Библиотечка консультанта информационно-консультационной службы Минсельхозпрода России

Министерство сельского хозяйства и продовольствия Российской Федерации

СбОРНИК ИНСТРУКЦИЙ

по борьбе с болезнями рыб.

Москва Отдел маркетинга АМБ-агро 1998

Приложение / к Методическим указаниям по определению возбудителей диплостомозов рыб

Таблица 1

Этиологичеокие формы диплостомозов, их возбудители и значение дли прудового рыбоводства

Приложение 2

к Методическим указаниям по определению возбудителей диплостомозов пресноводных рыб

Определительная таблица возбудителей диплостомозов пресноводных рыб России

1(2). Паразиты головного мозга рыб и круглоротых.....3.

2(1). Паразиты глаз рыб.....................................................7.

3(4). АВ органа Брандсса менее 5000² отношение АВ органа Брандеса к АВ брюшной присоски менее 3,0.

Diplostomum phoxini (Faust, 1918) (Рис. 46).

(Возбудитель диплостомоза "D").

Размеры: тело 220-280x125-150; ротовая присоска 49-60x25-38; брюшная присоска 32-41x35-45; орган Брандсса 45-54x55-70. Отношения: АВ тела к АВ органа Брандеса 9,61-12,9; АВ тела к АВ брюшной присоски 20,7-27,4; АВ ротовой к АВ брюшной присоски 1,04-1,50; АВ органа Брандсса к АВ брюшной присоски 1,82-2,47; В к А тела 49,0-61,4%; О к А тела 51,1-57,5%. Известковых телец 492-809.

Поражает головной мозг гольянов (р. Phoxinus); распространен очагово в местах обитания гольянов; промежуточные хозяева - прудовики (Lymnaea auricularia, L. ovata); дефинитивные хозяева - рыбоядные утки, в эксперименте домашняя утка и серебристая чайка.

4(3). АВ органа Брандеса более 5000; отношение АВ органа Брандеса к АВ брюшной присоски более 3,0..........5.

5(6). Отношение АВ тела к АВ органа Брандеса более 8,5.

Diplostomum petromyzifluviatilis Diesing, 1850 (Рис. 4а).

(Возбудитель диплостомоза "U").

Размеры: тело 410-530x213-265; ротовая присоска 55-62x40-47; брюшная присоска 45-51x50-56; орган Брандеса 95-115x100-115. Отношения: АВ тела к АВ органа Брандеса 8,95-11,16; АВ тела к АВ брюшной присоски 35,7-46,3; АВ ротовой к АВ брюшной присоски 0,92-1,08; АВ органа Брандсса к АВ брюшной присоски 3,60-4,73; В к А тела 45,4-60,8%; О к А тела 52,8-57,6%. Известковых телец 643-782.

Поражает головной и спинной мозг миног (р. Lampetra); распространен очагово в местах обитания миног; промежуточный хозяин - переднежаберный моллюск Bithynia tentaculata; дефинитивные хозяева не известны, в эксперименте домашние утка и курица, белая мышь.

6(5). Отношение А В тела к АВ органа Брандсса менее 8,5.

Diplostomum nemachill Zhatkanbaeva, Shigin, 1986 (Рис. Iв).

(Возбудитель диплостом она "S").

Размеры: тело 330-415x170-225; ротовая присоска 50-55x40-50; брюшная присоска 40-50x43-54; орган Брапдеса 80-105x90-120. Отношения: АВ тела к АВ органа Брапдеса 5,88-8,12; АВ тела к АВ брюшной присоски 28,5-40,4; А В ротовой к АВ брюшной присоски 0,90-1,36; АВ органа Брапдеса к АВ брюшной присоски 3,56-5,69; В к А тела 46,7-57,1%; О к А тела 51,4-57,8%. Известковых телец 500-600.

Поражает головной мозг гольцов и губачей (р. Nemachilus); распространен очагово в местах обитания дополнительных хозяев; жизненный цикл нс изучен.

7(24). Паразиты хрусталиков..........................8.

8(9). Псевдоприсоски сильно выступающие: их вершины достигают или переходят за уровень переднего края ротовой присоски

Diplostomum rutili Razmashkin, 1969. (Рис. 2д).

(Возбудитель диплостомоза "0^м).

Размеры: тело 355-390x195-210; ротовая присоска 49-55x40-47; брюшная присоска 40-47x47-55; орган Брапдеса 80-95x90-100. Отношения: АВ тела к АВ органа Брандеса 8,09-9,70; АВ тела к АВ брюшной присоски 29,6-38,0; АВ ротовой к АВ брюшной присоски 0,92-1,13; АВ органа Брандеса к АВ брюшной присоски 3,29-4,28; В к А тела 51,3-57,7%; О к А тела 51,4-55,8%. Известковых телец 122-279.

