ГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ РЕСПУБЛИКИ БЕЛАРУСЬ

СТБ ГОСТ Р 51435-2006 (ИСО 8128-1-93)

---

Сок яблочный, сок яблочный концентрированный и напитки, содержащие яблочный сок

МЕТОД ОПРЕДЕЛЕНИЯ СОДЕРЖАНИЯ ПАТУЛИНА С ПОМОЩЬЮ ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ

Сок яблычны, сок яблычны канцэнтраваны i HaniTKi, як1я змяшчаюць яблычны сок

МЕТАД ВЫЗНАЧЭННЯ ЗМЯШЧЭННЯ ПАТУЛ1НУ 3 ДАПАМОГАЙ ВЫСОКАЭФЕКТЫУНАЙ ВАДКАСНАЙ ХРАМАТАГРАФИ

(ГОСТ Р 51435-99 (ИСО 8128-1-93), ЮТ)

Издание официальное

CNI

3

GS

УДК 663.813:543.544.5.068.7(083.74)(476) МКС 67.080.10    КП    03    ЮТ

Ключевые слова: сок яблочный, сок яблочный концентрированный, напитки, содержащие яблочный сок. патулин. определение содержания, хроматография высокоэффективная жидкостная ОКП РБ 15.32.10

Предисловие

Цели, основные принципы, положения по государственному регулированию и управлению в области технического нормирования и стандартизации установлены Законом Республики Беларусь «О техническом нормировании и стандартизации».

1    ПОДГОТОВЛЕН научно-производственным республиканским унитарным предприятием «Белорусский государственный институт стандартизации и сертификации» (БелГИСС)

ВНЕСЕН Госстандартом Республики Беларусь

2    УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ постановлением Госстандарта Республики Беларусь от 28 декабря 2006 г. № 65

3    Настоящий стандарт идентичен национальному стандарту Российской Федерации ГОСТ Р 51435-99 (ИСО 8128-1-93) «Сок яблочный, сок яблочный концентрированный и напитки, содержащие яблочный сок. Метод определения содержания патулина с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии», разработанному на основе международного стандарта ISO 8128-1:1993 «Сок яблочный, концентраты яблочного сока и напитки, содержащие яблочный сок. Определение содержания патулина. Часть 1. Метод с применением высокоэффективной жидкостной хроматографии».

Разработан Всероссийским научно-исследовательским институтом консервной и овощесушильной промышленности (ВНИИКОП).

Дополнительные требования, отражающие потребности экономики страны, выделены курсивом.

Официальный экземпляр национального стандарта Российской Федерации, на основе которого подготовлен настоящий государственный стандарт, имеется в БелГИСС.

Степень соответствия - идентичная (ЮТ)

4    ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

Настоящий стандарт не может быть воспроизведен, тиражирован и распространен в качестве официального издания без разрешения Госстандарта Республики Беларусь

Издан на русском языке

Содержание

1    Область применения..............................................................................................................................1

2    Сущность метода....................................................................................................................................1

3    Реактивы..................................................................................................................................................1

4    Приборы и лабораторное оборудование.............................................................................................2

5    Отбор проб..............................................................................................................................................2

6    Проведение испытаний..........................................................................................................................2

7    Обработка результатов..........................................................................................................................3

8    Точность метода.....................................................................................................................................3

9    Протокол испытаний...............................................................................................................................3

С ТБ ГОСТ Р 51435-2006 (ИСО 8128-1-93)

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ РЕСПУБЛИКИ БЕЛАРУСЬ

Сок яблочный, сок яблочный концентрированный и напитки, содержащие яблочный сок МЕТОД ОПРЕДЕЛЕНИЯ СОДЕРЖАНИЯ ПАТУЛИНА С ПОМОЩЬЮ ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ

Сок яблычны, сок яблычны канцэнтраваны i HaniTKi, ямя змяшчаюць яблычны сок МЕТАД ВЫЗНАЧЭННЯ ЗМЯШЧЭННЯ ПАТУЛ1НУ 3 ДАПАМОГАЙ ВЫСОКАЭФЕКТЫУНАЙ ВАДКАСНАЙ ХРАМАТАГРАФИ

Apple juice, apple juice concentrates and drinks containing apple juice Method for determination of patulin content using high performance liquid chromatography

Дата введения 2007-06-01

1    Область применения

Настоящий стандарт устанавливает метод определения содержания патулина в яблочном соке, концентрированных яблочных соках и напитках, содержащих яблочный сок. с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии.

