Товары в корзине: 0 шт Оформить заказ
Стр. 1
 

14 страниц

191.00 ₽

Купить РД 39-0147103-350-89 — официальный бумажный документ с голограммой и синими печатями. подробнее

Официально распространяем нормативную документацию с 1999 года. Пробиваем чеки, платим налоги, принимаем к оплате все законные формы платежей без дополнительных процентов. Наши клиенты защищены Законом. ООО "ЦНТИ Нормоконтроль".

Наши цены ниже, чем в других местах, потому что мы работаем напрямую с поставщиками документов.

Способы доставки

  • Срочная курьерская доставка (1-3 дня)
  • Курьерская доставка (7 дней)
  • Самовывоз из московского офиса
  • Почта РФ

Руководящий документ предназначен для инженерно-технических и научных работников предприятий (организаций) Миннефтепрома, занимающихся проблемами защиты нефтепромыслового оборудования и коммуникаций от микробиологической коррозии.

  Скачать PDF

Оглавление

1 Общие положения

2 Оборудование и материалы

3 Подготовка стерилизация питательных сред, добавок и посуды

4 Культивирование адгезированных сульфатвосстанавливающих бактерий

5 Оценка бактерицидного действия реагентов

Показать даты введения Admin

МИНИСТЕРСТВО НЕФТЯНОЙ ПРОМЫШЛЕННОСТИ

внииспт

НЕФТЬ

ОЦЕНКА БАКТЕРИЦИДНОЙ ЭФФЕКТИВНОСТИ РЕАГЕНТОВ

ОТНОСИТЕЛЬНО АДГЕЗИРОВАННЫХ КЛЕТОК СУЛЬФАТВОССТАНАВЛИВАЮЩИХ БАКТЕРИЙ ПРИ ЛАБОРАТОРНЫХ ИСПЫТАНИЯХ

РД 39-0147103-350-89

г.Уфа

Министерство нефтяной промышленности ВНИЙСПТнефть

УТВЕРШН

начальником Главного научно-технического управления Довжком Е.М.

9 марта Х989г,

РУКОЮДЯЩЙ ДОКУМЕНТ

ОШКА БАКТЕРИЦИДНОЙ ЭФФЕКТИВНОСТИ РЕАГЕНТОВ ОТНОСИШЬНО АДГЕЗИРОВАНШХ КЛЕТОК СУДМАТ'ЮССТАНАВЛИВАЩЩ БАКТЕРИЙ ПРИ ЛАБОРАТОРНЫХ ИСПЫТАНИЯХ

РД 39-0147103-350-89

10

Затем для диспергирования биоплекхк флакон энергично встряхивают в течение (30-60)с или подвергают ультразвуковой обработке ка диспергаторе (22 кГц, 0,3-0,4 А, 30-60 с). При этом клетки СВБ сохраняют сэою жизнеспособность. Из приготовленной суспензии делают 7-9 разведений. Пробы инкубируют з течение 14 дней при теьзхературе 32-35 °С.

5. ОЦЕгПСА ВАКТЕР;ИДШЮТС ДсЙСТЕМ РЕАГЕНТОВ

5.1.    В ряд маркированных стерильных пробирок известного объема (20-25 см®) вводят определенное количество исследуемого реагента (например, 100,200...500 мг/дм3 и т.п,) и наливают предварительно прокипяченную и охлажденную минерализованную воду.

Состав соответствует сточкой воде месторождения, где предполагается дальнейшее испытание реагента.

5.2.    Образцы со сформировавшейся ка них окопденкой достают из сосуда стерильные пинцетом к промывают их стерильным буферным раствором (pH = 7,0-7,2) 3-4 раза для удаления культуральной среди и планктонных хлеток СЕВ.

Для сохранения асептических условий эту и последующие операция рекомендуется выполнять в камере с ламинарным течением воздуха кли ь струе инертного (стерильного) газа, например, гелия.

5.3.    Образцы с адгазированными хлоткамк СВЗ помещают в пробирки с бактерицидом и закрывают пробирка: пробкой. Пробы выдерживают при комнатной температуре от I до 24 часов. Для выбора более оптимальных параметров технологического режима время выдержки

я концентрации исследуемого бактерицида варьируют,

5.4.    Затем обработанные бактерицидом образны с адгесирован-ькык клетками помещают в пробирки с питательной средой Постгейта и инкубируют в термостате а течение 14 суток при температуре 32-35 °С. j'se пробирки с образцами без добавления реагента служат контрольной пробой.