Поражает хрусталики широкого круга пресноводных рыб, включая большую часть объектов прудового рыбоводства; распространен повсеместно; промежуточные хозяева - прудовики (Lymnaca baotriana, L. fontinalis, L. ovata); дефинитивные хозяева - чайки и крачки.

9(8). Вершины псевдоприсосок не достигают уровня переднего края ротовой присоски......................................10.

10(11). Метацеркарии мелкие: АВ тела менее 60000 .... 12.

! 1(10). Метацеркарии средних и крупных размеров:

АВ тела более 60000 ............................................ 14.

12(13). Отношение О к А тела менее 60,0%; отношение В к А тела 44,8-70,0%,

Diplostomum gobiorum Shigin, 1965. (Рис. 2г).

(Возбудитель диплостомоза "J").

Размеры: тело 200-310x115-175; ротовая присоска 33-40x25-80; брюшная присоска 29-35x30-40; орган Брандеса 50-75x60-75. Отно-

тения: АВ тела к АВ органа Брандеса 7,12-10,58; АВ тела к АВ брюшной присоски 26,0-51,7; АВ ротовой к АВ брюшной присоски 0,77-1,14; АВ органа Брандеса к АВ брюшной присоски 2,72-5,07; В к А тела 44,3-70,0%; О к А тела 48,2-54,9%. Известковых, телец 264-462.

Поражает хрусталики преимущественно бычковых рыб; распро-странен очагово в бассейнах Черного и Каспийского морей; промежуточный хозяин - ушковый прудовик (Lyimaea auricularia); дефинитивные хозяева - крачки, в эксперименте домашняя у пса.

13(12). Отношение О к А тела более 60,0%; отношение В к А тела 35,5-45,7%.

Diplostomum chromatophorum (Brown, 1981) (Рис. 36).

(Возбудитель диплостомоза "А").

Размеры: тело 324-887x143-163; ротовая присоска 37-44x35-39; брюшная присоска 30-35x32-37; орган Брандеса 62-74x53-65. Отношения: А В тела к АВ органа Брандеса 12,2-15,8; АВ тела к АВ брюшной присоски 31,7-45,4; АВ ротовой к АВ брюшной присоски 1,07-1,47; АВ органа Брандеса к А В брюшной присоски 2,88-4,28; В к А тела 38,6-52,7%; О к А тела 59,8-65,8%. Известковых телец 151-309.

Поражает хрусталики практически всех пресноводных рыб, основной возбудитель диплостомозов прудовых рыб: промежуточные хозяева - прудовики (Lymnaea stagnalis, L. ovata, L. palustris); облигатные дефинитивные хозяева - чайки и крачки,

14(15). Ротовая присоска меньше брюшной; известковых телец более 700.

Diplostomum mergi Dubois, 1932. (Рис. 26).

(Возбудитель диплосомоза "К").

Размеры: тело 382-458x157-174; ротовая присоска 33-50x33-40; брюшная присоска 45-53x45-55; орган Брандеса 70-85x70-90. Отношения: АВ тела к АВ органа Брандеса 9,43-13,38; АВ тела к АВ брюшной присоски 24,2-33,8; АВ ротовой к АВ брюшной присоски 0,56-0,79; А В органа Брандеса к АВ брюшной присоски 2,21-2,99; В к А тела 34,5-43,2%; О к А тела 56,0-60,2%. Известковых телец 702-854.

Поражает хрусталики широкого круга пресноводных рыб, в том числе всех объектов прудового рыбоводства; распространен очагово в местах постоянного обитания лутков и крохалей; промежуточные хозяева - прудовики (Lymnaea auricularia, реже L. stagnalis); дефинитивные хозяева - рыбоядные утки, в эксперименте домашняя узка.

15(14). Ротовая присоска крупнее брюшной; известковых телец менее 700............................... 16.

16(17). Тело овоидиой формы: максимальная ширина тела на границе первой и второй третей длины тела.

Diplostoinum spathaceum (Rud., 1819). (Рис. За).

(Возбудитель диплостомоза "Г).