Предел обнаружения патулина настоящим методом составляет 10 мкг/дм³ при условии, что взятый для анализа объем пробы готового к употреблению сока составляет 5 см

2    Сущность метода

Метод основан на экстракции патулина из исследуемой пробы этилацетатом, очистке экстракта перераспределением в водный раствор карбоната натрия и количественном и качественном анализе экстракта с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с использованием спектрофотометрического детектора в ультрафиолетовой области.

При необходимости в развитие настоящего стандарта разрабатываются в установленном порядке методики выполнения измерений.

3    Реактивы

Используют реактивы аналитической чистоты и воду квалификации «для ВЭЖХ».

3.1    Растворитель: этилацетат.

3.2    Подвижная фаза - раствор ацетонитрила в воде объемной концентрации 10 %.

3.3    Экстрагирующий раствор - водный раствор безводного карбоната натрия концентрации 14 г/дм³.

3.4    Ацетатный буфер. pH 4

Смешивают 16,4 см⁵ уксусной кислоты (с (СН_эСООН) = 0,2 моль/дм³] с 3,6 см³ раствора ацетата натрия [с (CH₃COONa) = 0.2 моль/дм³].

3.5    Уксусная кислота, ледяная.

3.6    Стандартный раствор патулина (СгН_в0₄)

3.6.1 Приготовление стандартного раствора

Навеску патулина массой 10,0 мг. взятую с точностью до 0.1 мг. растворяют в мерной колбе с одной отметкой вместимостью 100 см³ в ацетатном буфере (3.4). Объем содержимого в колбе доводят до метки ацетатным буфером.

Издание официальное

Пипеткой переносят 10,0 см³ приготовпенного раствора в другую мерную колбу с одной отметкой вместимостью 100 см', объем содержимого в колбе доводят до метки ацетатным буфером. Массовая концентрация патулина в приготовленном стандартном растворе составляет около 10 мкг/см .

Измеряют оптическую плотность стандартного раствора при длине волны 276 нм на подходящем спектрофотометре с использованием кварцевых кювет рабочей длиной 10 мм.

3.6.2 Расчет концентрации стандартного раствора патулина

Концентрацию стандартного раствора патулина (3.6.1) рр,. мкг/см³, вычисляют по формуле

(1)

где А - оптическая плотность стандартного раствора патулина;

А₂76 - молярный показатель поглощения раствора патулина при длине волны 276 нм.

дм³ • моль'¹ • см ¹ (*276 = 14600);

М - молярная масса патулина. г/моль;

С - постоянная прибора (обычно С = 1>.

4 Приборы и лабораторное оборудование

Перед использованием лабораторное оборудование промывают раствором гипохлорита натрия концентрации 10 г/дм³.

Лабораторное оборудование:

4.1    Жидкостный хроматограф, снабженный спектрофотометрическим детектором в ультрафиолетовой области (пригодным для работы при ^лине волны 276 нм) и самописцем или интегратором.

4.2    Обращенно-фазовая колонка ODS или другая аналогичная колонка со следующими параметрами:

-    эффективность не менее 35000 теоретических тарелок на метр;

-    длина 250 мм;

-    внутренний диаметр 4.6 мм;

-    неподвижная фаза размером частиц 5 мкм.

5    Отбор проб

Проба, поступающая в лабораторию, должна быть представительной и без следов порчи или изменения свойств продукта при транспортировании и хранении.

6    Проведение испытаний

6.1    Приготовление испытуемого раствора

При испытаниях концентрированных яблочных соков их разводят водой 1 : 5 по объему. Дальнейшую процедуру проводят для всех продуктов одинаково, как описано ниже.

6.1.1    Пробу объемом 5.0 см экстрагируют порцией этилацетата объемом 5.0 см (3.1) в течение не менее 1 мин. Экстракцию повторяют еще два раза новыми порциями этилацетата объемом по 5.0 см³. Этилацетатные фазы объединяют и экстрагируют раствором карбоната натрия (3.3) объемом 2.0 см³.