II

Дня каждой концентрации проводят три параллельных испытания* 5*5. Наблюдение за образцами осуществляют визуально , отмечая развитие СВБ во образовашш черного осадка сульфида железа, рао-проотранящвгооя от образца вверх по объему питательной среды* Отсутствие роста СВБ свидетельствует об эффективности действия бактерицида.

5*6. С целью определения эффективности действия бактерицидов на адг в зареванные клетки бактерий можно рекомендовать количественное выявление жизнеспособных СВБ в биопленке методом предельных разведений* Для этого адгезированные клетки СВБ после воздействия на них бактерицида удаляют о поверхности образцов (п*4.5)е готовят суспензию клеток и делают ряд разведений* Затем пенищлликоше флаконы с пробами помещают в термостат при температуре 33 °С и наблюдают за развитием бактерий по образованию осадка сульфида железа* Отсутствие роста СВБ свидетельствует об эффективности действия бактерицида*

СОДЕРЖАНИЕ

стр.

1. Общие положения    3

2.Оборудование и материалы    4

3, Подготовка и стерилизация питательных

сред,добавок и посуды    7

4. Культивирование адгезированнкх сульфатвос-

станавливаюших бактерий    9

5.Оценка бактерицидного действия реагентов Ю

РУКОВОДЯЩИЙ ДОКУМЕНТ

ОЦЕНКА БАКТЕРИЦИДНОЙ ЭФФЕКТИВНОСТИ РЕАГЕНТОВ ОТНОСИТЕЛЬНО АДГЕЗИРОВАНШХ КЛЕТОК СУЛ1ФАТ-ВОССТАНАВЛИВАДЦИХ БАКТЕРИЙ ПРИ ЛАБОРАТОРНЫХ ИСПЫТАНИЯХ

РД 39-0147103-050-89

450055, г.Уфа,прооп.Октября,144/3

Подписано к печати 12.04.89г.

Формат 60x90/16. 0,6 уч.-иэд.л. Тарах 136 аха. Закда J» //<f Ротапринт ШИИСПТнефти

Руковсудашй документ "Оценка бактерицидной эффективности реагентов относительно адгезированных клеток сульфатвосстанав-диващнх бактерий при лабораторных испытаниях" разработан ВНИИ-СИГнефть при участии ОЕЦ Башкирского научного центра УрО АН СССР. Исполнители:

от ВНИИСПТнефть - с.н.с.Мурзагильдин З.Г. # м.н.с.Юднна Е.Х\» м.н<о,Сабирова АД.;

от ОЕЦ Баятирокого научного донтра УрО АН СССР - ведлшучн, сотрДмагушш М.С.

рукоюдда ДОКУМЕНТ

Оценка бактерицидной эффективности реагентов относительно адгезированных клеток сульфатвосстанавлившдих бактерий при лабораторных испытаниях

РД 39-0147103-350-89

Вводится впервые

Срок введения установлен с I кая 1989г.

Настоящий руководящий документ предназначен для инженерно-технических и научных работников предприятий (организаций) Миннефтепрома, занимающихся проблемами защиты нефтепромыслового оборудования и коммуникаций от микробиологической коррозии.

I. ОБЩИЕ ШШОЕЕНИЯ

I.I. Значительная часть коррозионных повреждений нефтепромыслового оборудования и коммуникаций обусловлена жизнедеятельностью микробных сообществ, формирующихся в условиях нефтяного месторождения. Среди микроорганизмов, инициирушкх процесс разрушения металла, главная роль принадлежит сульфат в о с ст акав л и в агощим бактериям (СВБ).При этом большая часть СВБ, содержащаяся в нефтепромысловых водах, адгезирована на твердой поверхности и лишь небольшое количество представлено свободно-плавающими (планктонными) клетками* Адгезия бактериальных клеток на поверхности осуществляется с помощью гфодуцкруемых ими внеклеточных биополимеров - полисахаридов, которые играют роль барьера, предохраняющего клетки от воздействия неблагоприятных факторов внешней среды,

В том числе и бактерицидов. Бактерициды оказывают избирательное действие на клетки бактерий. Как правило, адгезироваиные СВБ б о-

4

лее устойчивы к их действию, чем планктонные клетки*

Следовательно, для оценки реальной эффективности бактерицидов необходимы исследования как на планктонных, так и на адгези-рованных клетках СВБ.

1.2.    Данная методика разработана для скрининга реагентов относительно адгезированных на металлической поверхности СВБ в лабораторных условиях.