Размеры: тело 360-410x165-220; ротовая присоска 37-43x37-45; брюшная присоска 34-38x36-40; орган Брандеса 60-70x60-75. Отношения: АВ тела к АВ органа Брандеса 14,0-20,2; АВ тела к АВ брюшной присоски 44,3-63,9; А В ротовой к АВ брюшной присоски 1,06-1,29; АВ органа Брандеса к АВ брюшной присоски 2,76-3,95; В к А тела 45,2-57,1%; О к А тела 65,3-71,4%. Известковых телец 117-401.

Поражает хрусталики широкого круга пресноводных рыб, включая все объекты прудового рыбоводства; распространен повсеместно; промежуточные хозяева - прудовики (Lymnaea auricuiaria, L. bactriana, L. pereger); дефинитивные хозяева - чайки и крачки.

17(16). Тело овальной формы: максимальная ширина его приходится на середину длины тела........................... 18.

18(19). Известковых телец более 450.

Diplostoinum parviventosum Dubois, 1932. (Рис. 2а).

(Возбудитель диплостомоза "Q'‘).

Размеры’, тело 405-485x185-220; ротовая присоска 37-45x35-45; брюшная присоска 40-45x40-53; орган Брандеса 80-120x80-105. Отношения: АВ тела к АВ органа Брандеса 6,95-13,4; АВ тела к АВ брюшной присоски 38,0-54,3; АВ ротовой к АВ брюшной присоски 0,63-1,07; АВ органа Брандеса к АВ брюшной присоски 3,09-7,32; В к А тела 39,6-49,4%; О к А тела 59,0-67,9%. Известковых телец 496-724.

Поражает хрусталики главным образом пескарей (р. Gobio), реже других карповых и окуневых рыб; зарегистрирован у пеляди; распространен очагово в местах гнездования крохалей; промежуточные хозяева - прудовики (Lymnaea lagotis, L. ovata); дефинитивные хозяева - рыбоядные утки.

19(18). Известковых телец менее 450............................ 20.

20(21). Отношение АВ тела к АВ органа Брандеса менее 12,0.

Diplostoinum hclvcticum (Dubois, 1929). (Рис. 2в).

(Возбудитель диплостомоза "В").

Размеры: тело 352-469x166-206; ротовая присоска 48-58x32-42; брюшная присоска 37-46x44-53; орган Брандеса 69-88x78-106. Отношения: АВ тела к АВ органа Брандеса 8,0-11,7; АВ тела к АВ брюшной присоски 28,3-43,3; АВ ротовой к АВ брюшной присоски 0,75-

1,23; АВ органа Брандсса к АВ брюшной присоски 2,89-4,16; В к А тела 43,5-53,6%; О к А тела 56,1-61,5%. Известковых телец 304-449.

Поражает хрусталики широкого круга пресноводных рыб, включая все объекты прудового рыбоводства; распространен повсеместно; промежуточные хозяева - прудовики (Lymnaea auricularia, L. limosa, L. ovata); дефинитивные хозяева - чайки и крачки.

21(20). Отношение АВ тела к АВ органа Брандеса более 12,0; если оно меньше, то отношение О к А тела более 60,0%........................................................................22.

22(23). А В брюшной присоски менее 2000.

Diplostomum huronensc (La Rue, 1927). (Рис. Зг).

(Возбудитель диплостомоза "L").

Синоним: Diplostomum paraspathaceum Shigin, 1965.

Размеры: тело 370-455x170-200; ротовая присоска 45-50x43-47; брюшная присоска 38-42x40-45; орган Брандеса 70-85x60-75. Отношения; АВ тела к АВ органа Брандеса 10,1-15,8; АВ тела к АВ брюшной присоски 38,5-53,2; А В ротовой к АВ брюшной присоски 1,08-1,47; АВ орг ана Брандеса к АВ брюшной присоски 2,50-3,99; В к А тела 40,2-50,0%; О к А тела 60.5-72,5%. Известковых телец 188-258.

Поражает хрусталики широкого круга пресноводных рыб, включая все объекты прудового рыбоводства; распространен повсеместное промежуточные хозяева - прудовики (Lymnaea bactriana, L. fontinalis); дефинитивные хозяева - чайки и крачки.

23(22). АВ брюшной присоски более 2000.

Diplostomum nordmanni Shigin, Sharipov, 1986. (Рис. Зв).

(Возбудитель диплостомоза ”Т").

Размеры: тело 445-515x175-210; ротовая присоска 47-62x45-53; брюшная присоска 40-52x45-55; орган Брандеса 65-90x75-90. Отношения: АВ тела к АВ органа Брандеса 12,2-18,7; А В тела к АВ брюшной присоски 36,7-45,9; АВ ротовой к АВ брюшной присоски 0,96-1,30; АВ органа Брандеса к АВ брюшной присоски 2,17-3,27; В к А тела 35,9-42,6%; О к А тела 62,9-71,3%. Известковых телец 215-356.

