому твчешш инфекционного процессе. При пальпации часто обнаруживаются уплотнения (узлы) в придатках я теле семенников. Хвост придатка иногда бывает увеличен в 1,5-3 раза; нередко встречается атрофия семекиысов,тогда они, как правило, сильно уменьшены и почтя неподвижны.Увеличение размеров мошонки, свойственное острому воспалительному процессу, встречается редко. В этом случае кока мошонки напряжена и болезненна, тестякулы почти не прощупываются из-за отечности тканей и скапливающегося экссудата; у некоторых баранов на мошонке образуются гнойные озищи.
Овцематки и молодняк более устойчивы к заболеванию,чем взрослые бараны. У большинства овцематок инфекционный процесс протекает скрыто (латентно) без выраженных сероаллергических реакций и клинических признаков. Однако у 9-382 овцематок после заражения может развиваться ярко вирапенный инфекционный процесс, сопровождающийся появлением в сыворотке кротзя специфических антител в высоких титрах и развитием аллергического состояния, а в некоторых случаях абортами и ровдением слабых, нежизнеспособных ягнят. В производственных условиях массовые аборты, как правиле,но наблюдаются, но в отдельных отарах ь скотный период сбор-тируют до 15-202 овцематок. Единичные случаи абортов бывают почти во всех неблагополучных по ИЭ отара?:.
Важной особенностью возбудктеля, попавшего в оргаяяз,? овцематки, является его сравнительно быстрая ь -трансформация, то есть переход к н - в Ь-форму и, как следствие, потеря обычной антигенной специфичности. Поэтому почти у всех зараженных овцематок (91-992; РДСК со стандартным оьисным антигеном бывает стрнцоюльной. Сроки прсби-вания таких измененных форм в организме инфицированных животных не ограничиваются сезоном осеменения, а гораздо продолжительнее - до года и более. Некоторые овцематки остаются носителями их, пг Bce'i вероятности, в течение всо:: лет производственного испатьзования.
Молодняк инфицируется чаще прк внутриутробном развитии в оргышзые больной матери и в первые месяцы жизни при сосении инфицированного молока. Однако заболевание у
них развивается в большинстве случаев только при достижении половой зрелости. До случной камлании обычно никаких нп иммунологических, ни клянжчоских признаков болезни у них нет. Именно с таким молодняком, у которого инфекция протекает окрито (латентно), занооится, как правило, возбудитель болезни в благополучные хозяйства и стада.
Диагностика. Диагноз заболевания, вызванного Br.ovis, устанавливают на основании результатов клинических, серологических, аллергических и бактериологических исследований с учетом епизоотологических и патолого-анатомических данных.
Клиническое обследование животных. Клиническому обследованию в начале подвергают взрослых баранов, которые использовались для естественного осеменения овцематок. Цри осмотре обращают вниманий на их общее состояний и состояние наружных половых органов: семенников, придатков. Животных, у которых обнаружены патологические изменения(увеличение, уменьшение, уплотнение семенников и придатков), характерные для инфекционного зпидилимита, изолируют и затем от них берут кровь для оерологячоокого исследования. Одновременно кровь берут и от всей группы (отары) баранов, в которой обнаружены животные, подозреваете в заболевании инфекционным эпидидимитом.
При установлении диагноза на ИЭ все поголовье хозяйства (фермы) исследуют комплексно, включая серологический и клин:гческий методы.
Серологический метод основан на выявлении в сыворотке крови исследуемых животных специфических к Br.ovia антител, и поэтому он особенно эффективен в начальных стадиях инфекционного процесса, когда идет активный синтез иммуноглобулинов.
Изучение диагностической эффективности реакции длительного связывания комплекта (РДСК) показало, что эта реакция очень специфична и позволяет своевременно установить наличие и степень распространения инфекции в отарах. Вместе с этим был выявлен и ряд ее иедоотатков. Установлено, что позитивная РДСК в отдельный сроки после заражения может "выпадать", то есть показания ее но строго постоянны. При повторных исследованиях, црозеденных через Г-34) месяцев, позитивные реакции могут исчезать у
6
пятой части естественно инфицированных баранов. Отрицательную ТОК имеют до 15-2056 баранов, являющихся носителями. Br.ovie и имеющих клинически траленные признаки эпидидямита.