1.3.    Сущность метода заключается в следующем: образцы из малоуглеродистой стали выдерживают в активной культуре СВБ.

Затем их обрабатывают бактерицидом и асептически переносят в культуральные сосуды с питательной средой и определяют минимальную летальную концентрацию реагента. Испытания проводятся в статических условиях.

2. ОБОРУДОВАНИЕ И МАТЕРИАЛЫ

автоклав электрический

- по ГОСТ 9586-75Е

термостат суховоздушный

ТС-80М-2

- по ТУ 64-I-1382-83

шкаф сушильный лаборатор

ный

- по ТУ 16-531.097-67

диспергатор ультразвуковой

- по ТУ 25-05.2170-77

приспособление для закру

чивания алюминиевых кол

пачков

-


2Л. Для работы с адгезированными на металлической поверхности сульфатвосстанавливающими бактериями необходимо следующее оборудование:

шприцы медицинские, емкостью 1,2 мл, с набором инъекцион

ных игл

5


пипетки

колбы плоскодонные склянки пенициллиновые с плос« кими резиновыми пробками пробирки химические стерилизатор медицинский пробки резиновые спиртовки

спирт этиловый ректификованный технический рН-метр-милливольтметр типа рН-673М


-    по РОСТ 20292-74Е

-    по ГОСТ 25336-82Е


-    по ГОСТ 25336-82Е

-    по ГОСТ I9569-80E

-    по ГОСТ 7852-76

-    по ГОСТ 25336-S2E




бумага индикаторная универсальная

алюминиевые колпачки образцы плоские диаметром 10 мм (h « 2 мм) из малоуглеродистой стали 3 камера с ламинарным течением воздуха типа УО-ЕГ или УЕБК-1 - ТУ 46-22-562-80 2.2. Для обнаружения СВБ и поддержания культуры с целью сохранения жизнеспособности клеток» а также таксономических свойств бактерий используется среда Постгейта В: основная среда калий фосфорнокислый

однозамещеннкй КНуР04-0*5 г - по ГОСТ 4198-75 аммоний хлористый - I г    -    по    ГОСТ    3773-72

кальций сернокислый - 1,0 г


Са2 04



6


магний сернокислый 7-водный


MyS04.TH20 - 2,0 г

натрий молочнокислый C^igO^/Za -

3,5 г

натрий хлористый /S аС£ - 5 г Добавки:

дрожжевой экстракт(5% водный экстракт)- I г



-    ТУ 6-09-3664-74

-    по ГОСТ 4233-77


- йо ТУ 6-09-3979-75


железо сернокислое з&кисное


7-водное ^ei'O^.TH^O - 0,5 г    -    по    ГОСТ    4148-78

натрий углекислый кислый /ГаНСОд - по ГОСТ 4201-79 натрий сернистый J’agi .9Н20 - 0,2 г - по ГОСТ 2053-77


В качестве восстановителей для питательных сред можно использовать сульфид натрия, аскорбиновую кислоту и другие.

Все реактивы основной среды растворяют в I л водопроводной воды. Добавки готовят каждую в отдельности.

2.3. Для накопления клеток GBB в лабораторной практике дня исследовательских целей используется среда Постгейта С! калий фосфорнокислый однозаме-

щенный KHgPO^ - 0,5 г    -    по    ГОСТ    4198-75

аммоний хлористый //Й4С - I г - по ГОСТ 3773-72 натрий сернокислый Л/а2^04 - 4,5 г - по ГОСТ 6053-77 кальций хлористый 6-водный

СаС£ 2-бН2° “ °»06 г    -    по    ГОСТ    4209-77

магний сернокислый 7-водкый



f

натрий молочнокислый CgHgOg/Ka - б г -натрий лимоннокислый CgHgO^/Za -0,3 г

дрожжевой экстракт - 0,1 г


по ГОСТ 4523-77 по ТУ 6-09-3664-74


по ГОСТ 22280-76 по ТУ 6-09-3979-75


7

- по ГОСТ 4I4S-78

железо сернокислое - 7-водное ^04*7^0 - 0,004 г

дистиллированная вода - I л

хлористый натрий N&C-t    -по    мере надобности

3. ПОДГОТОВКА И СТЕРИЛИЗАЦИЯ ПИТАТЕЛЬНЫХ СРЕД, ДОБАВОК И ПОСУДЫ

3.1.    Приготовление добавок

Навеску дрожжевого экстракта, растворенную в дистиллированной воде, тщательно перемешивают, кипятят 20 мин и фильтруют через бумажный фильтр. Фильтрат вновь кипятят 20 мин и фильтруют через мелкопористый бумажный фильтр.