Поражает хрусталики карповых рыб, в том числе карпа, белого амура, белого и пестрого толстолобика; палеарктический вид; промежуточные хозяева - прудовики (Lymuaea bactriana, L. fontinalis, L. lagotis, L. pereger); дефинитивные хозяева - чайки и крачки.

24(7). Паразиты внутренних сред глазного яблока, в хрусталиках нс встречаются............................................25.

26(26). Паразиты стекловидного тела глаза.

Diplostomum gavium (Gubcrlct, 1922). (Рис. 1д).

(Возбудитель диплостомоза "W").

Синонимы: Diplostomum numcricum Niewiadomska, 1988; Diplos-lomum vltreophilum Shigin, Stanislavez, 1989.

Размеры: тело 465-587x210-265; ротовая присоска 48-62x45-58; брюшная присоска 43-51x46-55; орган Брандеса 100-130x92-135. Отношения: АВ тела к АВ органа Брандеса 8,37-12,89; АВ тела к АВ брюшной присоски 43,2-58,9; АВ ротовой к АВ брюшной присоски 1,06-1,39; АВ органа Брандеса к АВ брюшной присоски 3,89-7,02; В к А тела 41,7-50,5%; 0 к А тела 51,3-56,6%. Известковых телец 760-1150.

Поражает стекловидное тело глаз сиговых и карповых рыб; распространен очагово в местах обитания дефинитивных хозяев; промежуточный хозяин не известен; дефинитивные хозяева - гагары, в эксперименте домашняя утка.

26(25). Паразиты внутренних оболочек глаза и жидких сред глазного яблоко..............................................27.

27(28). Метаисркарии меткие: АВ тела менее 6000, АВ ротовой и брюшной присосок менее 2000.

Diplostomum gasterostei М. О. Williams, 1966. (Рис. 1а).

(Возбудитель диплостомоза "V^м).

Синоним: Diplostomum pscudobaeri Razmashkin, Andrejuk, 1978.

Размеры: тело 250-290x130-155; ротовая присоска 38-45x35-41; брюшная присоска 33-41x36-45; орган Брандеса 55-75x65-75. Отношения: АВ тела к АВ органа Брандеса 7,13-9,88; АВ тела к АВ брюшной присоски 22,2-30,8; АВ ротовой к АВ брюшной присоски 0,88-1,29; АВ органа Брандеса к АВ брюшной присоски 2,43-3,99; В к А тела 47,3-55,8%; О к А тела 53,5-58,2.

Поражает лимфатическую систему глаза окуневых и сиговых рыб, вызывает смещение хрусталика и деформацию стекловидного тела; распространен очагово в местах гнездования дефинитивных хозяев; промежуточные хозяева - прудовики (Lynmaea ovata, L. pere-ger); дефинитивные хозяева - рыбоядные утки, в эксперименте домашняя утка и сизый голубь.

28(27). Метацсркарии средних и крупных размеров: АВ тела более 6000, АВ присосок более 2000........... 29.

29(30). Псевдоприсоски сильно смещены назад и располагаются на уровне фаринкса; АВ брюшной присоски более 3500; известковых телец более 2000.

Diplostomum pungitii Shigin, 1965. ,(Рис. 1в).

(Возбудитель диплостомоза "М").

Размеры: тело 410-655x240-330; ротовая присоска 60-90x47-67; брюшная присоска 57-77x65-83; орган Брандсса 85-140x105-140. Отношения: АВ тела к АВ органа Брандеса 10,2-14,8; АВ тела к АВ брюшной присоски 25,2-33,9; АВ ротовой к АВ брюшной присоски 0,71-0,94; АВ органа Брандеса к АВ брюшной присоски 2,12-3,00; В к А тела 49,1-63,7%; О к А тела 55,4-61,4%.Извсстковых телец 2158-2873.

Поражает донную часть глазного яблока, нарушая целостность и вызывая отслойку сетчатки у колюшковых и окуневых рыб; распространен очагово в местах обитания дефинитивных хозяев; промежуточные хозяева не известны; дефинитивные хозяева - рыбоядные утки, в эксперименте домашняя утка.

30(29). Псевдоприсоски расположены на уровне ротовой присоски; АВ брюшной присоски менее 3500; известковых телец менее 1000................................................. 31.

31(32). Отношение В к А тела менее 55,0%; паразиты окуневых рыб и налима Diplostomum volvcns Nordmann, 1832. (Рис. 16).