Особенно неудовлетворительные результаты РДСК дает при исследовании овцематок из неблагополучных по ИЭ отар и молодняка. Это связано, с одной стороны, с особенностями инфекционного процесса у этих групп овец, с другой - с изменчивостью антигенных свойств возбудителя. Иногда эффективность ИЮК пропорциональна чувствительности применяемого R -антигена.
В отдельных случаях при исследовании снБоротки крови овец неблагополучных только по ИЭ отар могут быть получены положительные результаты в РА и РСК оо стандартным бруцеллезным 3 -антигеном. Это отмечается там, где в ОКОТНЫЙ период было много абортов. У абортировавших овцематок РА обычно бывает положительной при разведении сыворотки 1:50-1:100 и с оценкой реакция в 2 и 3 креста. Следует учитывать и возможность получить положительные РДСК с овисным антигеном при исследования овец в отарах, благополучных по ИЭ, но неблагополучных по бруцеллезу. Она определяется очень близким антигенным родством бруцелл ввдов о via и meiitenaia и образованием среди последних R3- и я -форм клеток (колоний).
Учитывая возможность таких перекрестных положительных реакций, первичный диатаоэ на ИЭ необходимо подтверждать выделением культур возбудителя на питательных средах и идентификацией их по общепринятой схеме.
Аллергический метод также применим для диагностики ИЭ, Установлено, что у баранов, зараженных бруцаллаыи о via , развивается аллергическое состояние, которое можно выявить пальпебральной и внутрикожной пробами. Аллергическое состояние наблюдается у значительной частя баранов, не имеющих серологических и клинических признаков болезни. Аллергия у многих развивается во 2-3-й мвояц после заражения и сохраняется у некоторых животных в течение 2 лет.
Степень аллергазшш организма овец находится в прямой зависимости от свойств возбудителя: долее вирулентные культуры Сруцелл вида о vie вызывают, соответственно, я более выраженную реакцию.
7
В зависимости от активности течения и степени распространения инфекции аллергической пробой дополнительно к РДСК и клиническому обследованию выявляется от 2 до 29% инфицированных баранов. Эта проба эффективна и при исследовании овцематок. Вели в РДСК выявляются только единицы реагирующих положительно овцематок, то аллергической пробой - 6-385С от количества исследованных животных. Особенно хорошие результаты дает эта пробе в длительно существующих очагах, где преобладает хроническая форма инфекции.
При изыскании аллергенов, пригодных для практического приме но идя, были испытаны бруцеллин ВИЭВ, бруцеллизат. а также аллергены, изготовленные из Br.ovia , Лучшие результаты получены при использовании ввдоспецифического аллергена - бруцеллоовина. При этом установлено, что пальпебральная проба более пригодна для аллергической диагностики ИЗ, чем ваутрикожная, в области подхвостовой складки. Эффективность первой пробы по сравнению со второй выше в 2-S раз.
Удовлетворительные результаты были получены и с бру-целлином ШЭВ, на который реагировало 63-77/С всех животных имеющих серологические реакции и клинические признаки СЫфЭКЦПИ Br.ovie.
Применение пальпебральной пробы бруцеллином в неблагополучных по ИЭ хозяйствах позволяет иногда выделять в 1,5-2 раза больше инфицированных свец, чем РДСК и клиническим методом. Введение этого препарата и учет реакция осуществляются так же, как при диагностике бруцеллеза, вызванного бруцеллемя ВЧДа molitensis.
Ириченекне аллергической пробы, в том числе и бруцелл*-.-ном ВИЗЬ. на^бедое цслесообрсзно орк широком распространения ИЭ и в отарах- со см&саиной инфекцией СИЗ и бруцачлеэ), когда одновременно можно выявить лквотаых, зараженных Вг. ovig a Br.iaeliter.sis , а также при контрольных профилактических исследованиях овзц благополучных хозяйств зоны, надсдяцейсй под угрозой заноса везбудктеля ИЭ v. бруцеллезе
Аллергическую пробу пока можно применять только как до-полягтв-льный Диагностический тест при определении степени. Хяг>прострьнш»ия инфекции в хозяйство (отаре), а также при выгоре жавот.чых для диагностического убоя и бактериологического исследозапил.