ПРЕДУПРЕЖДЕНИЕ - Экстракцию раствором карбоната натрия проводят в течение 1 - 2 мин из-за нестабильности патулина в щелочной среде.

6.1.2    Карбонатную фазу (6.1.1) экстрагируют свежей порцией этилацетата объемом 5,0 см³, экстракт объединяют с предыдущими порциями. Карбонатную фазу отбрасывают. К экстракту добавляют 5 капель уксусной кислоты (3.5), смесь перемешивают и упаривают на ротационном испарителе до объема 1 - 2 см³.

6.1.3    Полученный таким образом раствор количественно переносят во флакон вместимостью около 5 см³ с помощью нескольких порций этилацетата объемом около 1 cm^j каждая. Раствор упаривают досуха в токе азота при температуре 40 °С. Остаток растворяют в 0.5 см подвижной фазы (3.2) или ацетатного буфера (3.4).

¹¹ ODS - октадецилсилан

6.2    Построение градуировочного графика

Порции стандартного раствора патулина (3.6.1) объемом 1.0; 2.0; 3.0; 5.0 и 7.5 см' переносят пипеткой в пять мерных колб с одной отметкой вместимостью 10 см³, объем содержимого в колбах доводят до метки ацетатным буфером (3.4); получают градуировочные растворы.

Устанавливают скорость потока подвижной фазы через колонку жидкостного хроматографа около 1 см^э/мин. Чувствительность детектора хроматографа устанавливают таким образом, чтобы оптической плотности 0.01 соответствовал сигнал величиной на полную шкалу регистрирующего устройства.

В хроматограф (4.1) вводят от 0.010 до 0.030 см³ каждого градуировочного раствора.

Градуировочный график строят, откладывая по оси абсцисс концентрацию патулина в микрограммах на кубический сантиметр, по оси ординат - соответствующие величины высоты или площади пиков.

6.3    Проведение определения

В хроматограф вводят от 0.010 до 0.030 см ‘ испытуемого раствора (6.1.3) при тех же условиях, что и при построении градуировочного графика.

Идентификацию пика патулина в испытуемом растворе проводят сравнением с пиками патулина в градуировочных растворах. Следует отличать пик патулина от пика оксиметилфурфурола (ОМФ).

7    Обработка результатов

Концентрацию патулина в испытуемом растворе определяют непосредственно по градуировочному графику (6.2). Содержание патулина в продукте р_р. мкг/дм^э, вычисляют по формуле

^Pp=^vT¹⁽⁾³'    ⁽²⁾

где рpt - концентрация патулина в испытуемом растворе, определенная по градуировочному графику, мкг/см³;

V1    -    объем, до которого сконцентрирован этилацетатный экстракт, см :

V₂ - объем пробы продукта, взятый для экстракции, см³.

8    Точность метода

8.1    Сходимость результатов

г = 41.9 мкг/дм³; S, = 14,9 мкг/дм³,

где г - предел сходимости;

s, - среднеквадратическое отклонение сходимости.

8.2    Воспроизводимость результатов

R = 47,5 мкг/дм³; S_R = 22,6 мкг/дм³,

где R - предел воспроизводимости;

S_R - среднеквадратическое отклонение воспроизводимости.

9    Протокол испытаний

В протоколе испытаний указывают:

-    метод испытаний;

-    результат испытаний;

-    окончательный результат с оценкой сходимости, если была проверена сходимость результатов.

Также следует отметить особенности проведения испытаний, не указанные в настоящем стандарте или рассматриваемые как несущественные, с побочными обстоятельствами, способными повлиять на результат испытаний.

Протокол испытаний должен содержать информацию, необходимую для полной идентификации образца.

Сдано в набор 16 01 2007 Подписано в печать 08.02 2007 Формат бумаги 60*84/8 Бумага офсетная Гарнитура Ariel Печать ризографическая Уел леч. л 0.81 Уч -изд л 0,27 Тираж экз Заказ

Издатель и полиграфическое исполнение НП РУП «Белорусский государственный институт стандартизации и сертификации» (БелГИСС) Лицензия № 02330/0133084 от 30 04 2004 220113. г. Минск, ул Мележа. 3.