(Возбудитель диплостомоза "С”).

Размеры: тело 410-475x185-230; ротовая присоска 55-62x40-50; брюшная присоска 45-50x48-53; орган Брандеоа 90-115x95-110. Отношения: АВ тела к АВ органа Брандеса 7,70-9,70; АВ тела к АВ брюшной присоски 33,2-45,0; АВ ротовой к АВ брюшной присоски 0,88-1,16; АВ органа Брандеса к АВ брюшной присоски 3,42-5,03; В к А тела 43,0-53,6%; О к А тела 50,5-56,8%. Известковых телец 443-664.

Поражает сетчатку глава, нарушая целостность пигментного слоя; обычный и широко распространенный паразит окуневых рыб и налима, зарегистрирован у радужной форели, пеляди и белого толстолобика; промежуточные хозяева - прудовики (Lymnaea auricu-laria, L. ovata); дефинитивные хозяева - чайки, крачки и поморники.

32(31). Отношение В к Л тела более 55,0%; паразиты гольцов и губачей.

Diplostomum pusillum (Dubois, 1928) (Рис. 4г).

(Возбудитель диплостомоза "N").

Размеры: тело 365-400x220-245; ротовая присоска 53-65x50-57; брюшная присоска 47-57x52-60; орган Брандеса 90-110x85-115. Отношения: АВ тела к АВ органа Брандеса 7,43-11,25; АВ тела к А В брюшной присоски 29,2-34,8; АВ ротовой к АВ брюшной присоски 1,04-1,33; АВ органа Брандеса к АВ брюшной присоски 2,82-4,60; В к А тела 56,8-65,3%; О к А тела 45,2-50,7%. Известковых телец 280-530.

Поражает глазное яблоко гольцов и губачей (р. Nemachilus), вызывая смещение хрусталика и деформацию стекловидного тела глаза; распространен очагово, преимушествешю в горных речках и ручьях; промежуточный хозяин не известен; дефинитивные хозяева -рыбоядные утки, ондатра, в эксперименте белая мышь, морская свинка, кролик.

УДК 597-12 + 616.99-08 +576.893.1+576.895.1+576.895-3+576.89 +616.98-036.2:578+616.98-036.2:579.8

ISBN 5-93098-002-0

Сборник включает документы по организации ветеринарного надзора за рыбохозяйственными предприятиями и инструкции по борьбе с основными инфекционными и инвазионными болезнями рыб.

Подготовлен специалистами ветеринарных, рыбохозяйственных и других НИИ (ВИЭВ, ВИГИС, ВГНКИ, ЦНМВЛ и Республиканский эпизоотический отряд Департамента ветеринарии Минсельхозпрода России, ВНИИПРХ, ГосНИОРХ, СибрыбНИИ Проект, РосрыбИ ИИ Проект, АГТУ, ВНИИР, КаспНИИРХ, ВНИРО, ИнПА РАН, Институт цитологии РАН, ЦПС, ЦИПС).

Сборник предназначен для специалистов широкого профиля рыбоводных предприятий всех форм собственности, ихтиопатоло-гической и ветеринарной службы, рыбохозяйственных и ветеринарных НИИ и ВУЗов.

Ответственные за выпуск: начальник отдела организации противоэпизоотических мероприятий, к.в.н. Н.АЯременко, гл. специалист, к.в.н. А.Н.Мачнев (Департамент ветеринарии Минсельхозпрода России), проф. Ю.А.Стрелков, д.б.н. А.М.Наумова (Межведомственная ихтиологическая комиссия Департамента рыболовства Минсельхозпрода России, ГосНИОРХ, ВНИИ ирригационного рыбоводства РАСХН).

Издается по заказу Департамента ветеринарии, Межведомственной ихтиологической комиссии, Департамента рыболовства. Центральной производственной станции по борьбе с болезнями рыб Ассоциации Росрыбхоз Минсельхозпрода России, Отделения ветеринарной медицины РАСХН

© Департамент науки и технического прогресса © Департамент ветеринарии

© Межведомственная ихтиологическая комиссия Департамента рыболовства Минсельхозпрода России

Содержание

1.    ОРГАНИЗАЦИЯ ВЕТЕРИНАРНОГО НАДЗОРА ЗА

РЫБОХОЗЯЙСТВЕННЫМИ ПРЕДПРИЯТИЯМИ..................................3

1.1.    ВЕТЕРИНАРИО-СЛЫИТАГНЫЕ ПРАВИЛА ДЛЯ РЫБОВОДНЫХ

ХОЗЯЙСТВ.................................................................................................................5