в
Бактериологическая диагностика включает 3 основных этапа: бяптериоскопию мазков из патологического материала, выдел энив чистой культуры возбудителя на питательных средах я, при необходимости, постановку биологической пробы на лабораторных животных. Этот метод применим и для исследований прижизненной и посмертной диагностики ИЗ.Для бактериологического исследования от животного нужно брать в первую очередь пробы органов (2,0x2,5 см) и димфатичеокяе узлы, имеющие видимые патологические изменения. Для взятия материала проводят либо специальный у о ой животных, либо кастрацию я взятие от баранов только сегоякинов и придатков, имеющих выраженные патололгческке изменения. При хронически протекающей инфекции возбудитель в 7O-I0C# случаев находится именно в этих органах. Дня прижизненной диагностики у барвнов удобным объектом исследования является и эякулят (сперма). При убое баранов дополнительно берут предстательные жэлезы, лимфатические узлы (срашше, паховые, тазовые, брыжеечные, предлопаточные, заглоточные, средостенные), кусочяя селезенки, печени, легких и почки.
От овцематок для исследования берут абортированные плоды, плодные оболочки (плаценту) и зеделенкч из плодных путей, а при убое - взмеыэшше участки матки, вымени, селезенки, печени, легких, почни и лимфатические узлы.
Если в точение суток взятой материал невозможно доставить в лабораторию,его консервируют стэрилъным ЗС5?-ы раствором химически чистого глицерина (1:5). Црц отсутствии этого консерванта материал замораживают в бытовом холодильнике или (в зимнее время) при минусовой естественной TOimeiWType. Такой материал .{ригодон для бэктериилох'ычэо-когс исследования в ючение 3-5 суток. В лабораторию отправляется с нарочным и с подробной аопэочедытедьной справкой.
При бактериоскопия патологического магерзада н вросших культур нужно учитывать сильно в^рааюкиую склонность в г. о via к патяморфизм/ и сбразовзндю гетзроморфн?;х культур в виде крупных « малких ко»:коб, овоидов, токкях нитей, гигантских шаров к элепсоядоз размером 3-5x10-12 м.чм,удда-авннх* зорвнетчх палочек и других необычных ферм. 1с.кие культуры к баацдякотБС случаев тзряюг способность к характерней оку-оекз по методу Козловского. :* прн с крас ко по
9
]}зому принимают фиолетовый и темно-синий цвета. Измененные клетки бруцелл даже в одном мазке часто бывают разнородны по форме, размерам и окраоке, что связано с различной степенью дефектности их клеточной оболочки. Встречаются также культуры в виде классических L-форм со всеми присущими им свойствами. Восстановить типичную морфологию и окраску измененных культур в некоторых случаях удается лишь путем многократных пересевов на полужидкие и плотные сывороточные среды или пассирования через организм морской свинки.
Бруцеллы вида о vis очень слабо или совсем не растут на питательных средах, применяемых для культивирования других видов. Поэтому для их выращивания рекомендуется применять плотные и полужидкие агаровые среды с добавлением 10-20% сыворотки крупного рогатого скота или амино-иептида. Хорошие результаты дает сухая среда - эритрит агаре. Выращивание культур возбудителя проводят в гкси-каторе при концентрации углекислоты 10-15%, для создания которой можно исиользовать бикарбонат натрия и раствори соляной а серной кислот. На X л воздуха требуется 0,48 г бикарбоната натрия и 5 мл 25%-го раствора серной кислоты или 0,4 г бикарбоната натрия я 0,35 мл концентрированной соляной кислоты. Удовлетворительные результаты дает сжигание в зкоякаторе ватного тампона, пропитанного спиртом. При отсутствии эксикатора ватные пробки можно заливать парафином или заменять резиновыми пробками. Посевы выдергивают б термостате при 37~38°С в течение 30 дней.
Серологическую идентификацию выделенных от овец культур бручол* вида о vis проводят обычно путем 2-кратного внутривенного введения 2-3 кроликам 2 мл взвеси этих культур в концентрации 3-4 млрд м.т. в I мл с интервалом 7-8 дней и последующего исследования гтериммунной сыворот ки в РДСК со стендартным овиеным антигеном. Сыворотку кровь исследуют через 1J-1? дней после повторного введения культуры. Появление положительных РДСК при исследования кроличьих оывороток с овясннм антигеном свидетельствует о принадлежиосте изучаемой культуру к возбудителю ИЭ.
Могут выделяться измененные варианты ьозоудателя, вызывающие з организме кроликов антитела, которые яелякггся гетерогенными и не улавливаются в РДСК биофзбричгнм R -ан-
го