Железо сернокислое закисное готовят в виде 5 % раствора в 2 % растворе соляной кислоты.

Натрий углекислый кислый - 5 % водный раствор, который используют для установления pH среды до 7,2.

Натрий сернистый - 5 % раствор в 5 % растворе натрия углекислого кислого, хранится в холодильнике, после стерилизации используется не более 7 дней.

3.2.    Стерилизацию питательных сред, добавок и других материалов проводят насыщенным водяным паром при давлении выше атмосферного в специально предназначенных для этого автоклавах.

Питательную среду и добавки разливают в колбы не выше чем на половину объема колбы и закрывают ватными пробками и бумажными колпачками. Стерилизацию основной среди проводят в автоклаве-при температуре 120± 2 °С, избыточном давлении ОД МПа, а добавок г при давлении 0,05 МПа. Время стерилизации 30 мин.

3.3.    После стерилизации основной раствор питательной ореды обескисдоооживают кипячением о последующим быстрым охлаждением под

8

струей водопроводной воды. Затем в той же последовательности, которая указана в п.2.2., вносятся добавки.

3.4.    Величину pH среды контролируют с помощью pH-метра или по универсальной индикаторной бумаге. Раствор сульфида натрия приливают по каплям стерильной пипеткой до появления темно-серой окраски среды. Разлив сред и добавок проводят с соблюдением правил стерильности над пламенем спиртовки.

3.5.    Установка автоклава и работа с ним производится при строгом выполнении правил, указанных в прилагаемой к аппарату инструкции. К работе допускаются только подготовленные лица.

Цростерилиэованнке автоклавированием среды проверяют ка стерильность путем термостатиров алия в течение суток при температуре 30 °С. Если среда сохраняет прозрачность, считают, что она стерильна.

Хранят среда в холодильнике. Срок хранения не более 2-х недель.

3.6.    Всю посуду перед стерилизацией тщательно моют и высушивают .

3.7.    Колбы, пробирки и пенициллиновые склянки закрывают ватными пробками и заворачивают в бумагу.

3.8.    Пробки готовят из медицинской ваты, обертывают слоем, марли и завязывают ниткой на свободном конце.

3.9.    В концы пипеток вставляют ватные тампоны и заворачивают в длинные полоски бумаги шириной 4-5 см.

ЗЛО, Резиновые пробки моют горячей водой с добавлением соды, затем тщательно промывают водопроводной к дастиллировакной водой, помещают в термостойкие стаканы с водой и стерилизуют в автоклаве при температуре 120 °С и избыточном давлении ОД МПа.

З.П. Подготовленную посуду стерилизуют сухим паром в сушильном шкафу при 160 °С r течение 2 часов с момента достижения

9

указанной температуры*

3.12. Простерилизованную посуду вынимают из сушильного шкафа после ого охлаждения ниже 60 °С.

4. КУЛЬТИВИРОВАНИЕ ЩЕЗШВШШ СУЛЬФАТВ0ССТАг1Ш1ИВА]ШЩ БАКТЕРИЙ

4.1.    Металлические образны тщательно обезжиривают, промывают водой, опускают ка 5 мин в раствор соляной кислоты 1:1, снова промывают водой и затем обрабатывают 70 % раствором этанола.

4.2.    Подготовленные образцы помещают на дно стерильного сосуда, вносят питательную среду Постгейта и накопительную культуру СВБ (2-3 суточную) в количестве 5-10 % от объема среды, закрывают пробкой и помещают в термостат (температура 32-35 °С).

4-3~ Период инкубации длится 5-7 дней до достижения статических условий роста адгезкрованных СВБ. Рост СВБ определяется количественно во время всего периода инкубации.

4.4.    Количественная оценка адгезкрованных СВБ производится методом предельных разведений после предварительного удаления клеток с поверхности металлических образцов. Результаты представляются как количество клеток на единицу площади - кл/см2.

4.5.    Удаление, адгезкрованных клеток (биопленки) о поверхности образцов осуществляется следующим образом:

образец помещают в стерильную чашку Петри и, придерживая пинцетом, очищают его поверхность небольшими кусочками (~1 см2) стерильной губки типа "Эффект”, загрязненные кусочки губки помещают во флакон со средой Постгейта; или образец помещают в стерильную чашку Петри (или фарфоровую чашку) с питательной средой и, придерживая его пинцетом, делают ооскоб стерильным скальпелем. Полученный ооскоб переносят в пенициллиновый флакон.