1.2.    Ветеринарно-санитарные правила для лососевых

РЫБОВОДНЫХ ЗАВОДОВ........................................................................................15

1.3.    Ветеринарно-санитарные правила для заводов по

разведению осетровых рыб...........................................................................19

1.4.    ветеринарно-санитарные правила для карантинных

рыбоводных хозяйств.....................................................................................26

1.5.    ветеринарно-санитарные правила для племенных

рыбоводных хозяйств.....................................................................................30

1.6.    инструкция по ветеринарному надзору за перевозками живой рыбы, оплодотворенной икры,

раков И ДРУ['ИХ водных организмов...........................................................34

1.7.    Рекомендации по планированию и проведению противоэпизоотических мероприятий в рыбоводных

ХОЗЯЙСТВАХ..........................................................................................................44

1.8.    Правила взятия патологического материала, крови, кормов и пересылки их для лабораторного

исследования....................................................................................................53

2.    ИНФЕКЦИОННЫЕ БОЛЕЗНИ РЫБ.........................................................59

2.1 Вирусные болезни.............................................................................................60

2.1.1.    Методические указания по идентификации вирусов и

лабораторной диагностике вирусных болезней рыб...............................60

2.1.2.    Инструкция о мероприятиях по профилактике и борьбе

с весенней виремией карпа (ВВК)..............................................................76

2.1.3.    Инструкция о мероприятиях по профилактике и борьбе с инфекционным некрозом гемопоэтической ткани

лососевых рыб..............................................................................................87

2.1.4.    Инструкция о мероприятиях по профилактике и ликвидации инфекционного некроза поджелудочной

железы лососевых рыб...............................................................................96

2.1.5.    Инструкция о мероприятиях по борьбе с вирусной

геморрагической септицемией рыб..........................................................105

2.2. Бактериальные болезни и микозы............................................................114

2.2.1.    Инструкция о мероприятиях по профилактике и мерам

борьбы с фурункулезом лососевых рыб...................................................114

2.2.2.    Временная инструкция по борьбе с вибриозом рыб...............................125

2.2.3.    Методические указания по диагностике

эритродерматита карпа.........................................................................139

2.2.4.    Инструкция о мероприятиях по борьбе с аэромонозом

карповых рыб.............................................................................................142

2.2.5.    Методические указания по определению патогенности

аэромонад по степени ДНКазной активности.....................................150

Инвазионные

болезни

рыб

3.2.12. Метоапческпе указания по определению возоуаителеи диплостомозов пресноводных пыо

МИНИСТЕРСТВО СЕЛЬСКОГО ХОЗЯЙСТВА И ПРОДОВОЛЬСТВИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ    УТВЕРЖДАЮ

(Минсельхозпрод России)    Заместитель    начальника

Департамента ветеринарии

ДЕПАРТАМЕНТ ВЕТЕРИНАРИИ

107139, Москва. Орликов пер., 1/11 Для телеграмм: Москва. 84 Минсельхозпрод Телекс: 417738 ЛЕН Телефоны: 975-58-50; 975-54-23 22.09.98 г. № 13-4-2/1404

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

по определению возбудителей диплостомозов пресноводных рыб

1.    Общие положения

1.1.    В фауне России и сопредельных государств выявлено 17 видов рода мстацсркарий трематод рода Diplostomum (отряд Strigeidida, семейство Diplostomidae), каждый из которых вызывает самостоятельную форму заболеваний. Для их обозначения к названию «днплостомоз» добавляется соответствующая данному виду' возбудителя литера латинского алфавита (Приложение 1.).

1.2.    Видовая принадлежность возбудителей и вызываемых ими

форм диплостомозов определяется по инвазионным метацеркариям и при строгом соблюдении описанной ниже методики сбора и фиксации, приготовления постоянных препаратов и морфометрического анализа, а также с учетом    го стальной    специфичности

(приуроченности к определенной более или менее узкой группе хозяев) метацеркарий, а так лес их строгой приуроченности к обитанию в определенных органах рыбы (глаза, головной мозг) или отдельных составных частей глаза (хрусталик, стекловидное тело, внутренние оболочки и жидкие среды глаза).

2.    Исследование рыб

2.1. Для исследования берут 10-15 экземпляров свежеуснувших рыб обследуемого вида и составляют протокол их исследования, в

котором регистрируется дата исследования, вид рыбы и место ее вылова.

2.2.    Каждую рыбу взвешивают, измеряют длину от вершины рыла до основания лучей хвостового плавника, проводят визуальный осмотр рыбы с обращением особого внимания на наличие патологических изменений глаз (изменение формы и размеров зрачка, патология глазного яблока), а также точечных кровоизлиянии на жаберных крышках и в основании плавников. Выявленные патологии описывают и заносят в протокол обследования рыб.

2.3.    На наличие мстацеркарий рода Diplostomum обследуют глаза и головной мозг рыб и круглоротых.

2.4.    Глаза извлекают из орбит и вскрывают с помощью ножниц или препаровальных игл на часовом стекле или чашке Петри в тонком слое воды. Хрусталики и стекловидное тело глаза переносят на отдельные часовые стекла с речной водой, а с внутренних стенок глазного яблока делают соскоб пинцетом.

2.4.1.    Хрусталики и стекловидное тело сразу же (пока они не потеряли своей прозрачности) просматривают под бинокуляром, а при наличии в них паразитов разрывают препаровальными иглами на мелкие части ы на 0,5—1,0 час оставляют в воде. За это время находящиеся в тканях этих органов метацеркарии сами выйдут в воду и могут быть собраны тонко оттянутой пипеткой. Молодые, еще нс-инвазионные метацеркарии при этом успевают погибнуть, а инвазионные сохранятся в живом виде.

2.4.2.    Соскоб с внутренних стенок глаза обследуют компрсс-сорно под бинокуляром. Обнаруженных мстацеркарий аккуратно извлекают из содержимого глазного яблока, отмывают в пресной воде. Если метацеркарии в содержимом, глазного яблока очень много (десятки и сотни), отмывку их удобнее производить в 0,2 л стаканчике методом отмучивания и последовательных сливов.

2.5.    Головной мозг извлекают пинцетом из черепной коробки через вскрытую крышу черепа, помещают на часовое стекло с водой и обследуют визуально па наличие кровоизлиянии на сосудистой оболочке мозга и в мозговой ткани. Для выявления метацеркарии рода Diplostomum головной мозг исследуют под бинокулярным микроскопом компрессорным способом, либо - если метацеркарии очень много, - методом отмучив ания и последовательных сливов.

2.6.    Собранных мстацеркарий подсчитывают (отдельно инвазионных и нсиивазионных), отмывают водой, а перед фиксацией изучают прижизненно.

3. Изучение живых мстацеркарий

3.1.    По живым мстацсркариям уточняют их пршшдпежность к роду Diplostomum и выявляют некоторые специфические особенности их морфологии. Для этого собранных метацеркарий помещают на предметное стекло с лункой и исследуют их под малым увеличением микроскопа, обращая основное внимание на форму, количество и характер расположения известковых телец в теле мстацеркарий.

3.2.    По форме и размерам известковых телец дифференцируют мстацеркарий рода Diplostomum от таковых рода Tylodclphys: у первых известковые тельца имеют шаровидную форму и разные размеры, у вторых они овальные и практически одинаковые по размерам.

3.3.    Количество и характер расположения известковых телец в теле метацеркарий рода Diplostomum — один из важных морфологических критериев вида метацеркарий (Рис. 1.). Отмечают , к каким из изображенных на указанном рисунке видам обнаруженные мета-церкарии наиболее близки по числу известковых телец и характеру их расположения. В глазах одной и той лее особи рыбы могут одновременно паразитировать несколько видов рода Diplostomum.

3.4.    Отсутствие известковых телец в теле мстацеркарий рода Diplostomum свидетельствует о том, что эти метацеркарий либо еще молодые и не достигли инвазионной стадии развития (чаще встречаются у молоди рыб), либо уже старые, утратившие свою инвази-онность особи (чаще обнаруживаются у рыб старше пяти лет).

4. Фиксация и окраска метацеркарнй, приготовление постоянных препаратов

4.1.    Фиксацию и окраску метацеркарий проводят уксуснокислым кармином путем добавления краски к живым мст ацсркариям в минимальном количестве воды. Делать это удобнее всего в биологической пробирке объемом не более 4-5 мл. Соотношение объема краски и воды и пробирке должно быть не менее 10:1. Все последующие манипуляции по подготовке метацеркарий для монтажа в постоянном препарате осуществляют в той же пробирке путем последовательной смены в ней реактивов тонко оттянутой пипеткой.

4.2.    Через 15-20 минут краску слить и заменить на 5-10 минут таким же объемом 1% раствора соляной кислоты в 70° этиловом спирте (дифференцировка окраски).

4.3.    Обезвоживание окрашенных метацеркарий производят спиртами возрастающей крепости (85° и двойная смена

96° этилового спирта),    просветление —диметилфталатом

(диметиловый эфир фталсвой кислоты). Диметилфталат вносят в пробирку специальной «дпмстилфталатовой» пипеткой, медленно выпуская его по стенке пробирки, непосредственно в спирт. Мета-церкарии при этом оказываются на границе более легкого спирта и диметилфталата. Просветление считается законченным, когда мета-церкарии опустятся на дно пробирки. После этого поверхностные слои спирта и смеси спирта с диметилфталатом удаляют и заменяют чистым диметилфталатом.

4.4.    Монтаж препарата производят на предметном стекле. Для этого в центр предметного стекла помещают каплю диметилфта лата с метацеркариями, излишки диметилфта лата насколько возможно удаляют и наносят каплю жидкого бальзама, расправляют ее препаровальной иглой, а метанеркарий равномерно (лучше рядами) размещают на стекле. Через 1—3 часа, когда препарат слегка подсохнет, на него наносят' одлу-двс капли жидкого бальзама и накрывают покровным стеклом. Препарат этикетируют и хранят в течение первого г ода (пока не высохнут) на лежачих лоточках.

4.5.    Если нет возможности завершить процесс изготовления препарата сразу, то его можпо прервать на неограниченно долгое время на двух этапах: после дифференцировки окраски, поместив мстацеркарий в пробирку с 70° спиртом, ИЛИ оставить метацеркарий в пробирке с диметилфталатом.

4.6.    Приготовление уксу снокисл ого кармина: в 100 мл 45%-ной уксусной кислоты растворить (на водяной бане!) 3-4 г мелко растертого порошка кармина; остывший раствор отфильтровать и разбавить 45%-ной уксусной кислотой в соотношении 1:1. Хранить в плотно закрытой стеклянной посуде.

5. Определение родовой и видовой принадлежности возбудителей диплостомозов пресноводных рыб

5.1.    В отличие от большинства метацеркарий трематод, встречающихся в глазах и головном мозге рыб и круглоротых, мсгацер-карии рода Diplostomum ведут активный (подвижный) образ жизни, никогда нс образуя вокруг себя ни цист, ни капсул. В этом отношении они близки только к метацеркариям рода Tylodclphys. от которых, как уже отмечалось, четко отличаются формой и размерами известковых телец (см. п. 3.2.).

5.2.    Для видовой диагностики возбудителей диплостомозов рыб используют помимо уже отмеченных выше биологических (гостальная специфичность и приуроченность к обитанию в строго определенных органах рыбы) и морфологических (число известковых телец) признаков целый ряд морфометрических критериев вида,

а именно: длину (А в мкм), ширину (В в мкм) и произведение длины на ширину (АВ) тела, ротовой и брюшной присосок, органа Бранде-са; расстояние от переднего конца тела до центра брюшной присоски (О в мкм); отношения АВ тела к АВ органа Браядеса и к АВ брюшной присоски; АВ органа Брандеса и АВ ротовой присоски к А В брюшной присоски; выраженное в процентах отношение В и О к А тела (Рис. 2).

5.3. Определение видовой принадлежности метацеркарий проводя!' по определительной таблице (Приложение 2).

6. Меры безопасности и личной гигиены

6.1.    Лица, проводящие исследования рыб на их зараженность возбудителями диплостомозов, сбор, фиксацию и окраску метацеркарий, а также приготовление реактивов и постоянных препаратов из метацеркарий, должны работать в халатах и соблюдать правила работы с ядовитыми (ледяная уксусная кислота) и огнеопасными (этиловый спирт, диметиловый эфир фталевой кислоты) веществами.

6.2.    Приготовление (варка) уксуснокислого кармина должно производиться в вытяжном шкафу и только на водяной бане.

6.3.    После окончания работы вымыть руки и лицо теплой водой с мылом, а место работы обработать 2%-ным раствором кальцинированной соды.

Рис. 1. Число и расположение известковых телец у метацерка-рий некоторых видов рода Diplostomum: а - D. rutili; б - D. chro-malophorum; в - D. helveticum; г - D. volvens; д - D. phoxini; е - D. mergi; ж - D. pungiti: (по Шигину, 1986).

1

Обозначения: "большое” - основной возбудитель диплостомозов прудовых рыб, распространен повсеместно; "малое" - у прудовых рыб редок или распространен очагово; "не имеет" • в качестве возбудителя диплостомозов прудовых рыб не зарегистрирован.

2

Все размеры в олределиелвной таблице даны в мкм.